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2006-2011年浙江省杭州市萧山区流感嗜血杆菌耐药性监测
目的 调查了解流感嗜血杆菌的临床分布及耐药情况,为临床用药提供依据.方法 对2006年1月至2011年12月浙江萧山医院临床分离的流感嗜血杆菌,用ATB嗜血杆菌药敏板条测定抗菌药物的敏感性,用头孢硝噻吩纸片法测定β-内酰胺酶,所有数据用WHONET 5.6软件进行回顾性分析.结果 共检出流感嗜血杆菌375株,对复方新诺明、氨苄西林耐药分别为248株(66.1％)和127株(33.8％),对氯霉素、头孢克洛和四环素耐药分别为38株(10.2％)、52株(13.8％)和55株(14.7％)；其他几种常用药物阿莫西林／克拉维酸、头孢呋辛、头孢噻肟、利福平和氧氟沙星对流感嗜血杆菌保持较好的抗菌活性(耐药率≤5.0％)；β-内酰胺酶阳性菌株对多种药物的耐药率显著高于阴性菌株(P＜0.01).结论 复方新诺明耐药率高而不宜用于流感嗜血杆菌感染的治疗,氨苄西林应慎重用于经验治疗；流感嗜血杆菌对氨苄西林耐药率呈下降趋势,对二代头孢菌素耐药率呈上升趋势,临床应根据药敏结果合理使用抗菌药物.
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鲍曼不动杆菌SHV型β-内酰胺酶耐药基因分子流行病学研究
目的分析自临床分离的产SHV型β-内酰胺酶(β-lactamases,BLA)多重耐药鲍曼不动杆菌的SHV型BLA耐药基因序列并确定其所产BLA耐药基因亚型.方法在2000年7月至2002年12月间从临床分离60株鲍曼不动杆菌,经药敏试验、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型确证试验和SHV型BLA耐药基因的聚合酶链反应(PCR)检测,筛选出2株具有多重耐药特性、SHV基因型均阳性的分离株(HZ02、HZ10株),对耐药基因进行序列分析.结果在2001年6月至2002年1月间分离到的18 株(30.0%)鲍曼不动杆菌质粒上携带SHV 型BLA耐药基因;HZ02株和HZ10株的SHV PCR扩增阳性,其基因片段分别含825个和833个核苷酸,与Nuesch-Inderbinen等首先发现的SHV-12亚型ESBLs编码基因序列(GenBank注册号:X98105)完全相同.结论 30.0%鲍曼不动杆菌质粒上携带SHV 型(超广谱)β-内酰胺酶耐药基因并引起一次医院感染爆发.同时证实在我国浙江省湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌中存在产SHV-12亚型ESBLs耐药基因菌株.
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社区获得性尿路感染中产超广谱β内酰胺酶菌株分子流行病学研究
目的 调查2013年1-8月同济医院门诊尿路感染中产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药机制. 方法 采用琼脂稀释法检测100株菌对19种抗菌药物的低抑菌浓度;对ESBLs阳性菌株进行ESBLs基因、Amp-C酶基因、质粒介导的喹诺酮耐药基因及16S rRNA甲基化酶基因进行测定. 结果 细菌ESBLs的发生率为57％,所有菌株对亚胺培南、美罗培南及粘菌素均敏感;ESBLs阳性菌对19种抗生素的耐药率为0～100％,ESBLs阴性菌为0～48.8％;在57株ESBLs阳性菌株中,CTX-M-14型33株,CTX-M-15型26株,TEM-1型28株,OXA-1型8株,SHV-11型与SHV-12型各1株;Amp-C酶基因阳性菌中DHA-1型2株,CMY-2型2株;质粒介导的喹诺酮耐药基因阳性菌中aac(6')-Ib-cr型32株,qnrB型4株;16S rRNA甲基化酶基因阳性菌中rmtB型3株,ar-mA型1株. 结论 CTX-M型、TEM型以及aac(6')-Ib-cr型是同济医院社区获得性尿路感染中产ESBLs菌株的主要流行基因型.
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同一标本分离的2株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制相关性分析
目的 对从同一标本中分离的碳青霉烯类药物耐药的肺炎克雷伯菌和摩根摩根菌进行耐药机制相关性分析.方法 琼脂稀释法进行药物敏感试验;特异性PCR扩增和序列分析检测介导耐碳青霉烯类药物的相关基因;接合试验、质粒提取和耐药基因周围序列分析耐药的可传递性、耐药质粒的同源性及耐药基因的遗传背景;提取外膜蛋白分析菌株外膜蛋白的改变.结果 2株分离菌均产碳青霉烯酶并扩增出介导碳青霉烯类耐药的KPC-2型基因;质粒接合试验成功传递了对碳青霉烯类药物的耐药性,耐药基因被携带在2个大小不同但耐药基因周围序列完全相同的质粒上;其中摩根摩根菌耐药株缺失了相对分子质量约为38×103的外膜蛋白同时出现36×103的外膜蛋白而肺炎克雷伯菌则缺失了外膜蛋白OMPK36.结论 2株分离菌均携带KPC-2基因.该基因由2个大小不同的质粒携带,同一复合转座子介导了KPC-2基因在2株细菌的不同质粒上转移.同时外膜蛋白缺失参与了对碳青霉烯类抗生素耐药.
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儿科产超广谱β-内酰胺酶志贺菌的基因型和耐药性研究
目的 探讨儿科临床分离志贺菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型及其耐药特点.方法 收集2004年1月至2008年12月北京儿童医院细菌性痢疾住院患儿粪便标本中分离出志贺菌共59株,按照美国临床和实验室标准协会推荐的表型确证试验检测ESBLs,用琼脂稀释法进行低抑菌浓度(MIC)测定,对产ESBLs菌株进行PCR扩增明确其基因型,对扩增产物进行DNA序列分析确定基因亚型.结果 59株志贺菌中共检出产ESBLs者21株,占35.6%.21株产ESBLs志贺菌PCR均扩增到CTX-M型ESBLs,包括CTX-M-1型6株,CTX-M-9型15株,其中有4株同时伴有TEM型酶,6株伴有OXA型酶.DNA序列分析证实6株CTX-M-1型分别为CTX-M-3亚型(1株)、CTX-M-15亚型(2株)、CTX-M-57亚型(3株),15株CTX-M-9型均为CTX-M-14亚型,伴随存在的TEM型及OXA型耐药基因分别为TEM-1型广谱酶、OXA-1型广谱酶.药敏结果显示对产ESBLs菌株敏感性较好的抗生素有亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦和头孢西丁,其耐药率均小于15%.产不同CTX-M基因亚型的菌株对头孢他啶的耐药性不同.结论 本地区儿科分离志贺菌产ESBLs阳性率高,均为CTX-M型,其中以CTX-M-14亚型为主,少部分为CTX-M-3、CTX-M-15和CTX-M-57亚型.大部分产ESBLs菌株呈多重耐药,碳青霉烯类抗生素应作为治疗产ESBLs志贺菌的首选.
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质粒介导KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌儿童分离株耐药基因研究
目的 研究碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌临床儿童分离株的耐药特点及分子流行病学特征.方法 收集温州医学院附属第二医院2010年7月-2011年6月从儿童标本中分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌12株,所有菌株为非重复菌株,菌种鉴定采用全自动微生物分析仪.改良的Hodge试验筛选产碳青霉烯酶阳性菌株,采用PCR法检测KPC、IMP、bla(s)、VIM、SPM和整合酶基因,测序确定基因型.对菌株进行质粒结合试验、质粒消除试验检测质粒的转移性.脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析耐药菌株的同源性.结果 12株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑的敏感率分别为8.3％、41.7％、58.3％、8.3％、8.3％、33.3％；12株菌均携带有KPC-2基因,且同时携带有TEM-1和SHV型β-内酰胺酶基因,其中SHV-11-like和SHV-1 2-like各6株；11株携带CTX-M型基因,其中4株为CTX-M-14-like基因,6株CTX-M-15-like基因；2株携带有OXA-10型基因,1株携带有PER-1基因.未检出NDM-1、GIM、SPM、SIM、VIM型碳青霉烯酶基因.12株均为Ⅰ类整合酶基因(int1)阳性.2株通过接合试验把质粒传递给受体菌EC600.所有接合子blaTEM-1基因阳性、超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因阳性及对亚胺培南、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素和头孢噻肟耐药,接合子ESBL基因型与供菌一致.2株菌经质粒消除后对亚胺培南的MIC值均有较大程度降低,消除后KPC-2基因扩增为阴性.12株KPC-2基因阳性菌株经PFGE分成5个基因型,主要为B型和C型.结论 KPC-2型碳青霉烯酶基因已经在儿童肺炎克雷伯菌中播散,常伴随携带多种类型的ESBL基因和Ⅰ类整合酶基因,部分耐药基因可通过质粒播散.
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产质粒介导AmpC酶和ESBLs细菌的耐药性及β-内酰胺酶基因型研究
目的了解我院同时产质粒介导AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌的耐药性及其β-内酰胺酶的基因型特征.方法110株临床分离无重复肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌耐药株,采用酶提取物三维实验检测AmpC酶,美国临床实验室标准委员会(NCCLS)表型筛选和确认实验检测ESBLs;琼脂二倍稀释法测定抗生素对同时产AmpC酶和ESBLs菌株的低抑菌浓度(MICs);等电聚焦实验测定β-内酰胺酶等电点(pIs);质粒接合实验定位耐药基因;PCR通用引物扩增AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定以确定其基因亚型.结果同时产AmpC酶和ESBLs菌株在肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌中的检出率分别为7.7%(5/65)、8.9%(4/45).该类产酶菌株产2～3种pI5.4～9.0 β-内酰胺酶,对第三代头孢菌素、氨曲南、头孢美唑和含酶抑制剂复合制剂的敏感性极低,但对亚胺培南均敏感.9株质粒中均检出AmpC酶基因DHA-1亚型,其中1株同时检出ACT-1亚型;ESBLs基因亚型分别为CTX-M-14、CTX-M-3、CTX-M-9,各有4、3、2株;有3株还携带广谱酶TEM-1基因.结论我院存在同时产质粒介导DHA-1、ACT-1型AmpC酶和CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌流行株,药敏检测结果显示对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感.
关键词： 质粒 β-内酰胺酶类 β-内酰胺类抗生素耐药 基因型 -
双抑制剂扩散协同法检测两种超广谱β-内酰胺酶
目的探讨氟氯西林、克拉维酸与超广谱头孢菌素协同法(双抑制剂扩散协同法,DIDST)检测AmpC β-内酰胺酶(AmpC-BLA)和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的应用价值.方法氟氯西林和克拉维酸分别作为AmpC-BLA和ESBLs的抑制剂.采用DIDST和双纸片增效试验、双纸片协同试验和头孢西丁三维试验同时检测56株革兰阴性杆菌的AmpC-BLA和ESBLs.结果 DIDST检出ESBLs 20株(35.71%)、AmpC-BLA 12株(21.43%)和ESBLs+AmpC-BLA 1株(1.78%);双纸片协同试验中,纸片相距25 mm仅检出15株(26.78%),距离减至20 mm,又检出5株,阳性检出率提高8.93%;双纸片增效试验检出ESBLs 20株(35.70%);三维试验检出AmpC-BLA 12株.DIDST与头孢西丁三维试验、双纸片协同试验和双纸片增效试验总符合率达100%.结论 DIDST在一个平板上可同时检测ESBLs和AmpC-BLA,方法准确、简易,适于各级医院推广应用.
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一种新基因型SHV-28 β-内酰胺酶的发现及其特性的初步研究
目的鉴定产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的肺炎克雷伯菌SHV型β-内酰胺酶(BLA)的编码基因、BLA亚型并初步研究其特性.方法聚合酶链反应(PCR)扩增BLA编码基因片段,克隆入pGEM-Teasy载体,双脱氧链终止法测定核苷酸序列、确定亚型,并做接合试验.结果临床分离的8株肺炎克雷伯菌,均产生SHV型BLA,其扩增片段含812个核苷酸,核苷酸及相应的氨基酸序列经GenBank查询无相同序列,为新发现的一种BLA SHV-28型(GenBank注册号:AF299299).接合试验的结果证明耐药基因位于质粒上.结论 8株临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌的产BLA为SHV-28亚型,为新发现的一种新型BLA.
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一种新CTX-M型超广谱β-内酰胺酶及其临床意义
目的查明肺炎克雷伯菌的耐药情况及其超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的分型.方法采用琼脂稀释法对1999年7～12月分离的80株肺炎克雷伯菌进行药敏试验,用美国临床实验室标准化委员会2000年制定的方法测ESBLs,并对所有ESBLs阳性菌株进行质粒接合试验、等电点(pI)测定,并对其中CK23株的ESBLs耐药基因做了序列分析.结果 28/80株(35%)的肺炎克雷伯菌产ESBLs.该28株中20株临床菌的耐药质粒接合成功.等电聚焦电泳显示:结合子的粗提酶中13/20(65%)有pI为8.8的酶,10/20(50%)有pI为7.6的酶,9/20(45%)有pI为5.6的酶.13株有pI值为8.8的ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌对头孢噻肟的耐药明显高于头孢他啶,从中抽取CK23结合子进行耐药基因的PCR扩增和测序,证实为CTX-M型酶,与CTX-M-3比较,仅有3个氨基酸序列不同.结论 28/80株(35%)的肺炎克雷伯菌产ESBLs.13/20(65%)株肺炎克雷伯菌接合子产pI 8.8的β-内酰胺酶,系CTX-M型的ESBLs,它极类似CTX-M-3.
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产超广谱β-内酰胺酶细菌的检测及耐药性观察
目的探讨超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的3种检测技术及调查产ESBLs细菌的耐药现状.方法对538株肠杆菌科细菌用VITEK32测定ESBLs,同时用复合纸片法做表型确证试验及双纸片协同法进行对照监测.结果仪器法、确证法、双纸片法检测ESBLs菌株阳性率分别为20.1%,19.5%,双纸片法阳性率为13.0%.产ESBLs菌对12种常用抗菌药物耐药率明显高于非产酶菌株.结论选择准确快速的检测方法,提高ESBLs菌株的阳性检出率,具有十分重要的临床意义.
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MALDI-TOF MS检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的效果评估
目的 评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术直接检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶效果.方法 收集2018年1月至5月苏州大学附属第二医院分离的21株对亚胺培南和(或)美罗培南敏感性下降的肠杆菌科菌株,包括11株肺炎克雷伯菌、3株产酸克雷伯菌、3株阴沟肠杆菌、4株大肠埃希菌.PCR检测21株菌株分别产A、B和D类碳青霉烯酶基因情况,同时将菌株与0.5 g/L美罗培南溶液孵育2 h后离心取上清进行MALDI-TOF MS检测,通过菌株水解药物所出现的特征性谱峰来快速判断菌株是否产碳青霉烯酶,并与PCR基因检测结果进行Kappa检验统计学比较.结果 PCR检测结果提示21株肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因检测均阳性,其中KPC阳性15株、GES阳性6株、NDM阳性2株、VIM阳性1株、GIM阳性4株、SIM阳性1株,同一菌株可产生一种或多种碳青霉烯酶基因.MALDI-TOF MS直接检测结果显示21株菌株与美罗培南孵育后,在质荷比199 m/z左右处均出现了一个特征性谱峰,为菌株产生碳青霉烯酶水解美罗培南药物所致,与PCR检测碳青霉烯酶基因结果高度一致.结论 本研究运用MALDI-TOF MS技术,可通过捕捉菌株水解碳青霉烯类药物所出现的特征性谱峰来直接检测碳青霉烯酶的产生.
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mCIM法检测产碳青霉烯酶菌株的性能评价
目的 评估改良的碳青霉烯类灭活法(mCIM)筛选产碳青霉烯酶菌株的能力.方法 以革兰阴性杆菌为研究对象,PCR技术检测菌株携带碳青霉烯酶编码基因结果为金标准,CLSI新推荐的mCIM作为产碳青霉烯酶菌株的表型筛选方法,同时增加不同的碳青霉烯类抗生素亚胺培南、厄他培南作为药物底物进行筛选能力的研究.结果 112株耐碳青霉烯类药物革兰阴性杆菌检测到碳青霉烯酶编码基因阳性菌株70株,mCIM采用不同药物底物筛选肠杆菌科产碳青霉烯酶菌株的差异有统计学意义(χ2=80,P<0.05).mCIM采用不同药物底物筛选非发酵菌产碳青霉烯酶菌株的差异有统计学意义(χ2=43,P<0.05).mCIM筛选肠杆菌科与非发酵菌产碳青霉烯酶菌株的特异度均为100%,敏感度肠杆菌科高于非发酵菌.mCIM更适用于肠杆菌科产碳青霉烯酶菌株的筛选,同时选用亚胺培南作为药物底物检测敏感度高.结论 mCIM法检测肠杆菌科产碳青霉烯酶菌株具有高敏感度与高特异性,其操作简便,成本低廉,结果易于判读,适合在临床微生物实验室开展.(中华检验医学杂志,2018,41:321-323)
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北京与杭州地区宋内志贺菌的耐药性及其耐药机制对比研究
目的 了解北京地区与杭州地区宋内志贺菌的耐药状况和基因型的特征.方法 用常规方法 培养、分离细菌,经生化反应和血清凝集试验鉴定到种.用Kirby-Bauer纸片法进行药物敏感性试验.超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)检测采用双纸片确认试验.采用PCR方法 进行基因扩增.结果 从北京地区分离获得203株宋内志贺菌,对氨苄西林、复方磺胺甲噁唑、头孢曲松的耐药率分别为56.70%、94.00%、19.10%.从杭州地区分离获得97株宋内志贺菌,耐药率较高的抗生素也是氨苄西林、复方磺胺甲噁唑、头孢曲松,但耐药率分别为99.00%、91.10%和71.30%.北京地区有43株产ESBLs,占21.18%,其耐药基因为CTX-M1群、CTX-M9群及TEM基因,分别占37.21%、25.58%和41.86%;杭州地区有73株产ESBLs,占75.26%,其耐药基因为CTX-M1群、CTX-M9群及TEM、OXA基因,分别占17.81%、58.90%和45.21%、9.59%.结论 北京和杭州地区宋内志贺菌对氨苄西林、头孢菌素等抗生素耐药性有显著差异,并检测到产ESBLs,主要耐药基因包括CTX-M1群、CTX-M9群及TEM、OXA基因.
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宋内志贺菌流行新趋势和耐药新特点
志贺菌是感染性腹泻的主要病原.其中宋内志贺菌的流行出现新趋势,不但在发达国家是优势流行株,在发展中国家的流行率也逐渐增加,已取代福氏志贺菌成为主要流行菌群.宋内志贺菌对临床常用抗生素(包括头孢菌素)的耐药性升高并快速增长,产生了超广谱β-内酰胺酶及AmpC酶,产生率为0.12％～12.74％,引起广泛关注,但实际的耐药状况更加严峻.目前报道的耐药基因型包括SHV-11、CTX-M-2、CTX-M-3、CTX-M-14、CTX-M-15、CTX-M-27、CTX-M-39、CTX-M-64、CTX-M-65、CTX-M-79、TEM-15、TEM-17、TEM-19、TEM-20、TEM-52和CMY-2等,提示须要加强耐药机制的研究,提高警惕并加强监测.
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宋内志贺菌中检出CTX-M-79型和CTX-M-65型超广谱β-内酰胺酶各1例
1 病例报告患者1,男,37 岁,因发热、腹痛、腹泻就诊,以头痛、乏力、全身酸痛、食欲减退为首发症状,继而出现阵发性腹部绞痛,腹泻8~10次/d,伴里急后重,于2011年7月15日入我院.
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老年人产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌属和大肠埃希菌肺感染的临床、耐药和防治的研讨
目的了解老年人克雷伯菌属和大肠埃希菌肺部感染的临床特征、细菌耐药性和防治方法.方法收集我院2000年～2002年老年克雷伯菌属和大肠埃希菌肺部感染98例,从病史、症状和体征,胸部X线检查、治疗和转归等方面分析老年克雷伯菌属和大肠埃希菌所致肺感染的临床特征.用纸片法检测克雷伯菌属和大肠埃希菌对阿米卡星等12种抗生素的体外药敏检测并测β-内酰胺酶(ESBLs).结果 98例患者中克雷伯菌属68例,大肠埃希菌30例,两组患者有基础疾病各为91.2%和90%(包括COPD、肺心病、支气管扩张、肺癌、肺结核、糖尿病、冠心病、两肺弥漫性间质纤维化等),临床症状以发热、咳嗽、咳痰为主,部分患者有意识状态下降.胸部X线以含有空气支气管症的大叶肺实变(25%和3.3%),小叶浸润(61.8%和83.3%)和肺脓肿及脓胸(13.2%和13.3%)的形成为主要病变,克雷伯菌属组有9例(13.2%)叶间裂下坠形成克雷伯菌属肺感染的特征性X线征象.两组产ESBLs菌各为21株(30.9%)和8株(26.7%),对多种抗生素交叉耐药,对亚胺培南和部分含β-内酰胺酶抑制剂的复合抗生素敏感.结论老年人克雷伯菌属和大肠埃希菌肺感染患者多有基础疾病,临床表现虽无特异性,但意识状态下降、嗜睡、食欲不振、腹泻等需考虑老年肺感染的可能性.诊断依靠病原菌检测并结合临床和X线检查.治疗应根据药敏测定,选择敏感抗菌素,对产ESBLs克雷伯菌属和大肠埃希菌引起肺部感染者,应用亚胺培南或部分含β-内酰胺酶抑制剂的复合物,或者选用药敏测定显示敏感的药物.应严格限制滥用抗生素,严格医院内的消毒隔离制度、防止医院内交叉感染、避免医院内产ESBLs菌株的发生和流行.
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抗菌药物干预对产ESBLs菌医院感染的影响
目的：研究哌拉西林-他唑巴坦替换第三代头孢菌素应用于神经ICU患者的临床价值，探讨其对产ESBLs菌株医院感染发生的影响。方法在哌拉西林-他唑巴坦临床干预前后，检测患者直肠拭子存在产ESBLs的大肠埃希菌，肺炎克雷伯杆菌的情况，比较前后两阶段的产ESBLs细菌的临床寄殖率；并对哌拉西林-他唑巴坦临床干预前后患者的气道分泌物进行培养鉴定、分析药物敏感性，比较前后两阶段产ESBLs细菌发生率变化。结果哌拉西林-他唑巴坦干预后，大肠埃希菌，肺炎克雷伯杆菌产ESBLs菌寄殖率从33.3％降至18.8％（ P＜0.05）。产ESBLs肺炎克雷伯杆菌比率从72.2％降至50％（P＜0.05），产ESBLs大肠埃希菌比率从75％降至39.58％（P＜0.05）。结论在神经ICU病区使用哌拉西林-他唑巴坦替换第三代头孢菌素可降低单元内产ESBLs细菌临床寄殖率，降低产ESBLs菌比率。
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多药耐药阴沟肠杆菌临床株ampC基因的克隆和表达
目的 克隆一株临床分离的多药耐药阴沟肠杆菌的ampC基因,并研究其编码的AmpCβ-内酰胺酶的特性.方法 聚合酶链反应(PCR)扩增阴沟肠杆菌ECLC074的ampC 基因,将扩增的目标片段连接入pMD18-T 进行双链测序后,进一步克隆入pACYC184质粒,用获得的pACYC184/ampC重组质粒转化大肠杆菌MC4100.采用琼脂稀释法测定阴沟肠杆菌ECLC074, 大肠杆菌 MC4100 及大肠杆菌 MC4100重组菌的抗生素敏感性, 采用三维试验及等电聚焦电泳研究β-内酰胺酶的特性.结果 DNA测序及限制性酶切分析结果表明,阴沟肠杆菌ECLC074的ampC 基因已被克隆入pACYC184质粒,大肠杆菌 MC4100重组菌和阴沟肠杆菌ECLC074均产生一种等电点为7.8的β-内酰胺酶,该酶具有AmpCβ-内酰胺酶的耐药表型特征.结论 阴沟肠杆菌的ampC基因可以被克隆入pACYC184质粒,并能在大肠杆菌 MC4100中表达,这为深入研究染色体AmpCβ-内酰胺酶创造了条件.
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产超广谱β内酰胺酶菌株中质粒头孢菌素酶的研究
目的调查产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中质粒头孢菌素酶(AmpC酶)的发生率及其基因型.方法收集北京朝阳医院2001年1～12月头孢西丁耐药的产ESBLs的24株大肠埃希菌、8株肺炎克雷伯菌,采用等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点;接合试验证实酶基因有无可转移性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)确定耐药株的亲缘关系;对AmpC酶基因进行多重PCR及序列分析确定其基因型.结果 2001年北京朝阳医院ESBLs的发生率,大肠埃希菌为16.8%(49/292),肺炎克雷伯菌为16.5%(35/212);ESBLs株中质粒AmpC酶的发生率,大肠埃希菌为2.0%(1/49),肺炎克雷伯菌为17.1%(6/35).这7株菌均产生DHA-1型AmpC酶;1株肺炎克雷伯菌可将头孢西丁耐药性传给受菌体.该7株菌都产TEM-1酶、5株产CTX-M-3型ESBL、2株产SHV-12型ESBL;该7株菌携带质粒2～5个,且都有约33～36kb的大质粒.PFGE发现这7株菌来自多个不同的克隆株.结论北京朝阳医院ESBL阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,有7株既产DHA-1型质粒AmpC酶,又产CTX-M-3或SHV-12 ESBL.这7株菌来自多个不同的克隆株.
