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衰老小鼠视网膜中FOXO1的表达及山茱萸多糖的干预作用
目的:通过山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠视网膜中FOXO1基因表达的影响,探讨其在改善视网膜衰老变化方面的作用及可能机制.方法:实验动物随机分为3组,衰老模型组:100 mg·kg-1·d-1皮下注射D-半乳糖45d后,经胃给予相当于给药组药量体积的温开水连续30d；对照组:每日侧腹部皮下注射生理盐水,剂量参照衰老模型组D-半乳糖给药量,45d后经胃给予相当于给药组药量体积的温开水连续30d；山茱萸多糖给药组:衰老造模(按衰老模型组给药)成功后,按照0.4g·kg-1体质量经胃给药,连续给药30d.RT-PCR和Western blotting法测定小鼠视网膜组织FOXO1、P53mRNA与蛋白的表达,以观察山茱萸多糖对衰老模型小鼠上述指标的影响.结果:各组视网膜组织的FOXO1、P53mRNA和蛋白与对照组相比D一半乳糖致衰老模型小鼠视网膜组织中FOXO1mRNA及蛋白的表达上升,分别为0.541±0.04、0.566±0.04,P53mRNA及蛋白的表达上升,分别为0.822±0.06、0.866±0.07,给药组FOXO1、P53mRNA及蛋白的表达与D-半乳糖致衰老模型组无差异(P＞0.05).结论:随着机体的衰老变化FOXO1,P53在视网膜组织中表达增多；山茱萸多糖不能有效地影响视网膜组织中FOXO1的表达.
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山茱萸多糖对衰老小鼠肝组织中SIRT1基因表达的影响
目的:观察山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠肝脏组织中SIRT1基因的表达的影响,探讨山茱萸多糖的抗衰老作用.方法:Wistar小鼠40只,雌雄各半,2～3月龄,体重18～22g,随机分为青年对照组、衰老模型组、山茱萸多糖小剂量组和山茱萸多糖大剂量组,每组10只.正常饮食水,衰老模型组及山茱萸大小剂量组每日上午颈背部注射D-gal (48mg/kg),连续45d,造模成功后衰老模型组经胃给予相当于给药组药量体积的温开水连续30d;大小剂量给药每日分别按0.4g/kg和0.2g/kg体重经胃给予山茱萸多糖.连续30d,后于末次给药后次日处死小鼠,取肝组织,RT-PCR法检测小鼠肝脏组织中SIRT1 mRNA的表达,Western bloting法检测SIRT1蛋白的表达.结果:与青年对照组相比,衰老模型组SIRT1 mRNA及蛋白质表达下降(P＜0.01);衰老模型组比较,大小剂量给药组SIRT1 mRNA及蛋白质升高,但差异不显著(P＞0.05).结论:山茱萸多糖能提高SIRT1 mRNA及蛋白的表达,延缓衰老过程.
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阿尔海默茨病模型大鼠ERK的变化及山茱萸多糖干预
目的:观察丝山茱萸对AD大鼠学习记忆功能的影响.方法:清洁级Wistar大鼠共75只;体重200～ 250g,随机分为6组:(1)假手术组,10只;(2)青年组,13只;(3)Aβ对照组,13只;(4)阳性对照组,13只;(5)水煎剂组,13只;(6)多糖组,13只;标准统一喂养,饮水自由.除青年组外,其他各组大鼠连续42d腹腔注射D-半乳糖(60mg/kg),之后建立AD大鼠模型,采用淀粉样蛋白1-40(Bamyloid,1-40)海马立体定向微量注射方法;通过HE染色、erk的检测,观察大鼠海马CA1、CA3区神经元的变化.结果:青年组大鼠海马区锥体细胞排列紧密均匀,轮廓清楚,细胞核大而圆,胞浆清亮;假手术组大鼠海马细胞排列尚紧密、欠均匀,轮廓尚清;而Aβ对照组细胞排列松散、紊乱,胞体可见明显萎缩,可见细胞空泡样变、核固缩;阳性对照组、多糖组和水煎剂组细胞排列、细胞密度、核着色和细胞核形状等较Aβ对照组有所改善.ERK染色结果:模型组与正常对照组和假手术组比较,CA1和CA3区阳性细胞率明显下降,有统计学意义(P＜0.01).山茱萸多糖、水煎剂及多奈哌齐组与模型组比较,CA1和CA3区阳性细胞率升高(P＜0.01),多奈哌齐、山茱萸多糖及水煎剂组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:本实验以Aβ毒性学说为切入点,采用海马注射Aβ1-40制作大鼠AD模型,探讨山茱萸对AD的治疗作用及ERK的变化,为临床应用山茱萸治疗AD提供实验依据.
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山茱萸多糖对肺癌细胞的凋亡作用及Bcl-2、Bax表达的影响
目的 探讨山茱萸多糖对人肺癌A549细胞凋亡的作用及凋亡相关基因表达的影响.方法 采用MTT法、DNA琼脂糖凝胶电泳法、免疫组化SP法检测山茱萸多糖对A549细胞凋亡作用及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 山茱萸多糖对A549细胞抑制作用明显,抑制程度与质量浓度呈正相关；DNA琼脂糖凝胶电泳出现相差约200 bp的DNA梯形条带,免疫组化SP法染色显示Bcl-2的表达下降,Bax的表达上升.结论 山茱萸多糖对人肺癌A549细胞的增殖有较强抑制作用,能诱导细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达有关.
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山茱萸多糖延缓衰老作用的研究
健康长寿是人类经久不衰研究的热门课题之一.尤其是进入21世纪后,社会人口的老龄化进程迫使我们对衰老及衰老相关疾病、有效防治衰老措施的研究有更深刻的理解和阐述.而衰老是内外环境引发的机体各种功能普遍减弱的过程,表现为渐进性、累积性和普遍性.中药以其特有的效果,在抗衰老研究领域占有重要的地位.
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山茱萸多糖对自然衰老雌性小鼠卵巢功能的影响
目的 观察山茱萸多糖对自然衰老雌性小鼠卵巢功能的改变.方法 3月龄小鼠为青年组对照,取14月龄左右自然衰老的雌性小鼠为老年组,然后灌服山茱萸多糖(青年组灌生理盐水).24 d后处死小鼠,测血清中激素水平,卵巢组织进行HE染色及电镜检测.结果 HE染色结果显示老年组与青年组比较,可见卵泡和黄体数量减少,闭锁卵泡较多,颗粒细胞消失或极薄而少；多糖组可见各级生长卵泡,部分卵泡周边可见较多而厚的颗粒细胞层,但卵泡数量较青年组少,闭锁卵泡减少.电镜结果显示老年组卵巢颗粒细胞数量明显减少,核膜粗糙,细胞器减少,可见染色质浓集于核边缘,多糖组凋亡征象明显改善.激素检测结果显示老年组孕激素(孕酮P)水平与青年组比明显较低,山茱萸多糖组孕激素值较老年组明显升高,差异显著(P＜0.05)；老年组与青年组比雄激素(睾酮T)值差异不显著,多糖组与老年组也无差异.结论 山茱萸多糖可明显改善自然衰老雌性小鼠的卵巢功能.
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山茱萸多糖对亚急性衰老大鼠下丘脑-腺垂体-性腺轴的影响
目的 观察山茱萸多糖对亚急性衰老大鼠下丘脑-腺垂体-性腺轴的影响.方法 2014年3-6月开展实验,取雄性SD大鼠40只,随机数字表法分为对照组、模型组、山茱萸多糖组、雄激素组,每组10只.采用D-半乳糖(200mg·kg-1·d-1)腹腔注射6周建立大鼠亚急性衰老模型,同时对照组、模型组每天给予生理盐水,药物组分别给予山茱萸多糖(50mg·kg-1·d-1)灌胃、雄激素(5mg·kg-1·d-1)肌肉注射6周.放射免疫(放免)法检测下丘脑促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteotropic hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)的含量.免疫组织化学法检测睾丸支持细胞雄激素结合蛋白(androgen binding protein,ABP)表达情况.计量资料多组间比较用方差分析,组间两两比较用LSD-t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 山茱萸多糖组GnRH、FSH、LH水平较模型组明显下降,T水平明显升高,ABP表达的光密度水平明显增强,对比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 山茱萸多糖对衰老大鼠睾丸功能具有改善作用,其可能的机制与改善下丘脑-腺垂体-性腺轴的功能、增加睾丸组织ABP的表达有关.
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山茱萸多糖对亚急性衰老大鼠睾丸的影响
目的 观察山茱萸多糖对亚急性衰老大鼠睾丸形态及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的影响.方法 2014年3-6月开展实验,取清洁级雄性SD大鼠40只,随机数字表法分为对照组、模型组、山茱萸多糖组、雄激素组,每组10只.采用D-半乳糖200 mg/(kg·d)腹腔注射6周构建大鼠亚急性衰老模型,同时对照组、模型组每天给予生理盐水,山茱萸多糖组、雄激素组分别给予山茱萸多糖50 mg/(kg·d)、雄激素5 mg/(kg·d)灌胃6周.紫外分光光度计法检测睾丸组织中SOD、MDA的含量.HE染色观察睾丸形态结构.计数资料比较用方差分析,组间两两比较用LSD-t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与对照组SOD活性、MDA水平[(119.43±11.62)U/mgprot、(0.69±0.19)nmol/mgprot]相比,衰老大鼠睾丸组织SOD活性[(104.67±09.85)U/mgprot]明显下降,MDA水平[(1.39±0.59)nmol/mgprot]显著升高,对比差异均有统计学意义(均P＜0.05),山茱萸多糖组、雄激素组睾丸组织SOD活性[(116.74±10.06)、(117.38±10.89)U/mgprot]明显升高,MDA水平[(0.89±0.39)、(0.85±0.38)nmol/mgprot]显著降低,对比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 山茱萸多糖对衰老大鼠睾丸具有改善作用,其机制可能与增加睾丸组织SOD的活性,减少MDA的含量有关.
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山茱萸多糖对血管性痴呆大鼠海马单胺类神经递质的影响
目的 探讨山茱萸多糖对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马组织内去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(dopamine,DA)水平的影响.方法 2014年3-12月将雄性SD大鼠60 只分为假手术组、模型组、低剂量山茱萸多糖组、中剂量山茱萸多糖组、高剂量山茱萸多糖组和盐酸多奈哌齐组各10只.除假手术组外,其余各组均制备VD模型.其中假手术组与模型组灌胃生理盐水,其余各组分别连续4周灌胃不同剂量山茱萸多糖和盐酸多奈哌齐.4周后,断头取脑,分别测定各组大鼠海马组织NE、DA、5-HT含量.计量资料采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与模型组比较,中剂量山茱萸多糖组、高剂量山茱萸多糖组与盐酸多奈哌齐组大鼠海马组织中NE、DA、5-HT含量均明显升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与假手术组相比,低剂量山茱萸多糖组与模型组大鼠海马组织中NE、DA、5-HT明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 一定浓度山茱萸多糖具有提高VD大鼠海马NE、DA、5-HT含量、改善大鼠学习记忆能力的作用.
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山茱萸多糖对血管性痴呆大鼠的治疗作用
目的 探讨山茱萸多糖对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠的治疗作用.方法 在2014年3-12月,将30只大鼠随机分为假手术组、模型组、山茱萸多糖组,每组10只,山茱萸多糖组按0.28g/kg剂量给予灌胃,1次/d,持续28 d.制作大鼠VD模型,通过Morris水迷宫实验以及海马、皮层病理学切片,观察山茱萸多糖对VD大鼠的影响.计量资料采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 Morris水迷宫测试结果显示,模型组大鼠逃避潜伏期时间与假手术组相比明显延长[(98.36±9.35)、(90.35±9.98)、(70.56±7.86)、(67.75±8.97)s与(78.65±9.82)、(67.53±7.85)、(58.32±8.65)、(45.31±9.32)s],平台象限路径百分比与平台象限停留时间明显缩短[(26.15±2.1)％、(11.65±4.32)s与(57.36±3.5)％、(23.45±6.54)s],差异均有统计学意义(均P＜0.05);山茱萸多糖干预作用后,大鼠逃避潜伏期时间与模型组相比明显缩短,平台象限路径百分比与平台象限停留时间明显延长[(8337±5.35)、(71.46±3.89)、(6035±7.66)、(47.35±6.58)s、(48.35±3.4)％、(21.98±6.78)s],差异均有统计学意义(均P＜0.05).病理切片发现山茱萸多糖明显减轻VD大鼠皮层及海马的病理变化.结论 山茱萸多糖对VD大鼠有一定治疗作用.
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山茱萸多糖对衰老大鼠学习记忆及海马单胺类神经递质的影响
目的 观察山茱萸多糖对衰老大鼠学习记忆及海马单胺类神经递质水平的影响.方法 选用健康成年SD大鼠40只,随机分为对照组、模型组、低剂量组、高剂量组,每组10只.模型组、低剂量组和高剂量组大鼠每天颈背部皮下注射D-半乳糖140 mg/kg,对照组大鼠每天颈背部皮下注射等量生理盐水1ml,连续6周;低剂量组和高剂量组大鼠从第1d开始分别给予0.14 g/kg、0.28 g/kg山茱萸多糖灌胃,均为1次/d,连续6周,对照组和模型组大鼠每天给予等量的生理盐水2ml灌胃,连续6周.用药结束后,测定大鼠的学习记忆能力并检测海马组织中去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、多巴胺(dopamine,DA)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量.计量资料采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 跳台结果模型组[(54.90±5.40)、(126.55±13.38)s、(2.80±0.79)、(2.30±0.95)次]与对照组[(27.50±4.68)、(198.85±14.70)s、(1.60±0.52)、(1.30±0.48)次]相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05);高剂量组[(30.40±4.50)、(1.70±0.67)s、(189.88±7.99)、(1.40±0.70)次]与模型组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).海马内单胺类神经递质检测结果显示,海马中NE、DA、5-HT含量模型组[(0.371±0.076)(0.579±0.086)(0.477±0.094)μg/g]与对照组[(0.547±0.096)、(0.762±0.085)、(0.650±0.066)μg/g]相比明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05);高剂量组[(0.483±0.069)、(0.686±0.104)、(0.640±0.079)μgg]与模型组相比明显增高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 山茱萸多糖能够提高衰老大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与改善海马中单胺类神经递质代谢有关.
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山茱萸多糖对肺癌A549细胞凋亡的影响及机制
目的 探讨山茱萸多糖对人肺癌A549细胞凋亡作用的影响及机制.方法 收集对数生长期A549细胞,加入终质量浓度分别为25、50、100 mg/mL的山茱萸多糖20 μL,分别培养24、48、72 h,MTF法测定细胞增殖抑制率和山茱萸多糖的半抑制浓度(IC50).倒置显微镜下观察50 mg/mL山茱萸多糖作用后细胞形态变化.免疫组化SP法检测Survivin蛋白表达,用免疫组化评分(IHS)表示.结果 山茱萸多糖作用后A549细胞生长受到明显抑制,细胞增殖抑制率呈明显的量效、时效关系；倒置显微镜下观察到细胞凋亡的典型改变,免疫组化SP法染色显示Survivin表达降低,Survivin蛋白的IHS随浓度增加呈明显下降趋势.结论 山茱萸多糖能诱导A549细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin表达有关.
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山茱萸多糖对AD模型大鼠抗氧化能力的影响
目的:探讨山茱萸多糖对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-４0)诱导的阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠学习记忆、脑组织氧化应激反应的影响.方法:健康SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、山茱萸多糖低、高剂量组,每组12只.海马CA区注射Aβ1-４0构建AD模型大鼠,同时每天给予低剂量(0.14g/kg)或高剂量(0.28 g/kg)的山茱萸多糖灌胃4周.假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃.以Y迷宫检测大鼠的学习记忆能力,测定脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、单胺氧化酶(MAO)活性.结果:与假手术组比较,模型组学习过程中的错误反应次数、训练时间明显增多,记忆正确次数减少(P＜0.01);山茱萸多糖低、高剂量组较模型组错误反应次数、训练时间减少,记忆正确次数明显增多(P＜0.01).与假手术组相比,模型组脑组织GSH-Px、CAT活性明显下降,MAO活性明显升高(P＜0.01);与模型组相比,山茱萸多糖低、高剂量组大鼠脑组织GSH-Px、CAT活性明显升高,MAO活性明显下降(P＜0.01).结论:山茱萸多糖能够改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与对抗机体氧化应激,增强机体的抗氧化能力有关.
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山茱萸多糖免疫兴奋作用的研究
研究山茱萸多糖对免疫抑制小鼠的免疫兴奋作用，现察山茱萸多糖对CY致免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、小鼠溶血素形成、小鼠溶血空斑形成及淋巴细胞转化的影响。提示山茱萸多糖在山茱萸中含量较高，有较好免疫兴奋作用。
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山茱萸多糖对小鼠免疫功能的影响
山茱萸多糖对小鼠免疫功能的影响实验结果表明，大、小剂量山茱萸多糖均可明显提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数(P＜0.05)；可显著促进小鼠溶血素的形成(P＜0.01)；可显著促进小鼠淋巴细胞的转化(P＜0.01)。从而推知，山茱萸多糖是山茱萸的主要活性成分，其补益肝肾作用与所含的多糖类成分相关。
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山茱萸多糖抗氧化作用研究
山茱萸多糖(Cornus officinalis polysaccharide)为主产于河南南阳的山茱萸提取物，对山茱萸的现代研究已有不少报道，但对其多糖类成分的活性较少涉及，本文报道该多糖的抗氧化作用。……
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山茱萸多糖对衰老小鼠视网膜相关因子表达的影响
目的 观察山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠视网膜组织相关因子表达的影响.方法 昆明小鼠90只,随机分为3组,每组30只,其中给药组:100 mg·kg-1·d-1皮下注射D-半乳糖45 d后,按照0.4 g·kg-1体质量经胃给予山茱萸多糖,连续给药30 d；衰老组:100 mg·kg-1·d-1皮下注射D-半乳糖45 d后,经胃给予相当于给药组药量体积的温开水连续30 d:对照组:每日上午侧腹部皮下注射生理盐水,剂量参照衰老组D-半乳糖给药量,45 d后经胃给予相当于给药组药量体积的温开水连续30 d.于末次给药后次日处死小鼠,测定小鼠视网膜组织超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)含量及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC),RT-PCR法测定小鼠视网膜组织SIRT1、p53 mRNA的表达.结果 对照组视网膜组织中的T-SOD和T-AOC分别为(341.27±10.22)U·mgprot-1和(287.40±10.70)U·mgprot-1,明显高于衰老组的(66.92±22.74)U·mgprot-1和(104.36±6.76)U·mgprot-1及给药组的(78.61±27.70)U·mgprot-1和(209.44±11.11)U· mgprot-1(均为P＜0.05),而给药组与衰老组相比差异均无统计学意义(均为P＞0.05).与对照组小鼠视网膜组织中SIRT1、p53 mRNA相对表达量(0.64±0.10、0.12±0.03)相比,衰老组及给药组的SIRTl mRNA表达下降,相对表达量分别为0.13±0.05、0.24±0.07,p53 mRNA的表达上升,相对表达量分别为0.82±0.06、0.54±0.16,给药组与衰老组相比差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 随着机体的衰老,SIRT1在视网膜组织中的表达减少,p53在视网膜组织中的表达增多；山茱萸多糖尚不能有效地提高D-半乳糖致衰老小鼠视网膜组织中SIRT1基因的表达.
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山茱萸多糖提取工艺及理化性质研究
通过单因素和正交实验,以多糖得率为指标,确定山茱萸多糖的佳提取工艺,同时对山茱萸多糖理化性质进行分析,结果表明,山茱萸多糖佳水提工艺条件:温度80℃,料液比1:60,时间5 h,在此条件下山茱萸多糖得率是13.8%,经DEAE-52纤维素离子交换和SephadexG-200柱层析法得到组分S21>,经元素分析仪测定C%37.80%,H%5.64%,S%0.37%,N未检出.
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山茱萸多糖提取工艺和含量测定方法的研究
目的 优选山茱萸中多糖提取工艺,并建立山茱萸多糖含量的测定方法.方法 采用水提醇沉法提取山茱萸中多糖,以料液比、提取时间和提取温度为考察因素,以多糖提取率为评价指标,采用正交试验优选提取工艺;应用苯酚-硫酸法测定山茱萸多糖含量,以苯酚用量、浓硫酸用量和反应时间为考察因素,采用正交试验优选显色条件.结果 山茱萸中多糖佳提取工艺为料液比1∶16、提取时间1.5h、提取温度80℃;用5％苯酚1.0 ml,浓硫酸6 ml,反应时间30 min进行显色.结论 正交设计优化山茱萸多糖的提取条件,多糖得率高;苯酚-硫酸法测定山茱萸多糖含量稳定性、回收率较好.
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山茱萸多糖的抗肿瘤作用及其免疫机制
目的:研究山茱萸多糖的抗肿瘤作用及其免疫机制.方法:采用S180肉瘤小鼠模型作为研究对象,观察山茱萸多糖的体内外抗肿瘤作用及其对荷瘤小鼠外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞、白细胞介素IL-2和白细胞介素IL-4的调节作用,并与阴性对照组进行比较.结果:山茱萸多糖对S180有明显的瘤抑制作用(P＜0.01),可以使外周血CD4+T细胞表达增加,CD8+T细胞表达降低,提高白细胞介素IL-2水平、降低白细胞介素IL-4水平,且与剂量和浓度呈正相关.结论:山茱萸多糖通过调节荷瘤小鼠异常的免疫状态而发挥抗肿瘤作用.
