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天山雪莲愈伤组织提取物对人成骨肉瘤细胞MG-63增殖及分化的影响
目的 研究天山雪莲愈伤组织提取物(extract from callus of Saussurea involucrate,ESI)对人成骨肉瘤细胞MG-63增殖及分化的影响,探讨ESI抗骨质疏松的作用及机制.方法 以MG-63为研究对象,采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测ESI对成骨细胞增殖的影响,相关试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性和羟脯氨酸(Hyp)水平,茜素红染色法观察对矿化骨结节形成的影响;实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测骨保护素(OPG)和核因子-κB活化因子受体配体(RANKL)基因表达水平;Western blotting法检测OPG/RANKL蛋白水平;检测p38特异性抑制剂SB203580对ESI作用于成骨细胞增殖、分化、矿化以及OPG/RANKL表达的影响.结果 ESI低于125 μg/mL对成骨细胞无细胞毒性,31.25、62.5 μg/mL对成骨细胞生长有促进作用;ESI显著提高ALP活性、Hyp水平以及矿化骨结节形成;显著上调MG-63细胞OPG mRNA水平,下调RANKL mRNA水平,上调OPG/RANKL蛋白水平;SB203580显著抑制ESI对成骨细胞增殖、ALP活性、矿化结节形成的促进作用以及对胶原蛋白积累量和OPG/RANKL值的提高作用.结论 ESI能够促进成骨细胞增殖、分化和矿化,其机制可能与调节OPG和RANKL基因表达有关,并且可能通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路进行信号转导.
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天山雪莲鲨烯合酶SiSQS1和SiSQS2调控β-谷甾醇合成机制研究
目的 通过比较天山雪莲Saussureainvolucrata细胞中鲨烯合酶SiSQSl和SiSQS2的位点变异、蛋白原核表达及表达水平差异以及下游产物β-谷甾醇量的高低,探索天山雪莲细胞SiSQS1和SiSQS2催化p-谷甾醇合成的机制.方法 从天山雪莲细胞中克隆出β-谷甾醇生物合成途径上关键酶SiSQS1与SiSQS2基因,并对其进行生物信息学分析;分别对sisQs1和SiSQS2进行原核表达与条件优化,比较二者在天山雪莲细胞中的蛋白原核表达差异;采用RT-PCR技术对二者在天山雪莲三色系细胞中的表达水平进行比较,采用GC-MS对雪莲三色系细胞中β-谷甾醇进行定量分析,并对p-谷甾醇量与SiSQS1、SiSQS2表达水平做相关性分析.结果 SiSQS1和SiSQS2在242E/D存在残基变异,原核表达及条件优化实验表明二者都有目的蛋白条带出现,但二者之间的原核表达适体系不同;化学定量与基因表达水平的相关性分析表明β-谷甾醇量与SiSQS1、SiSQS2基因表达水平呈正相关,相关系数分别为0.92和0.89.结论 SiSQS1与SiSQS2二者242E/D残基变异可能影响SiSQS蛋白的表达,二者在催化活性以及对β-谷甾醇积累调控作用上可能存在一定的功能差异,为研究鲨烯合酶SQS调控天山雪莲细胞β-谷甾醇积累的机制提供了技术支持和奠定了理论基础.
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大孔吸附树脂纯化天山雪莲中有效成分的研究
目的 研究大孔树脂纯化天山雪莲有效成分的工艺条件.方法 以紫丁香苷、绿原酸和芦丁的吸附量和解吸率为评价指标,筛选树脂,并优化了吸附和洗脱条件.结果 HPD400型树脂对天山雪莲各有效成分具有较好的吸附分离性能,适于纯化天山雪莲有效部位.佳工艺条件为:雪莲样品溶液4 BV,上样液的pH值为2～3,吸附流速1 BV/h,吸附时间为12 h,先用4 BV水洗涤,再用30%、50%乙醇各6、4 BV进行梯度洗脱,流速1 BV/h,合并30%、50%乙醇洗脱液,即为目标产品.各有效成分的质量分数均提高了5倍左右.结论 采用HPD400树脂分离纯化天山雪莲中有效成分是可行的.
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不同理化因素对天山雪莲组培苗生长及总黄酮量的影响
目的 研究不同理化因素对天山雪莲组培苗生长和总黄酮生物合成的影响.方法 测定不同理化因素影响下天山雪莲组培苗干质量和总黄酮量.结果 利于天山雪莲生长及黄酮积累的培养条件:MS培养基附加6-BA 0.5 mg/L,NAA 0.05mg/L,氮源浓度40 mmol/L,NH4+-NO3-比例为15∶25,碳源蔗糖质量浓度40g/L,pH值5.0～6.0,光照强度2500lx,温度25℃.结论 各项佳培养条件的组合总体上可以促进天山雪莲生长和总黄酮生物合成,氮源、碳源和温度对天山雪莲生长及总黄酮量的影响为明显.
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哈密“雪山花王”——天山雪莲的研究现状
雪莲是我国西部地区的珍稀名贵药材之一,在中医、维吾尔医中常用的草药.它有补肾活血,强筋骨,营养神经,调节异常体液等功效.在临床上主要用于治疗风寒湿痹痛,小腹疼痛,月经不调等.雪莲的主要化学成分生物碱类、黄酮类、苯丙素类化合物,这与他的药用价值密切相关.雪莲对生长环境有特殊的要求,这决定了它主要生长在新疆天山.但现在雪莲的研究开发上存在一些问题.哈密作为天山雪莲的主要产地,采取了相应的管理措施,以满足市场对雪莲的需求,更重要的是避免雪莲的灭绝.
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天山雪莲培养物的毒性实验研究
急性毒性实验:一次性灌胃天山雪莲培养物后,小鼠大耐受量相当于311.52 g/kg生药量.大鼠长期毒性实验结果表明天山雪莲培养物没有明显毒性.给药组与对照组结果均无明显差异(P≥0.05).结果提示天山雪莲培养物在本实验条件下对小鼠和大鼠均无明显的毒性反应.
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天山雪莲内生菌抗菌活性物质分析
目的 分析天山雪莲内生菌中的抗菌活性物质.方法 采用传统平板培养法从雪莲叶片、花、茎等部位分离内生真菌,用乙酸乙酯萃取和浓缩其PDB培养基,将得到的发酵萃取物用于抑菌测试.结果 N4菌株能够生产对4种主要指示菌株,即大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌均有抑制作用的活性物质.ITS序列和形态特征分析显示N4和N7菌株分别为Eurotium tonophilum和Talaromyces stollii.结论 N4和N7菌株能产抗菌活性物质,N4菌株抗性活性物质抑菌谱较广,其次级代谢产物值得进行深入研究.
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天山雪莲中产黄酮内生真菌的筛选和鉴定
目的 从天山雪莲中筛选产黄酮的内生真菌,并对其进行鉴定.方法 通过显色反应、TLC、HPLC法筛选产黄酮内生菌,标准曲线法测定黄酮含有量,ITS序列分析进行菌种鉴定.结果 筛选到一株产黄酮的雪莲内生真菌YS101,鉴定为Aspergillus tabacinus,它在200 mL PDA培养基中所产的芦丁量大于9.0 μg.结论 本实验首次从天山雪莲中分离得到产芦丁的丝状真菌,可为黄酮的发酵法生产提供参考.
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天山雪莲传递体包封率测定方法的研究
目的 建立维药天山雪莲传递体包封率的测定方法.方法 采用高效液相色谱法同时测定天山雪莲中芦丁和绿原酸,采用反相透析法分离传递体和游离药物芦丁和绿原酸,测定天山雪莲传递体中有效成分芦丁和绿原酸的包封率.结果 反相透析法能将天山雪莲传递体与游离药物芦丁和绿原酸有效分离,反透析平衡时间为10 h,反透析芦丁和绿原酸的回收率分别为(l00.07±0.58)％,(99.83±0.65)％；反透析芦丁和绿原酸加样回收率分别为(99.99±0.56)％,(99.68±0.46)％.以芦丁和绿原酸计的3批天山雪莲传递体样品的平均包封率为(77.63±1.57)％,(69.36±1.73)％.结论 反透析法便捷、准确,适用于天山雪莲传递体的包封率测定.
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RP-HPLC法测定不同产地天山雪莲药材中去氢木香内酯
目的 建立RP-HPLC法测定天山雪莲药材中去氢木香内酯的方法.方法 色谱柱为Symmetry ShieldTmM RP18( 250mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(13∶7);体积流量为1.0 mL/min;柱温为30℃;检测波长为225 nm;进样量为10μL.结果 去氢木香内酯线性范围为0.104 2μg～2.084 μg,平均回收率为99.71％;RSD为0.98％(n=9).结论 本方法操作简单、灵敏、准确、重现性好,可用于天山雪莲药材的质量控制.
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天山雪莲细胞培养物对RANKL诱导破骨细胞的影响
目的 研究天山雪莲细胞培养物对破骨细胞形成以及成熟破骨细胞活性的影响.方法 小鼠巨噬细胞RAW264.7在核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导下形成破骨细胞,诱导过程中加入天山雪莲细胞培养物(以天山雪莲总黄酮计算),通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和Hoechst 33342染色观察破骨细胞形成,以对硝基苯磷酸酯作底物检测TRAP活性;对诱导形成的破骨细胞进行乳酸脱氢酶(LDH)活性检测和Annexin V-PI双染流式细胞术进行细胞凋亡检测,RT-PCR检测Trap和基质金属蛋白酶(Mmp9)mRNA的表达.结果 天山雪莲细胞培养物能够显著抑制破骨细胞的形成以及TRAP酶活;天山雪莲总黄酮小于125 μg/mL时,对破骨前体细胞RAW264.7无细胞毒性,但会破坏成熟破骨细胞细胞膜,显著提高胞外LDH酶活性,并诱导破骨细胞凋亡;62.5 μg/mL天山雪莲总黄酮会显著下调破骨细胞的标志物Trap和Mmp9 mRNA表达.结论 天山雪莲细胞培养物对破骨细胞形成有抑制作用,并能破坏已形成的破骨细胞,降低骨吸收活性.
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天山雪莲提取物磷脂复合物溶解度及稳定性的考察
目的 通过溶解度比较考察天山雪莲提取物磷脂复合物稳定性.方法 分别测定天山雪莲提取物和天山雪莲提取物磷脂复合物在水和不同pH的缓冲溶液中平衡溶解度,不同pH的饱和正辛醇/水中表观油水分配系数,和强光照射、高温、高湿环境下,考察天山雪莲提取物磷脂复合物的质量及其有效成分(绿原酸和芦丁)的质量分数变化.结果 磷脂复合物可明显提高天山雪莲提取物中活性成分(绿原酸和芦丁)平衡溶解度和表观油水分配系数,而且具有一定的抗光照性,但高温下,磷脂复合物稳定性较差,易吸湿.结论 本研究将天山雪莲提取物磷脂复合物能不同程度改善天山雪莲提取物中活性成分的水溶性和脂溶性,同时以固体形式保存其稳定性较好.
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正交试验法优选天山雪莲提取工艺的研究
目的:优选天山雪莲的乙醇提取工艺.方法:采用正交实验设计,以醇浸膏得率,紫丁香苷、绿原酸和芦丁的含量为考察指标,并进行多指标综合评分,优化提取条件.结果:天山雪莲的佳提取工艺为:70%乙醇,加6倍量,提取3次,每次1.5 h.结论:该提取工艺稳定可行.
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雪莲提取物预处理对局灶性脑缺血再灌注小鼠Toll样受体4和核因子-κB表达的影响
目的 探讨雪莲提取物预处理对脑缺血再灌注小鼠脑组织Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响及其可能的神经保护机制.方法 72只昆明小鼠随机分为假手术组、生理盐水组、雪莲提取物组以及依达拉奉组,每组18只.雪莲提取物组经腹腔给予雪莲注射液0.8 g/kg,依达拉奉组给予依达拉奉3 mg/kg,生理盐水组给予同体积生理盐水.连续给药7d后制作大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死体积,应用免疫组织化学染色法检测缺血脑组织TLR4阳性细胞,逆转录聚合酶链反应检测TLR4和NF-κB mRNA表达.结果 生理盐水组、雪莲提取物组和依达拉奉组小鼠脑梗死体积分别为(131.55 ±28.25)mm3、(84.10±13.92)mm3和(65.10±6.78)mm3,存在显著性差异(F=10.158,P=0.012).雪莲提取物组(P =0.020)和依达拉奉组(P=0.005)梗死体积均显著小于生理盐水组,而雪莲提取物组与依达拉奉组无显著性差异.生理盐水组缺血侧皮质和海马区TLR4阳性细胞数显著多于假手术组(P均＜0.001),雪莲提取物组和依达拉奉组皮质和海马TLR4阳性细胞数均显著少于生理盐水组(P均＜0.05),而雪莲提取物组与依达拉奉组无显著差异.生理盐水组TLR4、p50和p65 mRNA表达均较假手术组显著上调(P均为0.000).雪莲提取物能显著下调缺血再灌注24 h时的TLR4、p50和p65 mRNA表达(P均为0.000)；依达拉奉能显著下调TLR4和p65 mRNA表达(P均为0.000),对p50 mRNA表达有下调趋势(P=0.053)；而雪莲提取物组与依达拉奉组之间TLR4和p65 mRNA表达均无显著性差异.结论 雪莲提取物预处理能显著缩小脑梗死体积,下调TLR4和NF-κB亚基表达,通过抑制缺血后炎症反应发挥神经保护作用.
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“救命仙草”铁皮石斛
石斛多生于东南亚,它的一个分支——铁皮石斛在中国被称为"仙草".道家经典《道藏》将铁皮石斛、天山雪莲、三两重人参、百二十年首乌、花甲之茯丛、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草等列为中华九大"仙草".之所以能上排行榜之首,它自然有着神奇的地方.据传,千年的石斛精,千年的山参精,千年的首乌精能像白娘子那样化成人形,谁要是碰到它都是福气,要是能够制服它并且吃到肚子里去,这个人就必定能够延年益寿,长生不老.因而古谚云:铁皮石斛何处有?深山长寿村里求.过去有钱人家生下孩子,第一口喂的是石斛水,人之将死,也要灌一口石斛水,所以石斛水也被称为"救命水".
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新奇滋补食品大揭秘
"平民燕窝"雪莲子的真相"雪莲子,难道是天山雪莲的籽?"黄先生到一滋补店内,品尝了第一次听说的"雪莲子",不由大为惊奇.面对这从未谋面的滋补食品,再听老板的介绍,黄先生心里产生了疑惑——这些食品难道真有那么好的保健效果?
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天山雪莲传递体的制备及其小鼠皮肤给药药动学特点
目的:制备天山雪莲传递体,考察天山雪莲在小鼠腹部皮肤的滞留量与时间的关系及其局部经皮给药的药动学.方法:采用注入-高剪切分散法制备天山雪莲传递体,测定样品的平均粒径、粒径分布等理化性质；以绿原酸、芦丁为指标性成分,采用HPLC法测定不同时间给药皮肤中绿原酸、芦丁生物滞留量,DAS软件拟合药动学参数.结果:天山雪莲传递体中以绿原酸为指标的包封率为83.95％、载药量为4.65％,以芦丁为指标的包封率为71.90％、载药量为3.94％,平均粒径为152.6nm,PDI值为0.202,Zeta电位为-3.29 mV;在小鼠皮肤中滞留量的动力学过程符合二室模型.结论:天山雪莲传递体中有效成分能较快渗透进入皮肤,并在皮肤局部较长时间蓄积.
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天山雪莲提取物平衡溶解度和表观油水分配系数的测定
目的:测定天山雪莲提取物的平衡溶解度及表观油水分配系数.方法:采用HPLC法测定了天山雪莲提取物在水和7种有机溶剂中的平衡溶解度,及天山雪莲提取物在正辛醇-水/缓冲盐溶液中的表现油水分配系数.结果:分别以绿原酸和芦丁为指标,天山雪莲提取物在水中的平衡溶解度为400.81 mg·L-1和559.65 mg·L-1,表观油水分配系数为0.57(logPapp=-0.24)和0.61(logPapp=-0.22),甲醇中溶解度较大,分别为974.73 mg·L-1和2 413.64 mg·L-1.结论:天山雪莲提取物的脂溶性较好,其平衡溶解度和油水分配系数受pH的影响较大,为天山雪莲透皮给药制剂的研究提供基础.
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天山雪莲微乳体外经皮渗透特性
目的:研究天山雪莲微乳对离体大鼠皮肤的渗透能力.方法:采用Franz扩散池,以离体鼠皮为渗透屏障,HPLC法测定,以绿原酸和芦丁为检测指标,考察不同载药量的天山雪莲微乳体外透皮特点.结果:天山雪莲微乳的透过百分率(P)随着微乳载药量的增加而增加,皮内滞留率则随着微乳载药量的增加而降低.结论:天山雪莲微乳有较强的透皮能力,有望开发为天山雪莲的新型透皮给药制剂.
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天山雪莲提取物纯化前后各部位抗炎镇痛作用
目的:观察天山雪莲提取物大孔树脂纯化前后各个部位抗炎镇痛作用.方法:用二甲苯致小鼠耳廓肿胀和冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响观察抗炎作用;采用醋酸扭体法和热板致痛法观察镇痛作用.结果:30%～50%乙醇洗脱部位可明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓的肿胀度和冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高;对抗醋酸所致小鼠的扭体次数增加,提高热板所致小鼠的痛阈值.结论:30%～50%乙醇洗脱部位具有明显的抗炎、镇痛作用.
关键词： 天山雪莲 大孔树脂 30％～50％乙醇洗脱部位 抗炎 镇痛
