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HPLC法测定不同季节千层塔中石杉碱甲和石杉碱乙含量
目的:考察不同季节千层塔药材中石杉碱甲、乙的含量,为确定千层塔的佳采收期提供依据.方法:采用超声提取方法进行样品的制备；用HPLC方法测定千层塔中石衫碱甲、石衫碱乙的含量.结果:石杉碱甲、乙线性范围分别为0.050μg-1.000 μg、0.031μg-0.620μg,回收率分别为100.1％(RSD:0.72％,n=6)、99.5％ (RSD:1.1％,n=6).不同采收期千层塔中的石衫碱甲、石衫碱乙的含量差异较大,其中8月份的含量高,为0.0236％、0.0124％.结论:该研究可为千层塔佳采收期的确定提供参考,以8月份为千层塔药材的佳采收时期.
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贯叶金丝桃的资源研究概况
贯叶金丝桃Hypericum perforatum L.为藤黄科金丝桃属植物,为多年生草本,又名贯叶连翘[1].其地方用名有小贯叶金丝桃、小金丝桃、刘寄奴、小叶刘寄奴、小对月草、千层塔、小汗淋草、小对口草、小过路草等[2],在我国有广泛的分布.中国民间主要用于止血、抗炎、妇科病等方面[3].
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生态环境因子对千层塔生长发育的影响研究
目的:通过生态因子对千层塔生长发育的影响研究,建立和优化野生药材千层塔的栽培体系.方法:采用自然栽培法进行定点、定时观察,研究光照、温度、相对湿度、肥料等因子对千层塔生长的影响.结果:结果表明在温度为18.9～26.3℃、相对湿度81%～90%和光照强度1 330～3 000 lx时,千层塔生长良好,初步筛选出利用山区毛竹林种植千层塔的技术方案.结论:提出了"光照强度和环境相对湿度是制约千层塔生长的两大生态环境因子"的观点,同时说明千层塔野生变家种是可行的.
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千层塔中的2个二萜类化合物
目的:对千层塔的化学成分进行研究.方法:采用硅胶柱色谱等多种色谱方法进行分离,利用NMR,MS等波谱及X-射线单晶衍射数据鉴定化合物结构.结果:分离鉴定了2个二萜化合物:(15R)-12,16-epoxy-11,14-dihydroxy-8,11,13-abietatrien-7-one(1)和3β9-hydroxysandamcopimaric acid(2).结论:化合物1为首次从生物样品中分离得到,化合物2是首次从该植物中分离得到.
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千层塔茎尖组织培养灭菌方法的研究
千层塔为石杉科的蕨类植物,它含有的石杉碱甲素是一种高效胆碱酯醇抑制剂,对重症肌无力症的治疗有效率高达99.2%,且还能提高脑内乙酰胆碱的含量.石杉碱甲素制剂(石杉碱甲素片、哈伯因等)现已应用于临床,用于治疗老年人记忆减退和早期老年性痴呆症.由于全合成石杉碱甲素步骤繁琐、价格昂贵且有副作用.因此,现在无论是结构改造还是直接作为药品,石杉碱甲的主要来源还是少数石杉科植物的提取.该类植物是古老的蕨类植物群,现已大多灭绝,现存的该类植物大多生长缓慢,对环境要求苛刻,且只有千层塔Huperzia serrata、小杉兰Lycopodium selago等少数种类含有石杉碱甲素,故资源极其有限.目前,国内外对石杉科植物的组织培养研究较少.我们采用千层塔为实验材料,对其外植体进行组织培养,筛选出一套理论上较完善的灭菌方法和组织培养条件,且进一步推断出其植株中有内源真菌的共生,并标记了内源真菌的共生部位,为内源真菌的大规模培养提供了依据.
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千层塔的研究进展
千层塔是我国民间一直用于治疗跌打损伤、瘀血肿痛和精神分裂等疾病的一味草药.20世纪80年代中国科学家从千层塔分离到石杉碱甲,药理学研究证明它是一种高效、可逆、选择性强的乙酰胆酯酶抑制剂,对老年痴呆症有显著疗效,引起国内外学者的普遍关注.为了在保护生态环境的同时合理开发和利用千层塔的药用价值,本综述对干层塔的生物学、生态学、化学成分、药理学和生物技术等方面的国内外新研究成果进行总结,并对今后的研究进行展望.
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中药有效成分石杉碱甲的多靶点作用研究进展
石杉碱甲(Huperzine-A,HupA)是从中国民问草药蛇足石杉(Huperzia serrata)(又名千层塔)中分离得到的1种新型石松类生物碱有效单体.近年来大量临床研究发现其对阿尔茨海默病(AD)、血管性痴呆(VD)、智力低下、精神分裂以及其他神经退行性疾病均有一定的治疗作用,且外周不良反应轻微.因此,HupA具有多重神经保护作用.除了乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)之外,它还具有多个分子作用靶点.
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千层塔中Ⅲ型聚酮合酶基因的克隆、表达与功能鉴定
Ⅲ型聚酮合酶是以合成聚酮类化合物为主的一类重要生物合成酶.本文利用逆转录聚合酶链反应从中草药千层塔新鲜嫩叶中扩增聚酮合酶基因,得到一个Ⅲ型聚酮合酶全长cDNA.该基因全长1 212 bp,编码404个氨基酸.与已知的其他植物来源的聚酮合酶氨基酸序列有约50％～66％的同源性.cDNA经双酶切后克隆至pQE81L,并导入大肠杆菌(E.coli) M15中表达,产生大量带寡聚组氨酸标记的重组酶,重组酶分子质量大小约为46.4 kDa.酶活性鉴定研究表明,该重组酶可催化芳香族底物、脂肪族底物生成系列非天然聚酮产物,尤其是其可催化N-甲基邻氨基苯甲酰CoA和丙二酰CoA生成1,3-二羟基-N-甲基-吖啶酮,吖啶酮生物碱一直被认为只能由吖啶酮合酶合成.该工作为研究千层塔中Ⅲ型聚酮合酶在天然药物石杉碱甲生物合成中的作用奠定基础.
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千层塔的23种原植物中石杉碱甲含量
目的 测定各种新鲜千层塔原植物中石杉碱甲的含量.方法 分检千层塔草药原料,核对馆藏标本确定原植物;野外采集上述原植物,从速粉碎与干燥;2%酒石酸提取总碱,HPLC测定石杉碱甲含量,外标法定量.结果 草药千层塔来源于石杉科石杉属与马尾杉属共计23种拟蕨类原植物,其中18种含有石杉碱甲,伏帖石杉中含量高,达0.200 4%,而东北石杉等5种中未检出石杉碱甲.结论 目前中国应用的千层塔原植物来源多样,且各种之间石杉碱甲含量差别较大.
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乙酰胆碱酯酶微反应器的制备及其中药抑制剂筛选方法的建立
目的 制备固定化乙酰胆碱酯酶微反应器,并建立可用于中药乙酰胆碱酯酶抑制剂的快速筛选方法.方法 以戊二醛为交联剂,氨基磁性微球为载体,制备一种新型的固定化乙酰胆碱酯酶微反应器,并对其理化性质和色谱性能进行了表征;应用该酶反应器对千层塔Huperzia serralum各提取部位进行酶抑制剂的筛选.结果 酶反应体系的佳底物浓度为50μmol/L,孵育时间5 min;红外表征、专属性验证、酶动力学考察以及稳定性考察均说明了该酶反应器的有效性;从千层塔提取物中筛选获得了石杉碱甲等乙酰胆碱酯酶抑制剂.结论 建立了一种有效的乙酰胆碱酯酶抑制剂高通量筛选方法,可进一步推广与应用.
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千层塔内生真菌G324-4次生代谢产物化学成分及乙酰胆碱酯酶抑制活性研究
目的:研究千层塔内生真菌G324-4次生代谢产物中的化学成分和抑制乙酰胆碱酯酶活性.方法:应用微生物培养的方法获得微生物菌丝体,再用溶剂提取,色谱方法分离化合物,并通过波谱方法鉴定其结构,Ellman法测定其乙酰胆碱酯酶抑制活性.结果:从千层塔内生真菌G324-4中得到2个化合物,分别鉴定为核丛青霉素(1)和Pencolide (2)；核丛青霉素具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,IC50值为(7.30 ±0.52) μg/mL; Pencolide没有乙酰胆碱酯酶抑制活性.结论:千层塔内生真菌G324-4可代谢产生核丛青霉素和pencolide,有望成为新的药源微生物.
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千层塔内生真菌的分离与鉴定
目的:为从千层塔中分离具有药用价值的内生真菌奠定基础.方法:新鲜千层塔茎段,经酒精和升汞消毒后,接种于PDA平板培养基上进行内生真菌的分离、纯化;根据菌落形态和孢子等形态特征,结合核糖体基因居间序列(ITS序列)进行菌株鉴定.结果:从千层塔的茎中分离出4株内生真菌.内生真菌Ⅰ菌落形态和孢子特征与枝状枝孢霉属的特征相符合,ITS序列与GenBank中多条属于枝状枝孢霉的ITS序列相似,鉴定该菌株属于枝状枝孢霉;内生真菌Ⅱ菌落形态和孢子特征与黄青霉的特征相符合,鉴定该菌株属于黄青霉;内生真菌Ⅲ菌落形态和孢子特征与尖孢镰刀菌的特征相符合,ITS序列与GenBank中多条属于尖孢镰刀菌的ITS序列相似程度高,鉴定该菌株属于尖孢镰刀菌;内生真菌Ⅳ菌落形态与盾壳霉相似,ITS序列与GenBank中6条属于盾壳霉的ITS序列具有较高的相似性,鉴定该菌株属于盾壳霉.结论:从千层塔中分离和鉴定出4株内生真菌,分别属于枝状枝孢霉、黄青霉、尖孢镰刀菌和盾壳霉.
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千层塔的研究概况
千层塔是我国沿用了上千年的中草药,有效成分石衫碱甲具有增强记忆,抗老年性痴呆的作用.本文对千层塔的化学成分、药理作用、临床应用有等方面做了较全面的论述,并时其临床应用前景做一展望.
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不同植株千层塔中石杉碱甲含量研究
目的:比较不同植株千层塔中石杉碱甲含量,优选原料药材.方法:采用HPLC法测定较高植株的大叶、较高植株的小叶、较小植株的大叶、较小植株的小叶千层塔中石杉碱甲的含量,并进一步进行提取方法的比较,从而优选提取工艺.结果:大植株大叶千层塔中石杉碱甲含量较高,达0.016%.且超声提取法优于温浸提取法.结论:生产中可选用较大植株大叶千层塔作为原料,采用超声提取法进行提取.
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珍稀药源植物蛇足石杉(千层塔)研究进展
千层塔由于其治疗老年痴呆等疾病具有特殊的药用价值和潜在的巨大经济价值,正日益受到国内外的关注.该文综述了近年来国内外对千层塔的生物学特性、资源分布、内部显微结构、繁育、石杉碱甲提取分离及药理等方面的研究现状,并提出一些建议,对未来千层塔的研究进行了展望.
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千层塔的性状及组织显微鉴定
千层塔为石杉科石杉属植物蛇足石杉Huperzia serrata Thunb.(Trey.)的干燥全草,又名蛇足草、金不换、万年杉等,生于林荫湿地或沟谷石上,分布于东北、长江流域及华南、西南各地.民间全草治疗痈疖肿毒、毒蛇咬伤、烧伤烫伤等[1].据报道其中的石杉碱甲和乙具有很强的抑制胆碱酯酶的活性和提高学习记忆率,改善老年记忆功能的效果[2、3],临床表明该药物对记忆衰退、重症肌无力和多发梗死性痴呆均有显著疗效,是一种前景广阔的治疗老年痴呆症(AD)的临床有效药物.本文通过对千层塔的药材性状、显微特征等方面的生药学研究,以期为药材真伪鉴别、药物资源的开发利用提供科学依据.
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石杉碱甲的药理作用与临床研究进展
千层塔是我国沿用了上千年的中草药,其有效成分石杉碱甲具有增强记忆,抗老年性痴呆的作用.本文综述了石杉碱甲药理特点与临床研究进展.
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广西不同居群千层塔孢子的扫描电镜观察
目的:在扫描电镜下对广西不同居群的千层塔孢子形态进行观察,为千层塔的种质资源多样性、孢子破壁技术研究及其繁殖提供参考.方法:利用电镜扫描,对不同居群的千层塔孢子大小、形态及表面纹饰和裂缝形态等进行观测,并对结果进行分析.结果:各居群的千层塔孢子均为四面体型,辐射对称,三裂缝,上被有白色颗粒物,赤道面观为近半圆或扇形,极面观为钝三角形,孔穴纹饰,有四分体痕.不同居群在极轴长、赤道轴长、极赤比、孔穴密集程度、裂缝形态及辐射区形态上有所差异.结论:孢子各面观、表面纹饰和裂缝数是不同居群作为同种植物所具备的共同特征.但孢子大小,孔穴多少、深浅和大小及四分体痕形态的差异则体现出不同居群的差异,可作为千层塔种质资源多样性的佐证.
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石杉碱甲的药理作用及临床应用
石杉碱甲又名福定碱,是从石杉科石杉属蛇足石杉(千层塔)中分离出的一种生物碱,化学名为(5R,9R,11E)-5-氨基-11-亚乙基-5,6,9,10-四氢-7-甲基-5,9-亚甲基环芳辛并(b)吡啶-2(1H)酮,商品名为双益平、哈伯因.1993年美国FDA批准上市,1996年我国批准为二类新药,用于治疗阿尔海默茨病(AD),是第二代乙酰胆碱酯酶抑制剂.
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HPLC法测定恩施州产千层塔中石杉碱甲的含量研究
目的:建立千层塔药材中石杉碱甲的含量测定方法.方法:采用HPLC法对千层塔中石杉碱甲进行测定.结果:石杉碱甲对照品在0.0203～0.4028 μg范围内与吸光度呈良好线性关系(r=0.99973),加样回收率为99.93％(RSD=2.34％,n=6).结论:该方法操作简单,对照品石杉碱甲出峰早,重复性好,精密度较高,可作为千层塔中石杉碱甲的含量测定方法.
