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连接蛋白43在肺腺癌中表达的意义
目的 检测肺腺癌组织及正常肺组织中缝隙连接蛋白43(Connexin 43)的表达.方法 应用免疫组织化学法和原位杂交方法检测146例肺腺癌组织及20例正常肺组织中Connexin 43蛋白及mRNA的表达,并分析其表达与肺腺癌转移的关系 正常肺组织和肺腺癌组织中Connexin 43蛋白阳性表达率分别为95% (19/20)和39.9% (59/148);mRNA的阳性表达率分别为90% (18/20)和54.7% (81/148).肺腺癌组织中Connexin 43蛋白及mRNA阳性表达率均低于正常肺组织(P<0.05).在高/中分化和低/未分化的肺腺癌组织中阳性表达率分别为48.7%和30.0%(P<0.05);Cx43在无淋巴结转移和有淋巴结转移的肺腺癌组织中阳性表达率分别为56.3%和34.5%(P<0.05);Connexin43在Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期肺腺癌组织中的阳性表达率分别为51.5%和34.0%(P<0.05).结论 Connexin 43蛋白和mRNA低表达与肺腺癌发生、发展及浸润、转移有关.
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连接蛋白43与心律失常
正常心脏的心电活动与节律性收缩,有赖于心肌细胞之间信息通道传递的完整性.细胞连接通讯是动物体内细胞通讯的重要方式之一,其发挥细胞之间信息传递功能的结构基础是细胞间隙连接,细胞间隙连接的重要结构成份是连接蛋白.而连接蛋白43(Cx43)作为心肌细胞闰盘内间隙连接(Gapajunction)组成中主要的连接蛋白.在维持心肌细胞的连接通讯功能,电信号传导和正常的节律性的收缩中起重要作用.为了深入了解间隙连接蛋白分子与心律失常的关系,本文就Cx43分布与命名,结构功能与心律失常的研究进展进行综述.
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阿片受体激动剂U50,488H通过Cx43介导的抗心律失常作用与抑制钙通道有关
目的 研究U50,488H(选择性κ阿片受体激动剂)是否通过抑制钙通道减少外钙内流参与了κ阿片受体的抗缺血性心律失常作用.方法 将30只SD大鼠完全随机设计分为5组(每组6只):对照组(Sham)、缺血组(Isc)、缺血+U50,488H组(Isc+U50)、缺血+U50,488H+钙离子通道激动剂Bay k8644组(Isc+U50+Bay)、缺血+Bay k8644组heartj@fmmu.edu.cn(Isc+Bay).建立大鼠急性心肌缺血模型,施行30 min心肌缺血前应用U50,488H(1.5 mg·kg-1)及Bay k8644(66.7 μg ·kg-1)进行干预,观察各组心律失常发生情况及连接蛋白43(Cx43)在蛋白和基因水平表达的变化.结果 ①在体动物模型中,Bay k8644可以翻转U50,488H激活κ阿片受体后产生的抗心律失常作用(P<0.05).②在蛋白表达水平,Bay k8644可以阻断U50,488H对缺血心肌Cx43的保护性上调作用(P<0.01).③在mRNA表达水平,Bay k8644亦可翻转U50,488H激活κ阿片受体后对缺血心肌Cx43 mRNA的调控作用(P<0.01).结论 U50,488H可通过抑制钙通道减少外钙内流,参与κ阿片受体对缺血心肌Cx43的稳定性调控及抗缺血性心律失常作用.
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二氮嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及对连接蛋白43的影响
目的:观察二氮嗪预处理(DPC)对大鼠在体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及对心室肌连接蛋白43(connexin 43,Cx43)含量的影响.方法:45只SD大鼠随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(IRI)组、缺血预适应(IPC)组、二氮嗪预处理(DPC)组和5-羟葵酸(5-HD)预处理组,每组9只.建立大鼠在体心肌MIRI模型,连接Medlab生物信号采集处理系统,监测左心室收缩压、舒张末压等心功能指标的变化.再灌注结束后,采取血浆检测心肌酶谱,留取心室肌标本,应用Western Blot法检测Cx43含量.结果:DPC组与IRI组比较,肌酸激酶同工酶及乳酸脱氢酶均下降(P<0.05～P<0.01);Cx43含量的平均光密度显著升高,且以PCx43为主(P<0.01);左心室收缩和舒张功能均较IRI组升高(P<0.05～P<0.01).结论:DPC能维持再灌注心肌Cx43的数量,降低心肌损伤,维护左心室收缩和舒张功能水平,提示Cx43可能参与了二氮嗪预处理的心肌保护作用.
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地奥心血康胶囊对大鼠急性缺血心肌间隙连接蛋白43的影响
目的 观察地奥心血康胶囊对大鼠急性缺血心肌连接蛋白43(Cx43)的影响,进一步探讨其抗心律失常的可能机制.方法 采用随机数字表方法将30只大鼠分成假手术组(SM组,n=10)、缺血组(IM组,n=10)、地奥心血康胶囊组(DA组,n=10).术前地奥心血康胶囊组给予胶囊粉(250 mg/kg),假手术组及缺血组均给予等量0.9％氯化钠注射液,连续干预4周.末次灌胃后,利用在体结扎冠状动脉前降支法建立急性心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎.观察2h各组心律失常的发生情况;造模2h后处死动物,应用免疫组化SP法检测Cx43在各组急性缺血心肌中的表达;应用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测各组动物血清中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力.结果 与SM组比较,IM组心律失常评分[(3.8±0.7)分比(0.7±0.2)分,t=13.466,P<0.01]和血清MDA含量[(8.3±0.8)nmol/mL比4.2±0.7)nmol/mL,t=12.197,P<0.01]显著增高,SOD活力[(68.2±5.5)U/mL比(144.1±7.9)U/mL,t=24.932,P<0.01]降低,心室肌Cx43含量[(0.39±0.06)比(0.92±0.05),t=21.459,P<0.01]显著降低、分布紊乱;与IM组相比,DA组心律失常评分[(2.6±0.8)分比(3.8±0.7)分,t=3.570,P<0.01]降低,Cx43含量[(0.60±0.08)比(0.39±0.06),t=6.641,P<0.01]增高、分布规律.结论 地奥心血康胶囊能有效抑制大鼠急性心肌缺血心室肌Cx43降解,减少心律失常的发生,其机制可能与抗氧化有关.
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实验性小鼠病毒性心肌炎组织中连接蛋白43的表达及与心律失常的关系
目的探讨病毒性心肌炎时连接蛋白43含量和分布的变化及其和心律失常的关系.方法Balb/c小鼠35只随机分为2组,应用免疫组织化学SABC法对正常小鼠和实验性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞连接蛋白43表达进行检测,并对小鼠心电图进行了观察和改良Curtis and Ravingerovand评分.结果连接蛋白43在正常小鼠心肌闰盘中分布均匀,病毒性心肌炎时连接蛋白43的分布面积和密度明显减弱甚至阴性;病毒性心肌炎小鼠较正常小鼠出现较明显的心律失常.结论病毒性心肌炎时受累的心肌细胞连接蛋白43的表达受到抑制可能是导致心肌细胞缝隙连接通讯障碍以致心律失常的一个原因.
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鼠连接蛋白43基因真核表达重组质粒的构建和鉴定
目的构建含鼠连接蛋白43基因的真核表达重组质粒.方法从胎鼠中提取总RNA,经RT-PCR方法获得并扩增含全部编码序列的连接蛋白43 cDNA片段,将其克隆到pBudCE4.1真核表达载体上,并进行酶切鉴定和测序分析.结果 RT-PCR技术扩增出约1.1 kb的连接蛋白43基因全部编码序列的片段.测序分析证实所插入连接蛋白43基因片段的序列完全正确.结论鼠连接蛋白43基因真核表达重组质粒成功构建.
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胃癌和胃癌前病变Cx43、PCNA的表达及意义
目的通过观察间隙连接蛋白Cx43和增殖细胞核抗原(PCNA)在正常胃粘膜、胃癌前病变和胃癌中的表达和分布情况,探讨Cx基因表达与胃癌发生的关系. 方法运用SP免疫组织化学方法检测Cx43、PCNA在70例原发性胃癌,62例中、重度不典型增生和16例正常胃粘膜中表达规律. 结果 Cx43在正常胃粘膜,中、重度不典型增生和胃癌中表达的阳性率分别为100%,83.9%和17.1%,三者比较差异有显著性(P<0.05).Cx43表达与胃癌的分化程度相关(P<0.01).胃癌前病变、胃癌组中的PCNA较正常胃粘膜组增高(P<0.01).Cx43表达与PCNA呈负相关(P<0.01). 结论 Cx43表达降低在胃癌发生发展中起重要作用,Cx43可做为胃癌早期诊断的指标.
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间隙连接蛋白43的研究新进展
间隙连接(GJ)是细胞间连接方式的一种,是相邻细胞间物质和信息直接交换的膜通道结构,由相邻胞膜上的连接子端对端连接而成.每个连接子包含6个哑铃形的蛋白亚单位--间隙连接蛋白(Cx),中间形成一窄小的六棱形小孔道.
关键词： 连接蛋白43 -
子宫平滑肌间隙连接蛋白43、促肾上腺皮质激素释放激素、皮质醇与分娩发动的研究
目的:探讨临产前、后子宫平滑肌细胞间隙连接蛋白Cx-43的表达以及母血、脐血、羊水中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、皮质醇(Cortisol)的水平变化,分析它们与分娩发动的关系.方法:应用免疫组化SABC法结合计算机图象分析技术分析60例足月妊娠产妇子宫下段平滑肌Cx-43的表达;用放射免疫方法测定产妇的静脉血、羊水及胎儿脐静脉血中CRH、Cortisol的含量.结果:临产组子宫肌细胞Cx-43的表达明显强于未临产组,差异有显著性(P<0.01).临产组母血、脐血中CRH、Cortisol及羊水中Cortisol与临产前比较显著升高(P<0.01),且与子宫肌Cx-43蛋白的表达呈显著正相关(P<0.01);结论:CRH、Cortisol在分娩发动中起重要作用,并可能通过促进子宫平滑肌Cx-43的表达参与分娩发动.
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间隙连接蛋白43与肿瘤
细胞间隙连接是一种特殊的蛋白质通道,间隙连接介导的细胞间信息交流对细胞生长、分化及组织稳态至关重要.间隙连接蛋白43(Cx43)是间隙连接蛋白家族成员之一,近年来研究发现Cx43基因表达异常易导致细胞间隙连接通讯功能缺陷,这与多种肿瘤的发生、转移及预后密切相关,Cx43有望成为肿瘤临床诊断和治疗的新靶点.
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慢性肾功能衰竭对大鼠阴茎海绵体缝隙连接蛋白43表达的影响
目的:探讨慢性肾功能衰竭(chronic renal failure, CRF)对大鼠阴茎海绵体缝隙连接蛋白43表达的影响.方法:应用SD雄性大鼠36只,同期行5/6肾脏切除术,建立CRF动物模型.随机分为假手术组(NCRF组,n=6)、CRF模型组(CRF组,n=30),分别于12周注射阿朴吗啡(APO)80 μg/(kg·d)后观察大鼠阴茎勃起情况,应用Western blot方法检测大鼠阴茎海绵体缝隙连接蛋白43(connexin 43,CX43)表达.结果:NCRF组死亡1例,CRF模型组死亡5例.CRF组阴茎勃起率为28%(7/25), NCRF组阴茎勃起率100%(5/5),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).CRF组阴茎勃起次数为(1.0±0.0)次, NCRF组阴茎勃起次数(2.2±0.8)次,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).CRF组大鼠阴茎海绵体组织CX43(0.18±0.08)低于NCRF组(0.53±0.27),两组比较差异有统计学意义 (P＜0.01) .结论:CRF明显降低大鼠阴茎勃起功能.CRF降低大鼠阴茎勃起功能与大鼠阴茎海绵体CX43表达减少密切相关.
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酒精对原代培养的神经前体细胞间隙连接蛋白43表达的影响
目的 研究贴壁培养的神经前体细胞(NPCs)间隙连接蛋白43(Cx43)的表达及酒精时其表达的影响.方法 采用贴壁培养的方法,取孕14d的胎鼠端脑进行NPCs体外培养,经形态学观察和纯度鉴定后,再采用免疫荧光化学方法,观察NPCs中Cx43的表达,利用体外NPCs酒精损伤实验模型,蛋白质免疫印迹技术和刻痕标记/荧光扩散实验,分析酒精对NPCs中Cx43表达及间隙连接功能的影响.结果 原代贴壁培养7 d的细胞NPCs阳性率达86.74%,免疫荧光化学法证实NPCs能表达Cx43,蛋白质免疫印迹实验证实酒精可以减少Cx43的表达,刻痕标记/荧光扩散实验显示酒精对NPCs的间隙连接功能具有抑制作用.结论 原代贴壁培养的NPCs可大量表达Cx43,酒精可以通过降低Cx43表达量抑制间隙连接功能,并且该抑制作用随酒精作用浓度的增加而提高.
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连接蛋白43与Snail在乳腺癌组织中的表达及意义
目的 观察乳腺癌组织中连接蛋白43(Cx43)与Snail的表达,探讨Cx43与Snail在乳腺癌发病中的作用.方法 分别应用SP免疫组织化学方法和Western blot法检测80例乳腺癌组织及相应癌旁正常乳腺组织中Cx43和Snail的表达,并进行相关性分析.结果 Cx43在80例乳腺癌组织及相应癌旁正常乳腺组织中阳性表达率分别为40.00%和95.00%,差异有显著性(P<0.01);Snail的阳性表达率分别为86.25%和20.00%,差异有显著性(P<0.01).Cx43阳性表达与Snail呈负相关(χ2=11.423,P<0.01,r=-0.353).Western blot结果显示:与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中Cx43表达明显减少,而Snail的表达明显增加.结论 乳腺癌组织中Cx43表达下调和Snail表达上调在乳腺癌的发生中发挥一定的作用.
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Cx43基因shRNA慢病毒载体的构建及其对大鼠心肌细胞Cx43基因的作用
目的 构建缝隙连接蛋白(Cx)43基因shRNA慢病毒载体,并检测其对大鼠心肌细胞Cx43基因的作用.方法 针对Cx43基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成靶序列的双链DNA,接入pGCL-GFP载体,挑选阳性克隆行PCR鉴定及测序.用pHelper1.0和pHelper2.0质粒转染293T细胞,包装产生具备感染能力的慢病毒.以293T细胞中绿色荧光蛋白的细胞数量计算病毒滴度；以适感染复数感染大鼠心肌细胞,通过荧光显微镜观察感染效率；应用real-time PCR和Western blot法检测大鼠心肌细胞.Cx43 mRNA及Cx43蛋白表达,并评价其抑制效果.结果 经PCR鉴定和测序证实,Cx43慢病毒载体构建正确,其病毒滴度为8×108 TU/mL、转染效率为82.59％.荧光定量real-time PCR法检测Cx43 mRNA的抑制率为96.10％,Western blot法检测Cx43蛋白的抑制率为77.16％.结论 成功构建了Cx43基因shRNA慢病毒载体,其能显著抑制大鼠心肌细胞Cx43基因的表达.
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HSV-TK/GCV系统杀伤高、低转移卵巢癌细胞株旁观者效应的观察
目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)系统杀伤高、低转移卵巢癌细胞时的旁观者效应及其与间隙连接蛋白(Cx)43表达的关系.方法 比较经HSV-TK/GCV作用的高、低转移性卵巢癌细胞株Ho-8910pm和Ho-8910旁观者效应;检测两种细胞Cx43的表达.结果 HSV-TK/GCV系统对Ho-8910细胞产生明显的旁观者效应,而对Ho-8910pm细胞旁观者效应较弱;Ho-8910细胞的Cx43表达为7.12(平均荧光强度),而Ho-8910pm细胞的Cx43表达为1.34,两者相比,P＜0.05.结论 HSV-TK/GCV系统杀伤低转移卵巢癌细胞时旁观者效应强,与Cx43的表达水平有关.
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环磷酰胺对小鼠胚胎成骨细胞M C3T3-E1缝隙连接功能的影响
目的 探讨环磷酰胺对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1缝隙连接功能的影响.方法 将对数生长期的MC3T3-E1细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入浓度为0.02、0.2、2 μg/mL的环磷酰胺,对照组加入等体积二甲基亚砜.采用CCK-8法检测观察组细胞相对存活率(设对照组存活率为100%),细胞接种荧光示踪法计数一个供体细胞周围含有绿色荧光受体细胞数(以此评价细胞缝隙连接功能),Western blotting 法检测连接蛋白43 (Cx43)蛋白表达.结果 加入浓度为0.02、0.2、2 μg/mL环磷酰胺的观察组细胞相对存活率分别为(100.5 ± 5.5)%、(101.0 ±12.0)%、(97.5 ±8.5)%,Cx43相对表达量分别为0.82 ±0.05、0.86 ±0.09、0.82 ±0.06;对照组细胞相对存活率及Cx43相对表达量分别为100%、0.90 ±0.06;加入不同浓度环磷酰胺的观察组与对照组比较P均>0.05,观察组不同浓度间比较P均>0.05.加入浓度为0.02、0.2、2 μg/mL环磷酰胺的观察组一个供体细胞周围含有绿色荧光受体细胞数分别为(5.2 ±0.11)、(4.7 ±0.19)、(3.9 ±0.34)个,对照组为(7.5 ±0.24)个细胞;加入不同浓度环磷酰胺的观察组与对照组比较P均<0.05,观察组不同浓度间比较P均>0.05.结论 环磷酰胺在0.02~2 μg/mL浓度范围内可降低MC3T3-E1细胞的缝隙连接功能;其机制与Cx43蛋白表达无关.
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NRG-1对急性心肌梗死大鼠梗死周边区心肌组织电传导速度及 CX43表达的影响
目的：探讨神经调节蛋白1（ NRG-1）对急性心肌梗死（ AMI ）大鼠梗死周边区心肌组织的电传导速度（ CV）及连接蛋白43（ CX43）表达的影响。方法将24只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和干预组，每组8只。模型组和干预组均结扎冠状动脉前室间支建立AMI模型，假手术组仅带线，不结扎。干预组于造模前30 min经鼠尾静脉注射重组人神经调节蛋白1（rhNRG-1）0．01μg／g。造模24 h后，通过微电极阵列电极在体记录模型组、干预组梗死周边区心肌组织和假手术组相对应部位心肌组织的场电位，采用Cardio2D软件分析CV，并采用Real-time PCR法检测心肌组织CX43 mRNA相对表达量。结果假手术组、模型组、干预组心肌组织CV分别为（817．17±143．72）、（451．13±167．52）、（871．47±156．14）mm／s，多组间比较，P＜0．05；假手术组和干预组均高于模型组，P均＜0．05；假手术组与干预组比较，P＞0．05。假手术组、模型组、干预组CX43 mRNA相对表达量分别为1．78±0．25、1．42±0．31、3．98±0．45，干预组高于假手术组和模型组，假手术组高于模型组， P 均＜0．05。结论 NRG-1可提高AMI大鼠梗死周边区心肌组织CV及CX43 mRNA表达，有利于稳定心电传导。
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三种ED模型小鼠海绵体组织Cx43蛋白表达变化
目的 观察三种阴茎勃起功能障碍(ED)小鼠海绵体组织中连接蛋白(Cx)43表达变化.方法 将125只Wistar大鼠随机分为DM因素组35只、血管因素组31只、神经因素组28只及对照组31只,其中前三组分别通过腹腔注射链脲菌素(STZ)、结扎髂内动脉及游离并切断海绵体神经等方法建立ED模型.各组均于制模后3周进行阿朴吗啡试验,观察大鼠阴茎勃起情况；并分别于8、12、16周分批断颈处死,采用免疫组化法检测阴茎海绵体组织的Cx43.结果 DM因素组、血管因素组及神经因素组勃起比例及次数均明显低于对照组,阴茎海绵体组织Cx43蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01),尤以DM因素组为著(P＜0.05).结论 三种ED小鼠海绵体组织中Cx43蛋白表达均下降,尤以DM性ED为著.
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连接蛋白43在正常胎儿和室间隔缺损患儿心脏的表达
目的探讨正常胎儿和室间隔缺损患者心脏连接蛋白43(Cx43)表达的分布规律.方法应用SP免疫组化方法,检测10例正常胎儿和5例室间隔缺损患者心肌细胞Cx43的蛋白表达.结果1.Cx43主要在心室肌表达,心房较少.2.正常胎儿心室肌细胞的Cx43多数分布于细胞表面,少数位于闰盘处.3.室间隔缺损心肌Cx43表达的颗粒细小,分布不均.结论Cx43的表达在胎儿时期主要位于心肌细胞表面,闰盘处少.室间隔缺损在未出现心功能异常之前对Cx43的表达影响不明显.
