现代经络研究中的三个主要思路——兼论循经感传现象的机理

现代经络研究已经进行了40多年，各种解释经络现象和阐述经络实质的假说多如牛毛，但基本上可以分为三大类：一是神经论。主张经络现象是神经系统的一种功能表现，并无独立的经络结构。神经论目前已涉及从皮层、脊髓到外周传入的各个神经层次以及植物神经。二是体液论。认为经络就是已知的脉管或间隙性结构，包括早期的血脉论、淋巴管论、间隙体液论等，以细胞内液为介质的细胞缝隙连接假说也可包括其中。三是能量论。认为经络是某种电磁波或电子能量的优势传递渠道。以上三类观点涵盖了人体信息传递的三种基本形式：神经传递、体液传递和能量传递。 假说及学派的形成是科学发展的重要阶段。纵观科学史，由一种学说取代另一种学说的，如天文学中日心说取代地心说；有两种学说互相促进长期共存的，如物理学中的粒子说与波动说；有行政因素影响下一个学派压制另一个学派的，如前苏联在遗传学领域的米丘林学派压制摩尔根学派。由此可见，学派的竞争与学术观点的自由辩论对学科的发展具有重大意义。笔者试对上述三类观点作一点评，以求抛砖引玉。

CX26/CX32缝隙连接蛋白的Tet-on HeLa细胞模型的建立及鉴定

目的 体外建立一种特异性快速有效观察药物对细胞缝隙连接(GJ)作用的特异性细胞模型,为发现作用于GJ的药物以及GJ的特异性研究提供一种有力的技术手段.方法 构建同时双向表达2种不同连接蛋白(CXs)的质粒;用表达CX26/CX32的质粒转染Tet-on HeLa细胞,建立稳定表达CX26/CX32并形成异质性GJ的HeLa细胞模型.设置多西环素(Dox)(1μg/mL)处理组和未处理组,分别用RT-PCR和Western blot法检测细胞CX26 mRNA和蛋白质表达;细胞接种荧光示踪法检测细胞GJ功能;丽丝胺罗丹明B(SRB)法检测细胞的增殖.在上述细胞模型上,用GJ抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB)和GJ激活剂维甲酸(RA)干预.结果 HeLa细胞无内源性CX的表达,Dox可诱导Tet-on HeLa细胞CX26 mRNA和蛋白质表达,并且被诱导表达的CX可形成有效的GJ.2-APB(50 μmol/L)减少稳定表达CX26/Cx32的HeLa细胞间的荧光传递数目,GJ抑制率为51.3％ (P ＜0.01);RA(10 μmol/L)增多细胞间的荧光传递数目,GJ增强率为60.3％ (P ＜0.01).结论 成功建立Dox调控的、稳定表达CX26/Cx32的Tet-on HeLa细胞模型,为寻找可调节GJ功能的药物、观察药物对GJ的特异性作用提供了有力的实验手段.

细胞缝隙连接与心血管疾病

目录一、细胞缝隙连接的形态和结构二、细胞缝隙连接的功能(一)参与信息的传递及神经冲动的传导(二)协调细胞间活动的一致性(三)参与细胞的分化生长与发育(四)缓冲毒性化学物质的毒害作用(五)通过周围细胞滋养受损细胞(六)参与局部的代谢功能三、细胞缝隙连接蛋白功能的调节四、缝隙连接和心血管疾病(一)心律失常(二)动脉粥样硬化(三)先天性心脏病(四)缺血性心脏病(五)心肌病

血管紧张素Ⅱ对心肌细胞肥大和缝隙连接蛋白43表达的影响

人们已经发现心肌肥大时心肌细胞间的缝隙连接重构参与心肌电生理特性的失稳态变化,而缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)是心肌细胞缝隙连接的主要蛋白成分,目前人们尚不清楚心肌肥大时Cx43变化的机制和规律,血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)作为强大的促心肌肥大因子对缝隙连接蛋白重构的影响至今也还鲜见报道,本组观察了AngⅡ对心肌cx43基因和蛋白表达及细胞周期影响,探讨心肌肥大过程中Cx43的变化及AngⅡ对缝隙连接蛋白重构的机制.

细胞缝隙连接与先天性白内障

先天性白内障是儿童中常见的致盲眼病.缝隙连接是组织细胞之间连接的一种基本形式.近年来,研究者发现,缝隙连接的异常与先天性白内障的形成和发展有明显的联系.本文就缝隙连接的生理作用及其与先天性白内障发生机制之间的联系等作一综述.

CD44V6的表达对大肠癌细胞缝隙连接细胞间通讯的影响

大肠癌细胞缝隙连接细胞间通讯功能与大肠癌转移相关性研究

细胞缝隙连接对乳腺癌细胞紫杉醇敏感性的影响

目的:探讨细胞缝隙连接对乳腺癌细胞紫杉醇敏感性的影响.方法:以乳腺癌T47D细胞为研究对象,采用CCK8法检测细胞毒性.结果:紫杉醇(TAX)的细胞毒性有细胞密度依赖性,与低密度相比,细胞在高密度时的毒性显著增加.这说明,细胞在高密度有缝隙连接(Gap Junction,GJ)形成的情况下,TAX的细胞毒性显著增加.此外,细胞在高密度的情况下,分别采用维甲酸(RA)和甘草次酸(18-α-GA)增强或抑制GJ功能,结果发现,RA组的TAX细胞毒性显著高于正常组,相反,给予18-α-GA抑制GJ功能后,TAX的细胞毒性显著降低.结论:增强GJ功能可显著提高乳腺癌细胞对TAX的敏感性.GJ可能是提高TAX对乳腺癌疗效的新靶点.

星形胶质细胞缝隙连接与缺血性脑卒中

缝隙连接(gap junction,GJ)是一种在进化上很古老的结构,广泛分布于包括无脊椎动物在内的多个种属和同一种属的多种组织中.它是进行细胞间直接信息交流的基础,这种交流无须借助第二信使途径,因此被称为直接通讯,又称为缝隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC).在中枢神经系统中,星形胶质细胞间存在大量以缝隙连接蛋白Cx43为结构基础的GJ,并且通过发达的GJIC,构成功能合胞体,对于调节细胞内外的离子平衡、向神经元运送或提供能量底物、调节细胞体积、调控胶质细胞增殖生长及传播细胞间钙波等具有重要意义.在缺血性脑卒中中,星形胶质细胞GJ功能的变化可能与病变早期梗死体积的扩大有关.目前国外已进行了一些实验研究,提出了几种假说.本文拟就当前的研究情况综述如下.

一种快速可靠筛选作用于细胞缝隙连接药物的方法建立

目的 建立一种可以快速有效地筛选能影响细胞缝隙连接(gap junction,GJ)功能药物的方法;为研制以GJ为靶点的新型药物提供技术手段.方法 构建能同时双向表达两种不同连接蛋白(connexins,Cxs)的质粒;用能表达Cx26/Cx32的质粒转染HeLa细胞,建立可以稳定表达Cx26/Cx32并形成异质性GJ的HeLa细胞模型.用荧光传递示踪法测定荧光示踪剂在细胞之间的传递,以此反映GJ的功能.观察公认的GJ激活剂--维甲酸(retinoid acid,RA)和GJ抑制剂--油酸酰胺(oleamide)对GJ功能的影响,检验该方法是否能够准确地检测出GJ功能.结果 Western blot和荧光传递示踪法的结果表明,转染含有Cx26/Cx32 cDNA质粒的HeLa细胞,可以稳定表达Cx26/Cx32;并能够形成可以传递荧光示踪剂在相邻细胞间的GJ.RA和油酸酰胺能分别增强和抑制荧光示踪剂的传递.结论 在转染Cx26/Cx32质粒并稳定表达Cxs的HeLa细胞上,用荧光传递示踪法测定GJ功能,可以快速准确地检测出药物对GJ的作用.该方法的建立为筛选作用于GJ的药物提供了一种有用的技术手段.

缝隙连接细胞间通讯对顺铂疗效的影响研究进展

缝隙连接(gap junction,GJ)是细胞间直接进行信息交换的重要通道,由其介导的通讯方式缝隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)在细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化等生理过程中发挥着关键的调节作用[1].顺铂是临床治疗肿瘤中广泛应用的化疗药物之一,但是肿瘤细胞对顺铂产生耐药性明显降低顺铂的疗效,关于顺铂耐药性产生的具体原因至今仍未阐明.研究发现GJIC与顺铂的治疗效果之间具有一定的关系,但目前对于这方面的研究还不是很深入,因此,进一步阐明GJIC与顺铂之间的关系对于解决顺铂耐药性问题具有重要的意义.

环磷酰胺对小鼠胚胎成骨细胞M C3T3-E1缝隙连接功能的影响

目的 探讨环磷酰胺对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1缝隙连接功能的影响.方法 将对数生长期的MC3T3-E1细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入浓度为0.02、0.2、2 μg/mL的环磷酰胺,对照组加入等体积二甲基亚砜.采用CCK-8法检测观察组细胞相对存活率(设对照组存活率为100%),细胞接种荧光示踪法计数一个供体细胞周围含有绿色荧光受体细胞数(以此评价细胞缝隙连接功能),Western blotting 法检测连接蛋白43 (Cx43)蛋白表达.结果 加入浓度为0.02、0.2、2 μg/mL环磷酰胺的观察组细胞相对存活率分别为(100.5 ± 5.5)%、(101.0 ±12.0)%、(97.5 ±8.5)%,Cx43相对表达量分别为0.82 ±0.05、0.86 ±0.09、0.82 ±0.06;对照组细胞相对存活率及Cx43相对表达量分别为100%、0.90 ±0.06;加入不同浓度环磷酰胺的观察组与对照组比较P均>0.05,观察组不同浓度间比较P均>0.05.加入浓度为0.02、0.2、2 μg/mL环磷酰胺的观察组一个供体细胞周围含有绿色荧光受体细胞数分别为(5.2 ±0.11)、(4.7 ±0.19)、(3.9 ±0.34)个,对照组为(7.5 ±0.24)个细胞;加入不同浓度环磷酰胺的观察组与对照组比较P均<0.05,观察组不同浓度间比较P均>0.05.结论 环磷酰胺在0.02~2 μg/mL浓度范围内可降低MC3T3-E1细胞的缝隙连接功能;其机制与Cx43蛋白表达无关.

血管紧张素Ⅱ受体与肥厚心肌细胞缝隙连接的关系

目的观察压力超负荷心肌细胞缝隙连接的改变和血管紧张素Ⅱ受体的作用.

RNA干扰抑制血管平滑肌细胞缝隙连接Cx43介导的细胞间通讯

RNA干扰技术的效应分子是小分子短链RNA(siRNA).本实验拟通过转染Cx43特异性siRNA检测平滑肌细胞Cx43基因表达和细胞间通讯(GJIC)功能,探讨RNA干扰技术在血管平滑肌细胞缝隙连接功能研究中的应用.

全反式维甲酸诱导脑胶质瘤化疗的旁观者效应

自杀基因抗肿瘤研究中已公认存在旁观者效应.但有关肿瘤化疗是否存在旁观者效应,目前国内外鲜见报道.本研究旨在探讨VM-26在治疗胶质瘤细胞过程中是否存在旁观者效应,及其与肿瘤细胞缝隙连接细胞间通讯功能(GJIC)的关系.

Connexin43在肝细胞癌组织中的表达

目的 探讨缝隙连接蛋白(connexin,Cx) 43在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达和功能.方法 采用免疫组织化学法检测Cx43在20例正常肝脏组织及76例HCC组织中的表达及分布.采用RT-PCR和Western blot法检测正常肝细胞LO2和肝癌细胞SMMC-7721中Cx43的表达,免疫荧光法观察Cx43的分布,细胞接种荧光示踪法测定细胞缝隙连接(gap junction,GJ)功能.结果 Cx43在HCC组织中的阳性表达率较正常肝脏组织明显下调,且从细胞膜向细胞质定位的"内化"现象明显.体外实验进一步证实与LO2细胞相比,Cx43在SMMC-7721细胞上存在表达及分布的异常,并且功能性GJ明显下调.结论 Cx43蛋白数量改变及分布异常与HCC发生密切相关,Cx43有望成为治疗HCC新靶点.

心房颤动与细胞缝隙连接关系及其治疗新进展

心房颤动(AF)是临床上常见的快速性房性心律失常之一,有极高的致残率和致死率.AF的发生和维持的机制是困扰心血管医生的难题.缝隙连接是存在于相邻细胞问的一种由特殊膜蛋白通道组成的,在相邻细胞间中构成一个通道,它埘多细胞生命体的协同行为非常莺要.心脏组织的缝隙连接与心律失常有着密切的关系.近年研究发现,肺静脉肌袖及心房组织细胞缝隙连接蛋白的变化与AF的发生及维持机制密切相关.本文主要综述心房组织的细胞缝隙连接与AF的关系及相关治疗的新进展.

黄芩素增强Cx32组成的细胞缝隙连接提高顺铂的细胞毒性

[目的]黄芩素在转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞上,对顺铂细胞毒性的影响及其与GJ的关系.[方法]SRB检测黄芩素对HeLa32细胞增殖性的影响,Parachute assay检测黄芩素对Cx32组成的GJ功能的影响.细胞集落实验用于检测黄芩素对顺铂细胞毒性的影响及其与Cx32组成的GJ的关系.Western blotting检测对Cx32蛋白的影响.[结果]黄芩素24 h,100 μmol/L浓度以下不影响Hela32细胞增殖.黄芩素(0.0125 ～0.1 μmol/L)能浓度依赖性地增强Hela32细胞间的荧光传递.黄芩素(0.1 μmol/L)分别作用4h,12h,和24 h,细胞间荧光传递强的作用时间是4h.在生长融合细胞组(有GJ形成),黄芩素可以提高顺铂对HeLa32细胞的细胞毒性.在生长未融合细胞(无GJ形成),或用GJ抑制剂oleamide阻断GJ功能,黄芩素不改变顺铂对细胞的杀伤作用.多西环素调控HeLa32细胞Cx32的表达与GJ的形成.在生长融合细胞,不表达Cx32(无GJ形成),可以降低黄芩素增强顺铂细胞毒性的作用.在生长未融合细胞(无论Cx表达与否,均无GJ形成),改变Cx表达无此效应.黄芩素0.0125 ～ 0.1 μmol/L作用细胞4h,对Cx32蛋白表达没有影响.黄芩素0.1μmol/L,作用细胞4h,12h,和24 h,对Cx32蛋白表达没有影响.[结论]黄芩素可增强HeLa32细胞GJ功能,提高顺铂的细胞毒性.黄芩素影响Cx32组成的GJ功能不伴有Cx32蛋白表达的增加.

温胆汤含药血清对谷氨酸条件下原代星形胶质细胞P38MAPK及PKC的影响

目的:探讨温胆汤含药血清在谷氨酸(Glu)环境条件下对星形胶质细胞P38MAPK和PKC表达的影响.方法:将40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组,每组8只.正常组用等量生理盐水ig,氯氮平组ig 20 mg/kg,ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,1次/d,8天后处死取血,制备含药血清.胶质原纤维酸性蛋白免疫染色法鉴定培养的星形胶质细胞纯度.星形胶质细胞在谷氨酸(0、5、10μ mol/ml)条件下经含药血清处理,即谷氨酸对照组、正常血清组、氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg血清组,处理24h、36h和48h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;EHSA法检测P38MAPK磷酸化和非磷酸化及PKC蛋白表达的影响.结果:培养的星形胶质细胞纯度在95％以上.谷氨酸(0μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg含药血清组在3个时间段不同程度增加星形胶质细胞存活率;谷氨酸(5、10 μmol/ml)条件下,温胆汤含药血清处理24h、36h后,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组不同程度增加的细胞存活率;48h后,温胆汤40g/kg含药血清组增加的细胞存活率.谷氨酸(0、5、10μmol/ml)条件下,氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤30g/kg含药血清组能显著上调星形胶质细胞P38MAPK蛋白磷酸化和非磷酸化的表达.谷氨酸(0、5μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达;谷氨酸(10μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达.结论:一定谷氨酸环境下温胆汤能不同程度的增加星形胶质细胞的存活率,能上调P38 MAPK磷酸化和非磷酸化的表达及降低PKC蛋白的表达,从而间接反映出温胆汤能调节星形胶质细胞GJIC(细胞缝隙连接)的功能.

机体细胞缝隙连接与经络相关性的探讨

简要介绍了缝隙连接功能,回顾了有关缝隙连接与经穴低电阻、循经感传以及经络形态的研究.认为进一步开展针刺手法(针体在经穴内的运动)、刺激的强弱、针刺的时间等因素与缝隙连接关系的研究,将是有意义的探索,必将为揭示经络实质及针刺机理作出贡献.