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战士髓核细胞的形态学和生长活性研究
目的：对战士突出椎间盘髓核细胞进行体外培养，并研究髓核细胞的形态学和生长活性。方法从战士髓核组织分离培养髓核细胞并传代，取传1～7代细胞作为研究对象，光镜和电镜下观察细胞形态，并对细胞进行生长计数测定。结果战士髓核细胞可在体外培养传代，前3代细胞形态良好，增殖力强。结论战士突出椎间盘髓核细胞体外培养成功，前3代细胞可用于细胞学和组织工程学研究。
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椎间盘退行性变的相关生物分子因素研究进展
随着年龄的增长,腰腿痛的发生率也逐年升高.引起腰腿痛的原因很多,其中椎间盘退行性病变是其发生的主要病因.从分子生物学角度探讨其发病机制,有望为延缓、修复、甚至扭转椎间盘退行性变提供可行的理论依据.本文对椎间盘退行性变与相关生物分子因素的研究进展进行综述,并据此展望其发展趋势.
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人髓核细胞分离、传代培养方法的建立及意义
目的 建立一种体外分离、培养人髓核细胞(NPCs)的新方法,并探讨其意义.方法 采用0.2% Ⅱ型胶原酶消化法分离人正常NPCs,单层贴壁法进行传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态.取第1、2、3代NPCs,采用CCK-8法检测细胞增殖能力(以吸光度值表示),连续检测12天.取第2代NPCs,采用免疫组化法检测Ⅱ型胶原(Col-2)、细胞角蛋白18(KRT-18)、KRT-19、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖转运子1(GLUT-1)、Sox-9、聚集蛋白聚糖(ACAN)、CD24阳性表达率.结果 分离的NPCs呈多角形或短梭形,类似于软骨细胞;第4代以后,NPCs细胞突起延长,呈长梭形,生长缓慢,出现老化现象.NPCs生长曲线呈S形:1~2天细胞生长缓慢;3~7天细胞生长迅速,进入对数生长期;8天后进入平台期,细胞增殖缓慢.连续培养12天,第1、2、3代NPCs相同时间点吸光度值比较差异均无统计学意义(P均>0.05).第2代NPCs中Col-2、KRT-18、KRT-19、HIF-1α、GLUT-1、Sox-9、ACAN、CD24阳性表达率均≥85.6%(85.6%~91.2%).结论 单纯0.2% Ⅱ型胶原酶消化法及单层贴壁法可分离、培养人NPCs,并经免疫组化染色鉴定证实;传代3代以内的NPCs细胞形态及增殖能力均无明显改变,可作为椎间盘退变相关研究的种子细胞.
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体内转染Ad/CMV-hTGF-β1对兔椎间盘髓核细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响
将15只纯种成年新西兰大白兔随机分为三组各5只,均腹外侧手术人路,找到椎间盘.实验组分别于L4～L5、L5～L6椎间盘髓核内注射以腺病毒为载体的Ad/CMV-hTGF-β120μl,实验对照组注射磷酸盐缓冲液20μl,正常对照组椎间盘未做任何处理.术后3周取椎间盘,观察各组髓核组织细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达情况.结果与其他两组比较,实验组椎间盘髓核组织凋亡细胞明显减少,Bcl-2表达增加,Bax表达降低.提示TGF-B1可通过促进Bcl-2蛋白表达、抑制Bax蛋白表达,有效阻止椎间盘髓核细胞的凋亡.
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不同浓度TGF-β1对人髓核细胞外基质成分基因表达的调控作用比较
目的 研究在体外培养条件下,不同浓度转化生长因子-β1(TGF-β1)对人髓核细胞聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原及SOX-9基因表达的调控作用.方法 以传2代人髓核细胞为研究对象,分别以0.1 μg/L、1.0 μg/L、10μg/L、100 μg/L四种浓度的TGF-β1为培养液,设不含生长因子培养液为对照组,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Aggrecan、Ⅱ型胶原和SOX-9 mRNA表达情况.结果 0.1 μg/L TGF-β1组与对照组相比,无显著性差异.1 μg/L、10 μg/L和100 μg/L TGF-β1组在促进Aggrecan、Ⅱ型胶原和SOX-9基因表达方面作用显著,差异均具统计学意义.其中,10μg/L组促进细胞mRNA表达作用明显.结论 TGF-β1能够促进髓核细胞Aggrecan、Ⅱ型胶原和SOX-9基因的表达,提示TGF-β1有可能在椎间盘退行性疾患的预防和治疗中发挥重要作用.
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高糖环境对大鼠髓核细胞基质代谢的影响
目的:探讨高糖环境对大鼠髓核细胞基质代谢的影响.方法:选取4～6周龄的SD大鼠30只,分离与培养髓核细胞.分别用5、15、25 mmol/L的葡萄糖干预髓核细胞,观察细胞生长情况,实时荧光定量PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖mRNA的表达,Western blot法检测MMP-3、MMP-13、ADAMTS-4、P38及磷酸化P38蛋白的表达,ELISA法检测细胞培养液中CTX-Ⅱ质量浓度,免疫细胞化学染色法检测Ⅱ型胶原蛋白的表达.结果:25 mmol/L组髓核细胞生长较5、15 mmol/L组减缓(P<0.001).与其他两组比较,25 mmol/L组细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖mRNA表达水平降低,Ⅱ型胶原蛋白表达减少,CTX-Ⅱ含量增加,MMP-3及MMP-13表达升高,P38磷酸化水平增加(P均<0.05).结论:高浓度葡萄糖可抑制髓核细胞的生长,并通过诱导P38磷酸化,抑制基质合成,增加基质降解.
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当归对氧化应激损伤的大鼠髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响
目的:研究当归对氧化应激损伤的大鼠髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响.方法:大鼠髓核细胞分为对照组、H2 O2组、H2 O2+当归组.H2 O2组加入400μmol/L H2 O2刺激6 h;H2 O2+当归组先加入1 g/L当归溶液培养24 h,然后加入H2 O2刺激6 h;对照组不进行任何处理.MTT检测细胞活力,Western blot检测增殖相关蛋白[增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白(Cyclin)D1],胞外基质相关因子[蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(Col-lagenⅡ)、基质金属蛋白酶(MMP)3和MMP9]以及Wnt/β-catenin通路相关因子(β-catenin和c-Myc)蛋白的表达,Real-time PCR检测胞外基质相关因子mRNA的表达.结果:与对照组相比,H2 O2组细胞活力、PCNA和CyclinD1蛋白的表达、Aggrecan和CollagenⅡmRNA和蛋白的表达均降低,MMP3和MMP9 mRNA与蛋白的表达、β-catenin和c-Myc蛋白的表达均升高;与H2O2组相比,H2O2+当归组以上指标均有改善(P均<0.05).结论:当归可能通过抑制Wnt/β-catenin通路,促进氧化应激损伤后髓核细胞的增殖及胞外基质的合成.
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身痛逐瘀汤方对椎间盘退变中PI3K/AKT通路影响的研究
目的:探明静水压下髓核细胞凋亡及基质代谢的相关分子生物学机制,揭示身痛逐瘀汤方对静水压下髓核细胞凋亡及基质代谢的调控机制及作用靶点.方法:将8只新西兰兔处死后无菌条件下取出髓核,分为8组,将8组髓核细胞分离培养、鉴定及传代后,加入身痛逐瘀汤方含药血清中,在体外静水压加栽系统中进行干预,在0.3 MPa,1 MPa及3 MPa压力下作用4h,24 h后,使用倒置相差显微镜观察髓核细胞加压前后的形态及生长状况;采用透射电镜观察各组髓核细胞超微结构的变化及差异;使用Cell Counting Kit-8法检测各组髓核细胞的增殖活性;使用Annexin V-FITC/Propidium Iodide双染法检验各组髓核细胞的凋亡状况;使用凝胶电泳迁移法(EMSA)检验各组髓核细胞中PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3-激酶)/(丝氨酸/苏氨酸激酶)的活跃情况;Western Blot法检验Sox9,CollagenⅡ,BAD,Caspase-9及GSK-3在髓核细胞中含量的变化.结果:在同一压力与作用时间下倒置相差显微镜及透射电镜示中药干预组较单纯压力组髓核细胞形态及超微结构保存更完整,生长状况更好;CCK-8法示中药干预组髓核细胞增殖活性更高;Annexin V-FIT检验结果示中药干预组髓核细胞凋亡百分比更低;凝胶电泳迁移法及Western Blot法示PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平明显升高.结论:身痛逐瘀汤能明显激活PI3K/AKT信号通路的表达,延缓椎间盘的退变.
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芪麝颈康丸对颈椎间盘髓核细胞超微结构的影响
为探讨芪麝颈康丸抑制颈椎间盘退变的作用机理,将48只14月龄SD大鼠分成四组,切除其中36只(A、B、C三组)颈后部浅、中层肌,造成颈椎间盘退变模型,D组为正常假手术组.分别给予芪麝颈康丸(A)、颈复康(B)等药物治疗,C、D组不给药.四月后将动物处死,透射电镜下检查椎间盘髓核细胞超微结构的变化,并与正常假手术组(D组)进行对比.结果显示,模型空白组(C)椎间盘退变明显,与A、D组比较,差异有显著意义(P＜0.05,P＜0.01).各组髓核中细胞量少,细胞密度低,模型空白组(C),正常细胞少,退变细胞较多,A、B组退变细胞较少,与正常组较接近.凋亡细胞数A、B、C三组较接近,D组较少,结果表明,芪麝颈康丸的疗效机理主要在于抑制椎间盘细胞的退变,改善髓核细胞的功能.
关键词： 颈椎间盘退变/中医药疗法 芪麝颈康丸/治疗应用 椎间盘 髓核细胞 超微结构 实验研究 -
恒磁场作用诱导骨髓间充质干细胞向髓核细胞分化的实验研究
目的 研究恒磁场作用对骨髓间充质干细胞(MSCs)向髓核细胞分化的影响.方法 采用4',6-二咪基-2'-苯吲哚盐酸(DAPI)标记新西兰大白兔原代髓核细胞,分别在恒磁场(磁场强度依次为0.05,0.10.0.50,1.00mT)及无磁场环境下与第三代MSCs直接接触或间接接触培养.每24 h观察MSCs的形态变化情况,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测MSCs细胞生长情况,采用RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原、Ag-grecan及Sox-9基因表达水平.结果 直接接触-曝磁组MSCs被诱导分化为圆形类髓核细胞,明显优于未曝磁组细胞(P＜0.05).在0.05 mT恒磁场干预条件下,类髓核细胞Ⅱ型胶原蛋白、Aggrecan及Sox-9基因表达水平均较未给予恒磁场作用的类髓核细胞显著增高(P＜0.05),0.10 mT恒磁场则无明显上述作用(P＞0.05);当磁场强度大于0.10 mT时,能明显抑制类髓核细胞增殖水平(P＜0.05).结论 0.05 mT恒磁场作用及细胞直接接触均有利于诱导MSCs向髓核细胞分化.
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hBMP7基因修饰的髓核细胞与同种异体椎间盘复合后体内原位移植的实验研究
目的 探讨用人骨形态发生蛋白7(human bone morphogenetic protein 7,hBMP7)基因修饰的犬髓核细胞与同种异体椎间盘复合后体内原位移植的方法阻止或延缓同种异体椎间盘移植后退变的能力.方法 将18个比格犬椎间盘(L4-5)置于-196℃冻存液中保存2个月,随机分为A、B、C三组,A组以rAAV2-hBMP7转染犬髓核细胞,将能够表达hBMP7蛋白的髓核细胞悬液(5×106个/ml,20μl)注射入复温后的椎间盘中体外培养,B组以相同数量未转染的hBMP7的髓核细胞注入椎间盘后体外培养,C组以20μl DMEM/F12细胞培养液生理盐水注射后体外培养.将培养7 d的3组椎间盘分别移植至15只比格犬的L4-5,在术前、术后即刻及术后1、3、6个月通过X线检测移植椎间盘的愈合情况及其高度变化;通过MRI T2像分析椎间盘的退变情况;术后6个月时处死动物取材,分析腰椎屈伸、侧弯及扭转的生物力学变化;组织学染色检测椎间盘的结构及退变情况;PCR法检测3组髓核组织中hBMP7 mRNA的表达.结果 X线检测显示3组移植椎间盘高度变化指数(DHVI)差异无统计学意义(P>0.05);MRI检测结果显示:在术后12、24周时,B、C两组移植椎间盘的MRI T2像信号灰度比明显低于A组(P<0.05);生物力学检测结果显示:C组的左右扭转度明显大于A、B组(P<0.05),而A、B两组间的差异无统计学意义(P>0.05),而对屈伸及侧弯活动度检测发现3组间差异无统计学意义;PCR检测结果显示:6个月时A组仍可检测到hBMP mRNA的高表达;组织学检测结果显示:移植后6个月时仍有外源性髓核细胞存活,A组相对于B、C两组髓核结构更加完整,所含细胞外基质更多.结论 表达hBMP7的髓核细胞能阻止同种异体椎间盘移植后的退变性.
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尼古丁在人椎间盘髓核细胞退变中的作用
目的 探讨不同浓度及时间的尼古丁在人椎间盘髓核细胞退变中的作用.方法 随机选择5例腰椎骨折患者的椎间盘髓核组织进行体外细胞培养,种于12孔板中,按照0、1、33.3、100、200、500ng/mL的尼古丁浓度以及1、2、3、7、10天加入来培养,每组细胞用Trizol法提取总RNA,用荧光定量PCR测定AQP1,AQP3和Ⅱ型胶原(Collagen)以及蛋白多糖(Aggrecan)的mRNA表达.用SPSS19.0进行统计分析.结果 随着尼古丁浓度升高及培养时间的延长,髓核细胞形态变化明显,贴壁能力减弱,胞质减少,胞核萎缩,空泡形成,凋亡增加.且细胞AQP1及AQP3的mRNA水平随着尼古丁浓度及时间的增加而降低,Ⅱ型胶原及蛋白聚糖mRNA水平也降低,细胞发生退变.结论 尼古丁会降低人椎间盘髓核细胞AQP1和AQP3的表达,进而降低髓核细胞Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达,促进椎间盘退变,且作用时间越长,浓度越高,细胞退变越严重.
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脂肪间充质干细胞向髓核样细胞定向分化研究
目的 探讨SD大鼠来源的髓核(nucleus pulposus,NP)细胞促使脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)向NP样细胞定向分化的分子机制.方法 采用酶消化法取脂肪细胞,极限稀释法纯化细胞;采用组织块培养法培养NP细胞.利用流式细胞技术,免疫荧光及RT-PCR检测对AMSCs及NP细胞进行鉴定.结果 AMSCs中Sca-1和CD44的阳性率较高,而CD45和CD11b阴性,共培养组荧光强度明显亮于单纯AMSCs组,AMSCs在NP细胞的诱导下聚焦蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ)、Sox-9等表达水平较对照组高.结论 共培养环境中髓核细胞分泌的可溶性因子TGF-β1能促使AMSCs向NP样细胞定向分化.
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兔髓核细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为髓核细胞的研究
目的 研究体外新西兰大白兔髓核细胞(nucleus pulposus cells)与SD大鼠骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cells,MSCs)共培养时,兔髓核细胞与大鼠MSCs直接和间接接触对MSCs分化为髓核细胞的影响.方法 DAPI (4',6-二咪基-2'-苯吲哚盐酸)标记原代髓核细胞后,分别与第三代MSCs按接触组和非接触组(Transwell培养系统)共培养.每隔24小时应用免疫荧光观察MSCs的形态学变化,并用RT-PCR方法检测Ⅱ型胶原和可凝集蛋白多糖(Aggrecan)的表达.结果 直接接触培养组中可见分化的MSCs形态和功能接近髓核细胞;非直接接触组的MSCs未见变化.结论 髓核细胞与MSCs的直接接触,是诱导MSCs分化为髓核细胞的重要因素.
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流体剪切力下微小RNA-222调节人髓核细胞c-fos蛋白的表达
目的 探讨流体剪切力作用下微小RNA(microRNA)-222调节人原代髓核细胞c-fos水平.方法 分组:原代人髓核细胞(NPC,n=24)随机平均分为4组:空白对照组(未经任何处理的NPC),在12 dyn/cm2×45 min流体剪切力加载条件下microRNA-222未干扰组(Control组)、microRNA-222过表达组(minic 222组)和microRNA-222沉默组(inhibitor 222组).Western blot检测各组黏着斑激酶(FAK)-细胞外信号调节激酶5(ERK5)信号通路中磷酸化ERK5(p-ERK5)、磷酸化丝裂原细胞外激酶5(p-MEK5)、丝裂原细胞外激酶5(MEK5)及其信号通路下游c-fos的蛋白表达.通过mimic RNA-222及inhibitor RNA-222对microRNA-222进行过表达或沉默,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证过表达或沉默效率,并检测各组c-fos的mRNA水平.结果 流体剪切力加载后,与流体剪切力加载前比较,髓核细胞MEK5蛋白表达降低(空白对照组477.00±25.28,对照组268.83 ±31.78),p-MEK5(空白对照组226.50±25.55,对照组369.00±22.15)、p-ERK5(空白对照组48.17±5.53,对照组85.67±13.32)、c-fos蛋白表达升高(空白对照组646.67±32.59,对照组754.67±37.44).过表达microRNA-222,流体剪切力加载后,与流体剪切力加载前比较,髓核细胞MEK5蛋白表达升高(对照组268.83±31.78,minic 222组374.50±17.21),p-MEK5(对照组369.00±22.15,minic 222组317.50±32.67)、p-ERK5(对照组85.67±13.32,minic 222组65.67±9.94)、c-fos蛋白表达降低(对照组754.67±37.44,minic 222组730.17±21.75).抑制microRNA-222,流体剪切力加载后,与流体剪切力加载前比较,髓核细胞MEK5蛋白表达降低(对照组268.83±31.78,inhibitor 222组176.83±20.88),p-MEK5(对照组369.00±22.15,inhibitor 222组453.00±30.86)、p-ERK5(对照组85.67±13.32,inhibitor 222组109.17±10.30)、c-fos蛋白表达升高(对照组754.67±37.44,inhibitor 222组850.33±33.49),c-fos mRNA表达量(空白对照组545.00±11.75,对照组562.17±28.90,minic 222组548.17±5.53,inhibitor 222组545.33±35.64)、ERK5蛋白表达量(空白对照组328.33±25.87,实验对照组309.83±25.31,minic 222组314.17±24.00,inhibitor 222组309.33±29.66)在各组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 流体剪切力通过抑制microRNA-222促进c-fos蛋白表达并上调髓核细胞骨架关键通路FAK-ERK5活性,加速髓核细胞退变.
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周期性应力通过G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1调控髓核细胞细胞外基质的表达
目的 观察周期性应力下G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1(Git1)对大鼠髓核细胞细胞外基质表达的影响.方法 首先将细胞玻片分为对照组和加压组,通过Western blot检测两组Git1蛋白的表达,荧光实时定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测两组细胞外基质的表达变化.然后使用小干扰RNA(siRNA)阻断Git1蛋白,分为对照组、Git1 siRNA组、siRNA阴性对照组,在加压环境下比较各组细胞外基质的表达变化.结果 加压组细胞的Git1蛋白表达(1.372±0.205)较对照组(0.478 ±0.186)明显增高,加压组细胞外基质的基因表达较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).siRNA处理细胞后,Git1 siRNA组Git1蛋白表达(0.587±0.142)较对照组(1.041±0.103)明显降低.加压环境下,Git1 siRNA组细胞外基质的基因表达较对照组和siRNA阴性对照组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 周期性压力能促进髓核细胞细胞外基质的表达,Git1在压力传导中起信号传递作用.
关键词： G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1 周期性应力 髓核细胞 -
基质细胞源性因子-1/CXC趋化因子受体-4轴调控髓核细胞凋亡的机制
目的 探讨基质细胞源性因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体-4(CXCR4)轴对髓核细胞细胞凋亡的影响及其机制.方法 体外培养大鼠髓核细胞,应用不同浓度的SDF-1α与CXCR4拮抗剂AMD3100进行干预;流式细胞仪检测细胞的凋亡,噻唑蓝(MTT)实验检测对细胞增殖的影响,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、-8、-9酶活性试剂盒检测Caspase-3、-8、-9酶活性,Western blot法检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)同源拮抗剂(bak)表达.结果 SDF-1α(0、50、100、150 μg/L)呈浓度依赖性促进髓核细胞凋亡,凋亡率分别为(5.278±0.562)％、(10.327±1.216)％、(18.634 ±2.632)％、(28.376 ±3.561)％;随SDF-1α浓度的升高,细胞活力明显受抑制,细胞活力为(99.72±0.49)％、(87.26±1.85)％、(75.79±2.89)％、(61.05±4.17)％,(P＜0.01).随SDF-1α浓度的升高,Caspase-3、-9酶的活性明显增加、bak蛋白的表达明显增加(P＜0.05).SDF-1α与AMD3100联合应用处理髓核细胞,与单独使用SDF-1α相比,细胞凋亡明显减少、细胞活力明显增加、Caspase-3和-9酶的活性明显降低、bak蛋白的表达明显减少(P＜0.05).结论 SDF-1α促进大鼠髓核细胞的凋亡、抑制其增殖,作用机制为上调bak蛋白的表达,进而内源性凋亡途径的激活.
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转化生长因子-β1诱导骨髓间充质干细胞向髓核样细胞转化的研究
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的可能性.方法 密度梯度法分离培养兔BMSCs,取BMSCs(P3).实验组:含TGF-β1的诱导培养基,对照组:不含TGF-β1诱导培养基,体外培养两周.阿尔新蓝法(Alcian blue)检测培养基内葡糖胺聚糖(GAG)含量.培养第14天,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测髓核样细胞Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)及聚集蛋白多糖(Aggrecan) mRNA基因表达.免疫组织化学法测定CollagenⅡ的含量变化.结果 GAG检测结果显示,第7、10、13天实验组GAG含量均显著高于对照组(P＜0.01).实验组CollagenⅡ免疫组织化学染色阳性,表达量较对照组高.Real-time PCR结果证实:实验组CollagenⅡ和Aggrecan mRNA表达水平较对照组显著增高(P＜0.01).结论 TGF-β1能明显增加BMSCs向髓核样细胞分化的诱导生物活性,促进BMSCs向髓核样细胞定向分化.
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白细胞介素-6通过p38蛋白调控髓核细胞的增殖和迁移
目的 观察白细胞介素-6(IL-6)对髓核细胞增殖和迁移的调控作用.方法 体外分离培养大鼠髓核细胞,将其随机分为对照组、IL-6组、加压组、IL-6+加压组和IL-6+ p38蛋白抑制剂(SB203580)+加压组.给予相应处理后,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法评估髓核细胞增殖能力,应用划痕实验评估细胞迁移能力.结果 CCK-8法检测各组细胞吸光度值,未加压环境下,IL-6组吸光度值(1.08±0.02)较对照组(0.67±0.01)明显升高(P＜0.05);加压环境下,IL-6组吸光度值(1.51±0.06)也较对照组(0.88±0.04)明显升高(P＜0.05).细胞划痕实验中,未加压环境下,IL-6组迁移距离[(27.73±3.15)像素]较对照组[(12.90±4.77)像素]明显升高(P＜0.05);加压环境下,IL-6组迁移距离[(52.81±3.72)像素]也较对照组[(14.32±3.84)像素]明显升高(P＜0.05).加压环境下使用SB203580阻断p38蛋白后,吸光度值(0.81±0.04)和迁移距离[(33.82±3.72)像素]均较IL-6组[(1.51±0.06)、(52.81±3.72)像素]显著下降(P＜0.05).结论IL-6能通过p38蛋白通路促进髓核细胞的增殖和迁移.
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周期性应力下大鼠髓核细胞中整合素的表达及其意义
目的 探讨周期性应力下大鼠髓核细胞中整合素的表达和意义.方法 体外分离培养大鼠髓核细胞,接种于玻片上,随机分为对照组和加压组.加压组在0～ 200 kPa,0.1 Hz的周期性应力下培养6h.使用荧光实时定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测两组细胞中整合素不同亚基、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达.结果 加压组Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达明显增加,分别为对照组的5.04和4.52倍,同时整合素α1亚基的表达为对照组的1.71倍(P＜0.05).结论 周期性压力对髓核细胞的代谢具有促进作用,整合素α1亚基在压力传导中起信号传递作用.
