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自噬参与压力诱导兔髓核细胞退变的研究
目的 观察自噬是否参与压力诱导兔髓核细胞退变,探讨压力诱导髓核细胞退变机制.方法 从3月龄兔胸腰段脊柱提取兔髓核细胞培养,取第2代兔髓核细胞,1 Mpa压力环境下培养12、24、48 h.细胞活力与细胞毒性检测观察压力对细胞生长的影响,透射电镜观察压力条件下细胞的微观结构,单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察细胞内自噬性空泡结构及自噬率,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)观察自噬相关基因在压力条件下的表达.结果 压力导致细胞衰老及死亡,透射电镜见细胞内存在自噬体结构,MDC染色后行流式细胞学检测显示12、24、48 h自噬率分别为(1.580±0.171)％、(7.930±0.252)％、(13.530±1.206)％,PCR结果显示压力诱导自噬相关基因(LC3B、Beclin-1)表达量与正常条件下表达明显增多(P＜0.05),且随着压力培养时间延长,LC3B、Beclin-1表达量也明显增多(P＜0.05).结论 自噬参与压力诱导细胞退变的过程,为压力诱导椎间盘髓核细胞退变的防治提供新的途径.
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周期性应力下磷脂酶C-γ1及其抑制剂对大鼠髓核细胞增殖能力的影响
目的 观察周期性应力下磷脂酶C-γ1(PLCγ1)及其抑制剂对大鼠髓核细胞增殖的影响.方法 将细胞玻片随机分成4组:对照组、加压0.5h组、加压1h组、加压2h组.Western blot法检测各组PLCγ1、磷酸化PLCγ1表达.另取细胞玻片,随机分为3组:对照组、加压6h组、U73122+加压6h组.使用荧光实时定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各组细胞外基质的表达.结果 PLCγ1磷酸化水平在加压0.5h组(0.109 ±0.010)、加压1h组(0.138±0.001)、加压2h组(0.201 ±0.014)较对照组(0.086 ±0.005)增高.加入U73122后,细胞外基质的基因表达,以对照组低,加压6h组高,U73122+加压6h组居中,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 周期性压力能促进髓核细胞的增殖,PLCγ1在压力传导中起信号传递作用.
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羧甲基壳聚糖对体外培养大鼠椎间盘髓核细胞增殖、细胞周期及细胞外基质分泌的影响
目的 观察羧甲基壳聚糖(CMCS)对体外培养大鼠椎间盘髓核细胞细胞周期进程、细胞周期蛋白表达及分泌细胞外基质的影响.方法 使用酶消化法提取大鼠椎间盘髓核细胞并进行体外培养,Ⅱ型胶原免疫组织化学鉴定髓核细胞.将髓核细胞分为:对照组、不同浓度CMCS处理组(100、200、500 mg/L),作用24 h后通过碘化丙锭(PI)染色流式细胞技术检测细胞周期进程.通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot法检测不同浓度(100、200、500 mg/L) CMCS对髓核细胞内增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白(Cyclin)D表达的影响,并通过FQ-PCR法检测不同浓度(100、200、500 mg/L) CMCS对髓核细胞分泌细胞外基质Ⅱ型胶原的影响.结果 培养的细胞经Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定显示其表达阳性,表明为髓核细胞；通过FQ-PCR及Western blot检测增殖相关蛋白PCNA可见通过100、200、500 mg/L CMCS作用后髓核细胞表达PCNA与对照组比较分别增加12.3％、18.2％、54.2％与25.1％、52.7％、66.9％ (P ＜0.05)；经流式细胞仪检测发现经100、200、500 mg/L CMCS处理的髓核细胞处于S期细胞比例是对照组的1.58、2.34与2.61倍(P＜0.05)；Cyclin D表达分别是对照组的1.26、2.15、2.64倍与1.53、1.69、1.83倍(P ＜0.05)；FQ-PCR及Western blot检测结果表明100、200、500 mg/L CMCS分别促进髓核细胞分泌Ⅱ型胶原表达是对照组的1.67、2.24、2.79倍与1.48、1.65、1.77倍(P＜0.05).结论 CMCS对体外培养髓核细胞增殖相关蛋白PCNA表达具有促进作用,可促进细胞周期进程及细胞周期蛋白表达,对髓核细胞分泌细胞外基质具有促进作用.
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羧甲基壳聚糖对硝普钠诱导大鼠髓核细胞诱导型一氧化氮合酶和基质金属蛋白酶表达的影响
目的 观察羧甲基壳聚糖(CMCS)对硝普钠(SNP)诱导的大鼠椎间盘髓核细胞增殖、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响.方法 使用酶消化法提取大鼠椎间盘髓核细胞并进行体外培养,Ⅱ型胶原免疫组织化学鉴定髓核细胞.通过不同浓度(1、2、3mmol／L)SNP诱导髓核细胞,并在经SNP诱导的髓核细胞内加入不同浓度(100、200、500 mg/L)CMCS进行处理,作用24h后通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞增殖.通过荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法检测不同浓度(100、200、500 mg/L) CMCS对SNP诱导髓核细胞内iNOS及MMP-3表达的影响.结果 培养的细胞经Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定显示其表达阳性,表明为髓核细胞;通过CCK-8检测发现不同浓度SNP可诱导髓核细胞使其增殖活性降低,其中3 mmol／L SNP使髓核细胞增殖降低62％ (P＜0.05),通过100、200、500 mg/L CMCS作用后髓核细胞增殖分别增加17％、35％和58％;Real-time PCR检测结果表明3 mmol/L SNP可诱导髓核细胞iNOS及MMP-3 mRNA表达增加,分别增加1.84倍和1.24倍,经100、200、500 mg/L CMCS作用后其表达分别降低17％、61％、69％和12％、47％、51％ (P＜ 0.05);Western blot检测结果表明3 mmol／L SNP可诱导髓核细胞iNOS及MMP-3蛋白表达增加,经100、200、500 mg/L CMCS作用后其表达有不同程度的降低.结论 CMCS对SNP诱导的髓核细胞增殖抑制具有保护作用,并对SNP诱导髓核细胞内iNOS及MMP-3表达增高具有抑制作用,从而抑制髓核细胞发生退变.
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正常髓核细胞的黏弹性研究
目的 观察正常髓核细胞的黏弹性。方法 髓核组织取材于3例脊柱侧凸矫形手术者术中取出废弃的髓核组织,用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化分离细胞,Ⅱ型胶原免疫荧光组化和蕃红染色进行细胞鉴定,测量细胞直径,采用微管吸吮技术分析髓核细胞的黏弹性特性。结果 髓核细胞直径为(15.40±1.83)μm,正常髓核细胞的黏弹性参数k1(0.101 ±0.052) kPn、k2(0.353±0.199) kPa和μ(3.034±1.843) kPa·s。直线相关性分析表明,仅k1与髓核细胞直径明显相关(r=-0.389,P＜0.05)。结论 正常髓核细胞表现为典型的黏弹性固体蠕变特征;微管吸吮技术可以作为测量髓核细胞生物力学特性的可靠方法。
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营养剥夺诱导髓核细胞凋亡与BNIP3蛋白表达上调
目的 通过营养剥夺(低氧-无糖-无血清)诱导髓核细胞凋亡,检测髓核细胞线粒体蛋白BNIP3(bcl-2/Adenovirus El B19-kd Protein-Interacting Protein 3)表达。方法 体外分离培养大鼠尾椎间盘髓核细胞,传代至P1代后将细胞分为正常对照组:DMEM/L培养基(1000 mg葡萄糖/L)、10％胎牛血清、21％ O2;实验组:DMEM无糖培养基、无血清、1％ O2;分别将两组细胞培养0、24、48、72 h后,免疫荧光检测BNIP3蛋白表达并定位、流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位。结果 免疫荧光检测显示正常对照组细胞低表达BNIP3,定位于胞质且未结合线粒体,实验组显示随培养时间延长,BNIP3表达呈上升趋势,在72 h明显增加,共定位发现BNIP3主要分布于胞质,并与线粒体相结合;流式细胞仪检测发现正常对照组细胞凋亡率为(1.02±0.21)％,实验组细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),分别为(4.22±0.34)％、(7.5l±2.33)％、( 19.93±2.58)％,线粒体膜电位结果显示实验组24、48、72 h线粒体膜电位均不同程度降低,分别为(90.23±1.32)％、(87.30±2.21)％、(82.63±2.91)％,均显著低于正常对照组(94.21±3.96)％(P＜0.05)。结论 营养剥夺可能通过诱导BNIP3表达增加并结合线粒体导致髓核细胞凋亡。
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地塞米松对兔髓核细胞增殖及增殖细胞核抗原表达的影响
目的 观察地塞米松对兔椎间盘髓核细胞增殖的影响,以及对髓核细胞表达增殖细胞核抗原(PCNA)的影响.方法 无菌条件下取兔椎间盘,常规分离消化髓核细胞进行培养;传代培养第2代髓核细胞7 d,随机分为4组,实验组给予l～100 nmol/L地塞米松进行培养,对照组给与等量磷酸盐缓冲液(PBS),培养5 d后收集细胞.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测地塞米松对兔髓核细胞内PCNA mRNA表达的影响;并提取蛋白用Western blot方法检测PCNA蛋白表达.结果 RT-PCR及Western blot检测结果表明,1～100 nmol/L地塞米松可增加兔髓核细胞内PCNA的表达,当地塞米松浓度为100 nmol/L时效果显著,分别增加了0.42和1.37倍,差异有统计学意义(P<0.05).结论 地塞米松可以促进兔椎间盘髓核细胞的增殖,并可使兔髓核细胞内PCNA的表达增高.
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地塞米松对兔髓核细胞增殖及聚集蛋白聚糖表达的影响
目的 观察地塞米松对兔椎间盘髓核细胞增殖的影响,以及对髓核细胞分泌聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的影响.方法 无菌条件下取兔椎间盘,常规分离消化髓核细胞进行培养;传代培养第2代髓核细胞7 d,随机分为两组,实验组给于1～10000 nmol/L地塞米松进行培养,对照组不给于地塞米松,分别培养不同的时间段.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测地塞米松对兔髓核细胞增殖的影响;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测地塞米松对兔髓核细胞内Aggrecan mRNA表达的影响.结果 MTT检测结果表明地塞米松对兔髓核细胞增殖有促进作用,佳作用浓度为100nmol/L,佳作用时间为48 h;RT-PCR检测结果表明经地塞米松处理的髓核细胞其Aggrecan表达明显较对照组高,是对照组的2.04倍(0.92/0.45),差异有统计学意义(P<0.05).结论 地塞米松可促进兔椎间盘髓核细胞的增殖,并可使兔髓核细胞内Aggrecan表达增高.
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Ad-人骨形态蛋白-2转染人变性椎间盘髓核细胞对细胞外基质代谢的影响
椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration,IDD)引起的一系列脊柱退行性疾病及继发病变在临床上十分多见.
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人骨形态发生蛋白-7基因转染对原代培养兔髓核细胞生物学活性的影响
为探讨骨形态发生蛋白-7(BMP-7)基因疗法治疗椎间盘退变(IDD)的可行性,我们在体外将整合有人BMP-7基因的重组腺病毒载体(Ad-hBMP7)导入原代培养的兔髓核细胞内,观察BMP-7基因在髓核细胞内的表达以及对髓核细胞增殖和细胞外基质(ECM)合成的影响.
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杆状病毒介导的GFP基因转染兔髓核组织的离体研究
杆状病毒是一个极具应用前景的基因治疗载体[1-4].我们采用机械组织分离法进行髓核组织块的培养,以探讨Ac/CMV/GFP转染组织块中髓核细胞的效率及外源性基因的表达水平.
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芯片分析椎间盘退行性变相关mRNA表达谱
目的 生物信息学分析椎间盘退行性变过程中基因的差异表达,探讨退变过程中起关键作用的基因并分析其在退变过程中参与的生物学过程及可能的机制.方法 对照组椎间盘髓核组织取自于我院行先天性脊柱侧弯矫形术的3例患者,退变组椎间盘髓核组织取自经影像学确认并于我院行间盘切除术的3例腰椎间盘退变患者.Trizol法裂解组织并用氯仿提取总RNA用于基因芯片杂交.应用R软件中的limma包分析对照组和退变组基因的差异表达,分别通过DAVID和KEGG数据库对差异基因进行基因本体(G0)富集分析和通路分析找出参与退变过程的主要生物学过程及信号通路.应用STRING数据库构建差异基因的蛋白相互作用网络,并确定椎间盘退变过程中关键基因.采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)进一步验证芯片分析的结果.结果 通过基因表达差异分析,与对照组比较退变组中共有153个差异表达基因,其中有111个基因表达上调,42个基因表达下调.GO富集分析结果显示差异基因主要富集在细胞程序性死亡、细胞凋亡等生物学过程,KEGG通路分析结果显示差异基因主要富集在细胞周期等相关通路上.蛋白相互作用网络结果显示着丝粒复合元件(NIDC80)、有丝分裂检查点丝氨酸(BUB1 B)、核基质蛋白21(RAD21)位于网络的核心.RT-qPCR结果证实NDC80、BUB1B、RAD21在退变的椎间盘髓核组织中分别表达上调(3.23±0.67)倍(P=0.016)、(3.79±0.91)倍(P=0.005)、(2.73±0.51)倍(P=0.009).结论 本研究结果显示,在椎间盘退变的过程中,NDC80,BUB1B、RAD21作为关键基因主要参与髓核细胞的凋亡及死亡过程.
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基质细胞衍生因子-1调控髓核细胞基质金属蛋白酶-13表达的机制
目的 探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对髓核细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的调控机制.方法 体外培养大鼠髓核细胞,应用SDF-1进行干预,以CXC趋化因子受体4、7(CXCR4、CXCR7)中和抗体阻抑SDF-1/CXCR4、7轴,检测MMP-13和活性的改变,荧光素酶报告基因检测法验证SDF-1与MMP-13作用关系.结果 SDF-1促进髓核细胞MMP-13表达,CXCR4中和抗体抑制MMP-13的表达和活性改变(P＜0.05).SDF-1增加MMP-13启动子的活性2.7倍,CXCR4抑制剂可降低MMP-13启动子活性3.8倍(P＜0.05).结论 SDF-1结合CXCR4后,激活MMP-13启动子并上调其表达水平.
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营养剥夺诱导髓核细胞凋亡诱导因子核转位的研究
目的 通过营养剥夺模拟体内髓核细胞退变微环境,检测促死亡蛋白凋亡诱导因子(AIF)的表达及细胞器定位.方法 体外分离获取大鼠尾椎间盘髓核细胞,将细胞分别置人正常环境[杜尔贝科改良型低糖培养基(DMEM/L)培养基、10％胎牛血清、21％ O2]和营养剥夺环境(DMEM无糖培养基、无血清、1％ O2)培养0、24、48、72 h后,采用细胞免疫荧光染色及Western blot 检测AIF蛋白表达水平及细胞器定位,流式细胞仪检测细胞存亡率及线粒体膜电位,酶标仪检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)活性.结果 细胞活性检测显示实验组活细胞比例分别为(82.0±2.4)％、(61.0±3.1)％、(42.0±2.9)％,较对照组的98％明显降低(P＜0.05),实验组细胞凋亡比例分别为(12.0±1.2)％、(32.0±1.6)％、(49.0±2.1)％,与对照组的2％比较明显增高(P＜0.05);线粒体膜电位检测结果显示实验组细胞线粒体膜电位降低,发橙色荧光的细胞比例分别为(80.22±2.31)％、(61.20±1.52)％、(15.01±2.91)％,均显著低于正常对照组[(93.00±3.22)％,P＜0.05];细胞免疫荧光染色及Western blot显示对照组细胞AIF蛋白主要位于线粒体内,而实验组细胞AIF从线粒体释放并转移至细胞核内,同时髓核细胞出现非典型性凋亡;酶标仪检测发现Caspase酶活性无明显变化(P＞0.05).结论 营养剥夺可能通过降低线粒体膜定位,增加其通透性导致AIF释放并转位至细胞核,导致髓核细胞出现非典型性凋亡.
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转录因子Krüppel样因子4抑制骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化研究
目的 观察Krüppel样因子4(KLF4)对转化生长因子(TGF)-β1诱导的入骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的影响.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测TGF-β1诱导BMSCs 7d和14d对KLF4 mRNA和蛋白表达的影响;建立KLF4过表达BMSC细胞株,用TGF-β1诱导7d或14 d,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,Real-timePCR和Western blot分析髓核细胞相关蛋白聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白α1链(Col2A1)、性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、角蛋白19(KRT19)和叉头蛋白(FOXF1)表达.结果 与对照组比较,TGF-β1诱导后KLF4 mRNA和蛋白表达均显著降低(第7天mRNA:0.653 ±0.083比1.027 ±0.068,t =6.012,P ＜0.01;第14天mRNA:0.453 ±0.065比1.063 ±0.096,t =9.105,P＜0.01;第7天蛋白,0.601 ±0.112比0.873 ±0.051,t =3.874,P ＜0.05;第14天蛋白:0.251 ±0.087比0.893 ±0.078,t =9.543,P ＜0.01),细胞增殖增加(第7天,166.355±11.132比99.647±6.220,t =9.064,P ＜0.01;第14天:195.333±10.512比124.667±9.609,t=8.598,P ＜0.01),Aggrecan、Col2A1 、SOX9 、KRT19 、FOXF1 mRNA (Aggrecan:2.600 ±0.255比1.017 ±0.095,t=10.07,P ＜0.01;Col2A1:3.441 ±0.259比1.010 ±0.076,t=15.58,P ＜0.01;SOX9:2.767 ±0.139比1.033 ±0.111,t=16.92,P＜0.01;KRT19:3.710±0.210比1.005±0.076,t 20.95,P＜0.01;FOXF1:2.783±0.174比1.035 ±0.132,t=13.88,P ＜0.01)和蛋白(Aggrecan:0.760±0.072比0.233 ±0.055,t=10.05,P ＜0.01;Col2A1:0.941 ±0.046比0.190 ±0.040,t =21.36,P ＜0.01;SOX9:1.237 ±0.140比0.317 ±0.065,t=10.31,P＜0.01;KRT19:0.897 ±0.072比0.137 ±0.051,t=14.84,P＜ 0.01;FOXF1:1.033 ±0.191比0.181 ±0.056,t=7.434,P ＜0.01)表达升高.与TGF-β1单独处理比较,过表达KLF4抑制了细胞增殖(第7天:125.750±10.386比166.355±11.132,t =4.620,P＜0.05;第14天:148.526±13.449比195.333±10.512,t=4.702,P＜0.01),降低了Aggrecan、Col2A1、SOX9、KRT19、FOXF1 mRNA (Aggrecan:1.510 ±0.187比2.600 ±0.255,t=5.970,P ＜0.01;Col2A1:1.727±0.254比3.441±0.259,t=8.176,P＜ 0.01:SOX9:1.493 ±0.169比2.767 ±0.139,t10.08,P ＜0.01;KRT19:2.117 ±0.387比3.710 ±0.210,t=6.273,P ＜0.01;FOXF1:1.550 ±0.125比2.783 ±0.174,t =9.978,P ＜0.01)和蛋白(Aggrecan:0.423 ±0.093比0.760 ±0.072,t =4.958,P ＜0.01;Col2A1:0.490 ±0.079比0.941±0.046,t=8.504,P＜0.01;SO X9:0.560±0.096比1.237±0.140,t =6.890,P ＜0.01;KRT19:0.375±0.047比0.897±0.072,t=10.49,P ＜0.01;FOXF1:0.537±0.097比1.033 ±0.191,t =4.017,P ＜0.05)表达.结论 KLF4过表达可抑制BMSC细胞增殖和向髓核样细胞分化.
关键词： Krüppel样因子4 骨髓间充质干细胞 髓核细胞 增殖 分化 -
复制性老化髓核细胞Hippo-Yes相关蛋白信号通路的作用机制
目的 探讨Hippo-Yes相关蛋白(YAP)信号通路在复制性老化髓核细胞中的作用机制.方法 取人源髓核细胞(NPCs)为研究对象,根据老化特性及慢病毒干扰载体不同进行分组,即A组:未老化第三代NPCs,B组:第十代老化NPCs,A和B两组根据转染不同的慢病毒载体shYAP或sh-Control再分两个亚组,分别是A sh-Control组,A shYAP组,B sh-Control组和B shYAP组.体外培养第三代NPCs,通过连续传代诱导建立复制性老化细胞模型(RS),细胞衰老SA-β-Gal染色检测分析老化与未老化NPCs生物学特性.慢病毒载体shYAP和sh-Control分别转染老化和未老化NPCs,检测Hippo-YAP信号通路干预情况及对下游靶基因CYR61的表达影响.后,SA-β-Gal染色检测分析各个亚组老化与未老化NPCs生物学特性和老化率.结果 B组SA-β-Gal染色显示NPCs蓝色团块数目高于A组(90.4％比15.6％,P＜0.05);A组可见YAP基因和蛋白水平表达高于B组(0.77 ±0.12比0.31±0.04,0.52±0.06比0.12±0.05,P＜0.05),免疫荧光显示YAP主要位于细胞核内(85％).B组细胞Hippo-YAP信号通路激活,YAP及其靶基因CYR61的基因水平和蛋白水平降低,且YAP分布由核内转移至胞质内,胞质YAP比例增加(56％).B组中两亚组细胞均显示出老化细胞特有的的外观表现,shYAP慢病毒载体转染老化NPCs后对其细胞老化率无明显影响(P＞0.05).结论 Hippo-YAP信号通路参与NPCs老化的发生发展,对维持细胞的生长、增殖发挥着重要作用.
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杆状病毒介导的GFP转染与退变的兔椎间盘髓核细胞
目的:检测杆状病毒转染正常与退变的椎间盘髓核细胞的效率以及杆状病毒介导的GFP基因(Ac/CMV/GFP)在正常与退变细胞中的表达水平.方法:取新西兰大白兔的髓核细胞进行离体培养,第1组:健康幼兔;第2组:椎间盘退变模型兔;第3组:椎间盘发生自然退变的成年兔.以200 MOI杆状病毒介导的绿色荧光蛋白(GFP)转染离体培养的细胞,于第48 h采用流式细胞仪检测转染效率,同时采用HPIAS 2000图像分析软件半定量分析外源性GFP基因的表达水平.结果:3组细胞被转染的百分率分别为84.4±3.4,82.9±5.7,81.8±5.5(P＞0.05).外源性基因表达荧光蛋白的光密度值分别为0.005 4±0.002 9,0.005 2±0.003 2,0.005 6±0.003 1(P＞0.05).结论:杆状病毒转染椎间盘髓核细胞的效率与椎间盘退变程度无关,杆状病毒介导的外源性基因能在正常与退变的髓核细胞中高水平的表达.
关键词： Ac/CMV/GFP 椎间盘退变 髓核细胞 -
藻酸钠微球培养对兔髓核细胞生物学特性的影响
目的 探讨藻酸钠微球培养对兔椎间盘髓核细胞(NPCs)体外生物学特性的影响.方法 4月龄健康新西兰大耳白兔6只,取髓核细胞原代培养,传代后分为实验组(藻酸钠微球培养)和对照组(平面培养),通过倒置相差显微镜对髓核细胞进行形态学观察,MTT法测定两组髓核细胞增殖情况,运用RT-PCR技术检测两组髓核细胞中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达.结果 经过2周的培养,两组髓核细胞增殖率无明显差异;藻酸钠微球培养组在Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达上均高于平面培养组 (P<0.01或P<0.05).结论 藻酸钠微球培养法能促进髓核细胞中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达,在维持其表型稳定方面优于平面培养法.
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转化生长因子-β1 和胰岛素样生长因子-1对兔退变髓核细胞生物学活性的影响
目的 观察在体外培养条件下转化生长因子-β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对兔退变髓核细胞生物学活性的影响.方法 建立兔腰椎间盘退变模型及体外培养兔退变髓核细胞,台盼蓝染色法测定活细胞率.将每份髓核细胞样本分为空白组、TGF-β1组和TGF-β1+IGF-1组.TGF-β1和IGF-1干预后第0、2、4、6天,采用RT-PCR和Western blot方法测定细胞内Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达. 结果 体外培养兔退变髓核细胞的活细胞率为88%～95%.干预后第4天和第6天TGF-β1+IGF-1组与TGF-β1组、空白组比较细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原均显著增加(P<0.05).结论 TGF-β1和IGF-1能够促进兔退变髓核细胞合成Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖,改善其生物学活性.
关键词： 椎间盘退变 髓核细胞 细胞培养 转化生长因子-β1 胰岛素样生长因子-1 -
改良法原代培养兔髓核细胞及其生物学特性
目的 探索兔髓核细胞培养的佳方法,并检测其生物学特性.方法 以DMEM /F12 (1∶1,添加FBS 10%,pH 7.2) 作为基础培养液,用酶消化及机械剪切法原代培养髓核细胞,检测细胞生长形态及代谢.结果 髓核细胞多为多角形,另有细胞为圆形或椭圆形,内含空泡;改良法较酶消化组单层培养细胞增殖能力较强.结论 改良法髓核细胞生长状态良好, 为椎间盘组织工程髓核细胞的培养奠定了基础.
