首页 > 文献资料
-
低氧预适应对自体原位肝移植大鼠TNF-α诱导肝细胞凋亡的保护作用及机制的研究
目的:探讨低氧预适应(HP)对自体原位肝移植大鼠肿瘤坏死因子-α (TNF-α)诱导肝细胞凋亡的保护作用以及可能的机制.方法:采用经门静脉灌注法制备大鼠自体原位肝移植模型,将SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、自体肝移植(AT)和AT+低氧预适应(HP)3组.HP组术前用8％氮氧混合气体处理90 min.3组分别于术后1,2,12,24 h处死大鼠取肝脏标本,抽血检测肝功能,RT-PCR检测TNF-α、c-Jun mRNA表达水平,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化.结果:术后1、2、12、24 h,HP组血清ALT,AST水平较AT组均显著降低,但均高于NC组(P＜0.01); HP组各时段TNF-α mRNA的转录水平较AT组显著降低,但高于NC组(P＜0.05)；HP组1h,2h,12h时段c-Jun mRNA的转录水平较AT组显著降低,但高于NC组(P＜0.05),24 h时段AT、HP、NC组间无显著差异(P＞0.05)；透射电镜下AT组肝细胞出现典型的凋亡征象,而HP组肝细胞无明显凋亡形态.结论:HP对移植所致的肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与减少上游TNF-α 表达,抑制JNK信号通路的激活,减轻肝细胞凋亡有关.
-
大鼠脑缺血再灌注后腺病毒表达GluR羧基肽段对脑组织JNK磷酸化的影响
目的 探讨大鼠脑缺血再灌注(IR)后腺病毒表达谷氨酸受体(GluR)羧基肽段对海马CA1区神经元的保护作用和JNK磷酸化的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、IR对照组、表达病毒组、非表达病毒组及溶剂组.采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠IR后海马神经元损伤和脑组织JNK的磷酸化情况.结果 与IR对照组、非表达病毒组及溶剂组比较,表达病毒组海马CA1区神经元损伤明显减轻,脑组织JNK磷酸化程度明显降低(P均＜0.05).结论 腺病毒表达GluR羧基肽段可能通过降低脑组织JNK磷酸化程度对海马CA1区神经元起保护作用.
-
SP600125-JNK抑制剂对缺血再灌注损伤保护作用的研究进展
SP600125是JNK激酶抑制剂,可特异性阻断JNK细胞转导通路,对缺血再灌注损伤起保护作用,并且抑制细胞活化和分化,相关炎症基因表达.笔者就SP600125抑制剂治疗脑、肝、心、肺、肾及脊髓缺血再灌注损伤的基础和实验研究成果做一综述,以期为临床医师选择使用SP600125抑制剂提供理论依据,同时提出在IRI中除了JNK信号通路影响之外是否存在诸如JAK-STAT、PI3K-Akt等信号通路,有可能成为临床治疗IRI新靶点.
-
链脲佐菌素对APP/PS1转基因小鼠学习记忆及JNK信号通路的影响
目的 观察链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对APP/PS1转基因小鼠学习记忆和海马组织MKK4、JNK、c-Jun磷酸化水平的影响.方法 3月龄APP/PS1转基因小鼠腹腔内注射STZ,采用Morris水迷宫实验观测学习记忆功能,应用尼氏染色观察海马神经元细胞形态,应用免疫印迹法检测海马组织内MKK4、JNK和c-Jun的表达水平.结果 水迷宫隐蔽平台实验中,从第2天到第5天,给予STZ后APP/PS1转基因小鼠逃避潜伏期和目标路径均明显长于对照组(P＜0.05或P＜0.01)；Nissl染色显示STZ组小鼠海马神经元损伤明显；与对照组比,STZ组海马组织中磷酸化JNK和c-Jun的表达水平明显增高,分别增高到217.78 ±23.49和189.27±17.80(P＜0.01).结论 STZ可使APP/PS1转基因小鼠学习记忆功能减退,神经元损伤,其机制可能与JNK信号转导通路有着密切的关系.
关键词： 链脲佐菌素 JNK C-Jun APP/PS1转基因鼠 学习记忆 -
IL-1β促肝星状细胞增殖与JNK/AP-1信号转导通路的关系
目的 探讨JNK/AP-1信号转导通路在白细胞介素-1β(IL-1β)介导的促肝星状细胞(HSC)增殖中的作用.方法 应用Western印记检测JNK的活化程度.应用活细胞计数试剂盒-CCK-8检测HSC增殖并观察JNK特异性阻断剂SP600125对IL-1β促HSC增殖的影响.应用凝胶电泳移动抑制法测定AP-1的活性.结果 IL-1β有明显促大鼠HSC增殖作用,JNK特异性阻断剂SP600125可抑制此作用.IL-1β刺激大鼠HSC首先引起JNK活化,并呈现出一定的时效变化.IL-1β作用HSC后可使AP-1活性增强,并呈现出一定的时效变化,而SP600125可抑制此作用.结论 IL-1β可刺激HSC增殖,细胞内JNK/AP-1信号转导通路参与了IL-1β促HSC增殖作用.
-
IL-1β上调大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达与JNK和P38通路的关系
目的 探讨IL-1β调控大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达与JNK、p38 MAPK通路的关系.方法 RT-PCR用于检测大鼠HSCsTIMP-1 mRNA表达;Western blot用于测定IL-1刺激HSCs后JNK、p38的活化程度.结果 IL-1β(10ng/mL)作用培养的HSCs 24 h后,TIMP-1 mRNA表达(1.191±0.079)明显高于对照组(0.545±0.091),有统计学意义(P<0.01);IL-1β以时间依赖方式激活JNK、p38通路.用不同浓度JNK阻断剂-SP600125预处理HSCs后.IL-1β上调HSCs TIMP-1 mRNA表达作用受到抑制,分别为10μmool/L,1.022±0.1 13;20μmol/L,0.869±0.070;40μmol/L,0.666±0.123,与对照组相比(1.163±0.107),各浓度组均有显著性差异(P<0.05,P<0.01,P<0.01).用不同浓度p38阻断剂-SB203580预处理HSCs后,HSCs表达TIMP-1 mRNA逐渐增多,分别为10 μmol/L,1.507±0.099;20 μmol/L,1.698±0.107;40μmol/L,1.857±0.054.与对照组相比(1.027±0.061),各浓度组均有显著性差异(P均<0.01).结论 IL-1β可通过上调HSCs TIMP-1 mRNA的表达来加速肝纤维化的发生发展,JNK和p38信号蛋白参与了此过程,HSCs巾两条通路均可被IL-1激活,但所起作用完全不同,它们相互作用相互调节,共同调控TIMP-1 mRNA的表达.
-
Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道和JNK信号转导通路的作用
目的 探讨Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道与JNK的作用,以及钾通道与JNK的关系,进一步了解AD的发病机制.方法 应用MTT法、Hoechst33342法、比色法及Westernb1ot法分别检测以TEA和SP 600125作用的Aβ1-40诱导神经干细胞的存活率、凋亡发生率、Caspase-3活性的改变及JNK磷酸化的情况.结果 预先加入TEA使Aβ1-40诱导的神经干细胞的存活率增加,凋亡减少;JNK的选择性阻断剂SP 600125 可显著的保护Aβ1-40诱导的神经干细胞的凋亡.在Aβ1-40孵育前30 min加入TEA,与Aβ1-40共同孵育24 h,TEA使JNK的磷酸化表达显著降低.结论 Aβ1-40可以使神经干细胞发生凋亡.钾通道在Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡时被激活,TEA可以明显减轻Aβ1-40诱导的神经干细胞的凋亡.Aβ1-40诱导神经干细胞后JNK信号转导通路参与了凋亡的发生,SP600 125对Aβ1-40诱导的神经干细胞具有明显的保护作用.TEA作用于Aβ1-40诱导的神经干细胞可以使JNK蛋白表达下降,说明Aβ1-40引起的钾通道激活和JNK磷酸化两者之间有一定的相互联系,进而诱发了下游凋亡相关蛋白的改变.
-
沉默热休克蛋白70基因对 A549细胞凋亡的影响
目的：探讨沉默热休克蛋白70（ HSP70）的表达对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法：将体外培养的A549细胞分为空白对照组（仅加入转染试剂Lipofectamine 2000）、阴性对照组（转染无关序列）和干扰组（转染HSP70 siRNA）3组，采用流式细胞仪检测A549细胞凋亡率的变化，采用实时定量PCR法检测各组细胞中HSP70 mRNA表达的差异，采用Western blot 检测各组细胞中HSP70、p-JNK及Caspase-3蛋白表达的变化。结果：转染后24 h，干扰组A549细胞中HSP70 mRNA及蛋白表达明显受到抑制，与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义（F＝150．348和450．953，P均＜0．001）；转染48 h后，干扰组细胞凋亡率高于空白对照组和阴性对照组，差异有统计学意义（F＝229．636，P＜0．001）。与空白对照组和阴性对照组相比，干扰组A549细胞中p-JNK蛋白和Caspase-3蛋白表达明显受到抑制，差异有统计学意义（F＝877．094和340．808，P均＜0．001）。结论：沉默HSP70的表达可促进A549细胞的凋亡，且该过程伴随着p-JNK和Caspase-3表达水平的降低。
-
HSP70、JNK和p38在放线菌素D诱导的A549细胞凋亡中的作用
目的：探讨HSP70、JNK和p38在放线菌素D（ Act D）诱导的人肺腺癌A549细胞凋亡中的作用。方法：采用MTT法确定Act D对A549细胞的染毒剂量。将对数生长期的A549细胞分为DMSO对照组、Act D染毒组、热处理（42℃，30 min）＋Act D组、JNK抑制剂SP600125＋Act D组和p38 MAPK抑制剂SB203580＋Act D组进行处理。采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率，Western blot 检测各组细胞中HSP70、p-JNK、p-p38和Caspase-3的表达水平。结果：热处理、SP600125和SB203580均能降低Act D诱导的A549细胞的凋亡率（ F＝7904．576， P＜0.001）。热处理＋Act D组的HSP70表达水平高于其余各组（F＝46．640，P＜0．001），而p-JNK、p-p38和Caspase-3的表达水平均低于Act D处理组（F＝122．381、44．104和50．650，P＜0．05）。 Act D能提高Caspase-3的表达水平，且热处理、SP600125和 SB203580均能降低 Act D 引起的 Caspase-3的高表达状态。结论：热处理诱导产生的HSP70、JNK通路抑制剂SP600125和p38 MAPK通路抑制剂SB203580均可以抑制由Act D诱导的A549细胞凋亡。
-
不同温度热疗联合紫杉醇化疗对肺癌A549细胞生长及JNK磷酸化的影响
目的:研究热疗及化疗联合对肺癌A549细胞生长的影响及其可能的机制.方法:以不同的临床常用温度(39 ℃、41 ℃、43 ℃、45 ℃)加热联合50 μg/L紫杉醇化疗的方法处理肺癌A549细胞,以37 ℃加热联合紫杉醇处理的A549细胞和未处理的A549细胞作对照.应用噻唑蓝比色法检测各组细胞增殖率的变化,损伤修复试验比较各组细胞的侵袭力,Western blotting检测JNK磷酸化水平.另取A549细胞如上分组,加入JNK特异性抑制剂SP600125预处理30 min,同法检测上述指标.结果:A549细胞的增殖率有随温度的升高而降低的趋势(P<0.05),并以43 ℃组低.给予JNK特异性抑制剂SP600125后,除39 ℃组外,细胞增殖率均较加入前升高(P<0.05);细胞的侵袭力变化具有与此相似的趋势;43 ℃组JNK磷酸化水平高,39 ℃组几乎未检测到JNK的磷酸化,差异有统计学意义(P<0.05).结论:不同温度热疗联合紫杉醇作用于肺癌A549细胞后,可对细胞产生不同程度的抑制作用,这种抑制作用可能是通过不同程度地激活JNK信号通路而产生的.
-
雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的影响及机制研究
目的:探讨雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的抑制作用及相关机制.方法:应用Transwell技术观察不同浓度(2.5 μmol·L-1、5.0 μmol·L-、10.0 μmol·L-1)雷公藤红素对MHCC97H细胞侵袭力和迁移力的影响.Westernblot法检测雷公藤红素处理后对C-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及NF-κB/p65核浆分布变化的影响.结果:雷公藤红素处理后24 h,迁移实验及侵袭实验结果显示,加药组透膜细胞数较对照组明显减少(P＜0.05).Westerblot结果显示磷酸化JNK表达上调,NF-κB/p65入核减少.结论:雷公藤红素体外具有抑制人肝癌细胞侵袭和转移的作用,其机制可能与活化JNK通路、抑制NF-κBp65入核有关.
-
温阳导滞针刺法对带状疱疹后遗神经痛患者ERK1/2、JNK基因表达的影响
目的:温阳导滞针刺法对带状疱疹后遗神经痛患者ERK1/2、JNK基因表达影响的研究.方法:将带状疱疹后遗神经痛患者86例,随机分为两组.对照组43例,予临床常规治疗;观察组43例,予温阳导滞针刺法治疗,共治疗4周.观察两组患者治疗前后血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-10、细胞外调节蛋白激酶(external-signal regulated kinase,ERK) 1/2、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)mRNA、疼痛视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)评分以及免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、IgA、IgE水平及临床疗效.结果:与治疗前相比,治疗后两组患者血清IL-1β、IL-6、IL-10、ERK1/2、JNK mRNA、VAS评分、IgM、IgA、IgE水平均显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,观察组患者治疗后血清IL-1β、IL-6、IL-10、ERK1/2、JNK mRNA、VAS评分、IgM、IgA、IgE水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗后,观察组有效率90.70％,对照组有效率67.44％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:温阳导滞针刺法能有效降低带状疱疹后遗神经痛患者ERK1/2、JNK基因表达,降低炎症因子水平,提高治愈率,其作用机制可能与有效降低患者血清炎症因子和ERK1/2、JNK基因表达水平有关.
-
改良三甲散对AD大鼠细胞模型相关信号通路的调节作用
目的 探讨改良三甲散对AD大鼠细胞模型NF-κB和JNK信号传导通路的调节作用.方法 选用健康大耳白兔分高、中、低剂量连续6天给药,抽取含药脑脊液备用.选用出生24 h内乳大鼠取海马神经细胞做原代培养,采用终浓度为5μmol/L的Aβ25-35诱导造模,用改良三甲散含药脑脊液处理AD细胞模型,采用ELISA测定细胞上清液中NF-κB和JNK的表达情况.结果 改良三甲散能显著降低细胞模型上清液中NF-κB和JNK的含量(P＜0.05).结论 改良三甲散治疗老年性痴呆病的机制可能与抑制NF-κB和JNK信号转导通路的激活有关.
-
壮医药线点灸对带状疱疹后遗神经痛患者ERK1/2、JNK基因表达的影响
目的 观察壮医药线点灸对带状疱疹后遗神经痛(Postherpetic neuralgia,PHN)患者患处皮肤细胞外信号调节激酶(external-signal regulated kinase,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)基因表达的影响.方法 选择10例健康志愿者作为正常对照组;10例符合纳入标准的躯干PHN患者作为空白对照组;选择符合纳入标准的躯干PHN患者20例作为火针观察组;选择符合纳入标准的躯干PHN患者20例作为药线观察组.采用荧光实时定量PCR法分别检测正常对照组、空白对照组、火针治疗后火针观察组及药线点灸治疗后药线观察组的ERK1/2、JNK基因表达.结果 ERK1/2在正常对照组、空白对照组、火针观察组及药线观察组的表达没有明显差异.JNK在空白对照组表达量高,与正常对照组、火针观察组及药线观察组比较有显著差异(P＜0.01).结论 壮医药线点灸治疗PHN作用机制可能与调控JNK的表达,抑制炎症反应有关.
-
c-jun原癌基因及其表达产物的研究进展
c-jun原癌基因属于bZIP家族核内转录因成员子之一,可以结合在许多基因的启动子上参与基因转录的调控.其蛋白编码产物能通过亮氨酸拉链形成同源二聚体或与AP-1家族其他成员形成异源二聚体,与某些基因的DNA区域特异结合以调控下游基因的转录活性.c-jun可与其他家族转录因子,如:TNF-a,PU.1、Spl、fas、ras,C/EBP、ATF/CREB等相互作用,发挥协同效应.c-jun的调控范围十分广泛,能被各组织中的多种化学物质激活并受其影响.本文综述了近年来有关c-jun与其他转录因子相互作用及其参与各组织发生、病理变化等方面的新研究进展.
-
MAPK/JNK信号传导通路研究进展
JNK信号途径参与如胚胎发育、免疫反应、细胞分化等许多正常的生理过程.近年来研究表明,JNK信号途径也参与许多病理过程:JNK介导心脏肥大反应,与Ⅱ型糖尿病发病有关,介导胰腺b细胞凋亡;JNK信号途径的异常活化与多种人类肿瘤的发生发展密切相关,因此JNK是一个潜在的治疗分子靶,已引起人们的关注.对其功能及作用的分子机制的深入研究,有助于我们对JNK相关疾病的了解和寻找可能的干预和治疗途径.
-
JIP——一种新型的胞浆抑制蛋白
JIP(JNK相互作用蛋白)是JNK的一种特异性胞浆抑制因子,引起JNK在胞质中滞留,阻止c-Jun、ATF-2、ElK等转录因子的活化,抑制受JNK调控的下游基因的表达.另外,JIP作为支架蛋白在MAPK信号途径发挥重要作用,现在JIP已作为一种新型的生物分子工具应用于JNK/SAPK/MAPK的研究.在哺乳动物中,发现了JIP的同源基因IBl,JIP参与了Glut2和胰岛素基因的表达.JIP作为肿瘤治疗候选的分子药物,可能在肿瘤治疗中发挥重要作用.
-
TNF-α通过激活蛋白磷酸酶4调节HepG2细胞中JNK磷酸化
目的 探讨蛋白磷酸酶4(protein phosphatase 4,PP4)在肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导JNK磷酸化中的作用.方法 TNF-α处理人肝癌细胞HepG2,免疫印迹检测JNK磷酸化水平和PP4表达水平,免疫沉淀结合磷酸酶活性测定法分析PP4活性变化.构建PP4磷酸酶活性缺失突变体 PP4-RL,转染HepG2细胞,经过G418筛选获得稳定表达FLAG-PP4-RL的克隆,进一步观察PP4对TNF-α诱导的JNK磷酸化的影响.结果 TNF-α处理后迅速引起HepG2细胞JNK的磷酸化,在20 min时达到峰值.PP4的表达在TNF-α处理后60 min内没有显著变化,但活性迅速增强,在20 min时达到峰值.在稳定表达FLAG-PP4-RL的HepG2细胞中,TNF-α诱导的JNK磷酸化被PP4-RL阻断.结论 TNF-α通过激活蛋白磷酸酶4调节HepG2细胞中JNK磷酸化.
-
吡格列酮预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡和线粒体超微结构的影响
目的:观察PPARγ激动剂吡格列酮对在体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)心肌细胞凋亡和线粒体超微结构的影响以及其可能机制.方法:将42只SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、I/R组、吡咯列酮预处理组(预处理组).I/R组、预处理组于I/R前24 h分别由尾静脉注射相应溶媒(0.9%氯化钠溶液)及吡格列酮(3 mg/kg).对照组不结扎前降支,4 h后取出心脏;余2组结扎前降支30 min,再灌注4 h后取出心脏.每组取8只,用透射电镜观察心肌线粒体的超微结构改变,采用TUNEL法和免疫组化法检测各组缺血心肌细胞凋亡和Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法测p38MAPK和JNK的mRNA表达;Western blot法测核转录因子-κB p65(NFκB p65)蛋白水平的表达;每组取6只,行心肌梗死面积测定.结果:①与I/R组相比,预处理组线粒体损伤程度明显减轻,梗死面积明显减少;②与I/R组相比,预处理组能明显增加Bcl-2蛋白的阳性细胞指数(P<0.05),降低心肌细胞凋亡率(P<0.05)及Bax、caspase-3蛋白的阳性细胞指数(P<0.05);③与对照组相比,I/R组p38MAPK和JNK的mRNA表达水平及NFκB p65蛋白表达水平明显增加(P<0.05);与I/R组相比,预处理组能抑制以上水平的过度表达(P<0.05).结论:吡格列酮预处理可通过保护心肌线粒体结构,减少心肌细胞凋亡起到抗I/R损伤作用,该保护作用机制可能与下调p38MAPK和JNK的mRNA表达及NFκB p65蛋白表达活性有关.
-
亚低温预处理通过抑制JNK激活减轻肝L02细胞缺血缺氧再灌注损伤
目的 探讨应用亚低温预处理减轻肝L02细胞缺血缺氧再灌注损伤的作用及其机制.方法 取对数期生长的肝L02细胞株,随机分成3组,分别为正常对照组,常温缺血缺氧再灌注组(常温对照组)和亚低温预处理缺血缺氧再灌注组(实验组).将实验组细胞置于亚低温(32℃)条件下预处理培养6h,常温对照组则正常培养6h.然后,将实验组和常温对照组的细胞置于三气培养箱中缺血缺氧培养12h,随后再正常培养4h.收集细胞及培养液,对细胞损伤、细胞活力、细胞凋亡水平以及细胞JNK蛋白表达水平进行检测.结果 与正常对照组相比,常温对照组及实验组细胞培养液丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)水平均显著升高,细胞活力值均显著下降,细胞凋亡水平均显著升高,p-JNK表达水平均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与常温对照组相比,实验组各项检测指标改变均较常温对照组有所减轻,常温对照组培养中ALT、AST、LDH水平分别为(30.0±4.6)U/L、(26.3±3.8)U/L、(1 129.0±134.3)U/L,实验组分别为(21.0±2.7)U/L、(18.7±2.1)U/L、(898.3±79.2)U/L;常温对照组细胞活力值为(64.33±2.32)％,实验组为(78.17±3.01)％;常温对照组细胞凋亡比例为(32.4±2.3)％,实验组为(18.8±1.4)％;实验组p-JNK表达水平较常温对照组显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 亚低温预处理可以显著减轻肝L02细胞的缺血缺氧再灌注损伤,这可能与亚低温预处理抑制JNK的激活有关.
