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大脑皮层细胞低氧条件液诱导神经干细胞分化及其可能的信号转导通路
本研究旨在分析大鼠大脑皮层细胞低氧条件液对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的影响,并探讨PI3-K和JNK两条信号通路在此过程中的作用.原代培养出生后24 h内SD大鼠大脑皮层细胞5d后,全量换液并分别在4％ O2、1％ O2和常氧浓度环境下继续培养细胞6h以制备低氧条件液和常氧条件液.用三种条件液及结合使用PI3-K、JNK信号通路抑制剂LY294002和SP600125培养NSCs,使用免疫荧光双标法鉴定NSCs后代细胞表型,并计算每种表型细胞在后代细胞中所占比例,以分析不同条件下NSCs的分化情况.结果显示,在三种条件液培养下NSCs分化出神经元的比例均高于星形胶质细胞的比例;与常氧条件液组比较,4％低氧条件液促进了NSCs向神经元方向分化(P＜0.01),而1％低氧条件液则抑制了NSCs向神经元方向分化(P＜ 0.01).在4％低氧条件液中使用LY294002和SP600125均抑制了NSCs向神经元方向分化(P＜0.01),且LY294002抑制作用较SP600125大(P＜0.01).以上结果提示,4％低氧条件液能促进大脑皮层NSCs向神经元方向分化,且PI3-K信号通路在此过程中发挥主要作用.
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SP600125抗大鼠脑缺血/再灌注中海马细胞凋亡的作用
目的 探讨JNK特异性抑制剂-SP600125对大鼠脑缺血/再灌注(schemia/reperfusion,I/R)中海马细胞凋亡的作用.方法 雄性SD大鼠54只,体重量230 g～250 g,采用双盲随机方法分成假手术组(SH组),I/R组,JNK抑制剂SP600125组(SP组),每组根据再灌注时间分为30 min、24 h和72h 3个亚组,每亚组6只动物.采用4-VO法建立SD大鼠脑缺血模型,于缺血前30 min侧脑室注射二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO),DMSO及JNK抑制剂SP600125(溶媒采用DMSO),容积均为10μl.脑I/R后24、72 h测定其行为学改变,分别在30 min、24 h和72 h等时间点,取脑组织,免疫组织化学方法测定海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达阳性细胞数量和凋亡锥体细胞数量.结果 全脑I/R使大鼠的垂直运动次数(4.8±2.0,9.1±3.4)和平衡木积分(2.3±1.2,3.5±0.9)显著减少(P＜0.05),I/R组的减少为显著 ;脑I/R后海马CA1区凋亡神经元细胞数目(40.5±5.1)显著低于I/R组(P＜0.01) ;全脑I/R 24 h后,海马CA1区Bcl-2和Bax阳性锥体细胞数目(89.7±8.4,40.5±2.3)显著增加(P＜0.01),再灌注24 h组增加多 ;SP600125可以增加Bcl-2蛋白表达、减少Bax蛋白表达.结论 SP600125对大鼠脑I/R中海马细胞的凋亡具有保护作用,此机制涉及抑制JNK信号转导通路.
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C-jun氨基末端激酶(JNKs)与脑缺血性损伤
c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNKs)为丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)超家族之一,其参与胚胎发育、免疫反应、及细胞的生长、分化、增殖等多种生理过程,同时也参与了许多病理过程.近期研究表明其在脑缺血性损伤神经元死亡过程中起重要调控作用.现就其相关研究进展作一综述.
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MAPK级联反应与缺血性脑损伤
缺血性脑损伤是一复杂病理生理过程,涉及到多途径、多机制的变化,具体发生机制尚未阐明.MAPK级联反应是近来发现的细胞质和细胞核联系的枢纽,其在接受不同通路的上游信号后,激发即早基因和转录因子的表达和活化,并通过相应的靶基因、靶蛋白等的表达与合成来完成对各种胞外刺激的反应.今介绍该级联反应在缺血性脑损伤中的改变和作用.
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大黄素对人乳腺癌细胞 MCF-7的促凋亡作用及其与 JNK 信号通路关系
目的：探讨大黄素对人乳腺癌细胞 MCF-7的促凋亡作用及其与 JNK 信号通路的关系。方法应用倒置显微镜观察人乳腺癌细胞 MCF-7的生长情况,MTT 法检测大黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用 Western blot 和免疫组织化学法检测 JNK 信号蛋白及其下游促凋亡蛋白 AP-1的表达。结果大黄素可降低人乳腺癌细胞 MCF-7增殖能力,具有时间依赖性和浓度依赖性。大黄素作用于人乳腺癌细胞 MCF-7后,出现明显的早期凋亡现象(P <0.05)。不同浓度大黄素处理人乳腺癌细胞 MCF-7后,均可引起 JNK 和 JNK 下游信号分子 AP-1表达增强(P <0.05)。结论大黄素可降低人乳腺癌细胞 MCF-7增殖能力,促进早期凋亡,可使人乳腺癌细胞 MCF-7表达 JNK 和 AP-1增强,促进人乳腺癌细胞 MCF-7的凋亡。大黄素通过活化 JNK 信号转导途径抑制人乳腺癌细胞 MCF-7增殖、促进凋亡。
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EB病毒编码的BARF1基因通过JNK/c-Jun信号通路调节鼻咽癌细胞bcl-2的表达
目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对鼻咽癌细胞JNK/c-Jun信号通路活性及bcl-2表达的影响.方法:以pSG5空载体转染鼻咽癌细胞系CNE1(CNE1-SG)为对照,采用蛋白质印迹法检测稳定表达BARF1的CNE1细胞(CNE1-BARF1)中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达;经JNK特异性抑制剂SP600125处理后,检测CNE1-BARF1细胞中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达.结果:与CNE1-SG细胞相比,CNE1-BARF1细胞中c-Jun、BCL-2表达以及JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平明显增加(P<0.05).经SP600125处理后,CNE1-BARF1细胞中c-Jun及BCL-2表达明显降低(P<0.05),c-Jun磷酸化水平也降低,但差异无统计学意义(P>0.05).结论:BARF1基因可能通过激活JNK/c-Jun信号通路上调原癌基因bcl-2的表达.
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JNK／c-Jun 信号通路参与介导 EB 病毒编码的BARF1基因上调胃癌细胞 Bcl-2的表达
目的：探讨 EB 病毒编码的 BARF1基因对胃癌细胞 JNK-MAPK 信号通路活性及 Bcl-2基因表达的影响。方法：以 pSG5空载体转染的胃癌细胞系 BGC823（BGC-SG）为对照，采用蛋白质印迹分析稳定表达 BARF1的 BGC823细胞（BGC-BARF1）中，以及采用 JNK-MAPK 的特异性抑制剂 SP600125处理后 JNK 和 c-Jun 蛋白的磷酸化水平以及 c-Jun 和 Bcl-2蛋白的表达。结果：与 BGC-SG 相比，BGC-BARF1细胞中 JNK 和 c-Jun 蛋白的磷酸化水平，以及 c-Jun 和Bcl-2蛋白的表达均显著提高（P ＜0．05）。SP600125处理后，c-Jun 蛋白的磷酸化水平以及 c-Jun 和 Bcl-2蛋白的表达均显著下降。结论：JNK／c-Jun 信号通路参与介导 BARF1上调胃癌细胞中 Bcl-2的表达。
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JNK信号通路在TGF-β1诱导肺间质成纤维细胞基质分泌中的作用
目的:探讨C-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)、P38信号通路的激活在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导人肺间质成纤维细胞基质分泌中的作用及意义.方法:将肺间质成纤维细胞株分为TGF-β1组、TGF-β1+SB203580组、TGF-β1+DMSO组、TGF-β1+SB600125组、正常对照组.采用免疫印迹法(Western blot)测定总JNK(T-JNK)、磷酸化JNK(p*-KNK)、总P38(T-P38)、磷酸化38(p*-P38)、纤维连接蛋白(FN)、层连粘蛋白(LN)水平的表达变化,采用3H-thymidine incorporation(3H-TdR)检测细胞增殖水平.结果:正常体外培养的肺间质成纤维细胞经TGF-β1刺激后p*-JNK水平显著升高,p*-P38蛋白表达无明显变化;FN、LN蛋白表达水平在TGF-β1诱导48 h后表达显著升高,JNK的特异性化学抑制剂SB600125可以减少p*-JNK、FN、LN蛋白表达水平和细胞增殖水平,P38的特异性化学抑制剂SB203580对上述指标表达无影响.结论:JNK信号通路在TGF-β1诱导的肺间质成纤维细胞分泌基质过程中被激活,并且参与TGF-β1诱导的肺间质成纤维细胞分泌基质过程.
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IP-10和JNK介导CFA诱导的大鼠足底炎性疼痛
目的:研究完全弗氏佐剂(CFA)外周注射诱导的趋化因子干扰素诱导蛋白10(IP-10)在局部皮肤的表达,以及JNK激酶抑制剂对CFA诱导的疼痛和IP-10表达的调节.方法:大鼠单侧足底皮下注射CFA 150μl绣导大鼠慢性炎症性疼痛.在注射后不同时间点,检测双侧足底的热痛觉过敏.通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附反应试验(ELISA)的方法,分别从mRNA和蛋白水平检测大鼠注射CFA后的足底皮肤中趋化因子IP-10表达的变化.通过在足底注射JNK抑制剂SP600125,观测其对疼痛的产生和IP-10表达的影响.结果:大鼠单侧足底皮下注射CFA诱导足底长时间的热痛觉过敏.在注射后3 h、6 h、1天,在注射部位足底皮肤IP-10 mRNA和蛋白表达均明显增加;足底注射JNK抑制剂,能有效延迟热痛觉过敏的形成和足底皮肤中趋化因子IP-10的表达上调.结论:趋化因子IP-10参与CFA诱导的疼痛,而且JNK激酶能够调控CFA诱导的疼痛和IP-10的表达.
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MLK3信号通路在癫痫及脑缺血海马CA3区神经元中的不同作用
目的:研究混合性谱系激酶3(MLK3)信号通路对癫痫及脑缺血海马CA3区神经元的作用.方法:采用海人藻酸(KA)或四动脉结扎法分别建立大鼠癫痫及全脑缺血模型,运用免疫印迹技术检测在KA注射后及脑缺血再灌注后不同时间海马CA3区MLK3和c-Jun的N端激酶(JNK)的活化水平;采用焦油紫染色,观察大鼠海马CA3区神经元的损伤.结果:KA刺激6h,癫痫大鼠海马CA3区MLK3和JNK明显激活,1d后仍维持在较高水平(P＜ 0.05);MLK3和JNK的总蛋白表达并无显著改变.脑缺血大鼠海马CA3区,缺血再灌注后各时间点,MLK3和JNK并未出现明显的活化.此外,大鼠致痫后7d,海马CA3区神经元大量死亡;缺血再灌注后7d,海马CA3区神经元并未受到明显损伤.结论:MLK3/JNK信号通路参与了癫痫脑损伤海马CA3区神经元的损伤;但并未介导缺血性脑损伤海马CA3区神经元的存活.
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JNK对胰岛素和葡萄糖刺激下脂肪细胞功能的影响
目的:探讨JNK对胰岛素和葡萄糖刺激下脂肪细胞表达脂联素(adiponectin)和抵抗素(resistin)的影响.方法:用不同浓度葡萄糖(5 mmol/L,25 mmol/L)和胰岛素(0.1 nmol/L,100 nmol/L)刺激分化成熟的脂肪细胞,各浓度均设立JNK抑制剂组(SP600125),采用荧光定量PCR检测adiponectin和resistin的mRNA表达.结果:高浓度胰岛素和葡萄糖均能使adiponectin mRNA表达降低(P＜0.01),resistin表达升高(P＜0.01),对应的抑制剂组adiponectin表达较高浓度组增加(P＜0.05),resistin表达降低(P＜0.05);两个低浓度组与对应抑制剂组及对照组相比均无明显差异.结论:高浓度葡萄糖和胰岛素影响了脂肪细胞脂联素和抵抗素的表达,JNK在其中起到了介导作用.
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JNK介导的Bcl-2磷酸化调控神经细胞缺氧缺糖再复氧复糖所致的自噬性细胞死亡
目的:探讨自噬在神经细胞缺氧缺糖再复氧复糖损伤过程中的机制.方法:通过改良Takei和Endo的方法分离培养Sprague-Dawley大鼠皮层神经细胞并鉴定.培养至7d后,将细胞随机分为4组,均培养细胞至0.5、2.0、6.0及12.0 h:①空白对照组;②实验组:即缺氧缺糖再复氧复糖组;③JNK抑制剂处理对照组:JNK特异性抑制剂SP600125处理神经细胞0.5h;④JNK抑制剂预处理预处理+实验组:应用JNK特异性抑制剂SP600125预处理0.5 h后进行缺氧缺糖再复氧复糖.结果:噻唑蓝(MTT)结果示神经细胞的活性在实验组中随复氧复糖时间的延长而逐渐下降;JNK抑制剂预处理+实验组在12h才出现明显降低(P＜0.05).电镜结果表明:实验组在0.5 h及2.0 h时,神经细胞内可见大量自噬泡及自噬溶酶体形成,6h时自噬泡数量短暂降低后,在12h又可见新“自噬潮”和大量已排空的自噬泡;JNK抑制剂预处理+实验组中,自噬泡在0.5 h和2.0 h时大量形成,随后随着复氧复糖时间的延长而逐渐减少.实验组和JNK抑制剂预处理+实验组,LC3Ⅱ蛋白表达在6h前无差异,均表现为先增高再降低;而实验组LC3Ⅱ蛋白表达量在12h却再次增加,JNK抑制剂预处理+实验组则持续降低.实验组JNK、Bcl-2的磷酸化水平及Beclin-1的蛋白表达量均随着复氧复糖时间的延长而逐渐增加;而在JNK抑制剂预处理+实验组,仅在12h时才增加(P＜0.05).同时,Bcl-2/Beclin-1复合物在实验组呈逐渐分离的趋势,JNK抑制剂则明显抑制了这种分离.结论:JNK/Bcl-2/Beclin-1信号的调节可能是缺氧缺糖后复氧复糖诱导神经细胞自噬性细胞死亡的机制之一.
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慢性低灌注诱导海马CA1区PERK/eIF2α/ATF4/CHOP-JNK/c-Jun信号通路及雌激素的保护作用
目的:观察慢性低灌注后海马CA1区内质网应激信号通路PERK-eIF2α-ATF4、促凋亡信号CHOP、JNK/c-Jun的变化及17-雌二醇(E2)的影响.方法:成年雌性大鼠行双侧卵巢切除,术后1周结扎双侧颈总动脉(bilateral common caroticl arterises occlusion,BCCAO)从而诱导慢性低灌注模型,实验动物随机分为sham(14 d、21 d)组,BCCAO(14 d、21 d、28 d)组,持续生理剂量E2处理组,SP600125处理组和溶剂对照组.Western blot法检测海马CA1区GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达和PERK、eIF2α、JNK、c-Jun的磷酸化水平.结果:与sham 14 d组相比,BCCAO后14、21、28 d GRP78蛋白水平无显著差异,但PERK、eIF2α、ATF4及CHOP的蛋白表达均显著升高;而且JNK、c-Jun的磷酸化水平于BCCAO后各时间点均较sham组14 d显著升高.JNK抑制剂SP600125和E2不但显著阻断JNK/c-Jun信号通路的激活,也显著降低BCCAO后21d诱导的PERK-eIF2α-ATF4-CHOP信号.结论:脑慢性低灌注可诱导海马CA1区内质网应激,其可能通过激活JNK/c-Jun信号通路及CHOP活性从而导致神经元损伤,长期生理剂量E2可显著降低此变化.
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EGCG减轻脑出血后凝血酶诱导神经元凋亡及其机制
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对凝血酶诱导的原代皮质神经元损伤的神经保护作用及可能机制.方法 体外培养胎鼠大脑皮质神经元8天,将其分为对照组、凝血酶组、EGCG组、EGCG预处理组(EGCG+凝血酶).EGCG预处理组用1、5、10、25 μmol/L EGCG孵育原代皮质神经元24 h后,予1×105U/L凝血酶处理24 h.监测各组乳酸脱氢酶(LDH)释放量,并用流式细胞技术评估各组神经元损伤.采用Western blot法检测各组磷酸化Jun氨基末端激酶(p-JNK)的激活和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(capase-3)的表达.结果 与对照组比较,凝血酶组LDH的释放率增加,神经元凋亡率增加,p-JNK的激活和caspase-3的表达增加,差异有统计学意义(P<0.01).与凝血酶组比较,EGCG预处理组的LDH释放率减少,神经元凋亡率减少,p-JNK的激活和capase-3的表达减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 EGCG可减轻凝血酶诱导的神经元损伤,其神经保护机制可能与其抑制p-JNK的激活和caspase-3的表达有关.
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MDCK细胞缺氧模型的建立及机制研究
目的：建立犬肾细胞（Madin－Darby canine kidney， MDCK）缺氧模型，进一步探讨丝裂原活化蛋白激酶（ MAPKs）在缺氧性细胞损伤中的活性改变。方法将MDCK细胞置于体积分数为5％ CO2和95％N2的有机玻璃调节性密闭容器中分别培养24、36、48、72、84 h，MTT实验检测细胞的存活力，蛋白免疫印迹法（ Western blot）检测JNK（c－Jun NH2 terminal protein kinase）和p38 MAPK的磷酸化活性。结果 MDCK细胞缺氧24、36、48、72、84 h后，与正常对照组相比，MTT D值均明显下降（P＜0．01）。MDCK细胞缺氧后，JNK和p38 MAPK的磷酸化水平增高。结论此方法可以成功建立操作简便、有效的MDCK细胞缺氧模型，且是通过激活JNK、p38 MAPK引起缺氧性细胞损伤。
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JNK信号传导通路在星形胶质细胞缺氧/复氧后损伤的作用
目的 建立SD大鼠星形胶质细胞(astrocyte,AC)缺氧/复氧损伤模型,探讨JNK信号转导通路与星形胶质细胞损伤的关系.方法 体外培养新生SD大鼠星形胶质细胞,传至第3代,细胞自然纯化,实验设正常对照组(N)、SP600125组(SP组,10 μmol /L)、缺氧/复氧组(H/R组)和缺氧/复氧+SP600125组(H/R+SP组).分别利用MTT法、AnnexinV/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染法、WB法检测缺氧8 h,复氧4、6、12、24 h时细胞存活率、凋亡率、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)的变化.结果 ①缺氧/复氧后细胞活力出现明显下降,SP600125阻断JNK通路后细胞活力高于H/R组;②缺氧/复氧后细胞凋亡率增加,SP600125阻断JNK通路后能够减轻细胞凋亡.③各组AC的JNK水平无显著变化,缺氧/复氧干预后p-JNK表达上调,用SP600125阻断JNK通路后,H/R+SP组较H/R组p-JNK水平降低.结论 JNK信号通路参与了星形胶质细胞缺氧/复氧损伤过程.
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LRP-1抑制缺氧/复氧诱导的肾细胞损伤
目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)在肾小管上皮细胞(HK2)缺氧/复氧损伤中的作用及其可能机制.方法:建立HK-2缺氧/复氧模型;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LRP-1 mRNA表达量;Western blotting检测LRP-1、JNK蛋白表达量和JNK磷酸化水平;构建重组载体pcDNA.3.1-LRP-1并转染细胞过表达LRP-1;转染LRP-1 siRNA抑制LRP-1表达;试剂盒方法检测caspase-3活性;Annexin-Ⅴfluorescein isothiocyanate conjugate and propidium iodide(Annexin-Ⅴ FITC/PI)方法检测细胞凋亡;MTT法检测细胞生长活力;试剂盒方法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;JNK抑制剂SP600125孵育HK-2.结果:HK-2缺氧/复氧诱导LRP-1表达量上调;过表达LRP-1显著下调JNK磷酸化水平,降低缺氧/复氧诱导的HK-2凋亡,降低caspase-3活性和LDH漏出量,且提高细胞生长活力.抑制LRP-1则作用相反.另外,SP600125抑制JNK磷酸化水平,且提高细胞生长活力,降低caspase-3活性.结论:LRP-1可通过调控JNK降低肾细胞的缺氧/复氧损伤,为肾脏缺血再灌注的防治提供新的靶点.
关键词： 低密度脂蛋白受体相关蛋白1 缺氧/复氧 肾细胞 JNK -
桔梗皂苷D对阿霉素体外抗肝癌活性的干预作用及其机制研究
目的 观察桔梗皂苷D对阿霉素体外抗肝癌活性的干预作用并探讨其作用机制.方法 将人肝癌细胞系PLC细胞按5×103/孔接种在96孔板上,分为对照组、桔梗皂苷D组、阿霉素组、阿霉素+桔梗皂苷D组、阿霉素+桔梗皂苷D+NAC组和阿霉素+桔梗皂苷D+ASK1小干扰RNA组.各组细胞处理完毕后,采用MTT实验检测肝癌细胞系PLC细胞活力;流式细胞术检测PLC细胞的凋亡和活性氧簇(ROS)的产生;Western blot实验检测PLC细胞ASK1及JNK磷酸化水平及半胱天冬酶-3(Caspase-3)活化水平.结果 桔梗皂苷D联合阿霉素对PLC细胞的细胞活力抑制率和凋亡诱导率显著高于阿霉素组[细胞活力抑制率:(61.5±5.1)％比(15.2±1.4)％,P＜0.05;凋亡诱导率:(36.8±2.9)％比(7.6±0.6)％,P＜0.05].桔梗皂苷D处理不影响PLC细胞内ROS水平,但桔梗皂苷D联合阿霉素处理组ASK1及JNK磷酸化水平及Caspase-3活化水平均显著高于阿霉素组.阿霉素+桔梗皂苷D+NAC组、阿霉素+桔梗皂苷D+ASK1小干扰RNA组PLC细胞活力抑制率和凋亡诱导率均显著低于桔梗皂苷D联合阿霉素组[细胞活力抑制率:(25.8±2.0)％、(19.7±1.6)％比(61.5±5.1)％,P均＜0.05;凋亡诱导率:(12.4±1.1)％、(10.8±0.9)％比(36.8±2.9)％,P均＜0.05].结论 桔梗皂苷D可能通过上调ASK1表达增强阿霉素的体外抗肝癌活性.
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同型半胱氨酸对内皮细胞凋亡及JNK表达的影响
目的 了解同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)对内皮细胞凋亡及JNK表达的影响.方法 用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后,TUNEL方法检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞磷酸化JNK的表达.结果 随着Hcy浓度的升高,细胞凋亡数目明显增加,各组细胞磷酸化JNK的表达也逐步增强,且具有显著性正相关.结论 Hcy能引起内皮细胞凋亡及磷酸化JNK表达的增强.
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二氢杨梅素通过SIRT1/JNK途径提高耐药恶性黑素瘤细胞对卡铂的敏感性
目的 探讨二氢杨梅素对卡铂耐药恶性黑素瘤细胞的增敏作用并研究其机制.方法 MTT法检测卡铂耐药A375细胞(A375-R)在卡铂和二氢杨梅素处理下的细胞活力.Western blot法检测卡铂和二氢杨梅素对A375-R细胞SIRT1表达水平,caspase-9、caspase-3活化水平及JNK蛋白磷酸化水平的影响.流式细胞术检测A375-R细胞在卡铂和二氢杨梅素联合处理下的细胞凋亡率.结果 MTT实验结果显示,卡铂对A375-R细胞的半数抑制浓度(IC50)显著高于A375细胞,二氢杨梅素辅助治疗能明显降低卡铂对A375-R的IC50.Western blot实验结果显示A375-R中SIRT1的表达水平显著高于A375细胞,二氢杨梅素处理能显著抑制A375-R细胞SIRT1的表达.二氢杨梅素能明显促进卡铂对A375-R细胞JNK的磷酸化,转染SIRT1质粒或用JNK特异性抑制剂(SP600125)处理后,二氢杨梅素联合卡铂对A375-R细胞的杀伤活性、凋亡诱导活性和JNK、caspase-9及caspase-3的活化均受到明显抑制.结论 二氢杨梅素通过SIRT1/JNK途径提高耐药恶性黑素瘤细胞对卡铂的敏感性.
