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胍丁胺通过抑制大鼠脊髓JNK通路对抗慢性吗啡耐受
目的 探讨脊髓c-Jun 蛋白氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在胍丁胺抗慢性吗啡镇痛耐受中的作用.方法 SD大鼠皮下注射吗啡(10 mg·kg-1,每日2次,连续9 d)建立慢性吗啡镇痛耐受模型.应用热水甩尾法测定甩尾潜伏期观察吗啡的镇痛效果.应用免疫印迹法(Western blot)检测脊髓总JNK和磷酸化(p)-JNK蛋白表达;免疫组织化学染色法检测脊髓p-JNK的免疫反应性(immnunoreactivity,IR).结果 吗啡耐受大鼠脊髓背角p-JNK-IR明显增多,p-JNK蛋白表达也增多,而总JNK没有改变.胍丁胺(10 mg·kg-1)不仅拮抗吗啡镇痛耐受,而且明显地抑制脊髓背角p-JNK-IR增多及p-JNK蛋白表达上调.结论 抑制慢性吗啡注射所引起的脊髓JNK的激活可能是胍丁胺抗吗啡镇痛耐受的作用机制之一.
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SHP-2在三氧化二砷诱导HEK293T细胞凋亡中的作用
目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用.方法 将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法 转染HEK293T细胞;在 5 μmol·L-1 的 As2O3孵育 48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot方法 检测Cyt-C、Caspase-3、p-ERK、ERK、p-JNK及 JNK的表达变化.结果 5μmol·L-1 As2O3可诱导HEK293T细胞凋亡,SHP-2能抑制其作用;SHP-2C459S突变体组Cyt-C和Caspase-3表达均高于空载体组,SHP-2野生型组则低于空载体组;SHP-2野生型组p-ERK表达高于空载体组,SHP-2C459S突变体组则相反;p-JNK的表达,SHP-2C459S突变体组高于空载体组,而SHP-2野生型组低于空载体组.结论 SHP-2可抑制As2O3诱导的HEK293T细胞凋亡,其机制可能与激活ERK和抑制JNK途径有关.
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小檗碱对胰岛素抵抗大鼠氧化应激和内质网应激的影响
目的 观察小檗碱对胰岛素抵抗大鼠氧化/抗氧化状态和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)的影响,并探讨其改善胰岛素抵抗的分子机制.方法 采用高脂高热卡饮食饲养8 wk制备胰岛素抵抗大鼠模型,成模后随机分为小檗碱组(BER组)、Alpha-硫辛酸组(ALA组)和模型组(MOD组),各组以相应的药物干预4 wk.另设正常组(NOR组),予普通饲料喂养,不予药物干预.比较各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素水平(Fins)和胰岛素敏感性(ISI).血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以观察药物对大鼠氧化和抗氧化的影响.Western blot方法测定肝脏组织中的ER应激标志物c-Jun氨基端激酶(c-jun NH2-terminal kinase, JNK)和Phospho-c-Jun (Ser73) (p-c-Jun)的含量变化.RT-PCR方法测定肝脏组织ER应激标志物葡萄糖调节蛋白GRP78 (glucose regulated protein78,GRP78) mRNA表达水平,以观察小檗碱对胰岛素抵抗大鼠ER应激的影响.结果 与NOR组比较,MOD组大鼠血清中MDA含量明显升高,SOD、GSH-Px活性明显降低(P均＜0.05).BER组大鼠SOD、GSH-Px的活性较MOD组明显升高(P＜0.01,P＜0.05),MDA含量较模型组明显下降.比较各组肝组织p-c-Jun/JNK的水平,MOD组较NOR组明显升高(P＜0.01),BER组及ALA组较MOD组均明显下降(P均＜0.01).比较各组肝组织中GRP78 mRNA水平,MOD组较NOR组明显升高(P＜0.05),BER组及ALA组较MOD组均明显下降.结论 小檗碱能提高胰岛素抵抗大鼠的胰岛素敏感性,增加其抗氧化能力,改善其ER应激状态,其作用机制可能与改善ER应激有关.
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金纳多对肾缺血/再灌注诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响
目的 研究银杏叶提取物金纳多(Ginaton)注射液对大鼠肾脏缺血/再灌注(I/R)诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制.方法 采用双侧夹闭大鼠肾蒂缺血45min后再灌注20 min、3、24 h的方法制备动物模型.在预定时间点采用免疫印迹分析JNK及其底物c-Jun的激活和表达.TUNEL(原位末端标记法)及流式细胞术检测肾小管上皮细胞凋亡情况.结果 肾脏缺血45 min再灌注24 h后肾小管上皮细胞凋亡明显增多,肾脏病理改变明显.肾脏缺血/再灌注20 min时,JNK的磷酸化水平明显增加,缺血/再灌注3 h,c-Jun的磷酸化水平明显增加.金纳多明显抑制了肾I/R诱导的JNK(vs I/R 20 min,P＜0.05)和c-Jun(vs I/R 3 h,P＜0.05)的磷酸化水平的增加.同时,金纳多明显减轻肾I/R诱导的肾小管上皮细胞凋亡(vs I/R 24 h,P＜0.05),改善肾脏组织病理学改变.结论 金纳多抑制肾I/R诱导的肾小管上皮细胞凋亡,保护缺血性肾损伤的作用,至少部分是通过抑制JNK通路的激活实现的.
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JNK通路在缺血预处理诱导海马神经元保护中的作用
目的 探讨JNK通路在缺血预处理诱导海马神经元保护中的作用.方法 ♂蒙古沙土鼠,随机分为假手术组(SH)、缺血/再灌注组(I/R)、缺血预处理组(IP)、Anisomycin组(AN)、Curcumin组(CU)、Anisomycin复合IP组(AP)、Curcumin复合IP组(CP)及溶剂对照组(VE),每组据再灌注15 min、2、4、6 h、1、3、5及7 d又分8个亚组.预定时间点行TUNEL海马CA1区凋亡细胞检测、免疫组化SP法检测p-JNK及Jun蛋白在海马CA1区的表达变化.结果 IP、CU及CP可减少海马CA1区凋亡锥体细胞数( vs I/R, P＜0.01),减弱CA1区再灌注各点p-JNK及Jun蛋白的表达水平( vs IR, P＜0.01),该效应CP组＞IP组＞CU组.AN增加CA1区凋亡锥体细胞数( vs IR, P＜0.01),增强CA1区再灌后1 d内各点p-JNK及再灌后1～7 d各点Jun蛋白表达水平( vs IR, P＜0.01).AP部分抵消IP保护效应.结论 JNK通路激活参与沙土鼠海马CA1区缺血性神经元凋亡,缺血预处理可通过抑制CA1区JNK磷酸化、减少Jun蛋白表达而保护海马细胞和功能.抑制JNK通路激活可发挥缺血预处理相似的保护作用.
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ERK和JNK通路在沙土鼠脑缺血预处理中的表达及作用
目的探讨ERK和JNK在沙土鼠脑缺血预处理中的表达及作用.方法采用沙土鼠前脑缺血再灌注损伤模型.随机分为假手术组(SH)、预处理对照组(IC)、预处理缺血组(IP)及脑缺血再灌注组(IR);各组根据再灌注15 min、2 h、4 h、6 h、1 d、3 d、5 d及7 d又分8个亚组.在预定时间点行开阔法行为学检查、TUNEL法海马CA1/3区凋亡细胞检测、免疫组织化学SP法测定p-ERK、p-JNK在海马区的变化.结果 IP可减少沙土鼠探索活动及海马CA1区凋亡锥体细胞数量(vs IR, P<0.01)各组CA1区p-ERK无表达,IR组海马CA1区p-JNK表达较强,再灌后1d为明显,IP可明显减弱CA1区p-JNK的表达 (vs IR, P<0.01),明显增强CA3区p-ERK的表达(P<0.05,P<0.01).结论脑缺血可导致ERK及JNK在海马各亚区的差异性表达.缺血预处理可能通过抑制CA1区JNK磷酸化、增强CA3区ERK活性而保护海马细胞.
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丁酸钠和氯高铁血红素诱导K562细胞分化的信号转导机制
目的探讨丁酸钠和氯高铁血红素(hemin,Hm)诱导K562细胞向红系分化的信号转导机制.方法采用台盼蓝拒染法观察丁酸钠和Hemin对K562细胞生长曲线的影响;流式细胞仪进行细胞周期分析;联苯胺染色检测药物诱导K562细胞向红系分化作用. 结果丁酸钠和Hemin呈时间和剂量依赖方式诱导K562细胞向红系分化; ERK抑制剂PD98059增加丁酸钠、降低Hemin诱导的联苯胺阳性率;JNK抑制剂SP600125未影响丁酸钠却降低Hemin的诱导分化作用.结论在K562细胞向红系分化过程中,ERK正性调节Hemin、负性调节丁酸钠的诱导分化作用;同时 Hemin而不是丁酸钠的诱导分化过程还需要JNK的活性.
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JNK信号级联的诱导性失活机制
MAPKKK(MEKK1或ASK1)/MAPKK(SEK1或MKK7)/JNK信号级联是介导细胞凋亡的重要信号通路,但在外界刺激下,机体也能诱导性抑制JNK激活,阻止细胞损伤.MAPK磷酸酶能直接诱导JNK去磷酸化灭活JNK;NO可使JNK的半胱氨酸残基上的巯基亚硝化灭活JNK.针对JNK上游激酶级联,SGK1或Akt可以磷酸化SEK1的Ser78灭活SEK1;c-FLIPL能够结合MKK7上活化JNK的位点,抑制其对JNK的活化.半胱氨酸转移酶 Mu 1-1结合MEKK1;TRX、半胱氨酸转移酶π1-1可以结合ASK1,灭活MAPKKK,继而导致细胞内MAPKK/JNK活性降低,阻断信号通路.JNK的失活能增强肿瘤细胞的耐药性,也能抵抗各种刺激导致的细胞损伤.该文综述了上述信号蛋白诱导性灭活JNK的机制及其介导的抗凋亡效应.
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JNK信号通路与神经退行性疾病
c-Jun N端蛋白激酶(JNK)是细胞功能的重要激酶,在各种刺激以及生理状态下导致神经元凋亡中起着重要的作用.JNK主要与一些神经退行性疾病有着密切的关系.理解JNK信号通路能够为将来选择JNK作为靶点干预这些疾病条件.JNK参与这些神经退行性疾病的发病机制,因此抑制其活性成为有效治疗的靶点.
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Toll 样受体2介导的 JNK 信号分子在小鼠支气管哮喘发病中的作用机制
目的：探讨 Toll 样受体2(TLR2)介导的 c-Jun 氨基末端激酶(JNK)信号分子参与小鼠支气管哮喘发病的作用机制。方法健康 SPF 级 C57(TLR2野生型)鼠和 TLR2基因缺失(TLR2-/-)鼠各14只,按随机数字表法分为4组：C57对照组、C57哮喘组、TLR2-/-对照组、TLR2-/-哮喘组,每组7只,哮喘组以卵清蛋白(OVA)腹腔注射联合雾化吸入致敏和激发建立哮喘模型,对照组以生理盐水代替 OVA致敏和激发。利用免疫组织化学染色技术( ABC 法)检测TLR2蛋白在 C57对照组、C57哮喘组肺内的表达差异,JNK及磷酸化 JNK(P-JNK)蛋白表达在各组肺内的表达差异。结果 HE 染色提示较其余3组,C57哮喘组有较明显的炎症细胞浸润及呼吸道平滑肌增生。以平均吸光度(mA)衡量各组织蛋白相对表达量,免疫组化结果提示 TLR2蛋白在C57哮喘组表达显著高于 C57对照组(P <0．01),JNK 蛋白在各组的表达差异无统计学意义,P-JNK 蛋白在 C57哮喘组肺组织的表达量显著高于 C57对照组、TLR2-/-哮喘组、TLR2-/-对照组(F =43．261,P <0．01)。结论 TLR2介导的 JNK 信号分子通路可能参与了支气管哮喘的发病过程。
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JNK通路促进乳化异氟烷引起的大鼠胚胎神经干细胞的增殖抑制
目的 探讨乳化异氟烷( EI)对原代培养的SD大鼠胚胎神经干细胞增殖的影响以及JNK通路在此影响中的作用. 方法 建立体外培养胚胎神经干细胞接受EI处理的模型,分为6组(n=8):正常组(N组)、脂肪乳组(F组)、EI处理组(8. 12 、9. 80 、12. 04 mmol/L EI)、9. 80 mmol/L EI组+20 μmol/L SP600125组( EISP组). 细胞处理12 h后,采用噻唑蓝( MTT)法分别检测6组胚胎神经干细胞的细胞活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot 法定量检测Caspase-3蛋白表达. 实验重复3次. 结果 与N组比较,F组各项指标无显著差异, EI组细胞增殖的抑制率明显升高(P<0. 01),EI组细胞的凋亡率明显升高(P<0. 01),EI 组明显上调Caspase-3的表达量( P<0. 05 );EI组内3 个浓度之间比较,细胞增殖的抑制率( P<0. 01 )、细胞的凋亡率以及Caspase-3 的表达量差异均有统计学意义( P<0. 05 );与EI组比较,EISP组细胞增殖的抑制率明显下降 ( P<0. 05 ) , EISP组细胞的凋亡率明显降低 ( P<0. 01 ) , EISP组明显下调Caspase-3的表达量( P<0. 05 ). 结论 EI引起的SD大鼠胚胎神经干细胞的增殖抑制具有一定的浓度依耐性,并且与JNK通路相关.
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金黄色葡菌球菌刺激巨噬细胞对JNK活化和Th1/Th2型细胞因子分泌的影响
目的 探讨金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7对c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路活化及其对Th1/Th2型细胞因子表达的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞,以金葡菌的感染复数(MOI)值为10(金葡菌:细胞=10∶1)刺激RAW264.7细胞,设置时间点为0.5、1.0、1.5、2.0h.Western blot检测金葡菌刺激后RAW264.7细胞JNK磷酸化水平,ELISA法检测各时间点RAW264.7细胞上清液中白介素-5(IL-5)和干扰素-γ(IFN-γ)的表达水平.结果 金葡菌刺激RAW264.7细胞后JNK磷酸化水平显著升高,在0.5h明显(P＜0.01);细胞上清液中IFN-γ水平在金葡菌刺激后0.5、1.0h显著升高(P＜0.01),而在1.5、2.0h逐渐恢复到正常水平(P＞0.05);IL-5水平在金葡菌刺激后1.0h时开始升高(P＜0.05),并在1.5、2.0h显著升高(P＜0.01);另外IL-5/IFN-γ在1.0、1.5、2.0h时差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 金葡菌刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞能够活化JNK通路,并影响Th1/Th2型细胞因子的表达.
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棕榈酸致大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗与JNK1活化的关系
目的 建立棕榈酸(PA)诱导的大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型,初步探讨其机制与C-jun氨基末端激酶1(JNK1)活化的关系.方法 不同浓度PA分别培养已分化的L6肌细胞2、4、8、12、24、36 h,用葡萄糖试剂盒分别检测各组培养液中剩余葡萄糖浓度,观察不同浓度PA对骨骼肌细胞葡萄糖摄取的影响.MTT法检测棕榈酸对L6细胞活性的影响.建立L6肌细胞胰岛素抵抗模型,Western blot检测正常组(NG组)和胰岛素抵抗组(IR组)的JNK1和p-JNK1的蛋白表达水平.结果 0.4 mmol/L的PA孵育24~36 h与0.6、0.8 mmol/L的PA孵育8~24 h后细胞上清液葡萄糖浓度明显高于NG组(P<0.05),MTT结果显示0.8、1.0 mmol/L的PA作用24、36 h时对细胞的活性有影响.Western blot结果显示:NG组JNK1和p-JNK1的表达量较低,IR组JNK1和p-JNK1的表达量上升,其中p-JNK1表达量上升较JNK1明显,但与NG组比较,IR组的JNK1表达差异无统计学意义,p-JNK1、p-JNK1/JNK1表达差异均有统计学意义(P<0.05).结论 通过一定浓度和时间的PA刺激可导致大鼠L6成肌细胞胰岛素抵抗的形成,其机制可能和JNK1的活化有一定关系.
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辛伐他汀对高糖诱导的血管内皮细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨辛伐他汀(SIM)对高糖诱导的血管内皮细胞(VEC)增殖及凋亡的影响,及其对VEC保护的作用机制.方法 将处于对数生长期的VEC随机分为正常对照组(Glu 5.5 mmol/L)、高糖组(Glu 33 mmol/L)、高糖+3个不同浓度SIM组,MTT法检测VEC增殖的变化,试剂盒检测细胞上清液中一氧化氮(NO)和内皮素(ET-1)的水平,流式细胞术检测各组细胞活性氧(ROS)的水平和凋亡率;增加高糖+SP600125组(SP600125 10.0 μmol/L),Western blot法检测JNK蛋白表达和磷酸化水平.结果 与正常对照组相比,高糖组细胞上清中NO水平明显下降、ET-1水平明显上升、ROS含量和凋亡率明显增加、JNK磷酸化水平明显上调.JNK抑制剂SP600125预处理后,VEC的p-JNK表达显著减少.SIM可显著逆转上述高糖效应,且呈一定的浓度依赖性.结论 SIM对VEC的保护作用可能与其促进细胞增殖、减少氧化应激和细胞凋亡、降低JNK的磷酸化水平有关.
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银杏叶提取物对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征合并高血压大鼠血压的影响
目的：研究银杏叶提取物( GBE)对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征( OSAS)合并高血压大鼠血压的影响,及GBE可能的作用机制。方法30只健康雄性SD大鼠随机均分为正常对照( NC)组、慢性间歇性低氧( CIH)组、GBE灌胃组,各组10只。于实验前后采用无创血压分析仪观察大鼠血压变化；HE染色观察大鼠心肌、肾、腹主动脉的病理变化；同时检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α( TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)的含量；及外周脂肪组织中Toll样受体4(TLR4)、c-Jun 氨基末端激酶(JNK)蛋白及其mR-NA表达水平。结果 CIH组大鼠血压明显高于对照组( P<0．01),GBE灌胃组大鼠血压显著低于CIH组(P<0．01)；与 NC 组相比,CIH组心肌细胞、肾小管明显水肿呈水样变性,GBE灌胃组与CIH组比较心肌细胞、肾小管水肿显著降低,各组腹主动脉均无明显病理改变；与NC组比较,CIH组大鼠血清中 TNF-α、IL-1、IL-6的含量均显著增高( P <0．01),GBE灌胃组与CIH组比较大鼠血清中TNF-α、IL-1、IL-6的含量显著降低(P<0．05),GBE灌胃组与NC 组比较TNF-α、IL-6的含量差异无统计学意义,而IL-1的含量GBE灌胃组明显高于NC 组(P<0．01)；与NC组比较,CIH组外周脂肪组织中TLR4、JNK蛋白及其mRNA表达水平显著增高(P<0．01),而GBE灌胃组其表达含量显著低于CIH组(P<0．01)。结论 GBE可以抑制OSAS合并高血压大鼠脂肪组织TLR4、JNK蛋白及mRNA的表达,降低血清中TNF-α、IL-1、IL-6的水平,对OSAS合并高血压大鼠血压有显著降压作用。
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吡格列酮对糖尿病大鼠肝脏及JNK表达的影响
目的 ①了解长期高脂喂养的伴胰岛素抵抗糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肝脏的病理改变;②了解糖尿病大鼠肝脏c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)表达的变化;③了解吡格列酮(PIO)对伴胰岛素抵抗的糖尿病大鼠肝脏JNK信号通路的影响.方法 将长期高脂喂养、伴胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的成模DM大鼠随机分为对照组(12只),模型组(9只),吡格列酮组(PIO,10 mg·kg·d-1)(10只).治疗6周后留取肝脏标本进行HE染色,免疫组化检测JNK及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase phosphorylation,p-JNK)分布及表达;逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain raction RT-PCR)测定JNK-mRNA在肝脏中的表达,并对JNK,p-JNK进行半定量分析.结果 ①肝脏HE染色显示:模型组肝细胞肿胀、脂肪变性,存在炎细胞浸润,部分出现点、灶状坏死.吡格列酮组肝细胞病理改变较模型组明显改善.② JNK mRNA,JNK,P-JNK蛋白表达量以及p-JNK/JNK,模型组高于对照组(P<0.05),亦高于吡格列酮组(P<0.05),差异有显著性.结论 长期高脂饮食伴IR的糖尿病大鼠可出现肝细胞脂肪变性、炎细胞浸润及局灶性坏死,且肝脏免疫组化JNK、p-JNK及JNK-mRNA蛋白表达量均明显增加.吡格列酮治疗可改善2型糖尿病引起的早期肝脏损害,该作用可能是通过抑制JNK信号通路的活性,减少JNK,p-JNK表达来实现的.
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NF-κB信号通路对糖尿病血管内皮的影响
目的 研究糖尿病血管内皮细胞NF-κB信号途径,从而为防治糖尿病血管并发症提供新的治疗策略.方法 设计、合成针对NF-κB基因ShRNA的寡核苷酸序列;构建腺病毒载体质粒,转染293A细胞,进行病毒包装、扩增;腺病毒载体转导血管内皮细胞,通过RT-PCR和Western blot从mRNA以及蛋白质水平验证构建的病毒载体对血管内皮细胞NF-κB表达的抑制效应;用Western blot验证NF-κB干扰的血管内皮细胞中JNK(c-Jun氨基末端激酶)的变化.结果 高浓度葡萄糖的条件下,内皮细胞NF-κB的表达量显著升高;干扰RNA有效干扰了正常血糖和高血糖环境下NF-κB及p-JNK的表达;p-JNK的表达随着NF-κB表达的下降而下降.结论 高糖通过NF-κB及JNK的信号传导通路影响内皮细胞的凋亡.
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JNK、p38MAPK信号通路与肿瘤细胞凋亡
JNK和p38MAPK通路是MAPK通路中至关重要的2条通路,这2条信号通路都在不同的应激反应中发挥重要的作用,随着如今对这2条信号通路研究的深入和认知的增强,人们发现JNK、p38MAPK信号通路的激活参与了不同刺激所致的一些常见的恶性肿瘤细胞凋亡的启动,例如胃癌、肺癌、乳腺癌以及白血病.探讨JNK、p38MAPK信号通路在肿瘤凋亡中的作用将有助于肿瘤细胞凋亡机制的研究,以及为恶性肿瘤的治疗提供重要的理论和实验基础.
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电针结合鳖甲煎丸对肝癌小鼠肿瘤细胞凋亡及JNK信号通路的影响
目的:观察电针结合鳖甲煎丸对H22肝癌小鼠肿瘤抑制作用及JNK信号通路的影响.方法:建立H22肝癌小鼠模型,将100只肝癌小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、电针组、鳖甲煎丸组、针药联合组,小鼠治疗14 d后,取肿瘤组织称重,计算抑瘤率;采用Western blot方法检测肿瘤组织Bcl-2、Bax、JNK、p-JNK蛋白表达情况.结果:针药联合对H22小鼠肿瘤生长有明显抑制作用;Western blot结果表明针药联合能明显降低Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,促进JNK蛋白磷酸化.结论:针药联合可通过激活JNK信号通路,降低抑凋亡蛋白Bcl-2表达,提高促凋亡蛋白Bax表达,调整Bcl-2/Bax比值,进而发挥抑瘤作用.
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11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯抗胃癌细胞增殖、侵袭迁移的机制研究
目的：研究脱水穿心莲内酯衍生物[11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯]抑制胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭及迁移的作用，并探讨其可能的作用机制。方法取 SGC7901细胞，加入11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯中，分别设置20、40、60、80和100μmol· L－15个药物浓度组；不加11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯的单纯细胞为空白对照组，分别置于培养箱孵育24、48、72 h；采用 MTT 法检测细胞增殖与细胞活力；采用 Transwell 小室测定24 h 后 SGC7901细胞的侵袭能力，并通过蛋白免疫印迹（Western blot）法检测48 h 细胞增殖与迁移相关蛋白 Akt、p-AKT、JNK、p-JNK、MMP-2、MMP-9的表达情况。结果与空白对照组相比：20、40、60、80和100μmol·L－15个药物浓度组能明显抑制 SGC7901细胞增殖，并呈时间和浓度依赖性（P ＜0．01）。空白对照组迁移和侵袭能力无显著变化，11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯（40μmol·L－1组）处理 SGC7901细胞迁移和侵袭能力较空白对照组明显减弱（P ＜0．01）。采用11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯（40μmol·L－1）处理 SGC7901细胞48 h后，可明显抑制 p-AKT、p-JNK、MMP-2及 MMP-9的表达水平。结论11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯可降低胃癌 SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力，其作用机制可能是通过抑制 p-AKT、p-JNK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达。
关键词： 脱水穿心莲内酯环磷酸酯衍生物 SGC7901 细胞 增殖 侵袭迁移 AKT JNK MMP-2 MMP-9
