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人脂肪来源干细胞与胶原支架共培养的实验研究
目的 观察评价人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,hADSCs)在胶原支架中的生长情况,为进一步体内组织修复研究提供依据.方法 取人抽脂术后脂肪,经胶原酶解、过滤、离心获得hADSCs,代传代扩增后,接种到胶原支架上.细胞-材料复合物分别体外培养1周、2周,裸鼠体内培养2周、4周后,HE染色观察细胞在支架上的生长情况,免疫组化HLA-I检测经裸鼠体内培养后的复合物上的细胞的种属来源.结果 原代培养的hADSCs呈“梭形”或“成纤维细胞”样,并以克隆团形式生长.免疫荧光Vimentin染色阳性.第3代hADSCs经流式细胞鉴定,CD29、CD44、CD105表达阳性,CD45、CD34表达阴性.胶原支架复合hADSCs经过体外、体内培养,hADSCs均能长入胶原支架的空隙内,且体内培养比体外培养有更多的细胞长入支架.体外培养1周,已有细胞粘附生长在胶原支架的边缘,体外培养2周后,更多的细胞渗透到材料内部.体内培养2周后,大量细胞占据材料的边缘,有部分细胞能渗透到材料内部甚至材料全层.体内培养4周后,大量细胞渗透支架全层.HLA-I抗体检测发现,支架材料内部细胞阳性表达,说明胶原支架内部的细胞来源于hADSCs.结论 胶原支架与hADSCs具有较好的相容性,可作为hADSCs的载体材料,用于组织工程缺损修复的研究.
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脂肪血管基质组分获取方法及临床应用的研究进展
脂肪血管基质组分(Stromal vascular fraction,SVF)是抽脂脂肪去除成熟脂肪细胞后剩余的多种细胞及基质成分的组合,主要包含脂肪来源干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)、造血干细胞、内皮祖细胞、巨噬细胞等.其中,ADSCs具有多向分化潜能,并可分泌多种细胞因子,在组织再生及修复中具有重要作用.SVF的获取方法主要包括酶消化法与机械乳化法,但获取标准尚未达成共识.SVF已广泛应用于辅助脂肪移植、面部年轻化、瘢痕及脱发治疗等整形外科领域,也可应用于放射性损伤、骨关节炎、糖尿病等疾病的治疗.目前关于SVF的安全性及临床效果仍存争议,需要基础实验及临床研究探索SVF的佳获取方法及作用机制,提高SVF临床使用的安全性和疗效,并进一步扩大应用.
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脂肪来源干细胞相关生长因子及其作用的研究进展
脂肪来源干细胞能分泌不同生长因子，并发挥多种生物学作用，如促血管生成作用、造血支持作用、抗凋亡作用和趋化作用等。本文对脂肪来源干细胞相关生长因子及其作用的研究进展进行综述。
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脂肪来源干细胞的特性鉴定
干细胞具有向多种细胞系定向分化的潜能,其中的胚胎干细胞由于伦理和取材等因素使其研究和应用受到限制.目前,用于组织修复和再生的间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)多采用成体多能干细胞.
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脂肪来源干细胞在创伤愈合方面的研究进展
干细胞是一类具有自我更新、增殖和多向分化能力的细胞,自Zuk等[1]发现脂肪组织中存在多向分化能力细胞以来,脂肪组织来源干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)已被证实具有分化成为骨骼、软骨、脂肪、心肌、神经等组织的能力,且对创伤愈合也有明显的促进作用.
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脂肪来源干细胞的可塑性
脂肪组织为中胚层来源,其中含有成熟的脂肪细胞和未分化的脂肪干细胞,以及微血管内皮细胞和少量的平滑肌细胞.具有干细胞特点的脂肪干细胞可以通过酶消化及离心等方法,从脂肪组织中分离获得.
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脂肪来源干细胞的临床治疗应用前景
1 背景介绍组织工程功能性再造受损的器官需要细胞因子、生物材料/基质和细胞三方面的联合和统一.为此理想的种子细胞应满足以下标准:产.
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组织工程学技术治疗压力性尿失禁的研究进展
压力性尿失禁是泌尿系统的常见病和多发病,目前治疗压力性尿失禁的方法主要有药物治疗、物理和行为治疗以及手术治疗.但由于各种原因,现行治疗手段的效果并不理想.组织工程学技术是一门新兴的技术,它的发展为压力性尿失禁的治疗提供了新的思路和手段.文章就组织工程学技术治疗压力性尿失禁的研究进展作一介绍.
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HGF基因转染脂肪来源干细胞移植改善兔急性心肌梗死后心功能的研究
目的 探讨脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSC)移植和肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因联合治疗兔急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的疗效及机制.方法 家兔30只,复制急性心肌梗死模型.随机分为3组:AMI/ADSC+ hHGF组、AMI/ADSC组、AMI未治疗组,每组10只,另外随机选取10只兔作为假手术组.AMI术后3d,取兔腿部脂肪,分离ADSC培养,流式细胞术鉴定其表面标记.构建pcDNA3.1-hHGF重组表达载体,移植前用脂质体包裹表达载体转染ADSCs,孵育24 h.AMI术后14d,自体细胞移植,AMI未治疗组接受等量的无血清培养基注射,假手术组只开胸,不注射.细胞移植后28 d,超声心动图检测左室功能指标;取心肌组织,酶联免疫吸附法( ELISA)测定心肌组织中HGF的含量;计算心肌血管密度和纤维化面积.结果 移植后28 d,超声心动图测定显示AMI/ADSC+ hHGF组心功能改善明显优于AMI/ADSC组;AMI/ADSC+ hHGF组HGF含量高于AMI/ADSC组以及AMI组.AMI/ADSC+ hHGF组梗死区血管的数量及心肌纤维化面积等参数明显优于AMI/ADSC组.结论 转染肝细胞生长因子基因的脂肪来源干细胞移植可改善兔心肌梗死后的心功能,其疗效明显优于单纯干细胞移植,其可能通过促进血管新生、改善梗死区的血供及抗纤维化效应而起作用.
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兔脂肪来源干细胞表面标记分析及向心肌样细胞分化
目的 分析兔脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)表面标记并且对其进行体外诱导,观察其向心肌细胞分化的潜能,探讨脂肪来源细胞治疗缺血性心脏病的可能性.方法 应用酶消化法获得兔ADSCs,并在DMEM培养基中进行体外培养.取第二代细胞以流式细胞术鉴定其表面标记.第二代细胞经5-AZA(浓渡为10μmol/L)处理24 h,第2天更换新鲜培养液,以后每3 d换液1次,诱导3周后,应用RT-PCR检测心肌细胞特异性α肌球蛋白重链(α-MHC)基因及免疫荧光检测心肌肌钙蛋白(cTNT).结果 流式细胞术检测显示Sca1、CD44、CD117高表达,CD34和CD45低表达.诱导后细胞表达cTNT.RT-PCR显示与正常心肌组织α-MHC阳性条带对照,诱导后ADSC也在相同位置出现α-MHC的阳性条带,而未诱导ADSC没有阳性条带出现.结论 ADSC具有间质干细胞的特征,ADSC在一定诱导条件下向心肌样细胞分化,是一种有潜力的治疗缺血性心脏病的移植细胞.
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脂肪来源干细胞在下尿路修复重建中的应用
脂肪来源干细胞具有自我更新及多向分化潜能,能够分化成平滑肌细胞、尿路上皮样细胞、内皮细胞、神经样细胞等,并且可以分泌多种生长因子.因此,脂肪来源干细胞结合组织工程技术,已成为近年来下尿路修复重建实验研究的热点之一.本文就利用脂肪来源干细胞作为种子细胞,对膀胱缺损、压力性尿失禁、勃起功能障碍等疾病的组织工程修复进行综述.
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脊髓损伤动物模型研究进展
脊髓损伤(Spina cord injury,SCI)是脊柱损伤严重的并发症,是一种严重的神经系统功能障碍性疾病,损伤后会导致损伤节段以下肢体发生严重的功能障碍,典型的表现为损伤部位以下瘫痪,这不仅会给损伤患者本人带来身体与心理上的严重伤害,还会对家庭以及社会造成巨大的经济负担.然而,目前对于脊髓损伤的研究仍然存在着很多问题,文章总结了近年来有关脊髓损伤动物模型的研究进展,并对于利用干细胞移植治疗脊髓损伤的方法进行综述.
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脂肪来源干细胞在移植脂肪中的分化及其相关miRNA的表达
本文介绍脂肪来源干细胞(ADSCs)在移植脂肪中经信号通路传递信号来调控ADSCs分化中转入因子的活性,及其分化中miRNA的表达,阐明ADSCs成脂分化中的作用机制,另外,从ADSCs成脂分化中脂肪细胞的形态变化观察其组织学特点及对几种检测手段的简单介绍.
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脂肪来源干细胞与炎症性肠病
炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD) 的病因和发病机制至今仍未完全明确,免疫异常是其发病的重要因素.间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可抑制效应T细胞的应答,并应用于治疗各种免疫性疾病.脂肪组织来源干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ASCs),因其具有生物学特性稳定、来源充足、易分离、较强的体外增殖能力等优点引起关注.本文就ASCs在IBD作用作一综述.
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异基因脂肪干细胞对皮肤移植免疫调节的影响
目的:探讨异基因ADSCs对大鼠同种异体皮肤移植抗免疫排斥的作用.方法:3～4周Wistar大鼠30只,雌雄不限,体质量150-300g,取新西兰大白兔肾周脂肪行传代培养ADSCs至第四代鉴定、备用;将30只大鼠随机等分三组,A组为自体皮肤移植组,B组为同种异体皮肤移植+PBS局部注射组,C组为同种异体皮肤移植+ADSCs局部注射组;术后3、7、14d观察皮片成活情况、白细胞计数、巨噬细胞活化率、IL-2、IL-10、IFN-γ表达水平,行统计学分析.结果:A、B、C组大鼠移植皮片坏死时间、血液白细胞计数、巨噬细胞活化率及ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-10含量均表明C组与A、B组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:脂肪来源干细胞在体内具有较低的免疫原性,对大鼠同种异体皮片移植有抗免疫排斥的作用.
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脂肪干细胞对小鼠放射性唾液腺损伤的治疗作用
目的 探讨脂肪干细胞对小鼠放射性唾液腺损伤的治疗作用.方法 选取10只健康雄性C3H小鼠作为脂肪干细胞供体,分离培养小鼠脂肪干细胞.选取30只雌性C3H小鼠并随机分为空白组、单射组和治疗组各10只;单射组、治疗组予以15 Gy放射线照射小鼠头颈部,制作放射性唾液腺损伤模型;空白组不照射.照射后1周,治疗组小鼠给予脂肪干细胞注射,每周2次,连续2周;对照组和单放组经尾静脉注射等量的PBS.分别于照射后1、5、10周测定唾液分泌率.照射后10周收集小鼠下颌下腺,并测定腺体占体质量的比例、腺泡细胞面积以及细胞增殖率.结果 脂肪干细胞注射后,治疗组小鼠唾液流量逐渐上升,在放射后10周,治疗组高于单射组(P<0.05).空白组小鼠腺泡细胞表面积占下颌下腺总表面积的百分比为72％±10％,治疗组为65％±13％,单射组为34％±9％,空白组和治疗组腺泡细胞表面积均高于单射组(P均<0.05).空白组唾液腺细胞增值率为10.0％±0.12％,单射组为3.6％±0.14％,治疗组为8.1％±0.18％,单射组唾液腺细胞的增殖率低于治疗组、空白组(P均<0.05).结论 脂肪干细胞能够明显改善放射损伤的唾液腺功能,促进唾液分泌,提高腺体细胞的增殖率.
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脂肪来源干细胞复合不同生物支架在裸鼠皮下的促血管化作用
目的：探讨脂肪来源干细胞复合不同生物支架在裸鼠皮下的促血管化作用。方法：根据所选支架的不同，将实验分为4组，A组为脂肪颗粒，B组为透明质酸钠，C组为Ⅰ型胶原支架，分别按体积比1：1与25×106 mL-1的脂肪来源干细胞混合，D组为单纯脂肪来源干细胞，将4组试剂注射到12只裸鼠皮下构建软组织，每只裸鼠各注射4个点，3个月后获取相应标本，测定湿质量、存活率、微血管密度。结果：4组间湿质量、存活率、微血管密度比较，差异均有统计学意义（F＝47．523、48．425和47．619，P均＜0．05），且A、B、C组湿质量、存活率、微血管密度均高于D组（P均＜0．05）。结论：脂肪来源干细胞复合生物支架可加速软组织血管化，且效果优于单纯脂肪来源干细胞。
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大鼠绝经后骨质疏松脂肪来源干细胞成骨分化研究
目的 观察绝经后骨质疏松发生后脂肪来源干细胞(opASCs)成骨分化.方法 成年SD大鼠切除双侧卵巢,12周后建立绝经后骨质疏松动物模型(ovx组),同时设立假手术组动物模型(sham组)作为对照.取两组大鼠皮下脂肪组织分离获得脂肪来源干细胞(ovx组:opASCs;sham组:ASCs),进行体外成骨诱导培养.对其碱性磷酸酶(1周后)及细胞外基质矿化(2周后)程度进行定性及定量检测.同时通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察成骨特异性基因包括Ⅰ型胶原(COL)、骨钙蛋白(OC)、骨唾液蛋白(BSP)的相对表达水平.结果 双侧卵巢去势后12周,ovx组股骨骨密度系统性下降[骨密度(BMD):(0.152±0.005) g/cm2],显著低于sham组(P＜0.05),提示骨质疏松动物模型成功建立.opASCs成骨诱导7d后碱性磷酸酶呈高效表达(偶氮耦联法胞质紫红色),14 d后von Kossa染色呈黑色,提示胞外基质矿化.与ASCs比较,碱性磷酸酶[7 d:(0.156±0.021) nmol/(μg·min);14 d:(0.506 ±0.039) nmol/(μg· min)]及胞外基质矿化(7 d:23.525±3.325;14 d:61.456±2.634)差异无统计学意义(P＞0.05).而且opASCs展现出与ASCs类似的COL(1 d:0.014±0.001;7 d:0.225 ±0.015;14 d:0.387±0.004)、OC(1 d:0.015 ±0.002;7 d:0.276±0.009;14 d:0.542 ±0.014)、BSP(l d:0.018±0.001;7 d:0.365±0.012;14 d:0.645±0.014)表达水平(P＞0.05).结论 来源于绝经后骨质疏松动物模型的opASCs具有与健康动物来源ASCs类似的成骨分化潜能.
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人细胞外基质支架联合脂肪干细胞构建脂肪组织
目的 探讨人脂肪组织细胞外基质(ECM)支架联合人脂肪来源干细胞(ADSCs)构建工程化脂肪组织的可行性.方法 以酶消化法从人抽脂术抽吸物脂质部分获取人ADSCs,体外进行多向分化诱导鉴定,并行DiI荧光标记.从抽脂术的脂质部分分离提取人脂肪组织细胞外基质,经过低温冻干、粉碎、灭菌等处理,制备成粉末状,电镜扫描观察表面特征并将其与ADSCs进行黏附实验,探讨其作为支架材料的可行性.收集人ADSCs,以2×109/L的细胞密度与提取的细胞外基质支架复合后移植于裸鼠背部皮下,同鼠对侧背部皮下移植ECM支架和细胞培养液作为对照,每侧移植0.5 ml,共6只实验鼠.8周后取材,称量标本湿重.取出的标本行苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色进行定性判断,分析人脂肪组织ECM支架联合人ADSCs构建工程化脂肪组织的能力.结果 从脂肪组织中分离得到人ADSCs和ECM支架.ADSCs在相应的诱导环境下能够分化成为脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞.ECM支架电镜扫描和大体观察具有疏松、多孔的结构特征,适合ADSCs的黏附生长.ADSCs与支架相容性良好,黏附率达(89.87±2.59)％,细胞在支架表面可充分伸展生长.体内移植8周后,实验组和对照组都能够形成新生物,湿重比较实验组较对照组重(P＜0.05).经HE切片及油红O染色均证实实验组形成成熟的脂肪组织,对照组不能形成脂肪组织.结论 人脂肪组织ECM支架联合人ADSCs在体内能够成功构建成熟的脂肪组织,8周后支架并无明显吸收.
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脂肪干细胞向神经元诱导分化的研究
目的 研究脂肪干细胞向神经元分化的可行性,为神经系统疾病的替代治疗寻求行之有效的可种植细胞.方法 用β-2-巯基乙醇和丁酸酯羟基茴香醚诱导脂肪干细胞向神经元分化,对干预后细胞进行形态学观察和细胞免疫组化鉴定.结果 人类腹部脂肪来源的基质细胞进行原代和传代培养后细胞形态类似于成纤维细胞.经过诱导分化后细胞形态表现为典型的神经元形态,神经元特异性烯醇化酶鉴定绝大部分有阳性染色,但在不到一周的时间内死亡.结论 脂肪组织中存在能分化为神经元的干细胞,有巨大的研究价值和临床应用前景.
