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芝麻素对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重构的影响
目的:观察芝麻素(Ses)对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压(PH)大鼠肺血管重构的影响.方法:雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠48只适应性喂养1周,随机分为正常对照组、MCT组、Ses低、高剂量组(50,100 mg·kg-1),每组12只.MCT(60 mg·kg-1)皮下注射诱导PH大鼠模型.连续给药4周后,右颈外静脉插管测定大鼠右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(mPAP).分离大鼠右心室(RV)、左心室+室间隔(LV+S)并称重,剥离大鼠胫骨并测量其长度,计算RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值.HE染色观察肺小动脉病理学变化,Masson染色观察肺小动脉胶原沉积的变化.免疫组化检测肺动脉α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.比色法测定肺动脉总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量.Real-time PCR和Western blot检测肺动脉collagen Ⅰ,NOX2及NOX4 mRNA和蛋白表达.结果:Ses连续给药4周后能明显降低MCT诱导的PH大鼠RVSP及mPAP,减轻RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值,降低肺动脉α-SMA,collagen Ⅰ表达、减轻肺血管及右心室重构.同时,Ses还能明显抑制肺动脉NOX2及NOX4的表达,降低其MDA含量及提高T-AOC水平.结论:Ses能够缓解MCT诱导的PH大鼠肺血管重构,其机制可能与抑制NOX2及NOX4的表达、进而降低氧化应激损伤有关.
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硫氧还蛋白对血管内皮细胞 Nox2通路调控的研究
目的：探讨动脉粥样硬化发生发展中硫氧还蛋白（Trx）对 NADPH 氧化酶 Nox2亚型的调控作用及机制。方法应用腺病毒感染的方法，在原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立高表达硫氧还蛋白（Ad-Trx）及其对照（Ad-GFP）的细胞模型，将致动脉粥样硬化重要危险因子氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）作为刺激剂，应用免疫印迹法检测 Nox2、Rac1的表达及 Akt 的磷酸化；用免疫印记及免疫荧光的方法检验 Trx 在内皮细胞中的蛋白表达水平；DCFH-DA 法检测细胞内活性氧（ROS）水平；提取细胞膜组织，用酶学方法测定内皮细胞 NADPH 氧化酶的活性。结果免疫印记结果显示腺病毒感染在内皮细胞中成功上调了 Trx 的表达，与对照组相比上调了3.3倍（P＜0.01）。与对照组相比，过表达 Trx 明显下调了 ox-LDL 刺激下内皮细胞 Nox2、Rac1及 p-Akt 的表达（分别下调了31.5％、23.8％和20.8％，均为 P ＜0.05），抑制了 ox-LDL 诱导的 ROS 增加（25.3％，P ＝0.0247）及 NADPH 氧化酶活性增加（32.6％，P＝0.004）。结论过表达 Trx 通过减少 ox-LDL 刺激下内皮细胞 Nox2、Nox2结合蛋白 Rac1的表达及 Nox2下游信号分子 Akt 的磷酸化，抑制了内皮细胞 Nox2通路的过度活化及氧化应激，减轻炎症损伤，保护内皮细胞功能。
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PMA诱导Hela细胞ROS升高机制研究
目的 活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)升高是癌症转移的主要原因之一,ROS已成为一种新的抗癌靶点,但其形成机制尚未完全阐明.本研究以佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导Hela细胞ROS升高为模型,探讨Hela细胞ROS升高的相关机制.方法 500 ng/mL的PMA诱导Hela细胞0.5 h,荧光酶标仪检测Hela细胞经过PMA诱导后的ROS产量,蛋白质印迹法检测Hela细胞经过PMA诱导后的HIF-1α 、Rac2和NOX2蛋白的表达量.结果 500 ng/mL PMA诱导Hela细胞0.5、1、2和4 h,与空白对照组比较,P值分别为<0.001、0.055、0.125和0.135,表明0.5 h为PMA诱导Hela细胞ROS升高的佳诱导条件.500 ng/mL PMA诱导Hela细胞0.5 h后,诱导组中HIF-1α 、Rac2和NOX2蛋白条带灰度平均值分别为15833.33±63.13、20448.33±78.65和21840.33±123.91,均高于空白组的9853.33±124.13、9782.00±93.62和10638.33±106.57,均P<0.001,表明PMA诱导了HIF-1α 、Rac2和NOX2蛋白的高表达.荧光酶标仪检测Hela细胞ROS结果显示,echinomycin组 、NSC23766组和DPI组与PMA组比较,P值分别为<0.001、0.003和<0.001,表明HIF-1α 、Rac2和NOX2抑制剂均抑制了Hela细胞中PMA诱导的ROS升高.蛋白质印迹法检测结果显示,空白组HIF-1α 、Rac2和NOX2灰度平均值分别为13571.00±287.68、10495.67±253.72和17403.33±162.87,PMA组分别为22946.33±67.10、30578.67±251.11和30582.00±88.39,NSC23766组分别为22629.67±445.26、3919.00±41.68和22618.67±161.51,echinomycin组分别为16691.33±9.504、15424.00±315.05和14899.00±71.55,DPI组分别为22970.00±714.88、30120.33±555.05和5787.00±12.29.echinomycin组与PMA组比较,均P<0.001,表明echinomycin抑制了PMA诱导的HIF-1α 、Rac2和NOX2蛋白的高表达;NSC23766组与PMA组比较,P值分别为0.354、<0.001和<0.001,表明NSC23766抑制了PMA诱导的Rac2和NOX2蛋白的高表达,但没有抑制HIF-1α 蛋白的高表达;DPI组与PMA组比较,P值分别为0.944、0.117和<0.001,表明DPI抑制了PMA诱导的NOX2蛋白的高表达,但没有抑制HIF-1α 和Rac2蛋白的高表达.结论 PMA能引起Hela细胞ROS升高,该现象依赖HIF-1α/Rac2/NOX2途径.这可能为阐明与ROS升高相关的癌症转移分子机制 、干预癌症转移的靶向治疗分子研究提供思路.
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NADPH氧化酶NOX1、NOX2和DUOX2在溃疡性结肠炎中的表达分析
目的 探讨NADPH氧化酶家族(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases,NOXs)的主要成员NOX1、NOX2和双氧化物酶(dual oxidase,DUOX)2 (人:NOX1、NOX2和DUOX2;小鼠:Nox1、Nox2 和Duox2)在人炎症性肠病和小鼠肠炎模型结肠中的表达.方法 人结肠标本选自于通过结肠镜活检或手术切除的炎症性肠病组织及距离病变组织边缘5 cm以上正常组织;同时选用8~10周龄的C57BL/6雌性小鼠建立结肠炎模型,采用掷硬币法将其随机分为对照组和慢性肠炎组,慢性肠炎组先自由饮用1.0%(质量分数)葡聚糖硫酸钠7 d,然后自由饮水14 d,循环3次;通过体质量变化和HE染色方法评估肠道炎性反应程度.采用实时定量PCR技术和免疫组织化学方法分别检测结肠组织中NOX1、NOX2及DUOX2 mRNA和蛋白表达情况,并分析在人炎症性肠病中三者表达情况与临床特征之间的关系.结果 NOX1、NOX2和DUOX2 mRNA在人炎症性肠病结肠组织中的表达量均显著高于自身正常对照组织,分别增高2.8、2.0和3.3倍(P均<0.01);与人不同,Nox1和Duox2 mRNA在小鼠慢性肠炎结肠组织中的表达量差异无统计学意义,Nox2 mRNA增加2.4倍 (P<0.01).Nox1蛋白在正常结肠上皮细胞刷状缘和胞质中表达;Nox2蛋白主要表达于浸润的吞噬细胞和中性粒细胞;Duox2蛋白在正常结肠黏膜组织中低表达;三者在人炎症性肠病结肠组织中表达均上调(均P<0.01);在小鼠慢性肠炎模型中,Nox2和Duox2蛋白上调(均P<0.01),而Nox1无变化.除了NOX2 mRNA在男性病人表达高于女性病人外,未发现这些氧化酶与病人临床特征之间有关联.结论 NOX1、NOX2和DUOX2不但在维持机体正常生理功能过程中发挥重要作用,而且在炎症性肠病初期阶段的发病中也起一定的作用.
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心脑疏通胶囊对心肌缺血的影响及机制初探
目的 探讨心脑舒通胶囊对异丙肾上腺素介导的心肌缺血的保护作用与其抑制NADPH氧化酶Nox2和Nox4的关系.方法 观察心脑舒通胶囊(XNST capsule)对异丙肾上腺素诱导的心肌缺血大鼠心电图,血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、左心室NADPH氧化酶Nox2和Nox4表达水平的影响.结果 同对照组比较,异丙肾上腺素(ISO)诱导的模型组大鼠心电图ST位移值(0.27±0.05比0.01±0.00,P＜0.05)和N-ST(9.63±0.37比0.47±0.08,P＜0.05)显著增加,血清中LDH[(1356.0±292.8)U/L比(640.0±145.3)U/L,P＜0.05)]、CK[(978.0±223.5)U/L比(470.0±113.7)U/L,P＜0.05]和MDA[(9.06±2.17)μmol/L比(5.40±1.78)μmol/L,P＜0.05]的蛋白水平增高,而血清中SOD蛋白水平明显减少[(71.0±12.8)U/ml比(107.0±16.7)U/ml,P＜0.05].与ISO模型组比较,心脑舒通胶囊治疗显著降低大鼠心电图ST位移值[0.16±0.04(低剂量组)比0.27±0.05,P＜0.05;0.13±0.03(高剂量组)比0.27±0.05,P＜0.05]和N-ST[4.70±0.42(低剂量组)比9.63±0.37,P＜0.05;3.83±0.28(高剂量组)比9.63±0.37,P＜0.05]以及血清中LDH[(938.0±275.9)U/L(低剂量组)比(1356.0±292.8)U/L,P＜0.05;(889.0±125.6)U/L(高剂量组)比(1356.0±292.8)U/L]、CK[(607.0±137.2)U/L(低剂量组)比(978.0±223.5)U/L,P＜0.05;(579.0±125.6)U/L(高剂量组)比(978.0±223.5)U/L,P＜0.05]和MDA[(6.60±1.92) μmol/L(低剂量组)比(9.06±2.17)μmol/L,P＜0.05;(6.20±1.63) μmol/L(高剂量组)比(9.06±2.17)μmol/L,P＜0.05]的蛋白表达水平,而心脑舒通胶囊治疗后大鼠血清中SOD蛋白水平升高[(89.0±13.9)U/ml(低剂量组)比(71.0±12.8)U/ml,P＜0.05;(94.0±15.3)U/ml(高剂量组)比(71.0±12.8)U/ml,P＜0.05].此外,心脑舒通胶囊可显著降低异丙肾上腺素诱导的心肌缺血大鼠左心室中NADPH氧化酶Nox2和Nox4的表达水平.结论 心脑舒通胶囊可显著改善异丙肾上腺素诱导的心肌缺血,其机制与其抑制NADPH氧化酶Nox2和Nox4介导的氧化应激有关,为心脑舒通胶囊的临床应用提供了进一步的理论依据和实验基础.
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GLP-1Ra减少高糖诱导的β细胞凋亡作用机制探讨
目的：探讨胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂（GLP-1Ra）减少高糖诱导的β细胞凋亡作用的可能机制。方法正常对照（N，普通饲料喂养）组、2型糖尿病（T2DM）组和GLP-1 Ra组[利拉鲁肽200μg/（kg·d）]大鼠干预12周。比较各组大鼠造模前、造模后给药前（0周）及12周末血糖水平。高压液相色谱分析法测定糖化血红蛋白（HbA1c）；全自动生化分析仪测定天冬氨酸转氨酶（AST）、肌酐（CR）及尿素氮（BUN ）等；TUNEL染色观察胰岛细胞凋亡情况；免疫组化法测定cleaved caspase 3；DCFH-DA荧光探针检测胰岛活性氧簇（ROS）；免疫组织化学法检测NADPH氧化酶（NOX）催化亚基（NOX2）。结果12周时，GLP-1Ra组的血糖、HbA1c、总胆固醇（TC）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）水平均低于T2DM组（P＜0.05）；GLP-1Ra组胰岛细胞凋亡率和cleaved caspase 3水平较T2DM组下降（P＜0.05）；应用Apocynin抑制前，GLP-1Ra组胰岛ROS水平明显低于T2DM组，并与N组差异无统计学意义（P＞0.05），应用Apocynin抑制后，各组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。GLP-1Ra组胰岛NOX2水平较T2DM组下降（P＜0.05）。结论 GLP-1Ra能抑制糖尿病大鼠β细胞的凋亡，抑制NOX2来源的ROS产生可能是重要的潜在机制之一。
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脱氢异雄酮缓解急性肺损伤及其机制研究
目的 探讨脱氢异雄酮(DHEA)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠模型中气道上皮细胞(AECs)中G6PD活性、NOX2表达、活性氧(ROS)产生和酶抗氧化剂的影响.方法 选取32只SPF级Balb/c小鼠,随机分为4组:对照组、LPS组、DHEA+ LPS处理组、DHEA对照组.应用LPS诱导小鼠ALI模型.给药后进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中的中性粒细胞计数、蛋白总浓度检测和肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性检测.分析各组小鼠肺组织中谷胱甘肽还原酶活性、G6PD活性、GR活性和ROS.实时PCR分析SOD1、SOD2、GPx1基因表达,流式细胞仪检测SOD1和硝基酪氨酸表达.结果 ALI导致AECs中G6PD活性增加,同时伴随着NOX2、ROS、SOD1和硝基酪氨酸的升高,G6PD抑制剂DHEA可有效改善LPS诱导的气道炎症,降低支气管肺泡灌洗液蛋白质浓度及NOX2衍生的ROS和氧化应激.结论 G6PD的激活与ALI期间氧化炎症的增强有关.因此,在ALI期间抑制G6PD可能是一种有益的策略,以限制氧化损伤和改善气道炎症.
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白细胞介素-1β参与curdlan诱导的慢性肉芽肿性疾病高炎症反应的初步研究
目的 探讨curdlan诱导慢性肉芽肿性疾病(CGD)高炎症性反应的分子机制,初步探讨NOX2(NADPH oxidase2)缺失与高炎症反应之间的关系及可能机制.方法 β-葡聚糖(β-glucan)是CGD感染并发症的主要刺激物,以NOX2基因缺失的小鼠耳背注射curdlan(1,3-β-glucan,200μg/50 μL)/PBS 50 μL建立CGD高炎症反应动物模型,观察其炎症反应并分析炎症因子的表达变化.在注射后的第2、7天提取鼠耳蛋白检测其中炎症因子白细胞介素(IL)-1β(interleukin-1β)的表达变化.Western blot检测对照组及NOX2缺失组caspase-1的表达情况.体外实验中,用10、50、100、200 μg/mL curdlan处理从上述小鼠中分离培养的巨噬细胞,建立CGD细胞模型.在处理后第1、2天和第5天收取细胞上清用酶联免疫吸附试验(EHSA)检测相关的炎症因子IL-1β表达变化.结果 NOX2缺失的小鼠注射curclan后表现出高炎症性反应,与对照组相比,炎症因子IL-1β显著高表达(第2天:P=0.0189,第7天:P =0.0450);NOX2缺失小鼠caspase-1的活性形式caspase-1p10表达显著增加(第2天:P=0.3980,第7天:P =0.0001).在CGD细胞模型中,我们发现在注射后第5天与正常对照组相比,炎症因子IL-1β水平显著升高(P=0.0011),且局限于NOX2缺失的骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)中,其水平与curdlan浓度呈剂量依赖性.结论 Curdlan通过激活巨噬细胞中的caspase-1导致炎症因子IL-1β显著高表达,炎症因子IL-1β参与了NOX2缺失导致的慢性肉芽肿病高炎症性反应.
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tBHQ和SFN在创伤性脑损伤小鼠中的疗效比较性分析
目的:探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)和莱菔硫烷(SEN)在患有创伤性脑损伤大鼠的疗效差异性.方法:80只健康成年的雄性SD大鼠分为假手术组、常规损伤组、tBHQ治疗组和SFN治疗组,使用电子颅脑损伤仪(eCCI)制备TBI模型.其中tBHQ治疗组在伤前24 h大鼠腹腔注射三次tBHQ(50 mg/kg),每8h一次;SFN治疗组在伤后15 min给予腹腔注射SFN(5 mg/kg).给药24h后,采用mNSS方法评价各组大鼠神经功能缺损状况,利用干湿称量法计算脑含水量,Western blot和ELISA方法分别测定大鼠脑组织的NOX2和Nrf2的表达水平.结果:损伤发生后第24 h,tBHQ治疗组和SFN治疗组在mNSS评分((4.5±0.71)vs(9.2±0.79),(6.0± 0.82) vs (9.2± 0.79))、脑水肿(79.4％ vs 85.6％,80.3％ vs 85.6％)、NOX2和Nrf2(0.93 ng/mL vs 0.81 ng/mL,0.87 ng/mLvs 0.81 ng/mL)表达上与常规损伤组差异明显,而tBHQ治疗组和SFN治疗组间在mNSS评分((4.5±0.71)vs(6.0±0.82))、NOX2和Nrf2(0.93 ng/mL vs 0.87 ng/mL)表达上差异显著.结论:在大鼠TBI模型中,tBHQ和SFN均可以有效的降低机体自身的氧化应激作用,并改善神经功能,但tBHQ的疗效要好于SFN.
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NOX2、SOD与颈动脉粥样硬化斑块稳定性关系的研究
目的：通过测定颈动脉粥样硬化患者外周血NOX2和SOD的水平，探讨其与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法一共纳入颈动脉粥样硬化患者88例，并进一步分为稳定斑块组和不稳定斑块组；另纳入性别、年龄匹配的对照组45例，分别以ELESA法以及WST－1还原法分别测定各组的SOD和NOX2在外周血的水平。结果不稳定斑块组NOX2水平较稳定斑块组及正常对照组高，且具有统计学意义（P＜0．05），稳定斑块组NOX2水平较对照高，但无明显统计学意义。不稳定斑块组SOD低于稳定斑块组及对照组，且具有统计学意义（P＜0．05）。稳定斑块组SOD水平较对照组低，具有统计学意义（P＜0．05）。稳定斑块组SOD较正常组低，差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 NOX2与SOD在颈动脉粥样硬化的发生发展中起到了一定作用，调节二者水平的稳定有利于干预颈动脉粥样硬化的发生、发展。
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶与心房颤动的研究
心房颤动是常见的心律失常，其发生和维持的分子机制尚未明确。近年来发现心房颤动存在氧化应激，并已从动物实验、临床试验等多方面证实其主要来源为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶，推测NADPH 氧化酶可能在心房颤动发生发展过程中起重要作用。以NADPH 氧化酶为靶点的心房颤动干预措施如肾素-血管紧张素系统抑制剂和他汀类等也愈受关注。
关键词： 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 心房颤动 氧化应激 NOX2 -
辛伐他汀对内皮细胞NADPH氧化酶表达和活性氧生成的影响
目的 探讨辛伐他汀对内皮细胞NADPH氧化酶表达及活性氧生成的影响.方法 以不同浓度辛伐他汀和10-8 mol·L-1辛伐他汀不同处理时间培养内皮细胞,用RT-PCR检测NADPH氧化酶各亚单位(NOX4、NOX2、p67phox、p22phox、RAC)表达的变化;用流式细胞仪检测细胞内活性氧的浓度.结果 辛伐他汀能下调NOX4、p67phox、p22phox mRNA表达,同时下调细胞内活性氧浓度.结论 辛伐他汀可能通过下调NADPH氧化酶表达,以减少活性氧生成从而达到抗氧化损伤作用.
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地塞米松诱导PC12细胞氧化应激损伤及对NOX2表达的影响
目的 观察地塞米松(DEX)对大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)细胞氧化应激损伤及对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)表达的影响.方法 体外培养的PC12细胞随机分为正常对照组、H2O2(100 μmol/L)组、DEX(1、5、10 μmol/L)组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞存活率,双氢溴化乙啶(DHE)荧光染色法测定细胞内活性氧(ROS)水平.RT-PCR法检测NOX2、小G蛋白(Rac1)mRNA表达.Western blot法检测NOX2、p47phox的表达.结果 与正常对照组比较,DEX作用于PC12细胞24 h后,DEX(5、10 μmol/L)组细胞活力下降、ROS水平显著增高.进一步研究显示DEX(5、10 μmol/L)组可以上调NOX2和Rac1 mRNA的表达,可以增加NOX2、p47phox的表达.结论 DEX可以增加PC12细胞ROS的生成,诱导PC12细胞氧化应激损伤,其机制可能与增加NOX2表达有关.
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NADPH Oxidase2在胃癌组织中的表达及其与VEGF水平的相关性分析
目的:观察NADPH Oxidase2(NOX2)在胃癌组织中的表达及与VEGF水平的相关性.方法:2014～2015年,胃癌根治术的1 23例切除标本,采用免疫组织化学染色法(IHC)及Western blot检测NOX2在胃癌组织及对应的癌旁组织中的表达情况.观察癌组织中VEGF的表达情况,应用Sperman秩相关分析NOX2表达水平与VEGF水平的相关性.结果:胃癌组织中NOX2的阳性表达率为47.2％(58/123),癌旁组织中NOX2的阳性表达率为8.13％(10/123),且多为弱阳性表达(P＜0.05).NOX2胃癌组织中的表达较癌旁组织上调39.0％ (48/123).NOX2的表达与患者的性别、年龄、分化程度无关(P＞0.05),与VEGF呈正相关.结论:NOX2在胃癌的发生发展中起到重要的作用,其与VEGF的表达呈正相关.
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NADPH氧化酶NOX2和NOX3基因在胃癌组织中表达的探讨
目的：探讨NADPH氧化酶NOX2和NOX3基因在胃癌组织中的表达情况。方法收集在我院行胃癌根治术患者的胃癌及自身正常对照组织标本各15例，慢性胃炎患者胃镜下活检胃黏膜组织标本20例，采用实时定量PCR法检测NOX2和NOX3 mRNA的表达情况。结果 NOX2和NOX3 mRNA在胃癌组织中的表达量显著高于自身正常对照组织和慢性胃炎组织；NOX2 mRNA在胃癌自身正常对照组织与慢性胃炎胃黏膜组织中的表达无明显差异；NOX3 mRNA在后两者中的表达量均很少。结论 NADPH氧化酶NOX2和NOX3在胃癌的发生和发展过程中可能发挥重要作用。
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NOX2与中枢神经系统关系的研究进展
NOX2是NADPH氧化酶的一个亚型,通过质膜传递电子,产生活性氧,从而发挥着各种生理和病理作用.NOX2与神经细胞的发育、增殖、活化、凋亡等过程密切相关,在中枢神经系统中各种疾病的发生、发展中具有重要作用,通过抑制NOX2,减少活性氧,可有效防治神经系统疾病.本文对NOX2在神经系统中的生理及病理作用的研究进展进行了阐述.
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红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号途径保护H2O2诱导的PC12细胞凋亡
目的 探讨红景天苷保护H2O2诱导PC12细胞凋亡的分子机制.方法 PC12细胞置于含10％马血清、5％胎牛血清的高糖DMEM完全培养基中常规培养.不同浓度的红景天苷预处理细胞2h,然后H2O2作用细胞特定的时间,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白PARP,caspase 3的表达及胞内信号分子p38,ERK和JNK的磷酸化水平;DAPI染色检测细胞核的形态改变;ROS检测试剂盒检测胞内ROS的水平;膜质分离实验检测NOX2的两个重要亚基gp91phox和p47phox在胞膜和胞质中的含量;免疫共沉淀实验检测gp91phox和p47phox的结合.结果 红景天苷浓度依赖性的抑制H2O2诱PC12细胞凋亡;减弱H2O2诱导p38,JNK和ERK的磷酸化;减少H2O2诱发的ROS释放;抑制gp91phox和p47phox的结合,进而抑制NOX2的活性.结论 红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号通路保护H2O2诱导PC12细胞凋亡.
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miR-210 inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用
[目的]观察miR-210 inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用.[方法]体外培养大鼠背脊髓神经元细胞,随机分成正常组,H2O2组,H2O2联合miRNA Negative control组以及H2O2联合miR-210 inhibitor组.采用MTT法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧,Elisa检测NOX2.[结果]qPCR结果显示,100 μmol/L H2O2处理可导致大鼠背脊髓神经元细胞内miR-210表达量上升7.34倍;转染miR-210 inhibitor可明显抑制miR-210的表达量;MTT结果显示,抑制miR-210的表达可明显降低H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞存活率的抑制作用;流式细胞仪检测发现抑制miR-210的表达可以明显阻止H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞凋亡的诱导,显著降低凋亡率;进一步研究发现,转染miR-210 inhibitor可显著性降低H2O2诱导的细胞内NOX2和ROS的表达.[结论]H2O2刺激鼠脊髓神经元细胞导致细胞内miR-210表达的上调;降低miR-210的表达能够降低细胞内NOX2和ROS的表达,抑制NOX2/ROS通路从而减缓H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞造成的损伤,推测miR-210可以作为脊髓损伤治疗的靶点.
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急性脑梗死外周血中 NOX2、SOD 水平变化的临床意义
目的：探讨外周血 NOX2、SOD 水平与急性脑梗死的关系。方法收集98例急性脑梗死患者，采用 ELISA 法以及 WST-1还原法分别测定急性脑梗死患者患病后24 h、3 d、7 d、14 d 以及对照组 SOD、NOX2在外周血的水平，并与91例健康者进行比较。结果脑梗死组外周血 SOD 值表达于发病后24 h 内降低显著多于对照组(P <0.01)，至3~7 d 达到高峰(P <0.01)，然后在发病后14 d 逐渐升高，水平仍低于对照组，但差异无统计学意义(P >0.05)；脑梗死组 NOX2在发病后24 h 即明显升高(P <0.01)，至3~7 d 达到高值(P <0.01)，之后又缓慢下降，至发病后14 d 接近正常。进一步将脑梗死分为轻、中、重三组，发现发病7 d 时重度、中度脑梗死组 NOX2、SOD 的水平与轻度脑梗死组、对照组比较，差异均有统计学意义(P <0.05)。结论急性脑梗死患者外周血 NOX2与 SOD 水平存在着动态变化，与脑梗死的严重程度有关，其浓度水平对急性脑梗死的病情变化及治疗具有重要的价值。
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NADPH氧化酶亚基在心脏重构中作用的比较
早期研究证实,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(还原型辅酶Ⅱ,NADPH)氧化酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的心室重构中发挥重要作用,随着对NADPH氧化酶的深入研究,发现其共有5种亚基和两种相关的亚基,其中在心脏组织中表达的主要为Nox2与Nox4.Nox2在AngⅡ、心肌梗死及阿霉素介导的心室重构中具有重要的促进作用,而在压力负荷过大时引起的左心室肥大中Nox4 mRNA表达上调明显,由此可得出NADPH氧化酶亚基Nox2与Nox4在心室重构中的作用不同.因此,深入研究NADPH氧化酶亚基及其在心室重构中的作用,将成为改善心室重构新的治疗靶点.
