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肿瘤干细胞与肿瘤的侵袭转移
肿瘤细胞在转移靶器官组织中的分裂增殖,终导致器官功能障碍和衰竭的特性,使肿瘤转移成为肿瘤患者的重要死因.肿瘤转移是一个复杂的过程,受到多种因素的调控,是肿瘤细胞与其微环境相互作用的结果.
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肝癌中 Foxd3的表达及其临床意义
目的探讨肝癌组织中干细胞关键转录因子Foxd3的表达情况及其临床意义。方法采用组织芯片及免疫组织化学技术对31例肝癌组织和12例正常肝组织中 Foxd3的蛋白表达进行检测。结果可见Foxd3蛋白在肝癌组织中表达（93.5％，29/31），其表达概率要高于正常组织（P＜0.05），对Foxd3的表达量进行半定量分析，其在肝癌中的表达量明显高于正常组织（ P＜0.001）。结论肝癌组织中存在着具有干细胞性质的癌细胞，提示了肝癌干细胞存在的可能。
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CD133在未分化甲状腺癌肿瘤干细胞中的作用研究
目的 探讨CD133与未分化甲状腺癌肿瘤干细胞的联系,为新的治疗方向提供研究基础.方法 利用流式细胞技术分析未分化甲状腺癌ARO细胞株中的CD133阳性百分比,采用磁珠分离技术分离CD133阳性及CD133阴性亚群细胞,分别用RT-PCR技术检测OCT-4基因表达,并观察其肿瘤细胞球的形成.结果 CD133阳性细胞在未分化甲状腺癌ARO细胞株中占8.9％,CD133阳性细胞的OCT-4蛋白表达明显高于CD133阴性细胞(P＜0.05),且更容易形成肿瘤细胞球,提示CD133阳性细胞的体外增殖能力比CD133阴性细胞强,具有肿瘤干细胞的特性.结论 CD133阳性可能是未分化甲状腺癌的肿瘤干细胞标记物之一.
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从耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞系分离和鉴定肺癌干细胞的研究
目的 从耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞系中分离侧群细胞(SP)以观察其是否富含肺癌干细胞(CSCs)样细胞,以期为肺癌CSCs样细胞生物学研究和干预建立基础.方法 将A549/DDP细胞经过流式细胞术分选获得SP细胞并检测纯度,经过体外克隆形成试验检验其体外克隆形成能力.通过比较接种A549/DDP SP细胞和A549/DDP non-SP细胞的NOD/SCID鼠成瘤和肿瘤生长情况,观察其体内成瘤能力.结果 流式细胞分析发现A549/DDP细胞中存在10%~17%的SP细胞.分离获得的SP细胞纯度>95%(平均97%).SP细胞的体外克隆形成能力和non-SP细胞相比有统计学差异(克隆形成率的对数,即lgCFE:1.544±0.150 vs.0.301±0.082,P<0.05).接种A549/DDP SP细胞的NOD/SCID鼠的成瘤率较对照组存在明显差异.接种SP细胞的小鼠只需要5×103个SP细胞便足以成瘤,而接种non-SP细胞的小鼠却需要超过5×106个non-SP细胞才能在体内成瘤.A549/DDP SP成瘤能力是non-SP细胞成瘤能力的1000倍.结论 耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞系中分离的SP细胞比例高且富含肺癌CSCs样细胞,可以用于肺癌CSCs样细胞生物学和干预治疗的研究.
关键词： 肺肿瘤 肿瘤干细胞 SP细胞 耐顺铂肺腺癌细胞系A549/DDP -
乳腺癌干细胞的有效富集
目的 探讨MCF-7细胞、BT474细胞和MDA-MB-231细胞微球体形成的影响因素,并检测其CD44+ CD24-/low的表达比例,明确富集干细胞的方法,以获得稳定数量的干细胞.方法 将MCF-7、BT474和MDA-MB-231乳腺癌细胞进行微球体培养,取培养第7天的微球体细胞分别进行干细胞表型的FCM检测分析,判断干细胞富集的程度.结果 MCF-7、BT474和MDA-MB-231细胞形成微球体的效率分别为(2.40±0.20)%、(1.60±0.10)%和(0.60±0.05)%.在通常的干细胞培养液中MDA-MB-231细胞很难聚团生长.但是如果去除胰岛素,MDA-MB-231细胞则聚团生长.单层培养细胞中MCF-7、BT474和MDA-MB-231的CD44+ CD24-/low的比例为(1.00±0.20)%、(0.30±0.05)%和(37.00±1.80)%,微球体细胞中CD44+ CD24-/low的比例分别为(8.10±0.40)%、(0.60±0.20)%和(93.80±2.10)%,乳腺癌细胞巾表达CD44+ CD24-/low细胞表型的比例明显低于同种细胞培养的微球体(P<0.01).结论 通过微球体培养,富集了肿瘤干细胞,但是不同乳腺癌细胞来源的微球体中干细胞所占的比例差异很大,MDA-MB-231细胞高.
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血管内皮细胞对肝癌干细胞样细胞增殖及成瘤的影响
目的：探讨血管内皮细胞对肝癌干细胞样细胞增殖及成瘤的影响，并初步了解血管微环境对肝癌干细胞样细胞作用。方法用磁珠分选技术分选MHCC97H细胞株中的肝癌干细胞样细胞，将其分别接种到普通软琼脂和内皮细胞条件软琼脂中，观察集落形成情况；将其与血管内皮细胞混合细胞接种到裸鼠皮下，观察移植瘤形成情况。结果肝癌干细胞样细胞在普通培养基和内皮细胞条件培养基中集落形成率分别为：（14.25±2.94）% vs.（33.49±5.46）%，差异具有统计学意义（P＝0.036）。两组移植瘤的体积和重量分别为（1442.73±67.51）mm3 vs.（862.93±135.12）mm3；（1.45±0.15）g vs.（0.91±0.19）g，差异具有统计学意义（P＝0.008；P＝0.043）。结论血管内皮细胞是肿瘤干细胞血管微环境的重要组成部分，血管内皮细胞不仅在体外培养时能够促进肝癌干细胞样细胞的生长与增殖，而且在体内也能促进其移植瘤的生长。
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hTERT表达水平对乳腺癌干细胞体外生物学行为的影响
目的：观察人端粒酶反转录酶反义寡核苷酸（hTERT ASODN）对乳腺癌干细胞生物学行为的影响。方法合成针对人端粒酶反转录酶（hTERT）的反义寡核苷酸，以脂质体转染的方法将其转染入乳腺癌干细胞，设为 ASODN 组，以正义序列转染作为阴性对照组，并设未处理对照组。RT-PCR和Western blot分别检测各组hTERT基因和蛋白表达。应用CCK8法检测转染对乳腺癌干细胞增殖的影响，Transwell小室法检测干细胞侵袭、迁移能力。结果 RT-PCR和Western blot检测结果显示，ASODN组hTERT基因相对表达量为0.40±0.03，低于阴性对照组（0.81±0.05）和未处理对照组（0.79±0.04），F＝137.33，P＜0.001；hTERT基因蛋白相对表达量为0.39±0.06，低于阴性对照组（0.87±0.04）和未处理对照组（0.90±0.02），F＝59.29，P＜0.001。CCK8结果显示，乳腺癌干细胞培养12、24、36、48和60 h，ASODN组细胞增殖能力明显低于阴性对照组和未处理对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。Transwell侵袭实验，ASODN组穿越Transwell小室的细胞数为8.40±0.36，低于阴性对照组（15.64±0.13）和未处理对照组（14.31±1.12），F＝94.56，P＜0.001。Transwell迁移实验，ASODN组穿越Transwell小室的细胞数为30.6±8.03，低于阴性对照组（51.40±5.66）和未处理对照组（53.11±6.34），F＝20.11，P＝0.002。结论 hTERT ASODN可显著抑制乳腺癌干细胞体外增殖、侵袭和迁移能力。
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人骨肉瘤细胞系HOS肿瘤干细胞样细胞亚群的分离与鉴定
目的：探索无血清培养基培养人骨肉瘤细胞系 HOS 细胞，筛选并鉴定人骨肉瘤细胞系HOS中肿瘤干细胞相关亚群。方法通过无血清悬浮培养初步富集骨肉瘤细HOS肿瘤干细胞，观察其形成肿瘤干细胞球过程中的细胞形态，并在有血清培养基中诱导其分化。各种浓度化疗药物顺铂（CDDP）和阿霉素（DXR）分别处理HOS悬浮细胞球与HOS贴壁细胞，MTT法检测两种细胞对化疗药敏感性。Real-time PCR检测HOS悬浮细胞球与HOS贴壁细胞干细胞相关基因ABCG2、Bmi1、Nanog、Oct3/4、Sox10、STAT3表达情况。将HOS悬浮细胞球与HOS贴壁细胞分别接种于BALB/c裸鼠，观察成瘤情况。结果人骨肉瘤细胞系HOS细胞能够在无血清培养基中存活、增殖并形成肿瘤干细胞球。HOS悬浮细胞球对于化疗药物的敏感性较HOS贴壁细胞高。Real-time PCR结果显示 HOS 悬浮细胞球较 HOS 贴壁细胞高表达肿瘤干细胞相关基因 ABCG2、Bmi1、Nanog、Oct3/4、Sox10、STAT3。HOS悬浮细胞球体内成瘤能力较HOS贴壁细胞强。结论无血清悬浮培养可以初步富集人骨肉瘤细胞系HOS悬浮细胞球，且这些细胞具有肿瘤干细胞特性。
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CD133表达与肺癌患者临床病理特征相关性的Meta分析
目的：通过Meta分析的方法综合评价CD133与肺癌患者临床病理特征关系。方法计算机检索Pubmed、Embase和CNKI，纳入公开发表涉及CD133表达与肺癌临床病理特征的中英文文献，使用Stata 12.0统计学软件对符合条件的文献进行分析。结果共获取文献15篇（英文7篇、中文8篇），1102例患者。Meta分析结果CD133表达在临床分期Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ期之间无显著性差异（pooled OR＝0.782，95%CI＝0.435～1.406，P＝0.411）。CD133表达在腺癌与非腺癌之间无显著性差异（pooled OR＝0.97，95%CI＝0.71～1.33， P＝0.86）。CD133表达在肺癌低分化与高分化差异有统计学意义（pooled OR＝1.66，95%CI＝1.15～2.40， P＝0.006）；CD133表达在肺癌淋巴结转移与非淋巴结转移差异有统计学意义（pooled OR＝2.98，95%CI＝2.04～4.35，P＜0.001）。结论 CD133阳性与肺癌组织低分化相关，且发生淋巴结转移可能性高。
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CD44和EPCR mRNA在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨肿瘤干细胞标记物CD44和EPCR在乳腺癌组织中的相关性及其与乳腺癌临床病理特征的关系.方法 选取2015年1月至4月在北京大学深圳医院行乳腺癌切除术的46例女性患者,用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测非特殊型浸润性乳腺癌及其配对癌旁正常乳腺组织中CD44及EPCR的mRNA表达水平,分析其与临床病理特征的关系,并探讨两者的相关性.结果 (1)荧光定量RT-PCR结果显示CD44 mRNA在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常乳腺组织,差异具有统计学意义(t=2.486,P=0.017),在ER阳性乳腺癌明显低于ER阴性组、在正常乳腺样型的三阴型乳腺癌明显高于非正常乳腺样型的三阴型组,差异具有统计学意义(t=-2.332,P=0.024;t=-4.209,P<0.01),但与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无关(P>0.05);(2)EPCR mRNA在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常乳腺组织,差异具有统计学意义(t=4.028,P<0.01),与乳腺癌的肿瘤大小(t=2.998,P<0.01)、组织学分级(t=4.082,P<0.01)、淋巴结转移(t=2.152,P=0.037)、临床分期(t=-2.378,P=0.022)、ER(t=-5.585,P<0.01),PR(t=-3.896,P<0.01)及增殖指数Ki67(t=2.197,P=0.033)相关,差异具有统计学意义.但与患者的年龄及HER2无关(P>0.05),在三阴型(尤其是基底样型)乳腺癌及Luminal B型乳腺癌中的相对表达水平也明显高于非三阴型组及非Luminal B型组,差异具有统计学意义(t=9.163,P<0.01;t=3.653,P=0.003);(3)在乳腺癌中,CD44及EPCR mRNA的表达呈显著正相关(rs=0.540,P<0.01).结论 乳腺癌干细胞标志物CD44及EPCR在乳腺癌组织中均明显表达上调,2者具有正相关,但EPCR与更多的临床病理特征相关,提示EPCR可更好地预测乳腺癌的淋巴结转移及较高临床分期等不良预后,并推测CD44及EPCR可能所标记为2种不同表型的乳腺癌干细胞.
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转化生长因子β1诱导胰腺癌细胞获得肿瘤干细胞功能的研究
目的：探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对胰腺癌细胞系肿瘤干细胞标记物CD133表达的影响。方法将三种胰腺癌细胞系（AsPc-1、Panc-1和SW1990）分别分成对照组及实验组，三种细胞系中对照组予以10μl CD133抗体及90μl磷酸盐缓冲液（PBS）标记液，实验组予以10μg/L TGF-β1及90μl PBS标记液。运用流式细胞计数（FACS）评估TGF-β1对Panc-1、AsPc-1和SW1990中CD133表达的影响；同时，采用磁性活化细胞分选技术（MACS）筛选出三种细胞系CD133阴性细胞，分成Blank组、T组及T+I组，T+I组同时加入10μg/L浓度的TGF-β1以及10μmol/L TGF-β1抑制剂，Blank组仅添加等量的PBS溶液，T组中加入10μg/LTGF-β1及与抑制剂等量的PBS溶液。采用FACS评估TGF-β1及其特异性抑制剂对胰腺癌CD133阴性细胞的影响。结果 AsPc-1[（1.63±0.21）% vs.（0.63±0.12）%，t=7.276，P=0.002]、Panc-1[（3.48±1.26）% vs.（0.66±0.22）%，t=4.924，P=0.001]和SW1990[（3.83±0.71）% vs.（0.90±0.44）%，t=6.102，P=0.004]细胞系中实验组CD133阳性率显著高于对照组。同时，由MACS分选后的CD133阴性细胞中，AsPc-1[（1.70±0.66）%、（0.50±0.00）%、（0.64±0.21）%]、Panc-1[（1.45±0.53）%、（0.50±0.00）%、（0.42±0.17）%]和SW1990[（1.68±1.26）%、（0.50±0.00）%、（0.62±0.11）%]中T组CD133阳性率均显著高于Blank组及T+I组（P均＜0.05）。结论 TGF-β1可以使胰腺癌细胞获得肿瘤干细胞能力，并且该现象可以被TGF-β1抑制剂所阻断。
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流式细胞术在肿瘤诊断中的应用
肿瘤疾病的早期往往缺乏客观明确的诊断指标,给治疗工作带来很大困扰.如何在癌变的早期发现一些有价值的标志物或者特征性变化,是医学专家们亟需解决的重点难题.随着流式细胞术(FCM)的不断进步,FCM在肿瘤的癌前病变筛查、早期癌变的检出、化疗指导以及预后评估等各个方面发挥着越来越重要的作用.在个体化医疗及精准医疗的时代背景下,FCM在肿瘤标志物的检测、肿瘤干细胞(CSCs)分离筛选、循环肿瘤细胞(CTCs)的分离鉴定等方面的应用尤其值得期待.
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上皮细胞粘附分子在肝动脉化疗栓塞治疗肝癌中的表达改变及其功能
目的明确肝动脉化疗栓塞（transcatheterhepaticarterialchemoembolization,TACE）治疗对肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）肿瘤组织中肿瘤干细胞指示分子——上皮细胞粘附分子（epithelialcelladhesionmolecule,EpCAM）表达及肝癌干细胞生物学行为的影响。方法用实时PCR分别检测30例经TACE治疗和30例未经TACE治疗的HCC患者肿瘤组织中EpCAM的表达水平。在此基础上，用EpCAM的siRNA载体，在HCC细胞系HepG2和高侵袭性的MHCC-97H中检测EpCAM对抗肿瘤药物作用的影响；在MHCC-97H细胞系中，检测降低EpCAM表达对MHCC-97H侵袭作用的影响。结果接受TACE治疗的HCC患者肿瘤组织中的EpCAM表达水平升高（P＜0.05）。与对照组相比，在HepG2细胞中转染EpCAM的siRNA能够显著上调HepG2细胞对分子靶向抗肿瘤药物索拉非尼以及细胞毒性化疗药物奥沙利铂和表柔比星的敏感性。在MHCC-97H中转染EpCAM的siRNA能够显著抑制其侵袭作用。结论 TACE治疗可引起HCC组织中EpCAM的表达水平明显升高；降低HCC细胞中EpCAM表达水平，可导致HCC细胞的肿瘤干细胞特征如侵袭性显著下降，对抗肿瘤药物的敏感性升高。
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USP22和Nanog在结肠癌组织中的表达及临床意义
目的:研究USP22和Nanog在结肠癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系.方法:采用免疫组织化学法检测USP22和Nanog在80例结肠癌组织,35例结肠腺瘤组织及40例癌旁正常结肠组织中的表达.结果:USP22在结肠癌中的阳性表达率明显高于结肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织(P＜0.05),但结肠腺瘤和癌旁正常组织的阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05),Nanog在癌旁正常组织,结肠腺瘤和结肠腺癌中的阳性表达率差异均有统计学意义(P＜0.05).USP22和Nanog的表达与Dukes分期,组织学分级,淋巴结转移以及浸润深度均有关(P＜0.05); USP22和Nanog 在结肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.509,P＜0.01).结论:USP22和Nanog的表达与结肠癌的发生发展有关,二者在结肠癌的细胞增殖、浸润和转移中有协同作用.他们有望成为结肠癌的早期诊断指标和治疗靶点.
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Wee1抑制剂MK-1775对GBC-SD细胞系胆囊癌干细胞样细胞自我更新的影响
目的 研究Weel抑制剂MK-1775对GBC-SD细胞系胆囊癌干细胞样细胞自我更新的抑制作用.方法 体外培养GBC-SD细胞系,在无血清干细胞培养基中加入MK-1775后培养悬浮肿瘤干细胞球;Western-blot检测Weel的表达,并分析比较肿瘤干细胞球体积大小和形成率的变化;建立裸鼠皮下移植瘤模型后MK-17751灌胃2 wk,2 wk后检测分析移植瘤的重量.结果 加入MK-1775培养8 d后,GBC-SD细胞中Weel表达下调,同时肿瘤干细胞球大小及形成率均受到抑制;经MK-17751处理后,裸鼠皮下移植瘤生长受到抑制.结论 MK-1775具有抑制GBC-SD细胞系胆囊癌干细胞样细胞自我更新的作用.
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阿司匹林对HT-29、SW480结肠癌细胞株CD133表达的影响
目的:观察阿司匹林对人结肠癌肿瘤于细胞标志物CD133表达的影响,探讨其对结肠癌干细胞的作用.方法:流式细胞仪检测结肠癌细胞株HT-29和SW480在不同浓度阿司匹林(0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)作用下CD133的表达变化.结果:流式细胞仪检测结果显示CD133+细胞在HT-29细胞株中的比例为88.37％±1.00％,在SW480细胞系中的比例为65.22％±1.50％.用阿司匹林干预后,随着阿司匹林浓度的增加,CD133在结肠癌细胞系HT-29和SW480中的表达呈下降趋势,差异有统计学意义(45.41±1.09,55.31±1.07 vs 73.45±1.04; 28.28±0.30,42.27±0.78 vs 58.96±0.09,均P＜0.05).结论:阿司匹林能抑制结肠癌细胞株HT-29和SW480中CD 133的表达,呈剂量依赖性.
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罗丹明123分离肝癌细胞系HepG2异质性亚群的鉴定
目的:建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法,并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.方法:利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料,分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群,再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,以比较不同肝癌细胞亚群的差异.结果:根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HepG2细胞分为Rholow和Rhohigh2个亚群,2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50%vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P＜0.01),Rholow亚群是具有干细胞特性的.结论:Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rholow亚群,同时进一步证实肝癌的异质性.
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大肠癌细胞系Lovo中亚群(SP)细胞的分离培养和鉴定
目的:应用无血清培养液(SFM)培养Lovo细胞系,克隆分离具有干细胞样特性SP细胞.方法:应用SFM培养Lovo细胞,分离成球样生长的细胞群作为SP细胞,并通过有限稀释,分化,自我更新,含血清培养基(SSM)和SFM交替培养及Musashi-1化学染色方法来鉴定SP细胞.结果:Lovo细胞中约含有0.54%-0.62%的SP能够在无血清培养基中能够存活、增殖,形成悬浮的肿瘤细胞球;在SFM中加入血清可促使SP细胞分化;SP细胞可以连续传代,并可交替培养于SSM和SFM中,细胞形态无明显变化;SP细胞Musashi-1染色阳性.结论:应用SFM可从Lovo细胞中分离出极少量的具有干细胞特性的SP细胞.
关键词： Lovo大肠癌细胞系 细胞亚群 肿瘤干细胞 悬浮培养 无血清培养基 -
5-Fu对低氧下胃癌SGC7901细胞系中SP细胞比例及HIF-2α、ABCG2表达的影响
目的:探讨低氧下5-Fu化疗抵抗的机制.方法:MTT检测常氧和低氧下的细胞活力,并计算5-Fu的半数抑制浓度(IC50).以IC50的5-Fu分别作用细胞常氧和低氧组细胞24、48和72h后,收集标本,Hoechst33342染色法检测侧群(side population,SP)细胞的比例,免疫细胞化学法检测低氧诱导因子(hypoxiainducible factor-2α,HIF-2α),荧光免疫细胞化学法检测ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2)的表达.结果:常氧和低氧下,5-Fu均呈时间、剂量依赖性地抑制SGC7901细胞增殖,其IC50分别为100、200 mg/L.常氧下SP细胞的比例为1.87％,低氧诱导后其比例逐渐增加.常氧下5-Fu-IC50作用于细胞不用时间后,SP细胞的比例无明显变化,低氧下其比例却逐渐增加.常氧下,HIF-2α和ABCG2蛋白呈低水平表达,且5-Fu-IC50作用于不同时间后也无明显变化,低氧下5-Fu-IC50作用于不同时间后二者的表达逐渐增加.结论:低氧下5-Fu对胃癌SGC7901细胞存在化疗抵抗可能与低氧通过诱导HIF-2α-ABCG2通路的表达、促进肿瘤细胞的干细胞化有关,这可能是肿瘤化疗抵抗和复发的根源.
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肠干细胞与结直肠肿瘤干细胞研究进展
干细胞(stem cell,SC)是一群结构和功能未特化的原始细胞,具有长期自我更新潜能和产生至少一种终末分化细胞的能力.而肠干细胞是位于小肠隐窝下部潘氏细胞上方及结直肠隐窝的底部的成体干细胞,具有增殖和自我维持、能产生许多子代细胞并能在受损伤后再生的特性.近年较多的文献报道结直肠癌组织中存在肿瘤干细胞,而这些具有干细胞特性的瘤细胞可能来自突变的肠干细胞,本文就肠干细胞和结直肠癌肿瘤干细胞的研究进展作一综述.
