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川芎嗪对高转移性人肺巨细胞癌PG-BE1干细胞样细胞黏附能力的影响
目的 研究川芎嗪对高转移性人肺巨细胞癌PG-BE1于细胞样细胞黏附能力的影响及可能作用机制.方法 采用无血清成球培养法分选PG-BE1细胞中的干细胞样细胞,并检测其表面OCT-4、SOX-2、Nanog蛋白表达及平板克隆形成实验进行验证.再采用人造基底膜黏附实验比较PG-BE1干细胞样细胞在不同环境(常氧和低氧环境)与其原代细胞黏附能力的差异,同时观察不同浓度川芎嗪(终浓度分别为100、300、500 μg/ml)及顺铂(2μg/ml)干预后各组干细胞样细胞的黏附能力,以及干预后备组干细胞样细胞表面黏附分子β整合素、CD44V6的表达量.结果 与原代细胞相比,PG-BE1干细胞样细胞克隆灶形成能力更强,干细胞样细胞表面的SOX-2、OCT-4及Nanog蛋白的表达相对光密度更强(P＜0.05或P＜0.01).常氧干细胞样细胞和低氧干细胞样细胞黏附能力均明显高于原代细胞(P ＜0.05或JP＜0.01),川芎嗪中、高剂量组及顺铂组干细胞样细胞黏附能力低于对照组(P＜0.01),川芎嗪高剂量组细胞黏附抑制率高达42.2％.常氧干细胞样细胞和低氧干细胞样细胞β整合素、CD44V6表达量均高于原代细胞(P＜0.01),川芎嗪低、中、高剂量组及顺铂组β整合素表达均较对照组下调(P＜0.01),川芎嗪高剂量组CD44V6表达较对照组亦明显降低(P＜0.01).结论 PG-BE1干细胞样细胞对基底膜的黏附能力强于其原代细胞,川芎嗪可抑制其黏附能力,其机制可能与抑制细胞表面β整合素、CD44V6蛋白的表达有关.
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中医药对肺癌干细胞干预作用的研究概况
肿瘤干细胞是指肿瘤组织内存在一群数目极少、但具有无限增殖和自我更新潜能的细胞群体,是形成不同分化程度肿瘤细胞和驱使肿瘤不断增大并转移的源泉.肺癌干细胞能不断自我更新并在特定条件下分化为新的肿瘤细胞.基于对肺癌干细胞研究的不断深入,认为肺癌的复发、转移、对放射线和药物的耐受等特征都与肺癌干细胞有关.中医药具有多靶点的特点,其对于肺癌干细胞的干预作用也逐渐显现.
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肿瘤干细胞标志物LGR5及ALDH1在卵巢癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨肿瘤干细胞标志物含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(1eucine-rich repeat-containing G protein coupled receptor 5,Lgr5)及乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydro-genase 1,ALDH1)在卵巢癌中的表达与临床意义.方法 选取2006年5月至2010年1月住院并接受手术治疗的卵巢癌患者140例,选取同期本院因卵巢良性病变行肿物剥除或附件切除的40例患者作为对照,应用免疫组化(S-P)方法检测140例卵巢癌组织(卵巢癌组)、140例卵巢癌癌旁组织(癌旁组)、正常卵巢组织40例(正常组)中的Lgr5及ALDH1蛋白表达,分析其与卵巢癌患者临床病理指标的关系.结果 (1)Lgr5在正常卵巢组织、癌旁组织和卵巢癌中的阳性率(5.0% vs 18.3% vs 95.7%)差异具有统计学意义(P=0.001);ALDH1在正常卵巢组织、癌旁组织和卵巢癌中的阳性率(7.5% vs 15.7% vs 90.0%)差异具有统计学意义(P<0.05).(2)Lgr5表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05).ALDH1表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05).(3)Lgr5及ALDH1存在正相关性(r=0.3,P<0.05).(4)Lgr5高表达者(+++)和低表达者(+)~(++)5年总生存率分别为51.2%和29.2%(HR=11.637,95%CI:4.351~38.213;P=0.002);ALDH1高表达者(+++)和低表达者(+)~(++)5年总生存率分别为41.3%和35.3%(HR=10.143,95%CI:4.285~33.275;P=0.006)..多因素Cox回归分析显示,Lgr5蛋白(+++)表达(P=0.002)、ALDH1蛋白(+++)表达(P=0.006)、分化程度(P=0.036)、浸润深度(P=0.001)和远处转移(P=0.002)是影响胃癌患者预后的独立因素.结论 Lgr5及ALDH1的增强表达与卵巢癌侵袭性增强有密切关系,其表达可作为判断卵巢癌患者预后的指标.
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CD44及Lgr5在卵巢癌组织中的表达及其与预后的相关性分析
目的 探讨含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(1 eucine-rich repeat-containing G protein coupled receptor 5,Lgr5)及CD44在卵巢癌中的表达及其与预后的关系.方法 选取2006年5月至2010年1月住院并接受手术治疗的卵巢癌患者140例,选取同期本院因卵巢良性病变行肿物剥除或附件切除的40例患者作为对照,应用免疫组化(S-P)方法检测140例卵巢癌组织(卵巢癌组)、140例卵巢癌癌旁组织(癌旁组)、正常卵巢组织40例(正常组)中的Lgr5及CD44蛋白表达,分析其与卵巢癌患者临床病理指标的关系.结果 ①Lgr5在正常卵巢组织、癌旁组织和卵巢癌中的阳性率分别为5.0％、18.3％和95.7％,差异具有统计学意义(F=24.581,P=0.001);CD44在正常卵巢组织、癌旁组织和卵巢癌中的阳性率分别为7.5％、15.7％和90.0％,差异具有统计学意义(P＜0.05).②Lgr5表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05).CD44表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05).③Lgr5及CD44存在正相关性(r=0.3,P＜0.05).④Lgr5高表达者(+++)和低表达者(+)～(++)5年总生存率分别为29.2％和51.2％(HR=11.637,95％ CI:4.351 ～ 18.439;P=0.002);CD44高表达者(+++)和低表达者(+)～(++)5年总生存率分别为35.3％和41.3％(HR=10.142,95％ CI:4.285～ 17.013;P=0.006).结论 Lgr5及CD44的增强表达与卵巢癌侵袭性增强有密切关系,其表达可作为判断卵巢癌患者预后的指标.
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miR-489通过调控TWIST1的表达抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换
目的 探讨miR-489在结肠癌干细胞表型和上皮间质转换中的作用和调控机制.方法 RT-qPCR检测多个人结肠癌细胞系(HT29、SW480、SW620和HCT116)和正常肠道上皮细胞HIEC中miR-489表达;采用基因转染技术提高结肠癌细胞中miR-489表达,Western blot检测过表达miR-489对结肠癌干细胞标志物CD133、CD44、EpCAM、ALDH1和上皮细胞标志物E-cadherin、间质细胞标志物vimentin和N-cadherin的表达;RT-qPCR和Western blot检测TWIST1 mRNA和蛋白表达水平.结果 4个结肠癌细胞系中的miR-489相对表达量显著低于正常肠道上皮细胞HIEC中的表达(P<0.05).在HT29和HCT116细胞中过表达miR-489,4个结肠癌干细胞标志物表达降低(P<0.05);上皮细胞标志物表达增加(P<0.05);间质细胞标志物表达减少(P<0.05).TWIST1是miR-489潜在靶基因,在2个细胞系中过表达miR-489,TWIST1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论 miR-489在结肠癌细胞中低表达,过表达miR-489可能通过调控TWIST1抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换.
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肿瘤pH微环境通过激活β-catenin/TCF4增强人乳腺癌肿瘤细胞的干性
目的 探讨酸性微环境对于乳腺癌肿瘤干细胞干性的影响及其作用机制.方法 分别在pH 6.8和7.4的环境下,培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231.用流式细胞术、PCR、Western blot、体外成球实验和细胞划痕实验分别检测肿瘤干细胞ALDHhigh细胞亚群的比率,干性基因SOX2、OCT4和Lin28b的表达,成球能力和肿瘤细胞迁移能力,同时检测相关信号通路的激活.结果 酸性微环境通过激活β-catenin/TCF4信号通路提高MDA-MB-231的ALDHhigh细胞亚群的比例(P＜0.05),上调干性相关基因的表达(P＜0.01),增强体外成球能力(P＜0.01)和迁移能力(P＜0.05).结论 酸性微环境能够上调干细胞比例,维持肿瘤干细胞干性特征,增加乳腺癌肿瘤细胞迁移能力.
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LIN28B调控miRNAs维持MCF-7肿瘤干细胞的干性特征
目的 研究LIN28B对人乳腺癌细胞(MCF-7)肿瘤干细胞的干性状态维持的作用机制.方法 在MCF-7细胞中瞬时过表达LIN28B,用qPCR和Western blot检测干性相关基因SOX2、NAONG、c-Myc和OCT4的表达;用流式细胞仪检测CD44high/CD24low细胞亚群的比例;利用体外成球培养检测肿瘤干细胞自我更新的能力,通过RNA第二代测序技术检测在LIN28B过表达后MCF-7细胞中miRNAs的表达差异,通过转染差异表达的miRNA,检测其对MCF-7细胞肿瘤干细胞比例和体外成球能力的影响.结果 转染p-CMV6-LIN28B后能明显提高LIN28B的mRNA和蛋白水平(P＜0.001);过表达LIN28B后MCF-7细胞中SOX2、NANOG和OCT4在RNA和蛋白水平表达都明显增高(P ＜0.05);CD44high/CD24low细胞比例由1.71％上升至11.60％ (P ＜0.05);体外成球培养发现成球细胞数量明显增多(P＜0.01);通过RNA测序发现有16个miRNAs在LIN28B过表达后差异表达倍数在2倍以上且P＜0.05,LIN28B过表达后miR-92b-5p表达显著上调(P＜0.01);转染miR-92b-5p mimic后MCF-7细胞的CD44high/CD24low细胞比例由1.14％上升至3.59％ (P ＜0.05),体外成球能力明显增强(P＜0.01).结论 LIN28B能维持MCF-7肿瘤干细胞的干性状态,其作用机制可能是通过miRNAs的表达来实现的.
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人膀胱癌EJ细胞EZH2基因表达降低后基因表达谱的差异分析
目的 利用基因芯片技术筛选膀胱癌EJ细胞EZH2基因RNA干扰后的差异表达基因,探讨EZH2基因在肿瘤中的作用机制.方法 构建EZH2基因的shRNA表达载体,转染膀胱癌EJ细胞,基因芯片筛选差异表达基因并上传passway miner服务器(http://www.biorag.org./passway.htm)进行功能分类.结果 差异表达基因436条,下调179条,上调257条,功能聚类分析显示115个差异表达基因定位于已知的生物通路中,有EGF信号传导通路、P53传导通路、细胞增殖、细胞周期通路、Notch、Wnt通路等.EZH2靶基因WNT1、MYT1、CNR1、WT1表达上调,部分通路及基因与肿瘤干细胞和细胞分化有关.结论 EZH2基因通过多个基因介导参与细胞分化,对EZH2相关基凶的研究有助于明确EZH2在细胞癌变过程中的作用机制.
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小鼠Lewis肺癌细胞非对称分裂细胞系的建立及其干性特征
目的 从小鼠Lewis肺癌细胞中分离建立非对称分裂细胞系,并初步鉴定其干性特征,为研究非对称分裂在癌症生物学中的作用奠定基础.方法 通过8次连续悬浮聚球,随后5次单细胞克隆的方法,从小鼠Lewis肺癌细胞亲代细胞(LLC-parental cells)中得到非对称分裂细胞系(LLC-ASD cells);通过Brdu标记的免疫荧光实验检测LLC-ASD cells中细胞非对称分裂;进行RT-qPCR、克隆斑成斑实验、单细胞琼脂球形成实验、单细胞克隆形成实验对比两细胞系干性特征;并通过同种小鼠肺部移植成瘤实验和裸鼠皮下成瘤实验分别对比两种细胞系体内转移和成瘤能力.结果 LLC-ASD cells的非对称分裂比例达50%.LLC-ASD cells的克隆斑、悬浮球形成数量和单细胞克隆形成率均分别高于LLC-parental cells(P<0.05),LLC-ASD cells原位种植转移能力较LLC-parental cells明显增强, LLC-ASD cells的裸鼠皮下接种致瘤能力也高于LLC-parental cells(P<0.05).结论 成功建立了小鼠Lewis肺癌细胞非对称分裂细胞系(LLC-ASD cells),并且它表现出了一定干性特征,为研究非对称分裂在肿瘤中的作用奠定了基础.
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肿瘤干细胞在肿瘤转移中作用与相关机制的研究进展
目前国内外对肿瘤转移的机制已进行了系统而深入的探索.随着肿瘤干细胞概念的提出和相关领域的深入研究,肿瘤干细胞作为肿瘤转移的佳候选细胞的观点正逐渐被人们接受.目前和肿瘤转移过程相关的分子细胞机制包括:上皮间质转变(EMT)、肿瘤微环境及血管生成机制等.近年来许多研究成果显示上述机制在肿瘤干细胞转移过程中起到不可低估的作用.本文就肿瘤干细胞转移相关机制的进展做一简要综述.
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肿瘤干细胞的研究进展
目前肿瘤干细胞的研究已经成为研究的热点,很多实验证实它的存在,并从实体瘤中成功地分离出肿瘤干细胞.随着肿瘤干细胞起源研究的不断深入,对肿瘤发生、发展过程的认识提高到了一个新的水平,将对肿瘤的诊断和治疗以及预后判断产生深远影响,为肿瘤患者带来希望.
关键词： 肿瘤干细胞 -
肿瘤干细胞与肿瘤耐药
肿瘤细胞对化疗药物耐药是肿瘤治疗的主要障碍,肿瘤干细胞(CSC)是造成肿瘤耐药的根本原因,故肿瘤治疗的关键应以CSC为治疗靶点.CSC概念的提出为癌症靶向治疗的研究带来了新的思路,提供了选择性杀伤CSC的靶向分子疗法,即新的药物应有选择的杀伤CSC而不损伤正常的干细胞,克服肿瘤耐药、防止治疗后的复发与转移,达到真正的治愈肿瘤.
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microRNAs与肿瘤及肿瘤干细胞的研究进展
近年来大量研究发现microRNAs在多种肿瘤中异常表达,并且与肿瘤发生、演化与进展密切相关.microRNAs与肿瘤干细胞的功能相关性得到了进一步揭示,为认识肿瘤发生机制提供了重要依据.而microRNAs在肿瘤诊断和治疗方面的研究更是推动了其从基础研究向临床应用的转化.
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肿瘤干细胞作为胰腺癌治疗潜在靶点的研究进展
胰腺导管腺癌是具侵袭性的肿瘤之一,对目前的治疗反应差和生存率低为其特点.近肿瘤干细胞(CsC)在肿瘤生成中作用的研究进展使人们认识到CSC可作为新的治疗靶点.CSC是肿瘤细胞中一类明确的亚群,具有分化为其他细胞类型和为了保持肿瘤扩增而自我更新的能力.通过回顾CSC的生物标记和主要路径,似应找到以CSC为靶点的新的治疗方向.
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靶向肿瘤干细胞的免疫疗法
由于肿瘤干细胞(TSCs)与肿瘤的发生、发展、转移、复发和耐药等有着密切关系,是肿瘤的根源细胞,意味着治愈肿瘤的关键途径可能在 于根除TSCs.因传统的手术、化疗和放疗等对肿瘤治疗的方法无法杀死TSCs,容易导致肿瘤转移和复发,而靶向TSCs的免疫疗法已确定能杀伤TSCs, 如靶向TSCs的表面抗原、T细胞靶向 TSCs的应用和分化疗法等.
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肿瘤干细胞与骨肉瘤
肿瘤干细胞是存在于恶性肿瘤细胞中为数极少却具有无限增殖并能自我更新的肿瘤细胞.研究证实急性髓系白血病中CD34+CD38-Thy-的白血病细胞即为白血病干细胞,Wnt旁路的异常在白血病的形成中发生着重要作用.已证实实体瘤(乳腺癌、脑肿瘤、前列腺癌及鳞状上皮细胞癌)中存在具有干细胞特性的肿瘤细胞.而骨肉瘤当中存在可能起源于间充质干细胞的肿瘤干细胞.本文即重点描述肿瘤干细胞的研究新进展,及其对骨肉瘤治疗方面的意义.
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卵巢癌肿瘤干细胞研究进展
肿瘤干细胞(TSC)是指肿瘤组织中极少数具有干细胞特性的细胞,它们具有自我更新及分化潜能,是肿瘤形成、生长和转移的基础.目前肿瘤干细胞的研究受到越来越多的关注,并在多种组织和器官的肿瘤中证实了肿瘤干细胞的存在.本文对卵巢癌肿瘤干细胞的研究现状进行了综述,提出寻找新的卵巢癌干细胞分离及鉴定方法是目前卵巢癌干细胞研究的主要任务,有效的卵巢癌细胞原代培养方法可能是实现分离及鉴定卵巢癌干细胞及其靶向治疗的关键.
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肿瘤干细胞与肿瘤靶向治疗
肿瘤干细胞(TSC)理论认为,肿瘤内部存在的一小部分具有干细胞特性的细胞,是肿瘤形成、生长、转移和复发的根源,只有靶向肿瘤干细胞的治疗才能使恶性肿瘤治愈.目前肿瘤的治疗只能杀死大部分已分化的肿瘤细胞,不能杀死肿瘤干细胞,造成了肿瘤治疗效果的不理想.扰乱维持肿瘤干细胞自我更新的信号通路和微环境;或诱导肿瘤干细胞的分化;或针对肿瘤干细胞所表达的区别于正常干细胞的表面标志的靶向治疗都是可行的策略.
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间质干细胞、肿瘤干细胞和肿瘤
近来研究认为肿瘤来源于干细胞,提出了肿瘤中存在极少量肿瘤干细胞(CSC)的新学说.问质干细胞(MSC)作为间质细胞的来源,与肿瘤的关系尤为密切.本文就间质干细胞,肿瘤干细胞和肿瘤的发生,发展作一综述.
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血液系统肿瘤细胞系中CD34+干细胞特性研究
目的探讨造血系统多种肿瘤细胞系中CD34+干细胞是否存在,并对其性质进行研究.方法利用流式细胞检测技术,检测了急性单核细胞白血病细胞THP-1、红白血病细胞MEL、慢性粒细胞白血病细胞K562,急性淋巴细胞白血病细胞MOLT-4,恶性淋巴瘤细胞RAJI,多发性骨髓瘤细胞RPMI8226、SP2/0和树突状细胞肉瘤DCS肿瘤细胞中CD34+的肿瘤细胞所占的比例.选取了MOLT-4和K562细胞系,分选出CD34+细胞,继续培养,观察CD34+细胞比例变化;比较CD34+与CD34-肿瘤细胞在功能状态、细胞周期、分化状态、耐药性的差异. 结果8种不同类型造血系统肿瘤细胞中CD34阳性率依次为2.5%、5.2%、3.1%、2.1%、1.4%、O、0和6.2%.从K562细胞中分选出CD34+细胞,继续培养后恢复为原来比例.MOLT-4和K562细胞系中分离出的CD34+细胞RNA含量低、细胞处于G0/G1期的比率较高(81.5%和77.9%)、分化抑制蛋白Id-1表达强阳性/阳性(分化程度低)、多耐药蛋白p-gp高表达(耐药性强).结论血液系统肿瘤细胞系中有一小部分肿瘤细胞带正常造血干细胞的标记,并且带有这种标记的细胞表现出更为原始的细胞特性,其中包括血液肿瘤细胞干细胞.
