首页 > 文献资料
-
干细胞、肿瘤干细胞与肿瘤发生
肿瘤干细胞是肿瘤研究的一个新热点,指出肿瘤可能是由肿瘤干细胞产生,肿瘤干细胞则由正常干细胞恶变形成.正常干细胞的特有性状,使其较成体细胞更易成为肿瘤发生的靶细胞.干细胞可能经基因突变、异常不对称分裂和细胞融合转化为肿瘤干细胞.利用不同的蛋白标志物或荧光探针,通过流式细胞仪分选是发现肿瘤干细胞的主要方法.已证实的肿瘤干细胞皆具有强大的自我更新和增殖能力,以及细胞分化潜能.针对肿瘤干细胞的检测和杀伤,可能为肿瘤早期诊断和治疗带来希望.
-
胃癌肿瘤干细胞相关信号通路及靶向治疗研究进展
胃癌是世界范围内常见的肿瘤之一,其死亡率在全球所有肿瘤中居第3位,因此,探究胃癌的发病及演变机制,为治疗胃癌提供理论依据尤为必要.过去数十年中,肿瘤干细胞的学说的提出与发展大大深化了人们对胃癌的认识.肿瘤干细胞是一类具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞,胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)在发生进展过程中都会伴随干细胞相关信号通路的异常,随着研究的深入,特别是针对GCSC及相关信号通路的研究取得了一定的成果,为阐明和治疗胃癌提供新的理论基础和实验依据.本文就干细胞相关的几条信号通路对GCSC影响与机制和靶向抑制信号通路关键靶点的治疗进行了综述.
-
SP细胞分选与肿瘤干细胞关系的研究进展
肿瘤干细胞已成为肿瘤研究的热点之一,但是由于缺乏特异的表面标记,肿瘤干细胞的分离纯化一直是亟待解决的难题.由于SP(side population)细胞富含干细胞样细胞,并且SP细胞具有较明确的表型标记和分离方法,近年来,通过流式细胞仪分选SP细胞的方法越来越多地应用在肿瘤干细胞的研究中.
-
食管鳞癌干细胞及其耐药机制的研究进展
食管癌(esophageal carcinoma,EC)的全球发病率在恶性肿瘤中位居第8位,死亡率居第6位,化疗是EC主要的治疗方法之一,但化疗药物耐药严重影响了化疗效果,甚至引起化疗失败,导致肿瘤复发或远处转移.肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)学说提出CSCs是引起肿瘤对化疗药物耐药的重要原因之一.本文就食管鳞癌干细胞的生物学特性、分选及化疗耐药的相关机制作一综述.
-
食管鳞癌干细胞相关标志物的研究进展
食管鳞癌是我国常见一种恶性肿瘤,其发病率和死亡率一直处于恶性肿瘤的前列.近年来,愈来愈多证据支持在包括ESCC恶性实体瘤中肿瘤干细胞的存在,并与其不良生物学行为及药物耐受密切相关,肿瘤干细胞标志物在分离肿瘤干细胞起着重要作用,其研究有助于认识和理解肿瘤发生发展的机制,指导肿瘤的临床治疗.
-
钼对人食管癌细胞ECA-109的化疗增敏作用及对食管癌干细胞p75NTR的影响
目的:探讨钼对食管癌细胞ECA-109化疗敏感性的影响及对食管癌干细胞p75NTR作用.方法:本实验选用人食管癌细胞(esophageal cancer cells,ECCs)ECA- 109.设计分为4组:空白对照组、顺铂组、单纯加钼组、顺铂加钼组,后3组均采用不同的浓度进行试验.用MTT法检测各组对人食管癌细胞ECA-109的生长抑制作用；流式细胞仪检测各组p75NTR百分率的变化.结果:顺铂组各浓度对食管癌细胞ECA-109有一定的抑制作用,且对食管癌干细胞也有不同程度的抑制作用,并且随着给药浓度和时间的增加均呈增强趋势；单纯加钼组对食管癌细胞ECA-109和对食管癌干细胞的抑制作用均不明显;顺铂加钼组对食管癌细胞ECA-109和食管癌干细胞的抑制作用则明显增强,与单用同浓度顺铂组及空白对照组比较有差异性(P＜0.05),且呈一定的浓度、时间依赖性.结论:钼可明显增强顺铂对食管癌细胞ECA-109和食管癌干细胞的抑制作用,而单用钼则达不到理想的效果,说明钼可作为化疗增敏剂,为其作为食管癌化疗的辅助剂提供了实验依据.
-
姜黄素、氯丙胺对人结肠癌肿瘤样干细胞CD44、Lgr5表达的作用
目的:探讨姜黄素和胃泌素受体不全拮抗剂氯丙胺对体外培养的人结肠癌肿瘤样干细胞生长增殖的抑制作用及作用机制.方法:取对数生长期的结肠癌SW480细胞用10％的完全培养基继续培养48h后,换用无血清培养基进行同步化培养24h,然后进行分组:姜黄素组、氯丙胺组、联合用药组,每一种药物组又分为对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组,联合用药组的浓度梯度依次为两药浓度的对应叠加,继续培养48h,加入FITC标记的小鼠抗人CD44单克隆抗体20μL,同时在对照组细胞中加入同型对照抗体IgG2b 20μL,4℃避光放置30min,然后使用目筛网滤过,上流式细胞仪进行检测CD44的表达变化.采用Western blot检测Lgr5在3种不同药物浓度作用下在细胞中的蛋白表达差异.结果:姜黄素和氯丙胺均呈时间和剂量依赖性抑制SW480细胞的生长增殖,且二者具有协同抑制作用;单独应用姜黄素和氯丙胺干预时,SW480细胞增殖逐渐减慢,数量减少,细胞逐渐变形,并出现崩解及死亡,细胞中CD44蛋白质的表达较对照组有所降低,Lgr5蛋白质的表达均低于对照组,单独用药组与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05);二者联合应用时,CD44、Lgr5蛋白质的表达均显著降低,而且与对照组和各单一用药组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:(1)姜黄素和氯丙胺呈剂量依赖性地抑制体外培养的人结肠癌肿瘤样干细胞的生长增殖,且二者具有协同抑制作用;(2)姜黄素和氯丙胺可能是通过下调CD44和Lgr5分子的表达来抑制肿瘤干细胞增殖.
-
胃癌MKN-28肿瘤细胞系SP细胞亚群初步分析
目的:分析胃癌细胞株MKN-28中是否包含肿瘤干细胞相关的SP(side population)细胞亚群.方法:采用免疫荧光方法检测干细胞标记ABCG2在胃癌细胞株MKN-28的表达;制备MKN-28细胞悬液,经Hoechst33342染色,流式细胞仪分析SP亚群.结果:ABCG2在胃癌细胞系MKN-28中有少量表达,ABCG2阳性细胞约占1.7%.SP亚群占MKN-28细胞的0.25%,维拉帕米阻断后减少为0.05%.结论:人胃癌细胞株MKN-28中存在SP细胞亚群,提示胃癌干细胞的存在.
-
结直肠癌组织中ESA和CD44的表达及其临床病理意义
目的:探讨原发性结直肠癌组织中E SA和CD44蛋白表达的关系及临床病理意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测10例正常结直肠黏膜组织、13例伴不典型增生的结直肠腺瘤及67例结直肠癌组织中ESA和CD44的表达,并比较两者不同病理参数的相关性.结果:结直肠癌组织中ESA和CD44的表达明显高于其在正常肠黏膜组织和伴不典型增生的结直肠腺瘤中的表达( P<0.05); 在结直肠癌中,CD44的表达与淋巴结转移,分化程度及Dukes分期有关(χ2 = 8.375,14.284,7.948,均P<0.05); ESA与年龄、浸润深度、分化程度及Dukes分期有关(χ2 = 16.918,15.195,10.395,7.681,均P<0.05); ESA的表达与CD44的表达呈正相关( r = 0.614,P = 0.000).结论:ESA与CD44在结直肠癌的发生发展、浸润转移中密切相关,同步检测二者在结直肠癌组织中的表达并综合分析两者之间的关系对评价结直肠癌的侵袭转移能力判断具有一定价值.
-
癌干细胞CD44+/ALDH+在结直肠癌中的表达及其临床病理学意义
目的:观察癌干细胞CD44+/ALDH+在结直肠癌组织中的表达,并探讨其临床病理学意义.方法:利用组织芯片仪制作组织芯片,通过免疫组织化学染色,免疫组织化学双重染色观察结直肠癌组织和不同组织中CD44+,ALDH+,CD44+/ALDH+的表达.结果:CD44,ALAH1在结直肠癌中的表达明显高于正常肠黏膜和伴不典型增生的管状腺瘤(均P＜0.05)；在结直肠癌中,CD44和ALDH1的表达率与癌组织的病理分级、浸润、淋巴结转移有关(均P＜0.05); CD44+/ALDH+在结直肠癌中的表达明显高于正常肠黏膜组织和伴不典型增生的管状腺瘤(均P＜0.05),随着癌分化程度的降低,表达率增加.结论:CD44+/ALDH+可作为结直肠癌干细胞有价值的标志物,可作为结直肠癌早期和预防复发转移的可靠指标.
关键词： 结直肠癌 肿瘤干细胞 CD44+/ALDH+ 免疫组织化学双重染色 -
结直肠癌CD44+/ki-67-癌干细胞特征及其与临床病理关系
目的 观察CD44+/ki-67-结直肠癌干细胞的特摘要征及其与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学染色、免疫组织化学双重染色和苏木精-伊红(HE) 染色,检测10 例正常肠黏膜,15 例腺瘤,59 例结直肠癌标本和人结肠癌细胞株SW620 中CD44 和ki-67 的表达,定位CD44+/ki-67-肿瘤细胞,观察、计数并与对应的HE 染色切片进行形态学比较,讨论CD44+/ki-67-癌干细胞与其临床病理特征的关系.结果 CD44+/ki-67-肿瘤细胞的数量占肿瘤细胞0.1%-25.0%,平均5.82%,这种细胞主要分布在腺体基底膜侧或者在共壁腺体的共壁侧,呈散在分布,核的形态较一致,呈圆形或卵圆形,染色质较深,胞浆较少,与正常肠黏膜隐窝底部干细胞形态较一致,与肿瘤浸润深度(χ2=1.851,P <0.05) 和是否有淋巴结转移相关(χ2= -4.113,P<0.01).结论 CD44+/ki-67-可以作为肿瘤干细胞的标志,这为肿瘤干细胞的分离、靶向治疗和个体化治疗提供了可靠的分子生物学指标,也是预测肿瘤转移和判断患者预后的可靠指标.
-
肝癌干细胞表面标志物研究进展
近年来有许多学者提出肿瘤干细胞理论,认为肿瘤是由少数肿瘤干细胞与大多数的普通肿瘤细胞组成,这让人们从新的角度去了解肝癌.肝癌干细胞(liver cancer stem cell,LCSC)的研究为肝癌的治愈提供新的希望,因而LCSC的分离鉴定显得尤为重要;因为肿瘤干细胞的分离鉴定主要依据肿瘤干细胞标志物的表达,目前多种肿瘤干细胞标志物已被科学家证实,肝癌也不例外.所以本文主要阐述总结了7种LCSC的表面标志物的特点及对其临床意义.
-
肿瘤干细胞研究进展
肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)是一类具有自我更新、高致瘤性,分化潜能、高度耐药等特征的恶性肿瘤细胞群.CSC不仅保留了正常干细胞的性质,并且独具自身特点,研究CSC,为肿瘤的靶向治疗开辟新途径.本文将对CSC的定义、表面标志、检测方法与分离方法的研究进展进行综述.
-
肿瘤干细胞相关信号通路与食管鳞癌的研究进展
由于肿瘤干细胞的发现,人们对肿瘤发生、发展、转移机制有了进一步了解.Wnt/β-catenin、PIP3、Hedgehog等信号通路对肿瘤干细胞自我更新与分化起重要作用,一旦信号通路发生异常,即可促肿瘤干细胞异常分化和无限增殖.虽不能完全确定食管鳞癌存在肿瘤干细胞,但越来越多证据提示,这3条肿瘤干细胞信号通路促食管上皮组织不良分化、食管癌发生发展进程甚至放化疗抵抗.
-
CD133在83例人肺腺癌细胞中的表达研究
目的:研究CD133在人肺腺癌中的表达,观察其表达情况及其临床意义.方法:取83例人肺腺癌石蜡标本,用免疫组化法检测CD133的表达,结合患者性别、淋巴转移等信息进行统计分析,研究CD133的表达与患者相关资料的关系.结果:83例患者中CD133阳性率为81.9％,同时具有表达的不均一性,阳性表达者其表达强度也不同.其表达与患者淋巴转移(x2=14.01,P＜0.01)、病理分化程度(x2 =9.67,P＜0.01)及5年存活率(x2=3.95,P＜0.05)相关,与性别(x2=2.70,P＞0.05)、吸烟指数(x2=0.09,P ＞0.05)未见相关性.结论:CD133在肺腺癌中的表达具有普遍性和不均一性,高表达患者淋巴转移率高,病理分化差,5年存活率低.CD133的表达对判断肺腺癌临床预后有指导作用.
-
MiR-590-3p在胰腺癌干细胞中的表达
目的 应用无血清培养基分离胰腺癌干细胞，检测其miR-590-3p的表达。方法 运用无血清培养基克隆培养ASPC-1、PANC1细胞，检测其单克隆形成、分化及细胞周期、半数抑制浓度(IC50)和表面标记物CD24+、CD44+表达。实时定量PCR法检测细胞miR-590-3p的表达。结果 经无血清培养基培养,(0.94±0.53)％的ASPC-1细胞和(0.57±0.12)％的PANC1细胞能存活，呈克隆球样悬浮生长，并可以在体外连续传代。加入血清后细胞球又重新贴壁生长。ASPC-1细胞球G0/G1期比例和CD24+、C44+、CD24+ CD44+的细胞比例及IC50分别为(75.3±5.4)％、0.96％～2.01％、27.52％～34.47％、0.35％ ～0.44％和(224.37±5.71) μg/ml，均显著高于亲本细胞的(43.7±3.8)％、0.38％～0.42％、17.65％ ～ 18.25％、0.05％～ 0.08％、(11.43±2.10) μg/ml(P值均＜0.05)。PANC1细胞球G0/G1期比例和CD24+、CD44+、CD24 +CD44+的细胞比例及IC50分别为(80.1±4.7)％、5.31％ ～9.84％、72.05％ ～93.06％、4.91％ ～5.21％、(296.58±4.27) μg/ml，均显著高于亲本细胞的(46.1±5.3)％、4.09％～4.97％、47.71％～55.66％、1.48％ ～2.63％、(26.17±3.81) μg/ml(P值均＜0.05)。ASPC-1、PANC1细胞球miR-590-3p表达分别是亲本细胞的4.67和4.52倍。结论 应用无血清培养基可以从ASPC-1、PANC1细胞系中分离出具有干细胞特性的胰腺癌细胞球，其miR-590-3p表达上调，该基因可能是胰腺癌干细胞特性维持的关键基因。
-
HIF-1α@Fe3O4纳米颗粒标记缺氧条件下胰腺癌PANC1细胞及其MRI表现
目的 探讨新型纳米颗粒缺氧诱导因子-1 α(HIF-1α)螯合四氧化三铁探针(HIF-1α@Fe3O4)标记胰腺癌PANC1细胞的可行性及其3.0T MRI扫描时T2WI信号的改变.方法 在缺氧条件下培养胰腺癌PANC1细胞,采用蛋白质印迹法检测细胞HIF-1d及干细胞标志蛋白CD133、Oct-4、Sox-2的表达.收集缺氧培养24 h的PANC1细胞,并分别与5、15、45 μg/ml的HIF-1α@Fe3O4纳米颗粒共孵育24 h,检测HIF-1 α@Fe3O4标记的PANC1细胞数及细胞存活率,采用3.0T MRI扫描记录细胞在T2WI图上的信号强度.结果 在缺氧培养下PANC1细胞HIF-1α表达量较常氧培养组明显增加,且随着缺氧时间的延长进一步增加(P值均＜0.05),干细胞标志蛋白CD133、Oct-4、Sox-2的表达与HIF-1α表达呈正相关.PANC1细胞与不同浓度HIF-1α@Fe3 O4共孵育24 h后,胞质内蓝色铁染颗粒细胞呈浓度依赖性增多,45 μg,/ml浓度时高,达100％.常氧培养组、缺氧培养未标记组及缺氧培养45 μg/mlHIF-1 α@Fe3 O4标记组的细胞存活率分别为(87.0±2.1)％、(84.7±2.7)％、(85.0±3.8)％,差异无统计学意义(P＞0.05).通过3.0T MRI扫描,未标记组及5、15、45 μg/ml HIF-1α@Fe3O4标记组细胞T2 WI的信号强度比分别为1.017 ±0.046、0.793 ±0.041、0.447±0.032、0.240±0.031,各组间差异有统计学意义(F=80.0,P＜0.05).结论 缺氧有利于胰腺癌PANC1细胞干细胞特性的维持.HIF-1α@Fe3O4探针可成功标记缺氧培养下高表达HIF-1 α的PANC1细胞,且标记细胞在3.0T MRI扫描的T2WI图上的信号强度减弱.
-
Latexin基因转染对CD133+MIAPaca-2胰腺癌干细胞增殖的影响
目的 探讨Latexin (Lxn)基因对CD133 MIAPaca-2胰腺癌干细胞增殖的影响.方法 采用磁珠分选法从MIAPaca-2胰腺癌细胞株中分选出CD133+细胞,在无血清培养基中观察其形态变化及种植到裸鼠皮下后的成瘤能力.采用脂质体法将不同浓度的插入Lxn基因(1、3、5μg)的质粒转染CD133+MIAPaca-2胰腺癌细胞.应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测转染的癌细胞Lxn mRNA及蛋白表达量.CCK-8法检测转染癌细胞的增殖能力.结果 成功分离出CD13;MIAPaca-2胰腺癌细胞,它以悬浮成球的方式生长,以1 ×105个癌细胞种植裸鼠皮下的成瘤率达100％.转染插入Lxn的质粒后,CD133+MIAPaca-2胰腺癌细胞Lxn基因的表达呈转染剂量依赖性地增加,转染5μg质粒的细胞Lxn mRNA及蛋白表达量分别为20.80±0.98、16.80±2.73,显著高于未转染细胞的1.02 ±0.01、1.01 ±0.01,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);转染后癌细胞增殖活性呈转染剂量及培养时间依赖性地被抑制,转染0.4 μg质粒的癌细胞的生长抑制率达36.2％,显著高于未转染细胞的抑制率,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CD133+ MIAPaca-2胰腺癌细胞具有肿瘤干细胞部分特性,Lxn基因转染对CD133+MIAPaca-2胰腺癌干细胞增殖具有抑制作用.
-
Hedgehog通路抑制剂逆转人胰腺癌SW1990细胞获得性耐药的实验研究
目的 探讨人胰腺癌SW1990耐药细胞株中Hedgehog通路成员(Shh、SMO、Gli1、ABCB1、ABCG2)表达的变化及应用Hedgehog信号通路抑制剂对其耐药性的影响.方法 建立人胰腺癌SW1990耐吉西他滨细胞株(SW1990/GZ).采用Hedgehog信号通路抑制剂环巴明作用耐药细胞,应用实时PCR、蛋白质印迹法检测用药前后细胞Shh、SMO、Gli1、ABCB1、ABCG2 mRNA和蛋白的表达及CD44+ CD24+、CD133+细胞亚群比例.以100 μmol/L吉西他滨作用环巴明处理后的SW1990/GZ细胞,应用Annexin V加PI双染法检测细胞凋亡率.结果 SW1990/GZ细胞中CD44+ CD24+细胞比例从亲代的(29.45±1.99)％增加到(93.16±2.46)％、CD133+细胞比例从(59.37±1.69)％增加到(95.88±1.47)％(P＜0.01)；ABCB1、ABCG2、Shh、Gli1 mRNA的表达分别增加(274.90±31.44)、(3.48±0.33)、(12.07±1.71)、(4.15±0.42)倍(P＜0.01),并检测出SMO mRNA表达.蛋白表达结果与mRNA表达一致.2μmol/L环巴明作用SW1990/GZ细胞1周后,CD44+CD24+比例下降到(36.68±2.44)％、CD133+细胞比例下降到(62.76±1.28)％(P＜0.05).2、5μmol/L环巴明处理SW1990/GZ细胞后再用100 μmol/L吉西他滨处理细胞,细胞的凋亡加死亡率分别为(53.68±5.24)％和(69.99±3.16)％,显著高于对照组的(4.55±0.87)％(P＜0.01).结论 人胰腺癌SW1990耐药细胞株中高富集肿瘤干细胞,高表达Hedgehog信号通路成员SMO及Gli1.抑制耐药株的Hedgehog通路,可以降低其肿瘤干细胞比例,下调SMO及Gli1表达,部分恢复对吉西他滨的敏感性.
关键词： 胰腺肿瘤 肿瘤干细胞 Hedgehog信号通路 吉西他滨 获得性耐药 -
体外侵袭和化疗干预富集PANC1中CD24+ CD44+细胞群的初步研究
肿瘤由异质性的肿瘤细胞组成,其中包含一个在肿瘤发生、发展、侵袭转移和耐药中起关键作用的亚群--肿瘤干细胞[1].近年根据肿瘤干细胞理论分选到了胰腺癌干细胞(CD24+ CD44+ ESA+)[2],而且从胰腺癌细胞系PANC1中分离的CDD24+ CD44+ 细胞具有高致瘤性[3].本实验探讨从胰腺癌细胞系PANC1中富集CD24+ CD44+细胞的方法,为进一步研究这种细胞的生物学特性提供足量的细胞.
