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胚胎干细胞关键因子Nanog在人胶质瘤中的表达及意义
目的 探讨胚胎干细胞关键因子Nanog在人胶质瘤中的表达及意义.方法 通过免疫荧光双标技术,分析40例胶质瘤组织内胚胎干细胞关键因子Nanog与肿瘤干细胞相关基因Nestin、CD133及胚胎干细胞全能性相关基因Oct4的共表达情况,并通过RT-PCR、Western blotting技术分析胶质瘤组织内Nanog与脑胶质瘤恶性程度之间的关系.结果 Nanog在胶质瘤组织中的表达随着胶质瘤病理级别增高而升高,而且超过50％的Nanog阳性细胞同时表达Nestin和CD133.95％以上的Nanog阳性细胞都同时表达胚胎干细胞全能性相关基因Oct4.结论 胶质瘤组织中Nanog多表达在肿瘤干细胞中,与胶质瘤的恶性程度呈正相关,在胶质瘤的发生、发展过程中起着重要作用,为研究胶质瘤的起源及胶质瘤的诊断和预后判断提供帮助.
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多种肿瘤干细胞标志物在食管鳞癌 Eca109细胞球细胞中的表达
目的：观察肿瘤干细胞标志物P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog在食管鳞癌Eca109细胞系富集的细胞球细胞中的表达。探讨食管鳞癌的肿瘤干细胞标记物。方法采用无血清成球培养法，富集培养细胞球细胞，观察其增殖过程。培养5d获得小细胞球继续培养至14d获得又大又圆的悬浮生长的细胞球，收集第14天的细胞球，一部分用于实验，一部分予以传代。应用免疫荧光技术检测细胞球细胞中P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog的表达和定位。结果 P75NTR、Oct-4荧光定位于细胞球细胞的细胞核上，贴壁的Eca109为细胞核和细胞质表达，但是Oct-4荧光强度比P75NTR弱；Lin28在细胞球细胞上为细胞核表达，贴壁的Eca109上为细胞核和细胞质表达；Nanog和Sox-2在食管鳞癌Eca109细胞球细胞和贴壁的Eca109上均为细胞质表达。结论 P75NTR、Oct-4、Lin28核表达阳性的细胞球可能为食管癌干细胞。
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OSKM诱导过表达c-Jun肝癌细胞重编程
目的 构建OSKM诱导的过表达c-Jun肝癌细胞(C3A-c-Jun)重编程细胞系,探讨外源性c-Jun对肝癌细胞重编程的影响.方法 通过C3A细胞稳定过表达c-Jun后进行OSKM诱导重编程,通过碱性磷酸酶染色,Real-time PCR,免疫印迹法,免疫荧光等技术对细胞进行鉴定,建立C3A-c-Jun诱导肿瘤干细胞系C3A-c-Jun-iCSCs.结果 C3A-c-Jun-iCSCs克隆呈圆顶状,边缘圆钝,克隆内细胞小且排列紧密,多层分布,碱性磷酸酶染色阳性,mRNA和蛋白水平均可表达多潜能性标记物OCT4、SOX2;C3A-c-Jun-iCSCs组外源性和内源性Sox2的表达量均明显高于C3A-iCSCs对照组;在重编程过程中c-Jun持续表达.结论 OSKM诱导C3A、C3A-c-Jun肝癌细胞重编程,分别建立C3A-iCSCs和C3A-c-Jun-iCSCs细胞系,发现外源性c-Jun通过上调Sox2基因的表达,启动下游一系列反应,对肝癌细胞重编程过程起促进作用.
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肿瘤干细胞:从假说到科学的漫长之路
干细胞是有自我更新和复制能力的原始细胞,这种细胞可分化为特定组织中一个或者多个具有特定功能的细胞.在脊椎动物中,它常常被分为3种类型:第1种类型--胚胎干细胞(embryonic stem,ES),这种细胞来源于内细胞团(inner cell mass)细胞,被认为是全能的(totipotent stem cell),也就是说它具有向机体各种细胞分化的潜能.第2种是pluripotent stem cell,它可以分化成除了胎盘外的任何一种细胞.第3种是multipotent stem cell,它能够分化成特定功能的细胞,如造血干细胞能够分化成血液和免疫系统中的各种细胞;此外,肠道、皮肤、大脑和心脏等组织中也存在这种类型的干细胞.5年前,以造血干细胞为主的干细胞生物学研究还是一门非常局限的学科,近年来这方面研究已经拓展到急性心肌梗死、糖尿病、帕金森病和退行性神经病变等原来认为无法根治的疾病[1],其迅速的发展将对人类的健康事业产生巨大的影响.
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肿瘤干细胞及其耐药机制
肿瘤干细胞是存在于造血系统肿瘤和一些实体瘤中具有干细胞特性的细胞.肿瘤干细胞假说认为,经药物治疗后肿瘤复发和转移与肿瘤干细胞残存有密切关系.其原因可能是肿瘤干细胞高表达ABC转运蛋白和Bcl-2抗凋亡蛋白,同时其本身又具有一些干细胞特性.对肿瘤干细胞耐药机制的研究,将有助于发现新的肿瘤治疗靶点和更好的抗癌策略.
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肿瘤干细胞标志物CD166在大肠癌的表达及其临床意义
目的 检测肿瘤干细胞标志CD166在大肠癌中的表达,以了解其在大肠癌发病中的意义.方法 用RT-PCR检测23例大肠癌患者的癌组织和癌外正常大肠组织中的CD166 mRNA的阳性率和表达水平,并分析其与临床和病理各变量的相关性.结果 大肠癌组织CD166 mRNA表达的阳性率为95.7%.表达水平为0.309±0.145,均显著高于正常大肠组织的39.1%和0.109±0.255(P<0.01),其表达率与表达强度与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤大小、病理分型等均无显著关系(P>0.05).结论 肿瘤干细胞标志物CD166在大肠癌中高表达,其表达与临床和病理的特征无显著关系.
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人卵巢癌细胞株侧群细胞的生物学特征
目的 研究人卵巢癌细胞株细胞中乳腺癌耐药蛋白与侧群细胞表型的关系,并探讨侧群细胞在卵巢癌病理牛理中的作用以及卵巢癌细胞株在卵巢癌肿瘤干细胞研究中的应用. 方法 利用流式细胞术从人卵巢浆液腺癌细胞株OVCAR3中分离排斥双苯酰亚胺(Hoechst 33342)染色的侧群细胞以及能被其染色的非侧群细胞,比较两个亚群的细胞集落形成率,并检验其在软琼脂平板生长的能力.同时以免疫印迹和免疫荧光染色检测两种细胞的乳腺癌耐药蛋白表达情况. 结果 OVCAR3细胞株中排斥Hoechst 33342的细胞占2.0%,此活动对维拉帕米(verapamil)敏感.侧群细胞和非侧群细胞克隆形成率分别为46.17%±23.27%和6.17%±3.06%,侧群细胞克隆形成率高于非侧群细胞(P<0.05),并能在软琼脂平板中生长、形成球形的细胞集落.侧群细胞表达乳腺癌耐药蛋白. 结论 人卵巢浆液腺癌细胞株中存在排斥Hoechst 33342染色、对维拉帕米敏感的侧群细胞,是维持细胞株的主要因素,其表型与乳腺癌耐药蛋白相关.OVCAR3可用于卵巢癌肿瘤干细胞的研究.
关键词： 卵巢肿瘤 肿瘤干细胞 三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2 侧群细胞 双苯酰亚胺 -
利用卵巢癌干细胞特异性基因表达谱进行针对性药物初步筛选
目的 综合分析卵巢癌中各干细胞特异性基因表达谱,发现其共同的表达特征,以期筛选具有逆转肿瘤细胞干细胞特性的小分子化合物.方法 从NCBI GEO数据库中获取卵巢癌细胞系、患者来源的卵巢癌干细胞与各非干性卵巢癌细胞的全基因组表达谱,进行整合比对分析,并以8例进展期卵巢癌细胞与正常卵巢上皮细胞的差异基因表达谱为校正,获得差异表达基因.利用GeneSifter软件解析卵巢癌细胞的干性特征并建立分子标签,使用连通图法筛选具有逆转此类分子标签的小分子化合物.结果 进展期卵巢癌患者来源的卵巢癌细胞相比正常人卵巢上皮细胞、卵巢癌细胞系OVCAR-3来源的多细胞球相比OVCAR-3细胞、卵巢癌细胞系IGROV1来源的侧群细胞相比非侧群细胞、进展期卵巢癌患者腹水细胞来源的侧群细胞相比腹水总体细胞差异表达的基因数分别为6053、6495、1347、509个,均满足差异基因表达在1.5倍以上且t检验P值＜0.05.其中NGFI-A结合蛋白1(NAB1)等为共同上调的关键基因,S蛋白1(PROS1)、雌激素介导的乳腺癌生长调节因子1(GREB1)、Kruppel相似因子9(KLF9)和线粒体肿瘤抑制因子1(MTUS1)等为共同下调基因.筛选出SC-560、disulfiram、thapsigargin、esculetin、cinchonine等18种小分子化合物具有逆转卵巢癌细胞干性的潜在药理特性.结论 初步揭示了各卵巢癌细胞中共有的干性差异表达基因及其特异调控网络,为筛选卵巢癌干细胞靶向药物提供了依据.
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卵巢上皮性癌中CD24的表达及其临床病理意义
目的 探讨肿瘤干细胞标记物CD24在卵巢癌实体肿瘤中的表达特点及其与临床病理学参数的关系.方法 收集解放军总医院病理科2001-06-2007-04间卵巢癌手术切除标本53例.采用免疫组化EnVision二步法检测癌组织中CD24的表达,结合病例随访结果分析CD24与卵巢癌发生发展的关系.结果 ①53例卵巢癌病例中,42例(79.2％)CD24(+),其中24例以细胞膜阳性为主,18例以胞质阳性为主；②胞质CD24阳性者与FIGO分期有明显相关性(P＜0.05),而与其他临床病理学参数无明显相关性(P＞0.05)；③Log-rank生存分析法显示,胞质CD24阳性者无瘤生存率及复发时间低于胞膜阳性者(P＜0.05).结论 肿瘤干细胞标记物CD24在卵巢癌中的表达率较高,可为寻找潜在治疗靶标提供新思路；CD24不同的表达模式可作为判断卵巢癌患者预后的指标之一.
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胸水乳腺肿瘤干细胞的分离与培养
肿瘤干细胞也称肿瘤起源细胞(cancer stem cells or tumor initiating cells, TICs),研究它是近几年发展迅速的新型细胞生物技术, 对探寻根治肿瘤的新方法具有重要的意义,目前已分别分离出乳腺肿瘤干细胞、结肠癌干细胞、脑肿瘤干细胞等多种肿瘤干细胞.本文探讨用乳腺癌转移患者胸水进行乳腺癌干细胞的分离与培养.
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肿瘤干细胞与肿瘤淋巴管生成及转移的研究进展
肿瘤干细胞(CSC)理论的提出,为人们重新认识肿瘤的本质和起源提供了新的方向和视角.CSC能直接和间接涉及肿瘤诱发的淋巴管生成,终促进肿瘤淋巴管转移;但CSC与淋巴管生成及淋巴管转移间的关系仍然模糊不清,且其中的诸多细节问题仍然存有争议.因此,进一步深层次了解CSC的生物学特性和功能,对于建立新的肿瘤诊断和治疗体系具有重要的现实意义和价值,也可能对肿瘤的治疗带来新的希望.
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ABCG2与恶性血液病耐药相关性的研究进展
ABCG2作为一种跨膜半转运蛋白,参与了内源及外源有害物质的外排,对机体正常组织起到了保护作用,但同时也介导了对多种化疗药物的外排,引起多药耐药,使许多恶性肿瘤患者对化学药物治疗不敏感,直接影响到临床预后.本文将对ABCG2基因的单核苷酸多态性(SNP)、ABCG2与干细胞和酪氨酸激酶抑制剂(TKI)之间的关系的一些研究进展做简要介绍,同时还对ABCG2与恶性血液病耐药相关性的临床研究结果做回顾性分析,从中可以看出目前研究中存在的问题及未来的研究方向.
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多发性骨髓瘤侧群细胞分选及其生物学特征分析
本研究旨在从人多发性骨髓瘤细胞株中分选出侧群(SP)细胞并对其生物学特性进行分析.细胞经Hoechst33342染色后,应用荧光显微镜观察细胞内Hoechst荧光染色情况,采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术,将细胞分选为SP细胞与主群(main population,MP)细胞,用细胞生长曲线法比较两群细胞的体外增殖能力、集落形成试验比较细胞集落形成能力、流式细胞术分析两群细胞CD138的表达情况,应用RT-PCR法检测ABCG2mRNA在两群细胞中的表达不平、硼替佐米对CCK-8法和集落形成试验检测对两群细胞增殖、活力和细胞集落形成能力的影响.结果表明,骨髓瘤细胞株中存在小部分比例的SP细胞,RPMI 8226细胞株中SP细胞高达(7.10±2.69)％,在荧光显微镜下也检测到SP细胞;SP细胞增殖活力、细胞集落形成能力明显高于MP细胞(P＜0.05);该基因SP和MP细胞的CD138表达率无明显差异(P＞0.05);SP细胞表达耐药基因ABCG2,而MP细胞几乎不表达该基因;SP细胞的硼替佐米抑制率明显低于MP细胞(P＜0.05),但在40 nmol/L作用下,两者抑制率未显示差异有显著统计学意义(P＞0.05);硼替佐米均能降低两群细胞的集落形成能力,但MP细胞降低更为明显.结论:骨髓瘤细胞系中存在少量SP细胞,具有肿瘤干细胞的相关生物学特性.
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重新编程与白血病干/祖细胞的起源与演化
由体细胞建立诱导性多潜能干细胞系(iPS)的成功证明重新编程在干细胞生成中的重要作用,引发对白血病干/祖细胞起源的思考.白血病干/祖细胞的起源和演化是白血病发生发展的核心.白血病有两类不同类型,真正的白血病(bona fide leukemia)和非真正的白血病(non-bona fide leukemia),不同类型的白血病有不同起源的白血病干/祖细胞,近年来的研究进展表明它们受起源细胞的重新编程状态影响.
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白血病干细胞及其微环境
白血病干细胞研究是肿瘤干细胞研究的先驱,不仅有重要的理论意义,也有潜在的应用前景.干细胞的生存和发展受其微环境的直接影响,白血病干细胞及其微环境成为研究热点.作者认为白血病干细胞是群体,具有异质性和阶梯性,不能分离单个细胞形成克隆;白血病干细胞与微环境的作用可以用白血病干细胞生态位(leukemia stem cell niche)的概念表述.本文就白血病细胞群体的阶梯性和异质性及白血病干细胞的生态位问题进行了评述.
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慢性粒细胞性白血病患者骨髓源bcr/abl融合基因阳性Flk1+CD31-CD34-干细胞体外抗STI571机制的初步研究
为进一步了解STI571对慢性粒细胞性白血病(CML)患者体内bcr/abl融合基因阳性的原始及定向白血病干/祖细胞分化及增殖的影响,更深入阐明部分CML患者在经历一段血液学甚至是细胞遗传学水平上的完全缓解后复发及对STI571的耐药机制,利用从CML患者骨髓分离到的具有血管母细胞特性、bcr/abl融合基因阳性、免疫表型为Flk1+CD31-CD34-细胞,体外检测了STI571对其在造血集落培养基中的分化及处于分化阶段时的增殖抑制作用.结果显示:浓度为5 μmol/L STI571,维持作用96小时(病人体内维持96小时的STI571浓度只可能达到1-2 μmol/L),即可有效抑制定向造血祖细胞的增殖.没有充分的证据显示,相对原始的bcr/abl融合基因阳性、免疫表型为Flk1+CD31-CD34-细胞的分化及增殖受到明显的抑制作用.结论:CML患者体内的原始白血病干/祖细胞对STI571具有一定的抗性,临床上所观察到的CML患者在运用STI571一段时间后出现正常的造血恢复现象,可能仅仅是因为STI571杀死或抑制了定向恶性白血病祖细胞的增殖,但随着时间的推移,在经历了短暂的血液学甚至是细胞遗传学水平上的缓解后,对STI571耐药的原始白血病干/祖细胞终究会再次导致CML的复发.
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同一组织来源的肝癌干细胞分化能力异质性的体外研究
目的通过比较肝癌干细胞的不同单细胞克隆的体外分化能力，分析同一组织来源的肿瘤干细胞分化能力是否具有异质性，以进一步明确肿瘤干细胞的分化特性，为靶向肿瘤干细胞的治疗提供实验依据。
方法通过有限稀释法对肝癌干细胞进行单细胞克隆培养，获得的单细胞克隆通过 MTT 测定比较其增殖能力。然后分别挑选增殖速度较快和较慢的3个克隆，采用 RT-PCR 方法比较其干细胞标志物表达水平。对干细胞标志表达水平高的3个克隆（A2、A3和 B2）进行向成骨、软骨和脂肪方向的诱导分化。采用实时荧光定量 PCR 方法检测诱导前后成骨、软骨和脂肪标志分子的表达。
结果获得的20个单细胞克隆增殖能力不同，并且增殖能力快的克隆表达干细胞标志物 CD133、Oct4、c-kit、SCF、nestin 比增殖能力慢的克隆强。向成骨方向诱导后，A2、A3和 B2克隆 I 型胶原 mRNA 表达水平分别升高了（4.71±0.11）、（2.13±0.15）和（3.82±0.3）倍；骨钙素mRNA 的表达水平分别升高（8.55±0.18）、（7.02±0.03）和（7.91±0.09）倍，说明 A2克隆向成骨细胞分化能力强。向软骨方向诱导后，B2分化能力强，软骨标志分子蛋白聚糖和 II 型胶原的表达分别上调（25.01±0.19）倍和（17.49±0.19）倍，而在 A2未发生明显变化，A3只轻微上调。向脂肪方向诱导后， A2、A3和 B2克隆脂联素mRNA 表达水平分别升高了（6.12±0.15）、（11.45±0.36）和（12.41±1.03）倍，过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA 的表达水平分别升高（4.92±0.02）、（9.54±0.18）和（8.96±0.11）倍。
结论来源于同一组织的肝癌干细胞在分化能力上具有异质性，这可能是导致肿瘤组织异质性的原因之一，也提示靶向肿瘤干细胞的治疗需要联合用药。 -
Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤干细胞中作用研究进展
Wnt信号通路是调控细胞生长、运动和分化的关键途径,在胚胎和器官发育以及维持干细胞的自我更新方面起重要作用.
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CD44v6和CD24在卵巢浆液性癌组织中的表达及其临床病理意义
目的 探讨肿瘤干细胞标志物CD44v6和CD24在卵巢浆液性癌中的表达特点及其与临床病理参数及预后的关系.方法 收集解放军总医院病理科2001年6月至2010年12月卵巢浆液性癌手术切除标本102例,采用两级病理分级系统判定组织学分级,免疫组织化学EnVision二步法检测癌组织中CD44v6和CD24的表达,结合随访结果分析其与卵巢浆液性癌发生发展的关系.结果 102例卵巢浆液性癌病例中,47例(46.1％) CD44v6呈阳性表达,61例(59.8％) CD24为阳性表达.CD44v6和CD24在病理分级高级别组中阳性表达率明显高于低级别组,差异有统计学意义(P=0.003,P＜0.05);CD24阳性表达与淋巴结转移相关(P＜0.05).两种标志物表达水平无明显相关性(X2 =0.394,P=0.530).年龄、病理分级、临床分期及淋巴结转移与患者无瘤生存时间相关(P＜0.05),CD44v6阳性表达及病理分级是影响总体生存的重要因素(P＜0.05),年龄是卵巢浆液性癌患者独立的预后影响因子.结论 CD44v6高表达、年龄≥50岁、临床分期为进展期及淋巴结有转移是卵巢浆液性癌患者预后的不良因素.两级病理分级系统与卵巢浆液性癌预后关系密切,高级别可作为预后不良的重要预测因子.
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lincRNA?ROR作为一个内源竞争RNA通过结合miR?145调节Oct4、Sox2和Nanog对结直肠癌干细胞生物学特性的影响及临床意义
目的 探讨长链非编码RNA(lincRNA)?ROR作为一个内源竞争RNA(ceRNA)结合miR?145对下游干性相关基因Oct4、Sox2和Nanog的表达,及对结直肠癌干细胞生物学特性的影响,并阐明这种分子调控网络的临床意义.方法 收集2014年至2016年间河南省南阳市中心医院及南阳市第二人民医院胃肠外科结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织共52例,采用即时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测52例临床患者结直肠癌组织标本及结直肠癌细胞系中lincRNA?ROR、miR?145的表达;分析lincRNA?ROR和miR?145的表达与结直肠癌临床病理特征的相关性;流式细胞术从SW1116中分离CD44-CD133-和CD44+CD133+细胞;qPCR检测细胞中CD44、CD133、Oct4、Sox2、Nanog表达及CD44+CD133+细胞贴壁黏附后CD44、CD133、lincRNA?ROR、miR?145表达;生物信息学分析miR?145与lincRNA?ROR及核心转录因子Oct4、Sox2、Nanog之间靶向调控关系,双荧光素酶报告基因实验、qPCR、Western blot进行验证;噻唑蓝法、克隆形成检测沉默lincRNA?ROR对结直肠癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响.结果 结直肠癌组织中lincRNA?ROR高表达,miR?145低表达,两者呈显著负相关(P<0.05);lincRNA?ROR表达与肿瘤大小、淋巴结转移、远端转移有关(P<0.05),miR?145表达与肿瘤大小、肿瘤位置有关(P<0.05);流式细胞术成功分选出 CD44+CD133+和 CD44-CD133-细胞, CD44+CD133+细胞中 CD44、CD133、Oct4、Sox2、Nanog、lincRNA?ROR 较 CD44-CD133-细胞高表达, miR?145低表达(P<0.05);贴壁黏附后CD44、CD133、lincRNA?ROR表达明显降低,miR?145表达增加(P<0.05);lincRNA?ROR能够结合miR?145调控Oct4、Sox2和Nanog表达;沉默lincRNA?ROR可显著抑制结直肠癌干细胞增殖克隆形成能力,增加其对顺铂、紫杉醇敏感性.结论 lincRNA?ROR结合miR?145调控核心转录因子Oct4、Sox2和Nanog表达来影响结直肠癌干细胞增殖及化疗敏感性,为后续研究结直肠癌发生发展中遗传网络组分之间相互作用的病理生理功能提供了新见解,为结直肠癌治疗提供新思路.
