丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1/2A在缺氧预处理诱导人脐静脉内皮细胞耐受中的作用

目的 研究丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1/2A (PP1/2A)在调节人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对缺氧耐受相关信号转导中的作用.方法 采用缺氧预处理诱导HUVEC对缺氧损伤的耐受.采用细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放及总抗氧化能力(T-AOC)评价HUVEC的耐受性.免疫细胞化学联合蛋白质印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)的亚细胞定位.蛋白质印迹法检测应激蛋白血红素氧合酶1(HO-1)的表达. 结果 缺氧90 min导致HUVEC存活率及T-AOC 降低,LDH释放增加.缺氧预处理(缺氧10 min 后4, 8及24 h)可提高HUVEC对随后缺氧90 min的耐受,细胞存活率及T-AOC较缺氧组显著提高,LDH 释出显著降低,并诱导Nrf2由胞浆向胞核移位,上调其下游信号分子HO-1的表达.缺氧预处理前用PP1/2A特异性抑制剂冈田酸(40 nmol·L-1)孵育HUVEC 10 min可部分抑制缺氧预处理诱导的Nrf2向核移位、HO-1表达及细胞耐受性.结论 PP1/2A至少部分参与缺氧预处理诱导HUVEC对缺氧损伤的耐受,其机制可能与调节Nrf2向核移位及HO-1表达有关.

诱导血红素氧化酶表达对乙醇所致人原代肝细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨乙醇暴露与诱导血红素氧化酶(HO-1)表达之间的关系.方法经体外灌流、分离培养人原代肝细胞,观察100 mmol*L-1乙醇暴露9 h后谷胱甘肽(GSH), 谷草转氨酶(GOT), 乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的变化以反应人原代肝细胞的氧化损伤,用RT-PCR及Western印迹方法检测乙醇对人原代肝细胞HO-1 mRNA及蛋白表达的影响.结果100 mmol*L-1乙醇暴露9 h后可导致人原代肝细胞明显的氧化损伤,肝细胞中的GSH明显降低,而MDA明显升高,GOT和LDH,此外,急性乙醇暴露下,HO-1表达开始应激升高,随后慢慢降低,肝细胞经HO-1诱导剂预处理后再与乙醇作用,能减轻乙醇对肝细胞的氧化损伤作用,并且这种作用可被HO-1抑制剂所抵消.结论诱导HO-1对乙醇所致人原代肝细胞的氧化损伤有保护作用.

内毒素致兔急性肺损伤血红素加氧酶拮抗作用

目的:探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对内毒素致兔急性肺损伤(ALI)的保护作用.方法:将24只雄性新西兰白兔随机分为生理盐水对照组(A组),内毒素损伤组(B组),血晶素预处理组(C组).用内毒素(700 μg/kg)一次性静脉注射复制兔急性肺损伤模型.检测肺组织HO-1蛋白的表达情况,以及在实验前(0 h)、实验后 0.5 h、 1 h、 2 h、 4 h 各点动脉血气、血清SOD值与MDA值.结果: B组动物静脉注射内毒素 0.5 h 后,动脉血氧分压下降至低7.287kPa(＜8kPa,符合急性肺损伤标准),血清SOD值 2 h、 4 h 时明显低于A组(P＜0.01),血清MDA值明显高于A组(P＜0.01).C组肺组织HO-1蛋白(平均光密度)明显高于A和B组(P＜0.01).结论:肺组织HO-1表达增加对内毒素所致ALI有一定的保护作用.

血清胆红素降低与冠心病关系的初步研究

目的：探讨低浓度血清胆红素是否是冠心病致病过程中的一个重要因素。方法用荷兰Vitatron-300半自动生化分析仪上使用两点法检测血清胆红素，用终点法检测甘油三脂及低密度脂蛋白胆固醇。结果冠心病组血清胆红素为（10.5±3.6μmol/l），健康对照组血清胆红素为（14.6±3.4μmol/l），冠心病组的胆红素、直接胆红素及间接胆红素较正常对照组降低显著有意义（P<0.05）。结论冠心病患者体内胆红素水平降低，造成氧化脂类增多，形成粥样斑块，是冠心病的重要致病因素之一。

氯高铁血红素对慢性肾功能衰竭大鼠的作用

氯高铁血红素(hemin)是血红素氧化酶1(HO-1)的诱导剂,它可通过诱导HO-1表达对多种肾病发挥保护作用;同时, 氯高铁血红素也是一种铁络合物,在治疗缺铁性贫血方面有着其他铁剂如葡萄糖酸亚铁(FG)等不可替代的优势[1].本实验以FG为对照,研究氯高铁血红素在慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠中的作用,探讨其可能的作用机制.

血红素氧合酶-1对大鼠复苏后心功能的影响及可能机制

目的 探讨血红素氧合酶-1对复苏后心功能的影响及可能机制.方法 采用窒息法制作大鼠心跳骤停心肺复苏( CPR)模型.实验动物分为4组:假手术组、CPR组、血晶素组(Hemin组)、血晶素+锌原卟啉组(Hemin+ ZnPP组).假手术组术后6、24 h两个观察时点,每时点6只鼠,各复苏组复苏后6、24 h两个观察时点,每时点8只鼠.各组记录血流动力学资料；蛋白免疫印迹法检测心肌组织HO-1蛋白水平；硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化法分别测定心肌组织匀浆丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性；免疫组化法检测心肌组织硝基酪氨酸蛋白表达.结果 (1)各复苏组复苏后平均动脉压(MAP)均显著低于复苏前(均P＜0.05),但组问比较差异无统计学意义.CPR组、Hemin+ ZnPP组复苏后各时相点dP/dt40、- dP/dt值均显著低于复苏前(均P＜0.05),Hemin组复苏前后dP/dt40值无显著性变化,- dP/dt仅复苏后0.5h和1h低于复苏前(3341.6±524.8和3711.4±502.4比4284.2±800.9,均P＜0.05),Hemin组复苏后各时相点dP/dt40、- dP/dt值均高于其他两组(均P＜0.05).(2)与假手术组比较,CPR组、Hemin组、Hemin+ZnPP组复苏后HO-1蛋白水平显著增高,SOD活性减低,MDA水平升高,心肌硝基硌氨酸蛋白表达明显增多(均P ＜0.05).但Hemin组HO-1蛋白水平、SOD活性高于CPR组和Hemin+ ZnPP组,MDA水平、硝基硌氨酸蛋白表达低于上述两组(均P ＜0.05),CPR组和Hemin+ ZnPP组之间上述指标差异无统计学意义.结论 HO-1可减轻大鼠心肺复苏中心肌氧化应激损伤,保护复苏后心功能.

软骨藻酸对人神经胶质瘤细胞的氧化损害及血红素氧化酶-1表达的诱导

目的探讨软骨藻酸(domoic acid)对人神经胶质瘤(H4)细胞的氧化损害及对血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白的诱导.方法对体外培养的H4细胞分别给予0.064、0.64、6.4μmol/L软骨藻酸,24 h后测定各剂量组与对照组细胞生存率、丙二醛(MDA)含量,并采用免疫组化和流式细胞术检测HO-1蛋白表达.结果在四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)实验中H4细胞生存率随软骨藻酸剂量增大而下降,呈明显的剂量依赖关系.各剂量组MDA含量与对照组差异均有显著性(P＜0.01),6.4 μmol/L组MDA含量与0.064μmoL/L组差异也有显著性(P＜0.01).免疫组化显示,对照组细胞胞浆HO-1弱阳性染色,0.064、0.64、6.4μmol/L组分别呈低、中、高密度阳性染色.流式细胞术显示各剂量组HO-1荧光强度与对照组差异均有显著性(P＜0.01),6.4μmol/L组与0.064μmol/L组差异也有显著性(P＜0.01).结论软骨藻酸对H4细胞具有细胞毒作用和氧化损害作用,并可能通过氧化损害间接诱导HO-1蛋白表达增多.

白藜芦醇诱导HO-1对酒精性肝细胞的保护作用

目的 白藜芦醇(resveratrol)是非黄酮类的多酚化合物,具有多种有益的生物学效应.本研究目的 观察白藜芦醇对酒精导致的人原代肝细胞损伤的保护作用及机制.方法 经体外灌流、分离培养人原代肝细胞.测定白藜芦醇20μmol/L对酒精致肝细胞LDH释放率的影响.人原代肝细胞给予不同受试物(100mmol/L酒精,20μmol/L白藜芦醇,25μmol/L Znpp9(锌原卟啉Ⅸ:zinc protoporphyrin-Ⅸ)24h,观察HO-1酶活性变化,孵育上清液AST,LDH释放水平,肝细胞内MDA,GSH含量变化.结果 白藜芦醇可显著升高酒精致肝细胞LDH释放率的EC50(从700mmol/L上升至1050mmol/L);白藜芦醇可使肝细胞HO-1酶活性明显增加,并可显著抑制酒精导致的肝细胞AST,LDH释放,降低肝细胞内MDA水平,提高GSH含量.但是HO-1抑制剂Znpp9却明显降低了白藜芦醇对酒精导致的肝细胞损伤的保护作用.结论 白藜芦醇对酒精导致的人肝细胞损伤具有保护作用,这种保护作用与其诱导的HO-1酶活性升高有关.

实验性肺血栓栓塞症血红素氧化酶的变化

目的 探讨肺血栓栓塞症(PTE)时肺动脉血红素氧化酶(HO)的表达变化,及其对肺动脉压力的影响.方法 23只健康成年雄性杂种家犬随机分为PTE 3 h组(A组)、PTE 8 h组(B组)、PTE 24 h组(C组)和对照组(D组).经右颈静脉置管注入自体血栓建立犬PTE模型,股静脉置入Swan-Ganz导管监测肺血流动力学变化.实验终点处死实验犬取肺动脉,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法检测HO-1的表达水平.结果 各实验组犬肺动脉平均压(PAMP)、肺动脉收缩压(PASP)和肺动脉舒张压(PADP)在栓塞成功后即刻均明显升高,与栓塞前比较差异有统计学意义(P均＜0.05);栓塞后1 h开始均明显下降(P均＜0.05),并呈下降趋势,约4～5 h后趋于稳定,栓塞8 h点与栓塞前相比仍有升高,但差异无统计学意义.RT-PCR和免疫组化检测结果显示,在D组肺动脉未见HO-1表达;栓塞后各实验组可见HO-1表达,且随着栓塞时间的延长,HO-1表达逐渐增多,以栓塞24 h表达量明显(P均＜0.05).结论 PTE后HO-1表达增加,同时升高的肺动脉压力下降,提示HO-1在 PTE时与肺血管舒张相关.

环氧化酶、血红素氧化酶以及泛素蛋白分解通路在人类脓毒症肌病中的作用

血红素氧化酶基因启动子多态性与慢性阻塞性肺疾病及胸部CT表现的关系

目的 探讨中国西南地区汉族人群血红素氧化酶(HOX)-1基因启动子多态性与慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性及胸部CT表现的关系.方法 应用微卫星片段分析法,分析HOX-1基因型在180例COPD吸烟者和150例健康吸烟者中的分布频率;然后对180例COPD患者通过胸部CT检查进行分型;后分析HOX-1基因型和COPD患者的胸部CT分型之间的关系.结果 根据HOX-1基因启动子(GT)n重复片段大小,将HOX-1等位基因分为三种类型:S等位基因(≤25个GT重复片段)、M等位基因(26～31个GT重复片段)和L等位基因(≥32个GT重复片段);再根据是否含有L等位基因,将HOX-1基因分为两类基因型,Ⅰ类:包含有L等位基因(S/L,M/L,L/L);Ⅱ类:不包含有L等位基因(S/S,S/M,M/M).研究发现:HOX-1基因型中Ⅰ类基因型在COPD吸烟者中的分布显著高于健康吸烟者(29.4%VS 18.7%,P=0.023,OR=1.8,95%CI 1.1～3.1),但是,携带不同HOX-1基因型(Ⅰ类和Ⅱ类)的两组COPD患者,比较其胸部CT表现分型差异无统计学意义.结论HOX-1基因遗传多态性在中国西南地区汉族人群中与COPD的易感性有关,而且,包含有HOX-1 Ⅰ类基因型的个体更易感COPD.但是,HOX-1基因多态性并不会影响COPD患者在胸部CT影像学上的表现分型.

左旋四氢巴马汀对脑缺血/再灌注大鼠脑组织血红素氧化酶-1及内源性一氧化碳的影响

目的:观察全脑缺血/再灌注大鼠全血碳氧血红蛋白(COHb)含量、脑组织血红素氧化酶-1(HO-1)活性的变化及左旋四氢巴马汀(L-THP)对其的影响.方法:77只SD大鼠随机分为假手术组(S组,n=7)、脑缺血/再灌注组(I组,n=35)及L-THP治疗组(T组,n=35).I组和T组建立大鼠全脑缺血/再灌注模型,分别于脑缺血/再灌注1、3、12、24和48 h各时间点检测脑组织匀浆HO-1活性、环磷酸鸟苷(cGMP)及血中COHb含量,并与S组比较.结果:①I组在脑缺血/再灌注后HO-1活性、COHb含量及cGMP水平均明显高于S组(P均<0.01).②T组的HO-1活性及COHb在脑缺血/再灌注1、12、24和48 h时均显著低于I组(P均<0.01),3 h时略低于I组,差异无显著性;HO-1活性在各时间点均高于S组(P均<0.01);COHb含量在24 h和48 h时略低于S组,但差异无显著性,其余各时间点均高于S组(P均<0.01);cGMP水平均显著低于I组(P均<0.01),但高于S组(P<0.01).③苏木素-伊红(HE)染色I组海马CA1区存活神经元数目在脑缺血/再灌注3 h后显著减少(P<0.01),应用L-THP后存活神经元数目明显高于I组(P<0.01).结论:L-THP可通过抑制HO-1活性使一氧化碳(CO)和cGMP水平下降,减少神经元丢失,提高存活神经元数目,减轻脑缺血/再灌注损伤.

应激状态下血红素氧合酶抑制血栓形成研究

目的探索血红素氧合酶(HO-1)对体内血栓形成的调节功能,并探求其可能机制.方法基因敲除技术培育出C57BL/6J HO-1杂合小鼠(HO-1+/-),在杂合小鼠子代中用PCR方法筛选出同代野生型小鼠(Wt)以及基因缺失型小鼠(HO-1-/-);用FeCl3刺激鼠颈动脉并记录栓塞时间;Western blot及化学法确定实验动物血小板HO-1、环状-磷酸鸟苷(cGMP)表达水平,并用常规方法检测血小板聚集率.结果Wt小鼠的平均栓塞时间为(15.56±1.25)min,HO-1-/-小鼠为(12.85±0.55)min,差异无统计学意义(n=14,P＞0.05).经氧化血红素预刺激后,Wt小鼠的栓塞时间[(16.25±1.20)min]与HO-1-/-小鼠[(11.96±0.98)min]相比显著延长(P＜0.05).同时,连续3 d的氧化血红素注射,可使Wt小鼠血小板中HO-1的蛋白表达提高约4倍;腺苷二磷酸(ADP)诱导的血小板聚集在Wt小鼠中出现显著降低;Wt小鼠与HO-1-/-小鼠血小板相比cGMP水平可被氧化血红素显著上调.结论在HO-1表达升高的应激条件下,血小板性血栓的形成受到抑制,此作用依赖于体内HO-1的存在,并与cGMP有关.

一氧化碳在某些呼吸系统疾病发生发展中的病理生理作用

血红素氧化酶(HO)催化产物之一CO,这一长期被认为是毒物和废物的小分子气体,是体内重要的细胞信使和神经递质.新近研究发现CO在神经系统、循环系统、免疫系统等多方面发挥调节作用,尤其在呼吸系统疾病中的作用日益被人们所关注.

一氧化碳生理作用研究进展

一氧化碳(CO)以往被认为是有毒气体.近年来,大量的研究证实CO与一氧化氮(NO)相类似,也是体内一种重要的细胞间信使,参与调节体内许多生理和病理生理过程,特别是在心、脑和血管系统中的作用已引起人们关注.

血清铁蛋白、氧化型低密度脂蛋白及胆红素在冠状动脉粥样硬化形成中相互作用的研究进展

冠状动脉粥样硬化是冠心病的病理基础,近来研究表明氧化型低密度脂蛋白是致冠状动脉粥样硬化的关键因素.在体内氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,Ox-LDL)主要由低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)在致氧化因素作用下形成的.研究表明铁离子是体内重要的致氧化因子,是启动氧化型低密度脂蛋白形成的重要因素.同时人们也注意到胆红素是一强有力的内源性抗氧化剂,能强烈抑制氧化型低密度脂蛋白表达.而胆红素在形成过程中伴随有铁离子的释放.笔者拟对铁与胆红素及氧化型低密度脂蛋白在冠状动脉粥样硬化形成中关系的研究进展做一综述.

一氧化碳与急性肺损伤的研究进展

血红素氧合酶(HO)-一氧化碳(CO)可调节机体炎症反应,对抗氧自由基损伤,舒张肺血管平滑肌,降低肺动脉高压,对急性肺损伤和其它肺疾病发挥重要的保护和调节作用.HO-CO诱导剂以及外源性应用HO-CO可能开辟急性肺损伤等疾病的防治新途径.

异丙酚对大鼠脑内血红素氧化酶2活性的影响

目的研究异丙酚对大鼠脑内血红素氧化酶2(HO-2)活性的影响.方法正常SD大鼠16只,随机分为两组,每组各8只,分别腹腔注射,注射生理盐水10mi@kg-1(对照组)和异丙酚100mg@kg-1(异丙酚组).待翻正反射消失后,迅速灌注,采用免疫组织化学方法观察大鼠脑内HO-2的分布并用计算机彩色图像分析仪计算各组HO-2阳性细胞数或阳性产物面积.结果与对照组比较,大鼠腹腔注射异丙酚100mg@kg-1能明显抑制大鼠端脑海马结构、脑干网状结构、小脑各核团、脑桥斜方体、前庭神经核和蜗神经核的HO-2活性(P＜0.01).结论异丙酚可能作用于中枢的HO-2,并抑制HO-2活性.异丙酚全麻作用的分子学机理可能与异丙酚抑制中枢HO-CO-cGMP信息途径有关,CO可能在异丙酚的全麻分子学机理中发挥作用.

内毒素血症下大鼠主、肺动脉血红素氧化酶-1的不同表达

感染性休克是一种临床上并非罕见的症候群,对于其发病机制已有很多研究,但仍未完全被阐明.本文旨在研究内毒素血症时大鼠主、肺动脉内血红素氧化酶-1(HO-1)的变化,以明确一氧化碳在感染性休克时体循环和肺循环的不同病生理改变中的作用.

氧化应激在大鼠液压冲击性脑损伤中的时程变化和意义

目的 观察大鼠液压冲击脑损伤活性氧族(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及血红素氧化酶1(HO-1)和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶1(NQO-1)表达变化,探讨氧化应激在大鼠液压冲击性脑损伤中的时程变化和意义.方法 成年雄性SD大鼠56只,制作液压冲击颅脑损伤模型,分别于术后1h、6h、12h、24h、3d、7d采用分光光度法及酶学法检测ROS生成、MDA含量以及SOD活性;用干湿重法、Western blot分别测定水肿脑组织含水量及HO-1和NQO-1蛋白表达.结果 与假手术组(SO组)比较,损伤组(TBI组)ROS于1h开始增加,6h急剧增加,12h达到峰值;SOD活性24h下降到低值,MDA于24h达到峰值;HO-1和NQO-1蛋白表达均于6h开始增高,24h达到高峰,3d后降低(P＜0.05).结论 氧化应激性脑损伤在大鼠颅脑液压冲击伤中起着重要作用,早期调控氧化应激状态有助于减轻继发性脑损伤.