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基质细胞衍生因子1α对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞与单核细胞粘附的影响
目的 观察基质细胞衍生因子1α对氧化型低密度脂蛋白诱导的单核细胞与内皮细胞粘附的影响.方法 逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法分别检测内皮细胞基质细胞衍生因子1α mRNA 和蛋白的表达,静态粘附实验观察氧化型低密度脂蛋白和基质细胞衍生因子1α抗体干预对内皮细胞与单核细胞粘附的影响.结果 基质细胞衍生因子1α在静息状态下的血管内皮细胞上几乎不表达,随着氧化型低密度脂蛋白浓度增加和处理时间延长,基质细胞衍生因子1α的mRNA和蛋白表达水平均明显上调,25 mg/L氧化型低密度脂蛋白处理48 h时,基质细胞衍生因子1α表达到达峰值.氧化型低密度脂蛋白浓度为1、5、25及125 mg/L时,每个视野粘附的单核细胞数分别为190±15、226±23、280±14、253±8,而正常对照组为104±10,差异有显著性意义(P＜0.05).终浓度为0.01、0.1和1 μg/L 基质细胞衍生因子1α抗体干预后,粘附的单核细胞数分别为202±17、142±6 和115±12,明显低于对照组的279±11 (P＜0.05).结论 基质细胞衍生因子1α参与了内皮细胞与单核细胞的粘附.
关键词： 病理学与病理生理学 内皮细胞 单核细胞 氧化型低密度脂蛋白 基质细胞衍生因子1α -
氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞表达基质细胞衍生因子1α的影响
目的 为探讨氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞上基质细胞衍生因子1α表达的影响.方法 原代培养的大鼠血管平滑肌细胞,与氧化型低密度脂蛋白共同孵育,用逆转录聚合酶链反应检测基质细胞衍生因子1α mRNA,免疫印迹检测其蛋白表达变化,观察氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞表达基质细胞衍生因子1α的剂量-时间效应.结果 原代培养的大鼠血管平滑肌细胞有基础水平的基质细胞衍生因子1α表达,且在0～50 mg/L范围内,基质细胞衍生因子1α表达量随氧化型低密度脂蛋白浓度增加而增加,50 mg/L可使基质细胞衍生因子1α上调约5倍;经50 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激0～48 h,其峰值在12 h,随后逐渐下降,但仍维持在基础水平的3倍左右.结论 氧化型低密度脂蛋白上调大鼠血管平滑肌细胞的基质细胞衍生因子1α的表达.
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脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响及其机制
目的 观察脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞分泌单核细胞趋化蛋白1的影响,并探讨其作用机制是否与细胞色素P450芳香酶的催化作用有关.方法 使用脂质体转染法将含有细胞色素P450芳香酶基因的质粒和空白对照质粒分别转染至体外培养的血管平滑肌细胞,24 h后给予氧化型低密度脂蛋白诱导及脱氢表雄酮刺激,采用逆转录聚合酶链反应、实时荧光定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法检测转染后各组细胞单核细胞趋化蛋白1的基因和蛋白表达水平.结果 与氧化型低密度脂蛋白刺激组比较,给予氧化型低密度脂蛋白和脱氢表雄酮后单核细胞趋化蛋白1的分泌明显降低(P＜0.05).转染含有细胞色素P450芳香酶基因的质粒组和空白对照质粒组单核细胞趋化蛋白1 的分泌差别不明显(P＞0.05).结论 脱氢表雄酮能抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1的分泌升高,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.而这一过程可能并不通过转化为雌雄激素而发挥,也许与其本身的生物学活性有关.
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普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1的表达
目的 观察普罗布考对氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1表达的影响.方法 用逆转录聚合酶链反应、免疫荧光分别检测ATP结合盒转运体A1 mRNA水平和蛋白的表达.结果 用氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)分别孵育细胞0、12、24及48 h,实验结果发现ATP结合盒转运体A1 mRNA水平呈时序上调;用50 μmol/L普罗布考预处理细胞4 h,再用氧化型低密度脂蛋白孵育48 h,普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)处理组与氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1 mRNA水平无明显差异,但免疫荧光检测发现普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1蛋白表达下调.结论 普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1蛋白的表达.
关键词： 药理学 普罗布考 ATP结合盒转运体A1 巨噬细胞 氧化型低密度脂蛋白 -
氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞小凹蛋白1表达的抑制作用及其与信号调节激酶的关系
目的 观察氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞小凹蛋白1表达的抑制作用及其与细胞外信号调节激酶活性的关系.方法 50 mg/L 氧化型低密度脂蛋白处理血管平滑肌细胞不同时间,或同时加入25 μmol/L细胞外信号调节激酶信号通路的特异性阻断剂,Western 印迹检测血管平滑肌细胞小凹蛋白1和细胞外信号调节激酶的变化.结果 50 mg/L氧化型低密度脂蛋白作用细胞24 h后小凹蛋白1的表达明显下降,细胞外信号调节激酶磷酸化活性显著增高,阻断氧化型低密度脂蛋白对细胞外信号调节激酶的激活可显著促进小凹蛋白1的表达.结论 血管平滑肌细胞源性泡沫细胞小凹蛋白1的表达下调与氧化型低密度脂蛋白激活细胞外信号调节激酶及其介导的信号传导密切相关.
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敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因对小鼠氧化型低密度脂蛋白组织分布和清除的影响
目的 应用清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠及其野生对照小鼠,观察在正常饮食和高脂饮食情况下,清道夫受体AⅠ/Ⅱ对小鼠氧化型低密度脂蛋白分布和清除的影响.方法 用Southern blot和免疫组织化学法鉴定实验小鼠清道夫受体AⅠ/Ⅱ DNA和蛋白的表达.将2月龄雄性野生对照小鼠和清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠各50只随机分为4组:清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠各38只,给予高脂饮食(常规饲料加15%油脂和1.25%胆固醇)8周,观察实验前后血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白A、载脂蛋白B及血肌酐等水平的变化;清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠各12只,高脂饮食3天后从尾静脉注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白,于10 min、1、3和6 h获取血液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、肠、脂肪和肌肉等标本,分别称取质量并用γ射线计数仪检测其放射性强度.结果 正常饮食下,清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠血脂水平接近;高脂饮食下两组小鼠血脂水平均明显升高,但清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠血浆低密度脂蛋白水平明显高于野生对照小鼠;清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠在注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白10 min后的清除率明显低于野生对照小鼠,注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白6 h后其主要分布于肝脏,在心脏和肾脏也有高分布;高脂饮食条件下,敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因对经尾静脉注射的125I标记的氧化型低密度脂蛋白在体内的分布不同于野生对照小鼠.结论 敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ后,小鼠脂质代谢的调节能力受到损伤,机体对血液中氧化型低密度脂蛋白的清除能力下降,组织细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取减少,血低密度脂蛋白水平升高.
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氧化型低密度脂蛋白及阿托伐他汀对培养的人脐静脉内皮细胞血管紧张素转化酶2表达的影响
目的 探讨氧化型低密度脂蛋白对人血管内皮细胞血管紧张素转化酶2表达的影响及阿托伐他汀的干预作用.方法 用正常人新鲜血浆制备氧化型低密度脂蛋白,人脐静脉内皮细胞株复苏、传代后取生长良好3-6代用于实验.分为空白对照组、不同浓度氧化型低密度脂蛋白组(终浓度分别为20、40及80 mg/L)、不同浓度阿托伐他汀组(1、5和10 μmol/L)、不同时间组(40 mg/L氧化型低密度脂蛋白和5μml/L阿托伐他汀分别刺激6、12和24 h及混合刺激组(5μmol/L阿托伐他汀+40 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激24 h).提取细胞总RNA及蛋白,逆转录聚合酶链反应检测血管紧张素转化酶2mRNA的表达,免疫印迹法检测血管紧张素转化酶2蛋白的表达.结果 氧化型低密度脂蛋白呈剂量和时间依赖性下调血管紧张素转化酶2 mRNA及蛋白的表达.与空白对照组比较,不同浓度氧化型低密度脂蛋白组血管紧张素转化酶2mRNA的表达分别降低为73%、51%和33%,蛋白的表达降低为81%、50%及32%,不同浓度组间比较差异亦有显著性(P＞0.01);氧化型低密度脂蛋白培养6、12和24 h时间组血管紧张素转化酶2mRNA与对照组比较分别减少为66%、55%和50%,蛋白的表达与对照组比较降低为63%、53%及49%(P＞0.01).不同浓度阿托伐他汀及其培养不同时间组血管紧张素转化酶2 mRNA和蛋白的表达与对照组比较差异无统计学意义.阿托伐他汀能抑制氧化型低密度脂蛋白对血管紧张素转化酶2 mRNA和蛋白表达的下调,mRNA表达增加为1.63倍,蛋白表达增加为1.60倍(P＞0.01).结论 氧化型低密度脂蛋白呈剂量和时间依赖性下调血管紧张素转化酶2 mRNA和蛋白的表达,阿托伐他汀能抑制这种作用.
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阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响
目的 观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响.方法 用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白与不同浓度的阿托伐他汀(0、0.312、1.25和5 μmol/L)共同孵育THP-1巨噬细胞24 h,以空白组作对照,用液体闪烁计数法检测细胞[3H]胆固醇流入情况,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,逆转录聚合酶链反应与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达.结果 阿托伐他汀使THP-1巨噬细胞胆固醇流入减少,对照组胆固醇流入为35.90%±2.36%,0、0.312、1.25和5 μmol/L阿托伐他汀组胆固醇流入分别为47.10%±3.18%、41.20%±2.88%、35.10%±2.35%和28.30%±1.98%;阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取,油红O染色可见氧化型低密度脂蛋白+阿托伐他汀组细胞内脂滴较氧化型低密度脂蛋白组明显减少,且脂滴颗粒体积变小;高效液相色谱分析发现,对照组细胞总胆固醇含量为78.24±11.35 mg/g,0、0.312、1.25和5 μmol/L阿托伐他汀组细胞总胆固醇含量分别为123.13±15.92 mg/g、115.36±13.18 mg/g、107.52±12.05 mg/g和98.03±10.24 mg/g.阿托伐他汀使氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达下调.结论 阿托伐他汀引起氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36表达下调,并使脂质蓄积减少.
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氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮祖细胞增殖、凋亡及bcl-2表达的影响
目的 探讨氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮祖细胞增殖、凋亡及bcl-2表达的影响.方法 密度梯度离心法获取人脐静脉血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度氧化型低密度脂蛋白(分别为5、10及20 mg/L)干预48 h.MTT法检测氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测氧化型低密度脂蛋白对细胞凋亡率的影响,逆转录聚台酶链反应检测bcl-2 mRNA的表达,免疫细胞化学法检测bcl-2蛋白的表达.结果 氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性抑制内皮祖细胞增殖,诱导内皮祖细胞凋亡(P＜0.01);基础状态下内皮祖细胞表达bcl-2 mRNA及蛋白,氧化型低密度脂蛋白处理能抑制其表达,并存在量效关系(P＜0.05).结论 氧化型低密度脂蛋白通过下调bcl-2的表达诱导内皮祖细胞凋亡、抑制内皮祖细胞增殖,这可能影响血管内皮的修复及新生血管的形成.
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基质细胞衍生因子1α-CXCR4趋化THP-1细胞迁移及氧化型低密度脂蛋白的影响
目的 探讨基质细胞衍生因子1α对单核细胞趋化作用、氧化型低密度脂蛋白对基质细胞衍生因子1α趋化单核细胞的影响及其对THP-1细胞表达CXCR4的影响.方法 用Transwell迁移实验检测基质细胞衍生因子1α对单核细胞的趋化作用,逆转录聚合酶链反应检测CXCR4 Mrna的表达,Western blot检测CXCR4蛋白的表达,并观察氧化型低密度脂蛋白对THP-1细胞CXCR4表达的剂量和时间效应.结果 基质细胞衍生因子1α呈浓度依赖性诱导单核细胞迁移,加入CXCR4抗体可明显抑制这种作用.经不同浓度氧化型低密度脂蛋白处理48 h后的THP-1细胞再用10 μg/L基质细胞衍生因子1α进行趋化时,氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性地增加单核细胞的迁移,50 mg/L氧化型低密度脂蛋白组迁移的细胞数是对照组的11倍.THP-1细胞有基础水平的CXCR4表达,50 mg/L氧化型低密度脂蛋白可使CXCR4的表达上调4～5倍.CXCR4上调早在6 h内发生,12 h达峰值.结论 基质细胞衍生因子1α-CXCR4参与趋化单核细胞迁移,其作用被氧化型低密度脂蛋白加强;氧化型低密度脂蛋白上调CXCR4表达.
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基质细胞衍生因子1α对大鼠血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的影响
目的 探讨基质细胞衍生因子1α对大鼠血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的影响.方法 原代培养的大鼠血管平滑肌细胞与50 mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育48 h,将单核细胞与平滑肌细胞共孵育后洗脱检测粘附功能,并用基质细胞衍生因子1α抗体阻断.结果 经氧化型低密度脂蛋白处理的血管平滑肌细胞基质细胞衍生因子1α上调5倍,单核细胞粘附增加29倍,但可被基质细胞衍生因子1α单抗所阻断.结论 基质细胞衍生因子1α参与单核细胞与大鼠血管平滑肌细胞的粘附过程.
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脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞中血管细胞粘附分子1表达的影响
目的 探讨脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞分泌血管细胞粘附分子1的影响.方法 用脱氢表雄酮(5 μmol/L)作用于氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)诱导的体外培养的SD大鼠血管平滑肌细胞,采用免疫细胞化学、免疫蛋白印迹法、逆转录聚合酶链反应检测其血管细胞粘附分子1蛋白及mRNA的表达.结果 当细胞培养基中加入氧化型低密度脂蛋白后,血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子1的分泌明显升高(P＜0.05),而同时加入脱氢表雄酮可使血管细胞粘附分子1的分泌降低(P＜0.05).结论 脱氢表雄酮能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子1的分泌,而且可能是脱氢表雄酮抗动脉粥样硬化的机制之一.
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非诺贝特部分阻断氧化型低密度脂蛋白诱导的人单核细胞源树突状细胞的免疫成熟
目的研究过氧化物酶体增殖物激活型受体α激动剂非诺贝特对氧化型低密度脂蛋白诱导的人单核细胞源树突状细胞的免疫成熟的影响.方法采用免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞,经含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素4的Cellgro培养5天,使其分化为未成熟树突状细胞.人单核细胞来源的树突状细胞经非诺贝特预干预后,加入氧化型低密度脂蛋白再干预,流式细胞术检测树突状细胞表型(CD1a、CD40、CD86和HLA-DR),FITC-右旋糖苷检测树突状细胞吞噬功能,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清细胞因子(白细胞介素12、白细胞介素10和肿瘤坏死因子α)浓度.结果与氧化型低密度脂蛋白组比较,非诺贝特组CD1a、CD40、CD86和HLA-DR分别为46.50%±11.39%比68.80%±5.89%(P＜0.05)、56.76%±11.16%比72.97%±10.38%(P＜0.05)、65.74%±9.94%比79.82%±22.07%(P＞0.05)和60.72%±11.85%比83.24%±6.60%(P＜0.05);非诺贝特部分抑制氧化型低密度脂蛋白减弱树突状细胞吞噬功能(83.12%±3.10%比57.78%±23.28%,P＜0.05).与氧化型低密度脂蛋白组比较,非诺贝特组白细胞介素12、肿瘤坏死因子α和白细胞介素10分别为64.9±18.5 ng/L比106.7±20.7 ng/L(P＜0.05)、26.0±8.8 ng/L比50.3±9.9 ng/L(P＜0.05)和33.4±13.4 ng/L比66.1±2.6 ng/L(P＜0.05).结论过氧化物酶体增殖物激活型受体α激动剂非诺贝特可以部分阻断氧化型低密度脂蛋白诱导的树突状细胞的免疫成熟,这可能是它抗动脉粥样硬化的一个重要机制.
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辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达
目的观察辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的作用.方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机分组:对照组、低密度脂蛋白(25 mg/L)组、氧化型低密度脂蛋白(25、50和100 mg/L)组和氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)+辛伐他汀(1和10 μmol/L)组,通过逆转录聚合酶链反应和Western blot蛋白印迹分析检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,并在相差显微镜下观察细胞形态变化.结果氧化型低密度脂蛋白上调血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.05).辛伐他汀明显抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.05),且高浓度组较低浓度组的抑制作用更强(P<0.05).结论氧化型低密度脂蛋白可能通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体导致内皮功能障碍,辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达是其非调脂抗动脉粥样硬化机制之一.
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非对称二甲基精氨酸促进大鼠主动脉氧化型低密度脂蛋白受体表达
目的 观察非对称二甲基精氨酸对大鼠主动脉氧化型低密度脂蛋白受体表达的影响,探讨其在动脉粥样硬化中的作用.方法 健康成年Wistar大鼠34只随机分为四组:①对照组(n=7)正常饲料喂养,正常饮水.②高脂饲料组(n=9)用高脂饲料喂养,正常饮水.③非对称二甲基精氨酸(简称甲基精氨酸)组(n=9)用高脂饲料喂养,饮水中按体重加入非对称二甲基精氨酸[0.2 mg/(kg·d)].④L精氨酸组(n=9)用高脂饲料喂养,饮水中按体重加入非对称二甲基精氨酸[0.2 mg/(kg·d)]和L精氨酸[12 mg/(kg·d)].18周后麻醉大鼠,取主动脉,以RT-PCR和 Western blotting检测主动脉氧化型低密度脂蛋白受体 mRNA和蛋白表达.结果 ①甲基精氨酸组氧化型低密度脂蛋白受体mRNA表达量(1.608±0.114)较对照组(0.363±0.027)和高脂饲料组(0.480±0.065)增加(P均＜0.001),L精氨酸组氧化型低密度脂蛋白受体mRNA表达量(0.902±0.037)较甲基精氨酸组降低(P＜0.01);②甲基精氨酸组氧化型低密度脂蛋白受体蛋白表达量(0.662±0.063)较对照组(0.111±0.022)和高脂饲料组(0.251±0.004)增加(P均＜0.001),L精氨酸组(0.364±0.117)较甲基精氨酸组氧化型低密度脂蛋白受体蛋白表达降低(P＜0.05).结论 非对称二甲基精氨酸促进大鼠主动脉氧化型低密度脂蛋白受体基因和蛋白表达,可能与非对称二甲基精氨酸促进动脉粥样硬化有关.
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脱氢表雄酮通过抑制血管细胞粘附分子1的表达发挥抗动脉粥样硬化作用
目的 研究脱氢表雄酮能否通过抑制血管细胞粘附分子1的表达发挥抗动脉粥样硬化作用以及维甲酸受体激动剂对这一作用有无影响.方法 高脂饮食构建兔动脉粥样硬化模型并加脱氢表雄酮干预,10周后检测各组兔血清脂质水平及主动脉斑块情况.采用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应方法观察脱氢表雄酮对高脂喂饲兔主动脉壁血管细胞粘附分子1表达的影响.体外培养THP-1单核细胞,采用免疫细胞化学及逆转录聚合酶链反应方法观察不同浓度脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1细胞表达血管细胞粘附分子1的影响.结果 脱氢表雄酮干预的高脂喂饲兔主动脉内膜厚度及粥样斑块面积相对动脉粥样硬化模型组兔分别降低59%和48%;同时兔主动脉血管细胞粘附分子1蛋白的表达在脱氢表雄酮干预后(0.1920±0.0034)较高脂喂饲兔(0.3846±0.0198)显著减弱,血管细胞粘附分子1 mRNA的表达(0.6856±0.0286)与高脂喂饲兔(1.0893±0.1089)相比也明显减少.体外培养的THP-1细胞中,加入不同浓度的脱氢表雄酮均可降低氧化型低密度脂蛋白诱导细胞的血管细胞粘附分子1表达,在脱氢表雄酮浓度为5 μmol/L时THP-1细胞中血管细胞粘附分子1 mRNA的表达(0.2988±0.0312)较氧化型低密度脂蛋白诱导组(0.6236±0.0237)下降明显.加入全反式维甲酸对脱氢表雄酮的作用没有显著影响(P＞0.05).结论 脱氢表雄酮能够抑制高脂喂饲兔主动脉壁及氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1细胞内血管细胞粘附分子1的表达,这可能是其发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一,而补充维甲酸受体激动剂对这一过程中血管细胞粘附分子1的表达没有明显影响.
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蛋白激酶C抑制剂对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体功能的影响
目的观察细胞内蛋白磷酸化水平对清道夫受体功能的影响.方法用蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素处理小鼠腹腔巨噬细胞,利用蛋白质印迹试验和放射自显影方法观察药物对细胞表面受体表达的影响,并分别测定对照组和处理组细胞对碘标记的氧化型低密度脂蛋白的结合、降解以及细胞内脂质蓄积的程度.结果 0.4 μmol/L蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素可以促进细胞结合碘标记的氧化型低密度脂蛋白,增加细胞表面受体的表达,但抑制细胞降解碘标记的氧化型低密度脂蛋白,同时抑制细胞内胆固醇酯的蓄积.结论以上表明清道夫受体功能与细胞内蛋白质磷酸化水平密切相关.
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非诺贝特对兔脂肪细胞摄取及降解氧化型低密度脂蛋白及CD36表达的影响
为了解非诺贝特对高胆固醇血症兔脂肪细胞摄取及降解氧化型低密度脂蛋白的影响并探讨其可能机制,将10只新西兰大白兔给予高胆固醇饲料饲养8周后,随机分为高胆固醇组和非诺贝特治疗组,非诺贝特组在饲以高胆固醇饲料的基础上给予非诺贝特(每天30mg/kg),共4周.另设普通饮食对照组5只.实验结束后,取皮下脂肪组织行脂肪细胞培养,放射配基法测定脂肪细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取及降解,半定量逆转录-聚合酶链反应测定脂肪细胞CD36及过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达.结果发现,3组兔脂肪细胞摄取及降解125Ⅰ-氧化型低密度脂蛋白均呈现一浓度依赖性饱和型曲线,高胆固醇组脂肪细胞摄取及降解125Ⅰ-氧化型低密度脂蛋白明显低于对照组;非诺贝特组脂肪细胞摄取及降解125Ⅰ-氧化型低密度脂蛋白高于高胆固醇组,但仍低于对照组,3组间比较差异有显著性(P<0.05).逆转录聚合酶链反应发现,高胆固醇组过氧化体增殖物激活型受体γ及CD36mRNA表达降低,非诺贝特组CD36mRNA表达与对照组相似.以上提示,非诺贝特能改善高胆固醇血症兔脂肪细胞摄取及降解125Ⅰ-氧化型低密度脂蛋白,并上调CD36mRNA的表达.
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氧化型低密度脂蛋白经血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径诱导血管内皮细胞损伤
探讨氧化型低密度脂蛋白致血管内皮细胞损伤的作用,并从血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的途径探讨损伤作用的机制.用125I标记的氧化型低密度脂蛋白进行放射性配基结合实验及配基竞争性抑制实验检测培养的人脐静脉内皮细胞中存在的特异性氧化型低密度脂蛋白受体, 2,4 - 二硝基笨肼法测定乳酸脱氢酶活性,台盼兰染色、相差显微镜下观察细胞的形态学变化并计数细胞的存活率.结果发现,人脐静脉内皮细胞膜上存在与氧化型低密度脂蛋白高亲和力的结合位点,Scatchard 分析Kd为38.4±18.8 mg/L、Bmax为181.5±55.5 ng/106cells.氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞作用24 h,随着氧化型低密度脂蛋白剂量的增加,不仅显著增加人脐静脉内皮细胞释放乳酸脱氢酶的量,而且使人脐静脉内皮细胞的存活率下降,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1受体阻滞剂聚肌苷酸和爱兰苔胶可以阻断氧化型低密度脂蛋白的上述损伤作用.结果提示,血管内皮细胞表达氧化型低密度脂蛋白受体血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1,氧化型低密度脂蛋白诱导对血管内皮细胞的损伤作用可能是通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的受体途径.
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健脾祛痰化瘀方对氧化型低密度脂蛋白诱导血管细胞信号分子钙离子和蛋白激酶C表达的影响
为了探讨健脾祛痰化瘀方在抗氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化中对信号转导分子钙离子和蛋白激酶C的影响,分别以健脾祛痰化瘀方-沥水调脂胶囊含药血清(浓度分别为5%、10%和20%)、氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理人脐静脉内皮细胞和人脐动脉平滑肌细胞,以流式细胞仪检测两种细胞胞质游离钙离子浓度,以液体闪烁仪检测平滑肌细胞胞膜蛋白激酶C活性.结果发现,沥水调脂胶囊含药血清对氧化型低密度脂蛋白引起的内皮细胞、平滑肌细胞胞质游离钙离子浓度升高及平滑肌细胞胞膜蛋白激酶C活性升高有明显的抑制作用,其中20%含药血清作用为明显.结果提示,健脾祛痰化瘀方可能通过调节钙离子、蛋白激酶C 两种信号传递分子的变化起抗氧化作用,进而抑制内皮细胞凋亡及平滑肌细胞增殖,达到阻止动脉粥样硬化发生的作用.
