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Caveolin-1在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达
目的 观察Caveolin-1在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化,进而分析Caveolin-1在巨噬源性泡沫细胞形成过程中的作用. 方法 采用75 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育不同时间,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化,建立巨噬细胞荷脂化模型;Western-blot检测Caveolin-1蛋白的表达改变. 结果 75 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育48 h后,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值上升至42.3%±5.9%,符合荷脂细胞特征.Caveolin-1的蛋白表达较0 h组明显减弱. 结论 ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞荷脂化过程中,Caveolin-1的表达下调.
关键词： Caveolin-1 巨噬细胞 氧化型低密度脂蛋白 -
褪黑素对ox-LDL所致巨噬细胞TNF-α释放及核因子κB活性的影响
目的 探讨褪黑素对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)所致的巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)释放及核因子κB活性的影响.方法 以ox-LDL、ox-LDL加不同浓度的褪黑素处理RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用酶联免疫吸附测定细胞上清液中TNF-α的浓度,免疫印迹法检测p65/核因子κB的核移位,凝胶电泳迁移率分析核因子κB与DNA的结合活性.结果 褪黑素能够显著减少ox-LDL所致的巨噬细胞TNF-α的释放,且p65/核因子κB的核移位减少,核因子κB与DNA的结合活性降低.结论 褪黑素减少ox-LDL所致的巨噬细胞TNF-α的释放与其调节核因子κB的活性有关.
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氧化型低密度脂蛋白对心脏瓣膜成肌纤维细胞的增殖及骨相关蛋白表达的影响
目的 通过观察猪主动脉瓣成肌纤维细胞在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作用下时,细胞的增殖变化以及是否表达骨相关蛋白,探讨心脏瓣膜钙化的病理机制.方法 以原代培养的猪主动脉瓣成肌纤维细胞作为研究对象,用与心脏瓣膜钙化有关的病理因素ox-LDL处理细胞,将细胞随机分为4组:对照组(Ctrl)、氧化型低密度脂蛋白组(25μ g/ml ox-LDL)、氧化型低密度脂蛋白+阿托伐他汀组(25μg/ml ox-LDL+50 μg/ml Ator)、阿托伐他汀组(50μ g/ml Ator).采用流式细胞学技术测定各组细胞在24、48和72h的增殖变化,利用Westernblot和Real-time PCR检测72h各组细胞的α-平滑肌蛋白(α-SMA)活性以及骨形成蛋白2(BMP2)、碱性磷酸酶(ALP)的基因表达;了解细胞是否异常激活以及是否向成骨细胞样表型转化.结果 ox-LDL分别处理成肌纤维细胞24、48和72h后,细胞显示出时间依赖性的增殖加速(P＜0.05);ox-LDL能使成肌纤维细胞α-SMA的表达明显增加(P＜0.05)而成为活性细胞;骨相关蛋白BMP2、ALP的蛋白和mRNA在对照组和Ator组仅有低水平表达,而在ox-LDL组表达显著升高(P＜0.01);Ator对ox-LDL的这种病理性影响可以起到一定的抑制作用(P＜0.05).结论 ox-LDL促使心脏瓣膜成肌纤维细胞激活、分化、增殖以及向成骨细胞样表型转化,进而导致心脏瓣膜的钙化.阿托伐他汀可能通过阻遏成肌纤维细胞的增殖起到对心脏瓣膜钙化的防治作用.
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LOX-1介导苯扎贝特对ox-LDL所引起PAI-1表达的影响
目的 探讨苯扎贝特对ox-LDL所诱导HUVECs表达PAI-1的影响及是否通过LOX-1介导.方法 体外培养HUVECs,RT-PCR检测PAI-1 mRNA表达,ELISA法观察PAI-1蛋白含量表达.结果 ox-LDL组,PAI-1 mKNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),poly(Ⅰ)组,PAI-1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05);不同浓度苯扎贝特组,PAI-1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05),组间比较差异有统计学意义,呈浓度依赖关系(P<0.05);Poly(Ⅰ)+100μmol/L苯扎贝特组,与未加poly(Ⅰ)组比较,PAI-1mR-NA和蛋白表达均明显减少(P<0.05).结论 LOX-1介导了ox-LDL所诱导HUVECs PAI-1的表达;苯扎贝特可以下调ox-LDL所诱导的HUVECs PAI-1的表达,呈浓度依赖关系,部分机制可能通过LOX-1介导.
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非诺贝特对氧化型低密度脂蛋白诱导的脂肪细胞肿瘤坏死因子-α分泌的影响
目的探讨调脂药物非诺贝特对兔脂肪细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响及可能机制.方法取新西兰兔皮下脂肪组织行脂肪细胞原代培养,分别给予不同浓度的氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)及非诺贝特刺激.采用酶联免疫吸附法检测脂肪细胞培养液中TNF-α蛋白水平,半定量逆转录多聚酶链式反应测定脂肪细胞TNF-α和PPARαmRNA的表达.结果较低剂量的OxLDL刺激脂肪细胞TNF-α分泌,呈剂量依赖性;不同浓度的非诺贝特呈剂量依赖性降低OxLDL诱导的脂肪细胞TNF-α分泌及mRNA表达,而相应的PPARαmRNA的表达则无显著变化.结论非诺贝特可显著抑制OxLDL诱导的兔脂肪细胞TNF-α分泌,这一作用可能有利于胰岛素抵抗的改善.
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氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞应激活化蛋白激酶活性及凋亡的影响
目的观察氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)对血管平滑肌细胞凋亡及应激活化蛋白激酶(SAPK)活性的影响.方法采用3个时间水平(24、 48、 72 h)、4个剂量水平(0、 50、 100、 200 μg/ml)的两因素析因设计观察Ox-LDL对兔主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡影响的时间、剂量效应关系;Ox-LDL对兔主动脉血管平滑肌细胞SAPK活性影响.结果 Ox-LDL诱导VSMCs凋亡随时间和剂量升高而不断增加,呈现一定的时间、剂量效应关系(P＜0.01); Ox-LDL可引起各血管平滑肌细胞SAPK活性升高.结论 Ox-LDL诱导血管平滑肌细胞凋亡与其作用浓度、时间相关;SAPK信号通路可能在Ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞凋亡过程中起重要的信号转导作用.
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IL-8对OX-LDL诱导的RAW264.7株作用的研究
目的 探讨白细胞介素8(IL-8)对OX-LDL诱导的小鼠单核巨噬细胞264.7细胞株(RAW264.7)的作用.方法 以IL-8作用于OX-LDL诱导RAW264.7细胞株,48 h后收集细胞和上清培养液,分别用流式细胞仪检测细胞表位CD14、CD34、CD86及其早、晚期凋亡率；用RT-PCR法检测细胞内IL-8 mRNA的表达水平；用Western bot检测IL-8 mRNA表达蛋白的量；用ELISA方法检测上清液IL-1β、IL-10的量.结果 与对照组相比,实验组的CD14、CD34表位表达及晚期凋亡明显增多(P＜0.05),而对CD86、早期凋亡影响不明显(P＞0.05),IL-8 mRNA及其表达的蛋白量明显升高,上清培养液中IL-1β增多(P＜0.05),IL-10减少(P＜0.05).结论 IL-8致动脉粥样硬化(AS)作用可能是部分通过上调单核巨噬细胞表面CD14、CD34表位表达,促进IL-8 mRNA及其表达蛋白的量,促进IL-1β、抑制IL-10的分泌,并促进其晚期凋亡,参与AS的炎症反应.
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冠心病患者氧化型低密度脂蛋白及同型半胱氨酸水平研究
目的：观察血浆氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL-C）和同型半胱氨酸（HCY）与冠状动脉狭窄程度间的关系，探讨其作为冠脉病变严重程度无创性预测因子的可能性。方法：将86例疑似冠心病患者根据冠脉造影结果分为冠心病组及非冠心病组，冠心病组又分为单支病变组、双支病变组和多支病变组，分析血浆OX-LDL-C、HCY与冠脉病变严重程度的关系，检测诊断冠心病的ROC曲线，并确定OX-LDL-C与HCY诊断冠心病的临界值。结果：冠心病组血浆OX-LDL-C、HCY水平均高于非冠心病组（P<0.05）；血浆OX-LDL-C、HCY水平随病变支数的增加而升高，且差异均有统计学意义（P<0.05）；OX-LDL-C临界值为527.5μg/L，HCY临界值为13.5μmol/L，其诊断冠心病有较高的敏感度及特异度。结论：血浆OX-LDL-C和HCY水平对诊断冠心病具有较高价值，可用于冠心病的临床早期危险分层，有利于及时识别高危冠心病患者，降低冠心病的病死率。
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茶黄素对Ox-LDL诱导单核-内皮细胞粘附作用影响的研究
采用硫酸铜诱导低密度脂蛋白(LDL)氧化,细胞粘附实验,细胞ELISA方法测定内皮细胞间粘附因子(ICAM-1)和血管内皮细胞粘附因子(VCAM-1)表达水平,研究了茶黄素(TFs)对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)损伤血管内皮细胞导致单核细胞粘附的影响.结果显示,茶黄素(TFs)能显著抑制由Ox-LDL诱导的单核细胞-血管内皮细胞粘附效应以及细胞间粘附因子(ICAM-1)和血管内皮细胞粘附因子(VCAM-1)的表达,并呈现浓度剂量正相关性.提示,TFs抑制ICAM-1和VCAM-1的表达是其抑制单核-内皮细胞粘附和抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
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OX-LDL诱导内皮细胞条件培养液对内皮细胞VCAM-1和 ICAM-1的影响
目的探讨受损内皮细胞的自分泌和旁分泌对内皮细胞自身的影响. 方法利用正常内皮细胞条件培养液和用氧化型低密度脂蛋白( OX- LDL)诱导内皮细胞的条件培养液分别作用于正常内皮细胞和受损内皮细胞,用酶联免疫细胞化学法检测血管内皮细胞黏附分子- 1( VCAM- 1)和细胞间黏附分子- 1( ICAM- 1)表达的变化. 结果正常内皮细胞的条件培养液和 OX- LDL诱导的内皮细胞条件培养液对正常内皮细胞 VCAM- 1和 ICAM- 1的表达作用不明显( P >0.05) ,而对受损内皮细胞 VCAM- 1和 ICAM- 1的表达具有明显的下调作用( P< 0.01). 结论正常和受到氧化损伤的内皮细胞的自分泌和旁分泌作用对正常内皮细胞黏附分子没有影响,而对受损内皮细胞黏附分子有下调作用,说明内皮细胞可通过下调黏附分子的表达来实现自身的抗损伤作用.
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氢分子通过激活自噬抑制C/EBP同源蛋白 介导的巨噬细胞凋亡
目的:研究氢分子对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制.方法:体外培养鼠源RAW264.7巨噬细胞,处理前更换为饱和含氢培养基,分别给予3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;5 mmol/L)和雷帕霉素(rapamycin,Rap;3μmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养24 h.分别采用MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况,试剂盒测定培养基中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,Western blot法检测自噬标志分子beclin-1和内质网应激相关促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达的变化,激光共聚焦显微镜观测细胞内微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达变化.结果:氢分子显著抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞活力降低、LDH漏出增加、细胞凋亡及CHOP表达上调;ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应,表现为beclin-1表达上调,LC3颗粒化聚集,而氢分子可进一步促进ox-LDL对细胞自噬的诱导作用,且氢分子的这种促进作用可被自噬抑制剂3-MA拮抗,而被自噬诱导剂Rap增强(P<0.01).另外,氢分子对ox-LDL所致的巨噬细胞凋亡、细胞活力降低及CHOP上调的抑制作用也可被3-MA拮抗,而被Rap促进.在体外培养的人源THP-1巨噬细胞中也观察到类似的结果,即氢分子不仅可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡和CHOP上调,也可使beclin-1表达进一步上调(P<0.01).结论:氢分子可通过下调CHOP表达抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,其上游机制可能是通过激活自噬实现的.
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TLR4／NK－κB信号介导氧化型低密度脂蛋白诱导的人血管平滑肌细胞钙化
目的：探讨Toll样受体4（TLR4）在氧化型低密度脂蛋白（Ox－LDL）诱导的血管平滑肌细胞钙化中的作用。方法：用Ox－LDL诱导体外培养的人血管平滑肌细胞钙化，real－time PCR和Western blot检测TLR4，血管平滑肌细胞收缩型蛋白SMA和SM22α，以及成骨样分化相关蛋白Msx2、osterix和BMP2的表达水平，细胞免疫荧光检测细胞核内NK－κB的表达水平。结果：Ox－LDL可促进TLR4的表达上调以及激活其下游分子NK－κB向细胞核内转移。 TLR4 siRNA转染细胞可减轻Ox－LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化，抑制血管平滑肌细胞成骨样分化相关蛋白Msx2、osterix和BMP2的表达水平，升高收缩型蛋白SMA和SM22α的表达水平，阻断NK－κB核内转移。另外，NK－κB抑制剂PDTC可抑制Ox－LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化。结论：TLR4通过激活NK－κB促进Ox－LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化，提示TLR4可作为干预血管钙化的潜在靶点。
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氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞炎症因子表达
目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)对培养的人巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(macrophagemigrationinhibitory factor,MIF)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)mRNA水平的影响.
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CaSR在oxLDL诱导的A7 r5细胞增殖及迁移中的作用
目的：探讨钙敏感受体（calcium－sensing receptor，CaSR）在氧化型低密度脂蛋白（oxidized low－density lipoprotein，oxLDL）诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（A7r5细胞）增殖及迁移中的作用及信号机制。方法：BrdU掺入法检测细胞增殖；伤口愈合实验及Transwell迁移分析检测细胞迁移情况；Western blot方法检测CaSR、PCNA、ERK MAPK通路及PI3K／AKT通路的蛋白表达。结果：（1）小剂量（10 mg／L）oxLDL 作用A7r5细胞24 h促进细胞的增殖和迁移；（2）oxLDL增加A7r5细胞的CaSR表达；（3）CaSR 拮抗剂NPS2390抑制了oxLDL 的作用，而激动剂GdCl3进一步增强了oxLDL 的作用；（4）oxLDL 可促进p－AKT、p－ERK蛋白表达；（5）PI3K／AKT通路抑制剂LY294002、ERK MAPK通路抑制剂PD98059能够抑制oxLDL 诱导的细胞增殖和迁移效应；（6）NPS2390抑制了oxLDL诱导的p－AKT和p－ERK蛋白表达，而GdCl3作用相反。结论：（1）oxLDL诱导A7r5细胞增殖及迁移效应；（2）CaSR参与oxLDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用；（3）CaSR 通过活化PI3K／AKT通路及ERK MAPK 信号通路参与oxLDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用。
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氧化应激与动脉粥样硬化
氧化应激以及在氧化应激过程中产生的活性氧与多种疾病的发生有关,包括高血压、糖尿病、衰老、癌症和心血管疾病如动脉粥样硬化.本文阐述了氧化应激与动脉粥样硬化之间的关系.氧化应激不仅促进低密度脂蛋白的氧化修饰和脂质过氧化,而且可以诱导血管基因表达的改变和促进细胞增殖,促进动脉粥样硬化的发生.近年有新的研究认为,轻度的氧化应激对机体可能产生有益作用,这为进一步明确动脉粥样硬化的发病机制提供了新的见解.
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氧化型低密度脂蛋白受体的研究进展
氧化修饰的低密度脂蛋白对于动脉粥样硬化早期泡沫细胞的形成起重要作用.细胞表面存在氧化型低密度脂蛋白受体,且种类繁多,本文就近年来有关该受体的种类、性质和功能的研究作一阐述,以进一步了解动脉粥样硬化的发生机制,探索防治途径.
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氧化型低密度脂蛋白和同型半胱氨酸与冠状动脉病变的相关性研究
目的 通过研究冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血浆氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-densitylipoprotein cholesterol,OX-LDL-C)和同型半胱氨酸(homoeysteine,HCY)浓度与Gensini评分的相关性,探讨其对冠状动脉病变严重程度的预测价值.方法 选择疑似冠心病患者86例,据冠状动脉造影结果分为冠心病组(67例)及对照组(19例),冠心病组根据Gensini评分分为轻度亚组(23例)、中度亚组(22例)和重度亚组(22例).分析各组血浆OX-LDL-C和HCY浓度与Gensini评分的相关性.结果 (1)冠心病组与对照组血浆OX-LDL-C、HCY浓度比较,冠心病组较高,差异有统计学意义(P＜0.05).(2) Gensini评分三个亚组间血浆OX-LDL-C和HCY浓度比较,差异有统计学意义(P＜0.05);随着冠状动脉狭窄程度加重,血浆OX-LDL-C、HCY浓度有增高趋势,差异有统计学意义(P＜0.05).(3) Gensini评分与血浆OX-LDL-C(r=0.805,P＜0.01)、HCY (r=0.700,P＜0.01)浓度呈正相关,且OX-LDL-C与Gensini评分相关性较HCY高;血浆OX-LDL-C与HCY浓度呈正相关(r=0.698,P＜0.01).结论 血浆OX-LDL-C和HCY浓度与Gensini评分有关,血浆OX-LDL-C与HCY具有相关一致性,联合检测血浆OX-LDL-C和HCY浓度可更好地了解病情、指导治疗及判断预后.
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氧化型低密度脂蛋白对血管内皮细胞ICAM-1 mRNA表达的影响
目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人血管内皮细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响.方法采用血管内皮细胞株EAhy 926培养,观察150 mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用在不同时程(0～36 h)及不同终浓度(0～300mg/L)的氧化型低密度脂蛋白作用24 h对细胞间粘附分子-1 mRNA表达的影响.RT-PCR测定ICAM-1基因表达水平.结果氧化型低密度脂蛋白可诱导培养血管内皮细胞表达细胞间粘附分子-1 mRNA,并呈时间和剂量依赖性增加.结论ox-LDL可以促进EAhv 926细胞间粘附分子-1表达,ICAM-1可能参与氧化型低密度脂蛋白所致的动脉粥样硬化进程.
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一种新的2型糖尿病血管并发症细胞研究模型:葡萄糖、胰岛素、低密度脂蛋白联合诱导血管内皮细胞损伤的研究
目的观察不同浓度的葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对内皮细胞的协同损伤作用,建立一种2型糖尿病血管并发症体外内皮细胞损伤模型.方法采用L9(34)正交设计方法,将生长融合状的血管内皮细胞(ECV-304)随机分为9组,分别施加不同浓度的葡萄糖、胰岛素和ox-LDL条件液,培养24 h后观测细胞活性、细胞一般形态学和超微结构改变以及细胞凋亡情况.结果显微镜下见模型组细胞回缩变圆,轮廓分明,细胞内出现粗糙颗粒样变化;线粒体肿胀,嵴丢失,内质网结构模糊、肿胀,呈小泡状;琼脂糖凝胶电泳可见模型组有明显的细胞凋亡典型的阶梯状区带电泳图谱(DNA Ladder).结论三因素对细胞有协同损伤作用,可以诱导细胞发生凋亡和细胞器结构发生变化,含100 mg/L ox-LDL、20 mmol/L葡萄糖和100 mU/L胰岛素的混合条件培养液对细胞的损伤显著,可作为糖尿病血管并发症体外内皮细胞损伤模型的合适诱导条件液.
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PAS三联疗法对急性脑梗死患者血清相关蛋白及颈动脉易损斑块的影响
目的 探讨普罗布考+阿司匹林+阿托伐他汀(PAS)三联疗法对急性脑梗死患者血清氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、血清妊娠相关蛋白A(PAPP-A)及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)水平的影响,观察其对颈动脉易损斑块的消退作用. 方法 选择武汉市第五人民医院神经内科自2007年9月至2010年7月收治的135例急性脑梗死患者为研究对象,根据颈动脉超声检查结果分为颈动脉稳定斑块组(n=45)和颈动脉易损斑块组(n=90).易损斑块组抽血检查后按随机数字表法分为阿托伐他汀+阿司匹林(AS)组45例(阿司匹林100 mg/d、阿托伐他汀20mg/d,口服)和PAS组45例(阿司匹林1 00 mg/d、阿托伐他汀20 mg/d、普罗布考0.25/次,2次/d,口服).比较治疗前和治疗4周后各组患者血清ox-LDL、PAPP-A和MMP-3水平,观察治疗前及治疗12月后颈动脉内中膜厚度(IMT)、斑块面积及斑块回声变化. 结果 治疗前,易损斑块组中两亚组(AS组和PAS组)血清ox-LDL、PAPP-A和MMP-3水平均明显高于稳定斑块组,差异有统计学意义(P＜0.05),但两亚组间该3项指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗4周后,PAS组患者血清ox-LDL、PAPP-A和MMP-3水平均明显低于AS组和稳定斑块组,距治疗前下降幅度均大于AS组和对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗12月后,易损斑块组中两亚组(AS组和PAS组)IMT值和斑块面积均较治疗前减少,且PAS组该2项指标低于AS组,差异均有统计学意义(P＜0.05)；PAS组低回声斑块数量较AS组明显减少,斑块消失数量增加,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 PAS三联疗法具有更强的抗氧化降脂作用,可逆转和稳定斑块.
