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通脉降浊煎剂含药血清对泡沫细胞胆固醇流出率的影响
目的 研究通脉降浊煎剂含药血清(TDMS)对泡沫细胞胆固醇流出率的影响及可能机制.方法 采用50 mg/L ox-LDL诱导巨噬细胞48 h,建立巨噬细胞源泡沫细胞模型,添加TDMS,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞),ox-LDL组(50 mg/L ox-LDL),β-环糊精(β-CD)组(50 mg/L ox-LDL +10 mmol/L β-CD),正常血清(CS)组(50 mg/L ox-LDL+等体积正常血清),TDMS组(50 mg/L ox-LDL +5％ TDMS).检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和细胞胆固醇流出率;采用Western blot方法检测细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1)蛋白表达;Real-time PCR方法检测细胞内ABCA1、miR-33a、miR-33bm RNA表达.结果 与对照组比较,ox-LDL组细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和胆固醇流出率均增加(P＜0.05,P＜0.01),ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.01),miR-33a和miR-33b mRNA表达水平均升高(P＜0.01).与ox-LDL组比较,β-CD组与TDMS组细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量均下降,胆固醇流出率增大(P＜ 0.05,P＜0.01),ABCA1 mRNA和蛋白表达水平升高(P＜0.01),细胞内miR-33a和miR-33b mRNA表达水平均降低(P＜0.01).结论 TDMS通过调节miR-33a/b和ABCA1表达,从而提高胆固醇流出率,降低泡沫细胞内胆固醇含量.
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苦参碱对人单核细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1及胆固醇酯的影响
目的 观察苦参碱对人单核细胞胆固醇和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响.方法 用TBARS法检测细胞内MDA,油红O染色法检测泡沫细胞的形成,荧光分光光度法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量,RT-PCR和Western blot检测ABCA1 mRNA与蛋白的表达.结果 单核细胞经佛波脂(PMA)及ox-LDL共同孵育后,细胞内积聚的总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯及脂质过氧化产物均明显增多(P＜0.05),有大量泡沫细胞形成,而ABCA1蛋白、mRNA水平明显减少(P＜0.05);苦参碱干预组显著缓解上述变化,细胞内胆固醇酯减少,ABCA1 mRNA、蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 苦参碱可能通过增强ABCA1的表达和降低细胞内胆固醇聚积而发挥抗动脉粥样硬化的作用.
关键词： 苦参碱 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 胆固醇 氧化型低密度脂蛋白 -
膜转运蛋白三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达调控与信号传导
动脉硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,CVD)是常见的死亡原因.高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)主要通过转运动脉巨噬细胞多余的胆固醇到肝脏代谢来预防CVD.这个途径的第1步称为胆固醇逆转运,由整合膜蛋白——三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)介导.ABCA1转运细胞的胆固醇和磷脂到乏脂载脂蛋白(apolipoprotein A-Ⅰ,ApoA-Ⅰ)和其他载脂蛋白,为细胞卸载多余胆固醇提供有效途径.ABCA1的功能可以在转录和转录后水平上调节.此外,ABCA1介导的脂质外流和抗炎反应均涉及了ApoA-Ⅰ和ABCA1相互作用后的信号级联放大效应[1].本文总结了目前已知的信号传导途径调节ABCA1功能的分子机制,以及它们潜在的治疗靶点.
关键词： 冠状动脉疾病 脂代谢障碍 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 -
钠氢交换体-1敲降对缺氧巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1水平及胆固醇外排的影响
目的 探讨钠氢交换体-1(NHE1)基因敲降对缺氧状态下巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1)蛋白水平及胆固醇外流的影响.方法 感染表达特异靶向NHE1基因短发夹RNA慢病毒(siNHE1)或表达乱码RNA慢病毒(siNC)的RAW264.7细胞缺氧24 h,实时定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)检测NHE1 mRNA及蛋白表达水平,用SNARF-1、Fluo-4 NW及Suc-ILVY-aminoluciferin分别检测NHE1活性、细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及钙蛋白酶(calpain)活性;免疫印迹检测缺氧状态下ABCA1蛋白水平,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量及3H-胆固醇法检测胆固醇外流.结果 缺氧相对于常氧上调NHE1 mRNA、蛋白水平表达及活性2.48倍、1.28倍和61.96％ (P＜0.05),升高[Ca2+]i及calpain活性4.51倍和2.41倍(P＜0.05),而siNHE1降低缺氧细胞NHE1mRNA、蛋白表达及活性84.95％、60.75％和66.44％ (P＜0.05),降低[Ca2+]i及calpain活性59.23％和54.66％(P＜0.05).缺氧使ABCA1蛋白水平降低61.67％(P＜0.05),siNHE1使缺氧细胞ABCA1蛋白水平升高56.52％.缺氧使细胞内总胆固醇及胆固醇酯含量增加74.57％和101.81％(均P＜0.05),而siNHE1降低总胆固醇及胆固醇酯34.24％及49.66％(均P＜0.05).缺氧降低胆固醇外流34.79％,而缺氧条件下siNHE1使胆固醇外流率升高37.80％.结论 NHE1可能通过[Ca2+]i/calpain通路在缺氧诱导ABCA1蛋白水平降低及胆固醇外流异常发挥重要作用.
关键词： 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 钠氢交换体-1 胆固醇 -
有氧运动对高脂饲料喂养大鼠血脂及骨骼肌PPAα、ABCA1及ApoAI mRNA表达的影响
目的:探讨有氧运动对高脂饮食大鼠血脂及骨骼肌过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPARα)、三磷酸腺苷结合金转运体A1(ABCA1)、载脂蛋白AI(ApoAI)基因表达的影响.方法:将40只SD雄性大鼠分为4组:正常饮食组(N)、正常运动组(NE)、高脂饮食组(H)和高脂运动组(HE).H组和HE组大鼠采用高脂饲料喂养.NE组和HE组大鼠进行跑台运动,速度为15m/min,每天60min,每周5d,持续8周.实验结束后,采用酶法、酶修饰法和清除法测试各组大鼠血清甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)与高密度脂蛋白(HDL-C);采用实时定量PCR测定骨骼肌PPARα、ABCA1、ApoAI mRNA表达.结果:(1)与N组比较,H组TG、TC、LDL-C水平显著上升,而HDL-C水平显著下降;HE组TG含量显著低于H组,HDL-C水平显著高于H组.HE组与H组相比,血清TC、LDL-C水平无显著性差异.(2)HE组大鼠PPARα、ABCA1、ApoAI mRNA的表达较N组显著增加;H组PPARα、ABCA1、ApoAI mRNA表达与N组相比显著降低;HE组ABCA1、ApoAI mRNA的表达较H组显著提高,而PPARα mRNA的表达与H组比较无显著差异.结论:(1)高脂饮食可以导致血脂水平异常,并使骨骼肌PPARα、ABCA1、ApoAI mRNA表达显著下降;(2)运动可以一定程度改善高脂饮食导致的血脂异常;运动可上调高脂饮食大鼠骨骼肌ABCA1和ApoAI mRNA表达.PPARα在该通路中可能不是唯一的调节机制.
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三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白第二跨膜结构域缺失突变体的构建及其抗砷性研究
目的 检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白第2跨膜结构域(the second transmembrane domain,TMD2)中关键的抗砷结构域.方法 采用重叠区扩增基因拼接法构建三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因TMD2的一系列缺失突变体,分别转染至HeLa细胞,激光共聚焦观察其定位,Cell Counting Kit-8检测48 h急性砷中毒后生存率的变化,原子荧光吸收光谱法检测细胞内的总砷含量.结果 激光共聚焦证实各突变体的编码蛋白均定位在HeLa细胞的细胞膜上.CCK-8结果显示,转染胞外第4、5环,胞内第4、5环缺失突变体的HeLa细胞IC50分别为33.18、32.84、33.45、34.29 μmol·L-1,与转染野生型三磷酸腺苷结合盒转运体A1质粒的HeLa细胞(IC50为33.96 μmol·L-1)无显著差异,均高于空载体转染对照组(IC50为19.01μmol·L-1).转染胞外第6环缺失突变体HeLa细胞的IC50为19.95 μmol·L-1,与空载体对照组无显著差异,显著低于野生型三磷酸腺苷结合盒转运体A1质粒转染组.原子荧光分光光度法结果显示,转染胞外第6环缺失三磷酸腺苷结合盒转运体A1的HeLa细胞内砷含量与转染空载体接近,而转染其他突变体的结果与转染野生型三磷酸腺苷结合盒转运体A1的结果基本一致.结论 成功构建了5个三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白第2跨膜结构域的缺失突变体,且其表达的蛋白仍然正确定位于HeLa细胞的细胞膜上.突变体(除胞外第6环外)仍然具有一定的抗砷性,提示三磷酸腺苷结合盒转运体A1胞外第6环可能是关键抗砷结构域.
关键词： 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 突变体 重叠区扩增基因拼接法 抗砷性 第2跨膜结构域 -
应激性肾上腺素与动脉粥样硬化相关机制研究
目的观察心理应激时肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞脂质转运相关基因三磷酸腺苷综合盒转运体A1(ABCA1)、小凹蛋白(Caveolin-1)与细胞因子转化生长因子(TGF-β1) mRNA表达的影响,探讨应激性肾上腺素在动脉粥样硬化中的作用.方法不同浓度肾上腺素(1 pmol/L-1 μmol/L)处理THP-1源性巨噬细胞24 h,运用逆转录多聚酶链反应检测其ABCA1、Caveolin-1与TGF-β1 mRNA表达.结果 1 pmol/L-10 nmol/L的肾上腺素对受试基因mRNA的表达与相应对照组比较其差异无显著性(P＞0.05).而100 nmol/L及1 μmol/L的肾上腺素下调TGF-β1和ABCA1 mRNA水平,与各自对照组比较其差异有显著性(P＜0.05);但100 nmol/L及1 μmol/L的肾上腺素对Caveolin-1mRNA的表达无明显影响,与对照组比较其差异无显著性(P＞0.05).结论肾上腺素下调THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与ABCA1 mRNA水平,不影响Caveolin-1 mRNA表达.
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大豆异黄酮对动脉硬化小鼠胆固醇外排作用的影响
目的 观察大豆异黄酮(SIF)对动脉硬化小鼠胆固醇外排作用的影响,揭示SIF降脂及抗动脉硬化的作用靶标和相关机制,为进一步探索(SIF)的功能和动脉硬化的防治新措施提供依据.方法 C57BL/6J小鼠30只,随机分为3组,每组10只.正常对照组饲以正常合成饲料;模型对照组和大豆异黄酮组均饲以高脂饲料,后者再以大豆异黄酮灌胃,实验周期16周.观察大豆异黄酮干预对小鼠主动脉形态结构、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达和血清胆固醇水平的影响.结果 与模型对照组比较,大豆异黄酮组小鼠主动脉内皮未出现明显增厚,脂质沉积和泡沫细胞也明显减少;主动脉ABCA1蛋白表达显著增强(P＜0.05),接近正常对照组水平;血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇分别为(2.31±0.19)和(1.65 ±0.19) mmol/L,明显低于模型对照组水平[(2.59±0.22)和(2.12±0.14) mmol/L,P＜0.05];血清高密度脂蛋白胆固醇为(1.19±0.16) mmol/L,明显高于模型对照组[(0.74±0.19) mmol/L,P＜O.01].结论 大豆异黄酮通过诱导ABCA1表达,增强组织胆固醇的逆转运,改善脂质代谢状况,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用.
关键词： 大豆异黄酮 动脉粥样硬化 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 胆固醇外排 -
ABCA1基因功能性SNP对糖尿病患者胰岛β细胞功能的调控作用
目的 探究ABCA1基因功能性SNP对糖尿病患者胰岛β细胞功能的调控作用.方法 选取我院2015年12月-2017年4月收治的糖尿病患者332例,按胆固醇情况分为对照组和实验组,检测各生化指标并进行DNA提取和PCR测定,比较生化指标差异及其相关性,比较各功能性SNP基因频率.结果 TG、TC、HDL-C、INS、CP是与胰岛β细胞功能有关的独立影响因素,多态性位点rs2020927基因频率在对照组和实验组之间存在显著差异(P<0.05),而等位基因位点在两组之间无明显差异(P>0.05).结论 ABCA1基因多态性位点rs2020927可能与糖尿病患者胰岛β细胞功能缺陷有关.
关键词： 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 基因多态性 糖尿病 胰岛β细胞 功能调节 -
二氢杨梅素对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响
目的：观察二氢杨梅素（DMY）对鼠源巨噬细胞性泡沫细胞胆固醇流出的影响并探讨其可能机制。方法用50 mg/L的氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）孵育鼠源性巨噬细胞RAW264.7经48 h诱导细胞泡沫化。将泡沫细胞分为对照组（只加RPMI 1640的培养基培养）和DMY1~4组（分别用10、20、40和80μmol/L DMY处理），培养24 h。采用[3H]标记的胆固醇检测细胞胆固醇的流出率，高效液相色谱测定细胞内游离胆固醇（FC）、胆固醇酯（CE）和总胆固醇（TC）的水平，Western blot检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达。结果与对照组比较，20、40和80μmol/L DMY组细胞的胆固醇流出率均显著增加，细胞内FC、TC和CE水平及CE/TC的比值均显著减少，ABCA1的表达显著上调，均呈剂量依赖性（均P<0.05）。与对照组比较，DMY（10μmol/L）组细胞胆固醇流出率，细胞内FC、TC和CE水平，ABCA1的表达差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 DMY促进了鼠源巨噬细胞性泡沫细胞胆固醇流出，其机制可能与上调泡沫细胞中ABCA1的表达有关。
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中药黄蛭口服液对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响
目的:通过观察中药黄蛭口服液对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表述的影响,探讨中药黄蛭口服液对动脉粥样硬化的影响.方法:采用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度.运用逆转录多聚酶链反应检测ABCA1 mRNA的表述.结果: ox-LDL能够引起THP-1细胞ABCA1水平的上调;相对于阴性对照组中药黄蛭口服液能明显提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1荧光强度以及ABCA1 mRNA的表达.结论:研究显示中药黄蛭口服液能显著上调THP-1细胞ABCA1的水平.
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三磷酸腺苷结合盒转运体A1在转基因小鼠中的作用
1999年人们发现Tangier病病人缺乏三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)基因[1～3], Tangier病以血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低、组织巨噬细胞内胆固醇聚积和心血管疾病事件增加为特征[4, 5].此后,许多实验室为进一步了解ABCA1的功能作了大量的工作.研究发现ABCA1促进胆固醇逆转运的第一步,即细胞内胆固醇和磷脂流出到载脂蛋白接受体[6, 7].排除细胞内多余胆固醇对防止巨噬细胞内胆固醇聚积和泡沫细胞形成起着非常重要的作用[8].ABCA1的基因表达可以在转录和转录后水平调节[9～12].对缺乏ABCA1基因的人和小鼠的研究发现ABCA1对血浆HDL水平起着重要作用,并可能有助于防止动脉粥样硬化发生[13].目前人们认为ABCA1是防治低HDL综合征和心血管疾病的重要干预靶点.
关键词： 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 胆固醇流出 高密度脂蛋白 转基因 小鼠 -
三磷酸腺苷结合盒转运体A1在动脉粥样硬化发病学中的作用
三磷酸腺苷结合盒转运体(ATP binding cassette transporter,ABC)超家族目前已发现有6个家族分别为A、B、C、D、E、F,共48个成员,其中A家族12个成员[1].尽管人ABCA1基因在1994年就已经克隆获得,但对其功能的认识直到1999年才得到突破.ABCA1是一种整合膜蛋白,它以ATP为能源,促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出.
关键词： 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 胆固醇流出 动脉粥样硬化 -
子痫前期患者血清中ABCA1的表达及其对内皮细胞损伤的影响
目的:探讨子痫前期患者外周静脉血清中三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1)蛋白表达的特点,阐明ABCA1对内皮细胞损伤的影响及可能的机制.方法:选取同期住院、年龄、孕周无明显差异的子痫前期患者40例(按病情轻重分为轻度、重度组)及正常妊娠者20名,采用ELISA试剂盒定量检测3组研究对象外周静脉血清中ABCA1及氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)表达水平的差异.原代分离并培养上述3组研究对象脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用荧光标记的牛血清白蛋白(BSA)检测内皮细胞的单层屏障功能;采用MTT法检测内皮细胞的增殖能力;采用硝酸还原酶法检测内皮细胞的一氧化氮(NO)合成能力;计算OX-LDL/ABCA1比值,并进行相关性分析.结果:与正常妊娠组比较,子痫前期组患者外周静脉血清中ABCA1蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而OX-LDL表达水平及OX-LDL/ABCA1比值明显升高(P＜0.05); ABCA1与OX-LDL表达水平呈明显负相关关系(r=-0.681,P＜0.05).与正常妊娠组比较,子痫前期组患者通过单层内皮细胞的BSA水平明显升高(P＜0.05),内皮细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);内皮细胞分泌NO水平明显降低(P＜0.05).且病情越严重,上述改变越明显.子痫前期组患者血清中OX-LDL/ABCA1比值与通过内皮细胞的BSA水平呈正相关关系(r=0.791,P＜0.05),与内皮细胞的增殖水平呈负相关关系(r=-0.812,P＜0.05),与内皮细胞中NO水平也呈负相关关系(r=-0.635,P＜0.05).结论:子痫前期患者血清中ABCA1蛋白表达水平明显下降,引起氧化应激,OX-LDL和ABCA1表达失衡,这与全身血管内皮细胞的损伤密切相关,可能是参与子痫前期发生发展的重要机制之一.
关键词： 子痫前期 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 氧化应激 氧化低密度脂蛋白 脐静脉内皮细胞 -
冠心康对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠PPARγ-LXRα-ABCA1信号通路的影响
目的:观察中药复方冠心康对载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除(ApoE-/-)动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)小鼠三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ATP-binding cassettetransporter Al,ABCAl)通路的影响.方法:70只ApoE-/-小鼠用高脂饲料喂养建立小鼠AS模型.14只C57BL/6 J小鼠为正常对照组,给予普通饲料.70只ApoE-/-小鼠造模成功后随机分为5组,即模型组、高剂量冠心康组(生药浓度为3.456 g/mL)、中剂量冠心康组(1.728 g/mL)、低剂量冠心康组(0.864 g/mL)和西药辛伐他汀组[3mg/(kg·d)].每只小鼠灌胃0.5 mL,每天1次.连续灌胃8周后取材,分离肝脏及主动脉.运用蛋白质印迹法检测各组小鼠过氧化物酶体增殖物激活型受体Υ(peroxisome proliferator-aetivated receptor Υ,PPARΥ)、肝X受体α(liver X receptor α,LXRα)和ABCA1蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组小鼠主动脉、肝脏PPARΥ、LXRα和ABCAl mRNA的表达.结果:与C57BL/6 J小鼠比较,ApoE-/-小鼠的主动脉、肝脏的PPARΥ、LXRα、ABCAl mRNA的表达明显增高；与模型组小鼠比较,高、中剂量冠心康与辛伐他汀在不同程度上下调了主动脉、肝脏的PPARΥ、LXRα、ABCAl mRNA的表达(P<0.05),而以高剂量冠心康的作用为突出.低剂量组无明显改变(P＞0.05).与C57BL/6 J小鼠比较,ApoE-/-小鼠的主动脉、肝脏的PPARΥ、LXRα、ABCA1蛋白的表达明显增高；与模型组小鼠比较,各用药组主动脉、肝脏的PPARΥ、LXRα、ABCA1蛋白的表达量下降(P<0.05),而以冠心康高剂量组作用为突出.结论:PPARΥ-LXRα-ABCA1通路在ApoE-/-小鼠脂质代谢紊乱、炎症反应方面扮演重要角色.复方冠心康能改善ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化过程中的脂质代谢紊乱,抑制炎症反应的进展,可能与调控ApoE-/-小鼠的主动脉、肝脏PPARΥ、LXRα、ABCAl mRNA及蛋白的表达有关.
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小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响
目的 观察不同浓度小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 佛波酯(PMA)刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞后经乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)诱导泡沫化,建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型.根据小檗碱干预与否及干预浓度将泡沫细胞分为空白对照组和小檗碱(5～20 μmol/L)干预组.细胞经分组处理24 h后,流式细胞仪检测AcLDL聚集量;酶法检测胆固醇和乙酰甘油含量;闪烁计数法检测各组胆固醇流出率,同时分析过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制剂GW9662预处理对胆固醇流出率的影响(以吡格列酮作为阳性对照);RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1) mRNA表达.结果 与空白对照组比较,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞内AcLDL聚集量及胆固醇和乙酰甘油含量均显著减少(P＜0.01),而胆固醇流出率上升(P＜0.01),并呈现一定的量效关系.GW9662预处理后,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞的胆固醇流出率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞LXRα和ABCA1 mRNA表达均高于空白对照组.结论 小檗碱可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇的流出量,其作用机制可能与激活PPARγ途径,增加LXRα和ABCA1 mRNA表达有关.
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三七皂苷通过PPARγ调控SIRT1介导的狼疮肾炎小鼠脾淋巴细胞激素耐药及脂代谢影响的研究
[目的]观察三七皂苷(Panax notoginseng saponin,PNS)对激素耐药狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)小鼠脾淋巴细胞过氧化物酶增殖体活化受体γ(peroxidase proliferator activated receptor gamma,PPARγ)、沉默信息调节因子相关酶1(silent information regulation factor related enzyme 1,SIRT1)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (adenosine triphosphate binding cassette transporter A1,ABCA1)表达的影响,探索PNS改善激素耐药和脂代谢紊乱的双重作用,为运用活血化瘀中药提高难治性LN临床疗效提供科学依据.[方法]采用密度梯度法分离NZB/WF1小鼠的脾淋巴细胞,用小剂量甲基强的松龙诱导细胞产生激素耐药,将诱导后的细胞分为模型组、PPARγy质粒转染组、PPARγsiRNA+PNS组和PNS组,并以未诱导耐药的NZB/WF1小鼠脾淋巴细胞作为对照组,各组细胞培养72h后以Real-time PCR检测各组淋巴细胞PPARγy和SIRT1 mRNA表达,Western blot检测PPARγ和SIRT1蛋白表达,荧光分光光度法检测细胞内胆固醇酯含量,流式细胞术检测ABCA1蛋白表达.[结果](1)上调PPARγ能抑制SIRT1高表达,模型组PPARγ mRNA和蛋白表达水平均低于对照组,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组(P ＜0.05);通过质粒转染上调PPARγ水平后,PPARγy质粒转染组的SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均低于模型组(P＜0.05);(2)PNS组PPARγ表达高于模型组,SIRT1表达则减低(P＜0.05).尽管PNS组PPARγymRNA表达水平低于PPARγy质粒转染组,但两组SIRT1 mRNA表达水平无统计学差异(P＞0.05);与模型组比较,PPARγ siRNA+PNS组的SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均下降(P＜0.05).(3)PNS具有调节细胞内脂代谢紊乱作用,模型组细胞内胆固醇酯含量低于对照组(P＜0.05);PNS组细胞内胆固醇酯含量高于对照组,ABCA1蛋白表达则低于对照组(P＜0.05).[结论](1)激素耐药的LN小鼠脾淋巴细胞内存在脂代谢紊乱.(2)PNS具有逆转激素耐药和调节细胞内脂代谢紊乱的双重效应.
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三磷酸腺苷结合盒转运体A1介导胆固醇流出主要信号转导通路
动脉粥样硬化是心肌梗死等心血管疾病的主要病理生理基础，巨噬细胞内胆固醇代谢障碍及血管壁炎症反应是动脉粥样硬化的重要发病机制［1］。三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）能促进巨噬细胞内胆固醇流出，将胆固醇脂转运到肝脏，进行再循环或以胆酸的形式排泄，参与胆固醇逆转运（RCT），从而清除组织内过量的胆固醇。因此，AB-CA1被称为 RCT 的守门者。ABCA1相关信号转导通路不仅在 RCT 中起到了重要作用，而且在对抗动脉粥样硬化的炎症反应中也有一定作用［2］。
关键词： 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 胆固醇逆转运 动脉粥样硬化 信号转导通路 -
ABCA1：肿瘤治疗新靶点
三磷酸腺苷结合盒转运体 A1（ABCA1）是三磷酸结合盒转运体超家族的重要成员之一，在胆固醇逆向转运、胆固醇代谢以及高密度脂蛋白（HDL）代谢中起着极其重要的调节作用。ABCA1基因突变会诱导 Tangier 疾病和家族型 HDL 缺乏。近年来研究表明 ABCA1介导的胆固醇流出功能具有抗肿瘤活性，ABCA1有望成为肿瘤治疗新靶点。
关键词： 肿瘤 胆固醇 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 -
IL-10对TNF-α诱导的泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的抑制作用
目的:观察白介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的干预作用.方法:THP-1单核细胞经诱导转化为巨噬细胞源性泡沫细胞后随机分为4组:对照组,培养液中不加任何其他物质;TNF-α组,培养液中加10μg/L TNF-α;IL-10组,培养液中加10μg/L IL-10;IL-10+TNF-α组,培养液中加10μg/L IL-10预先孵育2 h后,再加10μg/L TNF-α.采用RT-PCR和Western-Blot检测各组0 h、6 h、12 h、24 h、48 h ABCA1 mRNA和蛋白表达.结果:TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达呈时间依赖性降低(F=782.94,F=768.12,P均＜0.05).IL-10组ABCA1 mRNA表达在24 h和48 h有轻微增加(P＜0.05),但ABCA1蛋白表达在各时间点无明显变化.IL-10+TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达也呈时间依赖性降低(F=697.23,F=749.64,P均＜0.05),但同TNF-α组相比,其下降程度有所减轻(P＜0.05).结论:IL-10可部分抑制TNF-α所引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的下调.
