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慢性神经痛大鼠脊髓缝隙连接蛋白43基因表达变化的实验研究
目的:研究慢性神经痛大鼠脊髓缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)基因表达的变化.方法:18只成年SD大鼠随机分为两组(n=9),分别接受右侧坐骨神经结扎手术(CCI组)和假手术(Sham组).手术前、后观察大鼠疼痛行为学并测定右后肢热刺激抬脚潜伏期(PWTL)、电刺激抬脚阈值(PWET)的变化,于术后14天取大鼠L4/5右侧脊髓,以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照基因,采用RT-PCR半定量分析CCI组和Sham组Cx43表达的差异.结果:CCI组大鼠表现为行走步态异常,与Sham组相比CCI组术后5～14天疼痛阈值明显降低(P＜0.01).Sham组Cx43扩增产物量极少,而CCI组L4/5 Cx43扩增产物量约为Sham组的3倍.结论:慢性神经痛大鼠脊髓Cx43基因表达显著增加,提示脊髓缝隙连接可能在慢性病理性痛过程中发挥重要的作用.
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大肠癌淋巴结微转移检测的研究进展
大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其在我国的发病率和死亡率有逐年上升的趋势.随着大肠癌根治术及辅助治疗手段的不断改进,总体预后有一定改善,但接受根治术的患者5年内仍有20％-40％死于肿瘤的复发及转移,尤其是淋巴结转移.淋巴结转移是以淋巴结微转移为基础的.因此,预测和诊断淋巴结微转移对患者的预后和治疗具有十分重要的意义.随着分子生物技术的发展,尤其是逆转录多聚酶链反应技术的成熟,使淋巴结微转移的检测已成为目前研究的热点.
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奥曲肽对SGC-7901胃癌细胞中Fas,FasL及P53表达的影响
目的:探讨奥曲肽(OCT)对胃癌细胞SGC-7901中Fas,FasL,P53,P21,P27和C-Myc表达的影响.方法:流式细胞术和RT-PCR法分别用于检测经OCT(1×10-7 mol/L)处理前后胃癌细胞SGC-7901中Fas,FasL,P53,P21,P27,c-Myc阳性癌百分率、mRNA表达和蛋白表达及细胞周期G0/G1、S、G2/M的变化.结果:胃癌细胞SGC-7901经OCT诱导6、12、24和48 h垢,Fas和FasL mRNA表达均明显增加,P53 mRNA表达则显著减少,而P21,P27和c-Myc mRNA表达均无明显变化;胃癌细胞SGC-7901经OCT诱导12 h后,Fas和FasL蛋白相对表达强度也显著增加,P53蛋白相对表达强度则明显降低(5.5±0.3 vs 3.2±0.1,5.1±0.3 vs 4.5±0.1.3.3±0.2 vs 4.9±0.3,P＜0.05或0.01),而P21,P27和c-Myc蛋白相对表达强度均无明显改变.细胞周期G0/G1、S、G2/M在OCT处理前后的变化并不明显.结论:OCT能上调SGC-7901胃癌细胞中Fas和FasL表达,下调突变型p53表达,是其诱导凋亡作用的重要机制之一.
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醛固酮合成酶基因CYP11B2在肝星状细胞中的表达
目的研究表明,血管、心肌和大脑等肾上腺外组织能合成醛固酮,醛固酮是肌成纤维细胞和有丝分裂的强刺激因子,肝脏局部合成的醛固酮对肝纤维化可能起重要的作用.本实验意在研究醛固酮合成酶基因-CYP11B2在肝组织中的表达材料与方法取Wistar大鼠,异硫氰酸胍法提取肝组织中总RNA,一步法行RT-PCR,原位杂交检测CYP11B2的表达结果 RT-PCR及原位杂交显示CYP11B2的表达定位于肝星状细胞之胞质.结论肝星状细胞可以表达醛固酮合成酶基因-CYP11B2.基金基目:本课题受国家自然科学基金资助,No 39870331;参加第六届全国消化病会议,西安:1999-10-7～11
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心力衰竭病人心肌组织肿瘤坏死因子、诱导型一氧化氮合酶的基因表达与心功能的临床研究
目的:了解充血性心力衰竭(CHF)病人心肌组织肿瘤坏死因子-α(THF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的基因表达与心功能的关系. 方法:通过手术取材,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术测定31例瓣膜病所致不同程度CHF病人(心力衰竭组)与5例正常人(正常对照组)心肌组织TNF-α和iNOS的mRNA表达. 结果:心力衰竭组与正常对照比较,心肌细胞TNF-α和iNOS的mRNA表达明显增强,且随心功能恶化和心腔扩大,TNF-α和iNOS的mRNA表达越强.CHF病人中,左心室舒张末内径(LVEDd)≥55 mm者与＜55 mm者比较,左心室射血分数(LVEF)＜0.45者与≥0.45者相比,心肌组织TNF-α和iNOS的mRNA表达均明显增强,P＜0.05. 结论:CHF病人心肌组织TNF-α和iNOS的基因表达与疾病严重程度和左心室扩大呈正相关,而与左心室收缩功能呈负相关,提示心脏局部的细胞因子在CHF病人的心室重构和心功能恶化等病理过程中起重要作用.
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L-甲状腺素诱导心肌肥厚模型下电压依赖性钾通道信使核糖核酸的表达
目的:探讨心肌肥厚易致心律失常的机制.方法:SD大鼠实验组9只,对照组7只,用L-甲状腺素诱导法制备大鼠心肌肥厚模型,用逆转录多聚酶链反应方法(RT-PCR)半定量分析肥厚心肌内电压依赖性K+通道信使核糖核酸(mRNA)水平.结果:实验组与对照组相比,实验组即肥厚心肌内电压依赖性K+通道mRNA的表达水平显著下降(P<0.05).结论:电压依赖性K+通道是心肌电活动的主要离子通道,心肌肥厚时电压依赖性K+通道基因表达水平下降,可能会导致动作电位复极化时间延长,与易诱发心律失常有关.
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肝硬化大鼠肝脏内皮素受体基因的表达与门静脉压力的关系
目的研究四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝脏内皮素(endothelin, ET)受体基因的表达,并探讨其与门静脉压力的关系.方法采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定大鼠肝组织ETA受体和ETB受体mRNA的表达水平, 并测量门静脉压力.结果肝硬化大鼠肝组织ETA受体(0.4245±0.0612 vs 0.2792±0.1115,P<0.05) 和ETB受体(0.5984±0.1047 vs 0.2938±0.1399, P<0.05) mRNA的表达均较对照组均显著升高;肝硬化大鼠门静脉压力较正常大鼠明显升高(16.08±2.19 vs 8.25±2.56 cmH2O,P<0.05),并且ETA受体mRNA的表达与门静脉压力显著正相关(r=0.8074,P<0.05).结论四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝组织ET受体mRNA的表达显著升高,并且ETA受体mRNA的表达与门静脉压力显著正相关, 表明ET受体的高表达在门静脉高压症的发病机制中起重要作用.
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细胞型FLICE样抑制蛋白、T-box转录因子在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及意义
目的 探讨口腔鳞状细胞癌(osCC)中细胞型FLICE样抑制蛋白(cFLIP)及T-box转录因子(TBX2)的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化检测OSCC 57例、口腔黏膜上皮异常增生组织(DOM)38例及正常黏膜组织(NOM)30例中cFLIP、TBX2蛋白表达情况.运用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测OSCC、DOM和NOM中的cFLIP mRNA和TBX2 mRNA表达水平.结果 在OSCC、DOM及NOM中,cFLIP的阳性表达率分别为91.23％、84.21％和10.00％;TBX2的阳性表达率分别为87.72％、81.85％和26.67％.cFLIP及TBX2的表达水平与患者的年龄、性别无关,差异无统计学意义(P＞0.05),而肿瘤TNM分期以及有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P＜0.05).OSCC中cFLIP mRNA及TBX2 mRNA的表达水平明显高于DOM及NOM.cFLIP mRNA及TBX2mRNA的表达水平与患者的年龄、性别无关,差异无统计学意义(P＞0.05),而肿瘤TNM分期以及有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P＜0.05).Spenrman相关性分析显示cFLIP及TBX2的表达呈正相关(r=0.768,P＜0.05).结论 cFLIP及TBX2在OSCC中呈高表达,两者可能在OSCC的发生、发展中发挥重要的作用.
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癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义
目的 观察癌-睾丸抗原SSX基因在肝癌组织和肝癌细胞株中mRNA水平的表达情况,探究该基因家族的表达与肝癌的诊断、治疗的关系,进而评价该基因家族作为肝癌免疫治疗靶点和多价肿瘤疫苗研制的可行性.方法 对28例肝细胞癌和癌旁组织、3例肝硬化组织以及肝癌细胞株7404、HePG2、7721采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测癌-睾丸抗原SSX基因在mRNA水平的表达情况.结果 SSX-1、SSX-2、SSX-3在肝癌癌旁组织和肝硬化组织中均不表达.在收集的肝细胞癌组织中SSX-1、SSX-3基因表达阳性率较高(53.6%、57.1%),SSX-2表达阳性率相对较低(35.7%),其中SSX-1、SSX-2、SSX-3三种基因共同表达的有6例(21.4%),至少有两种SSX基因表达的有23例(82.1%).结论 癌-睾丸抗原某些SSX基因在肝细胞癌中高频率表达与肝癌的发生、发展有关,同时基因的共同表达结果又为多价瘤苗的研究提供了实验方向.
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核因子-κB在脂多糖诱导大鼠心肌血红素加氧酶-1基因表达中的作用
目的:观察核因子-κB(NF-κB)在脂多糖(LPS)诱导大鼠心肌血红素加氧酶-1(HO-1)表达中的作用,探讨其对内毒素休克(ES)的影响.方法:用生理多导仪监测大鼠静脉注射LPS(8 mg/Kg)后12 h平均动脉压(MAP)变化;用免疫组化方法检测心肌组织NF-κBp65和HO-1蛋白表达的变化;用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织HO-1基因表达的变化.结果:①LPS组MAP较对照组快速持续降低(P＜0.01):②LPS可诱导大鼠心肌间质血管内皮细胞和心肌细胞NF-κB阳性表达增强,1/2h和2h表达明显升高,6 h和12 h逐渐降低;③LPS可诱导大鼠心肌HO-1基因表达上调,2 h开始增加,6 h达到高峰,12 h表达下调;LPS组大鼠心肌间质血管内皮细胞和心肌细胞HO-1蛋白表达在6h明显增强,12 h表达减弱.④应用PDTC可明显减轻ES大鼠心肌损伤,并抑制心肌HO-1蛋白和基因表达.结论:LPS活化的心肌NF-κB参与LPS诱导心肌HO-1蛋白和基因高表达的信号转导,可能是导致ES顽固性低血压的机制之一.
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食管癌新鲜肿瘤组织中MT-3基因CpG岛甲基化的临床意义
目的:金属硫蛋白(metailothionein,MT)-3不仅具有其它MT共有的细胞解毒功能,还有很强的生长抑制活性,是目前所知唯一一个具有独特生理功能的MT亚型.本研究旨在明确MT-3基因CpG岛在食管癌组织中的甲基化状况及其临床意义.方法:选取2005年5月至7月河北医科大学第四医院胸外科食管癌手术治疗患者68例,其中男49例,女19例;年龄42～76岁;其中食管上段癌6例,中段癌46例,下段癌16例.国际TNM分期:Ⅰ期3例,ⅡA期13例,ⅡB期29例,Ⅲ期22例,Ⅳ期1例.组织学分级:高分化癌8例,中分化癌54例,低分化癌6例.全组患者均为鳞状细胞癌,且随访满30个月.取其新鲜手术标本及切缘正常组织,提取组织DNA及RNA,应用重亚硫酸钠处理限制性酶切图谱分析研究其MT-3基因的甲基化情况;应用实时RT-PCR技术,研究其MT-3mRNA的表达情况,然后与各临床病理参数及随访资料进行比较.结果:全组患者共11例(16.2%)肿瘤组织发现MT-3基因甲基化,而所有患者的上或下切缘的正常组织均未检测到甲基化.存在和不存在甲基化的肿瘤组织中MT-3 mRNA的表达水平分别为2.54±1.11和5.13±1.86(P=0.027).MT-3基因甲基化与TNM分期(P=0.031)、淋巴结转移情况(P=0.001)及术后生存时间(P=0.037)有关,而与患者的性别、肿瘤部位、组织分化程度及肿瘤侵犯深度均无关(P均＞0.05).结论:食管癌组织MT-3基因的甲基化影响该基因的表达水平,此事件易发生于肿瘤晚期患者,与淋巴结转移及预后较差相关.
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IL-8RB mRNA和IL-8RB蛋白在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达
目的 研究妊娠早期小鼠子宫内膜中IL-8RB在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况.方法 应用半定量RT-PCR、免疫组织化学显色和图像分析技术,观察IL-8RB在妊娠1d、4d、5d、6d小鼠子宫内膜中的表达情况.结果 免疫组化染色结果显示在子宫内膜腔上皮,IL-8RB于妊娠4d表达强,妊娠5d开始逐渐下降,妊娠6d降至妊娠1d水平；在子宫内膜腺上皮和基质,IL-8RB的表达水平随妊娠天数的增加而逐渐升高.RT-PCR结果显示IL-8RB mRNA表达规律与IL-8RB蛋白在子宫内膜腔上皮的表达相一致.结论 IL-8RB可能通过与其配体白细胞介素-8结合而参与小鼠胚泡着床过程.
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乳腺癌KAI1基因表达及其临床病理意义
目的:探讨乳腺癌KAI1表达及其临床病理意义.方法:采用免疫组织化学和半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR).检测83例乳腺癌标本中KAI1蛋白和mRNA的表达并与临床病理资料比较分析.结果:免疫组化的阳性率48.19%(40/83)和阴性率51.81%(43/83),RT-PCR的阳性率41.17%(35/83)和阴性率57.83% (48/83).结论:免疫组化和RT-PCR的结果基本一致(P＞0.05).并与乳腺癌的转移呈负相关.在Ⅲ、Ⅳ期以及发生淋巴结等转移的病人中,KAI1的表达明显下调(P＜0.01).
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锌对断乳小鼠金属离子转运体mRNA表达的影响
目的观察哺乳期后幼鼠在不同膳食锌水平条件下的生长情况;探索膳食锌对幼鼠2价金属离子转运体(DMT1)mRNA表达所产生的影响.方法20只肿瘤研究所(ICR)幼鼠(P21)随机分为膳食缺锌(ZD,Zn 1 m/gkg)、适锌(ZA,Zn 30 m/kg)、高锌(ZS,Zn 180 mg/kg)、对喂(PF,Zn 180 mg/kg)4组.以相应饲料饲喂3周(P21～P42),观察小鼠P21～P42期间的摄食量及体重变化.饲喂3周后,处死小鼠取血清及相关组织,原子吸收分光光度法测定小鼠血清锌含量.半定量(RT-PCR法)检测不同膳食锌水平幼鼠P42时DMT1 mRNA的表达状况.结果断乳幼鼠饲喂不同水平膳食锌3周后,缺锌幼鼠摄食量及体重显著低于其余各组,血清锌与其余各组存在显著性差异.膳食高锌可致睾丸DMT1 mRNA表达显著降低,约为适锌时表达量的1/3～1/4,脑中DMT1 mRNA表达未见变化.结论哺乳期后保证膳食足量锌对幼鼠的生长发育十分重要;小鼠睾丸DMT1 mRNA在高锌时表达量下降可能是哺乳期后幼鼠维持锌内稳态的一种反馈保护机制.
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中药黄蛭口服液对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响
目的:通过观察中药黄蛭口服液对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表述的影响,探讨中药黄蛭口服液对动脉粥样硬化的影响.方法:采用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度.运用逆转录多聚酶链反应检测ABCA1 mRNA的表述.结果: ox-LDL能够引起THP-1细胞ABCA1水平的上调;相对于阴性对照组中药黄蛭口服液能明显提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1荧光强度以及ABCA1 mRNA的表达.结论:研究显示中药黄蛭口服液能显著上调THP-1细胞ABCA1的水平.
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碱性成纤维细胞生长因子对体外培养的乳兔软骨细胞中p53 mRNA表达的影响
目的 探讨在乳兔关节软骨细胞体外培养过程中,成纤维细胞生长因子(bFGF)对p53mRNA表达水平的影响及意义.方法 原代体外培养乳兔关节软骨细胞并传代,实验组加入10nG/ml的bFGF,光镜下观测各代细胞形态学变化,RT-PCR检测各代细胞中p53基因在mRNA水平上的表达.结果 光镜观察体外培养的软骨细胞,对照组第4代培养细胞始出现凋亡细胞,bFGF组第7代出现少量凋亡细胞;RT-PCR检测bFGF组p53的目的基因指数(p53吸光光度值/β-actin吸光光度值)明显低于对照组(P＜0.05).结论 在体外培养的兔关节软骨细胞中bFGF下调p53基因mRNA水平表达.
关键词： 凋亡 碱性成纤维细胞生长因子 逆转录多聚酶链反应 软骨细胞 -
上皮性卵巢癌中CD44v6基因的表达及意义
目的:探讨CD44v6基因在上皮性卵巢癌发生、发展及转移中的作用.方法:采用逆转录多聚酶链反应检测38例上皮性卵巢癌、15例交界性上皮性卵巢肿瘤、30例良性上皮性卵巢肿瘤以及10例正常卵巢组织中CD44v6mRNA的表达及其与各种临床参数的关系.结果:CD44v6mRNA在上皮性卵巢癌组织中的表达率以及相对含量明显高于其他组织(P均<0.05).上皮性卵巢癌组织中CD44v6mRNA的相对含量与临床分期、组织学分级及淋巴结转移密切相关(P均<0.05).但是其表达率与上述参数均无关.结论:CD44v6在上皮性卵巢癌的发生、发展以及转移过程中起着重要的作用.
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小鼠白细胞介素-18的cDNA克隆及在真核细胞中初步表达的研究
目的: 克隆小鼠白细胞介素-18(IL-18)编码区的cDNA, 并实现在真核细胞中的表达.方法:用小鼠白细胞介素-18( mIL-18)的cDNA核苷酸序列,设计、合成基因序列特异性引物,应用逆转录多聚酶链反应RT -PCR,以植物血凝(PHA)和细菌脂多糖(LPS)刺激的小鼠非粘附性脾细胞的mRNA为模板,扩增获得全长mIL-1 8,转染小鼠成纤维细胞系SVT2,并进行IL-18生物学活性的检测.结果:经测序证实获得的小鼠IL-18的cDNA序列与文献报道的mIL-18的cDNA序列完全一致.构建的小鼠IL-18的重组表达载体在转染小鼠成纤维细胞SVT2后,获得具有生物学活性mIL-18的分泌表达.结论:克隆了小鼠IL-18的cDNA,并实现了在真核细胞中的表达.
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低密度脂蛋白诱导巨噬细胞髓过氧化物酶活性的研究
目的:研究低密度脂蛋白(LDL)与巨噬细胞髓过氧化物酶(MPO)活性的关系.方法:LDL诱导培养的小鼠腹水巨噬细胞,用MPO催化底物邻联二茴香胺氧化的方法测定MPO活性;以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)的方法检测MPO基因的表达,借此观察LDL与MPO活性的关系.结果:LDL可以促进巨噬细胞内及分泌的髓过氧化物酶活性升高,但远比细菌脂多糖(LPS)的作用小;氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)没有此作用;随着LDL作用时间的延长巨噬细胞内及分泌的髓过氧化物酶活性逐渐升高,但随着LDL浓度的增加髓过氧化物酶基因的表达达到大值后便维持该水平而不再随LDL浓度的变化而变化.结论:LDL非特异性地诱导巨噬细胞MPO活性升高以及分泌增强,加强自身的氧化吸收;MPO活性升高的原因可能主要为巨噬细胞内酶活性的激活及分泌增强而非基因表达的增强.
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不同月龄小鼠蜗神经核中甲基化CpG结合蛋白2的表达及临床意义
目的 探讨年龄相关性听力减退小鼠蜗神经核中甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)的表达差异及临床意义.方法 分别取3、6、12、18月龄BALB/c小鼠测定其听性脑干反应阈值,应用半定量逆转录多聚酶链反应方法,检测3、6、12、18月龄鼠蜗神经核中MeCP2的表达.结果 3、6、12月龄鼠8 kHz听阈分别为(24.8±5.1)、(51.5±6.7)和(92.5±7.5)dB SPL,18月龄组120 dB SPL刺激声无诱发反应.MeCP2在各组小鼠蜗神经核中均有表达,随着月龄增加MeCP2呈下降趋势,各组间差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 MeCP2在年龄相关性听力减退小鼠蜗神经核中的表达水平呈增龄相关性降低,可能与蜗神经核的老化及老年性耳聋的发生有关.
