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SEA自省式教学分析评估法在皮肤科教学中的应用探讨
目的 在皮肤科实习当中,对学生所学所感以及"自省"的程度,用SEA的方法进行判定,评价不同实习时间对其主动学习能力的影响.方法 以2017年7月到2018年5月参加曙光医院皮肤科实习的51名医学院学生作为对象,其中有24名同学实习2周、27名同学实习1个月,按实习时间将其分两组,以SEA进行评价.结果 反省内容反映了实习同学的一些期待及感受,实习1个月较实习2周的同学自我反省更具深度.结论 SEA自省式临床教学分析评估法有其鲜明的特点,可以很好地搭建从理论到实践再到理论的桥梁,作为评价工具,也极具真实性,在教学实践中很有潜力.
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提升海勤人员海水浴疗效工作要点
海勤疗养员是一个独特的群体,三军联勤后我院圆满完成了多批海勤疗养任务.我院地处北戴河海滨疗养区,每年6月下旬～9月中旬,风和日丽、海清气爽、植物茂盛、沙滩细软,天时地利人和,是开展海水浴疗养的佳时期.通过对海勤疗养人员人院和出院时的调查,结合多年积累的海水浴实践与海勤人员的特点,总结以下提升海勤人员海水浴疗效的要点.
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初探日本血吸虫SWA及SEA对Ⅰ型糖尿病小鼠血糖的抑制作用
目的：探讨日本血吸虫SWA及SEA对实验性Ⅰ型糖尿病小鼠血糖的抑制作用。方法：制备日本血吸虫可溶性成虫抗原（Soluble worm antigen ，SWA）与可溶性虫卵抗原（Soluble egg antigen ，SEA）并构造实验性Ⅰ型糖尿病小鼠模型。把24只糖尿病实验小鼠随机平分为A、B、C组（每组8只）。A组实验小鼠从腹部皮下多点免疫注射日本血吸虫SWA ；B组实验小鼠从腹部皮下多点免疫注射日本血吸虫SEA ；C组实验小鼠用PBS进行腹部皮下多点免疫，3组小鼠每周免疫1次，连续免疫4周后，采小鼠尾静脉血，检测实验小鼠的血糖变化。结果：B组实验小鼠的血糖在4周左右为（9．85±1．17）mmol/L ，有明显降低，相比C组小鼠血糖（12．14±1．25）mmol/L具有显著性差异（P＜0．01），但A组实验小鼠血糖在4周左右为（12．11±0．67）mmol/L与C组小鼠血糖无显著差异（P＞0．05）。结论：日本血吸虫SEA 对实验性Ⅰ型糖尿病小鼠的血糖具有一定的抑制作用，其机制可能是日本血吸虫SEA刺激了机体的免疫应答，导致T h1反应向T h2反应偏移。
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海带湿敷治疗老年病人静脉炎的疗效观察
静脉炎是一种常见的周围血管疾病,多见于中老年人.老年人由于血管硬化,弹性减弱,长期输液或输入刺激性强的药物,如甘露醇、抗生素、化疗药物等,易引起静脉炎.不仅给病人造成痛苦,增加护理人员静脉穿刺的难度,而且严重影响病人的治疗及康复.2009年10月-2010年10月对老年病人静脉炎进行海带湿敷治疗,效果满意.现报道如下.
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以后谁来给我们治病
如我所料,又是"mountain people,mountain sea",在中国这家著名的公立医院门前,永远是人山人海.而这家医院乳腺外科的门口,更是"海浪翻滚".来自祖国四面八方,克服了重重艰难险阻,经历了长途跋涉和通宵排队的女性朋友们为了诊治自己重要的女性器官之一,汇聚到这里,等待被认为有权威性的诊断和治疗."说你是癌,你就是癌;说你不是你就不是."人群中一位显得很有经历的老病友对刚来的新病友说道.
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SEA诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡机制的研究
目的:为了观察葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人膀胱癌BIU-87细胞株诱导凋亡机制.方法:应用MTT比色法和流式细胞术检测SEA对BIU-87细胞增殖抑制率和对细胞周期的影响.结果:SEA对BIU-87细胞株有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.流式细胞术分析,SEA能阻止G1期细胞向S期的进程,G1期细胞堆积.结论:SEA能诱导BIU-87细胞凋亡,具有细胞毒性效应,可用于膀胱内灌注,从而抑制膀胱癌的浸润转移.
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低毒性金葡萄球菌肠毒素A D227A突变体的原核表达、纯化及鉴定
目的:获得低毒性但仍保留其免疫活性、高纯度的重组D227A突变型金葡菌肠毒素A蛋白(rSEAD227A).方法:利用PCR技术克隆含D227A突变的SEA基因并原核表达,用盐酸胍溶解包涵体并进行梯度透析复性;使用StrepⅡ亲和层析来纯化蛋白;免疫印迹和LC-MS/MS进行鉴定.结果:成功克隆SEA的D227A突变体,获得了高纯度的rSEAD227A蛋白. LC-MS/MS分析证实,胰酶消化后的rSEAD227A肽段序列与数据库中SEA的序列匹配.结论:获得了高纯度rSEAD227A蛋白,为SEA的进一步基础研究和临床应用提供了实验基础.
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SEA诱导人膀胱癌T24细胞周期进程及凋亡
目的 体外观察葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人膀胱癌T24细胞株的增殖抑制作用.方法 应用MTT比色法检测不同浓度的SEA对人膀胱癌T24细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测T24细胞周期进程的变化,电子显微镜观察T24细胞亚细胞水平改变.结果 不同浓度的SEA对T24细胞的增殖抑制率分别为24.2％、34.5％和43.3％,与对照组相比差异显著(P＜0.01),且具有明显的剂量依赖性.流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多.电子显微镜下可见T24细胞线粒体肿胀,有空泡形成,可见凋亡小体.结论 SEA能显著抑制T24细胞增殖,抑制T24细胞G1期向S期细胞转化进程,诱导T24细胞凋亡及亚细胞结构改变.
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SEA对人结肠癌SW480细胞周期进程及凋亡的影响
目的 体外观察葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人结肠癌细胞株SW480的增殖抑制作用.方法 应用MTr比色法检测不同浓度的SEA对SW480细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率,电子显微镜检测亚细胞水平变化.结果 不同浓度的SEA对SW480细胞增殖抑制率分别为18.5％、37.6％和41.5％,与对照组相比差异显著.流式细胞仪结果显示Go/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高.电子显微镜可见,细胞线粒体肿胀、胞膜破裂、细胞核染色质趋边、凝集,可见凋亡小体.结论 SEA能显著抑制SW480细胞增殖,抑制SW480细胞周期G1期向S期转化进程,从而使G2/M期细胞相对增高,诱导SW480细胞凋亡及亚细胞结构改变.
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导B10细胞产生的研究
目的 观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)与成虫抗原(SWAP)是否能够诱导小鼠调节性B细胞的产生.方法 SEA、SWAP和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和磁珠分选后的脾脏CD19+B细胞,72 h后用流式细胞术分别检测CD19+ IL-10+细胞比例,和细胞表面CD80、CD86及CD40的表达,用ELISA法检测培养上清中IL-10的水平.体内实验用SEA、SWAP、PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,1次/周,共3次,末次免疫后7d取小鼠脾脏,流式细胞术检测CD19+ IL-10+细胞比例,用ELISA法检测培养上清中IL-10的水平.结果 LPS与SEA体外均能显著诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL-10+细胞,两者无显著差异,而SWAP组不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL-10+细胞；SEA与LPS能够诱导脾脏CD19+B细胞表面高表达CD80、CD86和CD40,而SWAP不能诱导脾脏CD19+B细胞活化；SEA与LPS诱导脾脏CD19+B细胞分化为IL-10+细胞的比例也显著升高,同时能刺激脾脏CD19+B细胞分泌高水平的IL-10,两者无显著差异；而SWAP不能诱导小鼠脾脏CD19+B细胞分化为IL-10+细胞并分泌IL-10.SEA体内免疫小鼠后,小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL-10+细胞比例显著升高,并且能够分泌高水平的IL-10,而SWAP和PBS免疫组均不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL-10+细胞并分泌IL-10.结论 SEA体外体内均能诱导小鼠产生分泌IL-10的B10细胞,并且在体外不依赖于脾脏其他免疫细胞的参与,而SWAP体外体内均不能诱导B10细胞的产生.
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日本血吸虫不同病期血清抗体对虫源性及卵源性组分抗原的识别及鉴定
目的 分析不同病期感染兔血清所识别的日本血吸虫成虫抗原(adult worm antigen, AWA)和可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen, SEA)的组分蛋白,探索可能与Th1/Th2极化相关的主要功能性抗原.方法 常规方法制备成虫和虫卵抗原,用SDS-PAGE电泳和Western blotting技术,分析鉴定感染动物血清抗体识别的虫源性及卵源性组分抗原.结果 不同病期血清抗体识别的AWA、SEA组分蛋白谱不同.其中AWA中的11kDa、37kDa、57kDa、79kDa、95kDa a组分分子能被各病期(2~20w)感染血清抗体所识别;SEA中的10kDa、18kDa、41kDa、47kDa、74kDa则可被急性期及以后各病期(6~20w)血清抗体所识别,25kDa、32kDa仅为急性期(6~12w)血清抗体所识别,提示这些组分抗原可能为血吸虫免疫应答的主要功能性抗原,并且同感染血清的反应性明显与病期相关.结论 以上AWA和SEA的组分蛋白和不同病期感染血清的反应与血吸虫感染后的Th1/Th2免疫偏移相关,其中能被急性期及以后各病期血清抗体共同识别的SEA主要功能性组分抗原中可能存在诱导Th2极化反应的重要抗原分子.
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基于可溶性虫卵抗原的血吸虫抗体检测免疫传感器
目的:将免疫法特异性和电化学法灵敏性相结合,建立一种高灵敏基于可溶性虫卵抗原的电化学免疫传感器.用于血吸虫抗体的检测.方法:巯基乙胺通过吸附作用在金电极表面形成的自组装单分子层(SAM),依次滴加2.5%戊二醛和血吸虫抗原(可溶性虫卵抗原,soluble egg antigen,SEA),用以捕获抗SEA抗体(兔多抗或人多抗),然后再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗形成免疫复合物.用循环伏安法检测还原峰的电流值.结果:在底物为添加了2μl30%的双氧水及1.0 mmol/L对苯二酚的0.1 mol/L pH7.2的PBS缓冲液中,还原峰的电流值与抗SEA兔血清稀释度在10-3与10-6范围内成正比,相关系数为0.956.与抗SEA人血清稀释比在10-1与10-4范围内成正比,相关系数为0.988.在1:40稀释度条件下,血吸虫病人与正常人血清的抗SEA还原峰的电流值相差7.4μA.结论:该方法可以用于血吸虫抗体的初步检测.
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SEA及MDP对骨肉瘤融合细胞瘤苗作用的影响
目的检测SEA和MDP对骨肉瘤融合细胞瘤苗作用的影响.方法使用3H-TdR掺入法和51Cr释放法测定SEA对骨肉瘤融合细胞瘤苗所诱导的T细胞增殖和CTL杀伤活性的影响.在骨肉瘤动物模型上检测SEA和MDP与骨肉瘤融合细胞瘤苗同时使用的治疗效果.结果SEA可显著增强骨肉瘤融合细胞瘤苗所诱导的T细胞增殖和CTL细胞杀伤活性.动物实验结果表明,SEA和MDP与骨肉瘤融合细胞瘤苗共同使用时,可显著降低荷瘤鼠的平均瘤重及肺转移发生率.结论SEA和MDP可作为免疫促进剂与骨肉瘤融合细胞瘤苗共同使用,加强其抗肿瘤免疫的治疗效果.
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伽马射线对重组质粒(CArG)6-hTERTp-SEA-GPI在人肿瘤A549细胞和成纤维细胞WI-38中的SEA表达的影响
目的:观察γ-射线对重组质粒(CArG)6-hTERTp-SEA-GPI在人肿瘤A549细胞和人正常细胞WI-38中的SEA表达的影响.方法:重组质粒(CArG)6-hTERTp-SEA-GPI分别转染A549和WI-38细胞,转染后12h2Gy γ-射线照射肿瘤细胞和正常细胞,转染后24 h后采用RT-PCR法检测SEA mRNA的表达,转染后48 h采用Western blot法检测SEA蛋白的表达.结果:(CArG)6-hTERTp-SEA-GPI能够在肿瘤细胞A549细胞中表达SEA,正常细胞WI-38细胞中不能表达SEA;2 Gy γ-射线可以诱导转染(CArG) 6-hTERTp-SEA-GPI质粒的A549细胞SEA mRNA和蛋白的表达,表达量分别增加115.4％和24.2％.结论:重组质粒(CArG)6-hTERTp-SEA-GPI能够在肿瘤细胞A549中选择性表达SEA,且2 Gyγ-射线可以增强SEA的表达水平.
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树突状细胞抗日本血吸虫感染保护性免疫力的研究
目的探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)致敏树突状细胞抗血吸虫感染的保护性免疫力.方法利用SEA分别致敏树突状细胞和巨噬细胞,将致敏树突状细胞和巨噬细胞分别免疫BALB/C小鼠3次,攻击感染6周后计数成虫和肝脏虫卵.结果 SEA致敏树突状细胞免疫小鼠诱导27.3 %的减虫率和41.5%的减卵率,明显高于SEA致敏巨噬细胞组(22.0%和30.7%)和未致敏树突状细胞及巨噬细胞组(16.3%,27.3%和11.7%,17.0%),血清抗体水平于第6周达高峰.结论 SEA致敏树突状细胞具有抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用.
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超抗原SEA对外周血T细胞的活化作用
目的 研究超抗原SEA对外周血T淋巴细胞的活化作用。方法 用SEA刺激人外周血T淋巴细胞，观察细胞的DNA合成、形态、IL-2的产生、细胞表型以及凋亡情况。结果 SEA对T淋巴细胞的促增殖作用在浓度为100 ng/mL强，在第2、3d达高峰；首次或多次刺激不改变T淋巴细胞的CD4+CD8+表型；首次刺激24h内未见明显凋亡；但再次刺激24 h内即有明显凋亡；加入rhIL-2 2 d凋亡现象消失。结论 超抗原SEA对T淋巴细胞的促增殖作用与其浓度、作用时间有关，并且SEA首次或多次刺激对CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞起同等的活化作用。
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超抗原SEA诱导T细胞失能体外实验模型的建立
目的建立超抗原诱导T细胞失能的体外实验模型.方法 SEA刺激人外周血淋巴细胞,再加入外源性的rIL2维持@建立短期SEA反应性T细胞系;进行Ficoll Hypaque密度梯度离心获取经SEA多次刺激过SEA反应性T细胞;加入处理过的PBMC作APCs,建立超抗原SEA诱导T细胞的活化组和失能组.结果 SEA和rIL-2共同作用可得到静息SEA反应性T细胞系;SEA反复刺激使T细胞处于一低反应状态,与活化组相比,其DNA合成能力明显下降,IL-2分泌显著减少,静息一段时间后,其增殖能力慢慢恢复.结论超抗原SEA多次刺激诱导SEA反应性T细胞处于失能状态.
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NE(MHS)纳米乳剂疫苗的抗肿瘤免疫学效应研究
目的:制备包裹有MAGE1-Hsp70和SEA的复合抗原的纳米乳剂疫苗NE(MHS)(nanoemulsion-encapsulatedMAGE1-Hsp70/SEA),评价其抗肿瘤免疫学特性.方法:采用磁力超声法制备纳米疫苗NE(MHS),评价其粒径、包裹率及稳定性;NE(MHS)免疫动物,IFN-γ ELISPOT和LDH杀伤实验检测疫苗激活机体特异性细胞免疫反应情况;肿瘤攻击实验检测纳米乳剂疫苗的抗肿瘤效应.结果:(1)成功制备出粒径为(20±5)nm的NE(MHS),其药物包裹率为87%,于4℃放置6个月后或3 000 r/min 10 min离心后无分层;(2)与其他组相比,NE(MHS)组小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ的T细胞数量明显增多(P<0.05),CTL对B16-MAGE-1的特异性杀伤作用明显增强;NE(MHS)组B16-MAGE-1肿瘤成瘤时间长、成瘤率低.结论:NE(MHS)纳米乳剂疫苗具有良好的理化性质,能够刺激机体产生强烈的MAGE-1特异性的细胞免疫,能有效预防表达MAGE-1的肿瘤细胞攻击,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗.
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超抗原SEA诱导T细胞无能的作用机制探讨
目的探讨超抗原诱导T细胞无能的分子机制.方法采用ELISA和FACS, 分别检测超抗原对诱导T细胞无能的过程中, IL-2、IL-10的产生和IL-2Rα链(CD25)的表达, 并以3H-TdR掺入法, 测定无能T细胞对rhIL-2、PMA及ionomycin的应答能力.结果在诱导T细胞无能的过程中, IL-2的产生显著降低, 而IL-10的产生则逐渐升高; CD25的表达与活化组相比较无显著差异.rhIL-2的加入可恢复T细胞增殖; PMA单独作用能诱导无能T细胞的部分增殖能力, 但PMA+ionomycin则能更大程度地恢复T细胞的增殖.结论超抗原SEA对T细胞无能的诱导, 可能与降低IL-2的水平和升高IL-10的水平有关.超抗原SEA的反复刺激对T细胞无能的诱导, 可能是干扰了TCR信号途径的近端事件, 导致Ras/MAPK途径和Ca/calcineurin途径受阻, 而使IL-2基因不能转录所致.
关键词： SEA 无反应性 IL-2/IL-2R -
葡萄球菌肠毒素A体内诱导小鼠T细胞增殖的实验研究
目的:观察葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)体内对小鼠脾T淋巴细胞增殖的作用规律.方法:采用SEA不同的注射方式和注射剂量,对小鼠脾T淋巴细胞进行体内单次诱导,用流式细胞术检测CD3的表达和测定胞内、外IL-2水平.结果:四种注射方式均能刺激体内T细胞的增殖,但静脉和腹腔注射对T细胞的影响显著.根据对T细胞刺激程度和效力维持时间,选择腹腔注射为佳注射途径.SEA剂量在5-15μg范围内均能促进CD3表达显著上升,佳剂量为10μg.SEA体内注射后能诱导IL-2的大量合成和释放,促进T细胞的增殖.结论:体内SEA刺激对T细胞具有强大的促增殖作用,并且受SEA注射途径和剂量的影响.
