益肾活血止痛方对骨转移癌大鼠胫骨组织OPG、RANKL、RANK表达的影响

目的 探讨益肾活血止痛方治疗骨转移癌的可能作用机制.方法 40只SD大鼠随机分为中药组、唑来膦酸组、模型组、假手术组,每组10只.除假手术组外其余各组采用大鼠乳腺癌Walker 256细胞悬液3山缓慢注射于大鼠胫骨骨髓腔内建立骨转移癌模型.于造模后第5天开始给药,唑来膦酸组给予唑来膦酸溶液于第5、7、9、12、14、16、19天腹腔注射,每次30μg/kg;中药组给予益肾活血止痛方0.5ml(浓度1.92 g/ml)灌胃,假手术组及模型组给予等量生理盐水0.5ml灌胃,每日1次,连续3周.观察各组大鼠肿瘤体积,X线摄片对骨质破坏程度进行评分,HE染色观察胫骨组织病理形态;检测胫骨组织中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白及mRNA表达.结果 与模型组比较,中药组和唑来膦酸组大鼠胫骨肿瘤体积及骨质破坏减少,胫骨组织OPG蛋白及mRNA表达升高,RANKL、RANK蛋白及mRNA表达降低(P＜0.05).中药组和唑来膦酸组各指标组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 益肾活血止痛方可抑制大鼠骨转移癌的生长,其机制可能与其激活胫骨组织OPG表达,抑制RANKL和RANK的活化有关.

血清骨保护素、可溶性核因子κB受体活化因子配体与急性冠状动脉综合征相关性研究

目的 探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清骨保护素(OPG)、可溶性核因子κB受体活化因子配体(sRANKL)的变化与冠状动脉病变程度的关系.方法 随机选择南京军区福州总医院300例住院患者分为三组:ACS 100例,稳定性心绞痛(SA)100例和对照组100例;采用ELISA法检测血清OPG、sRANKL;并对所有患者进行冠状动脉造影,根据造影结果 对冠状动脉病变进行Gensini评分,分析二者血清水平与冠状动脉狭窄的数目及冠状动脉病变Gensini评分的相关性.结果 ACS组血清OPG水平显著高于对照组(P<0.01)及SA组(P<0.01),且随病变血管支数增加而增高(P<0.01);与之相反血清sRANKL水平显著低于对照组(P<0.01)及SA组(P<0.01),且随病变血管支数增加而减低(P<0.01);冠心病患者OPG水平与Gemini评分水平呈正相关(P<0.01);sRANKL水平与Gensini评分呈负相关(P<0.01).结论 ACS患者血清OPG、sRANKL水平与冠状动脉病变程度有关,提示OPG系统可能通过干预血管炎症反应参与了冠状动脉粥样硬化病变进程.

地诺单抗在骨巨细胞瘤治疗中的应用研究进展

地诺单抗治疗复发或难治骨巨细胞瘤疗效和安全性的初步观察

目的 评价地诺单抗(denosumab)治疗骨巨细胞瘤(giant cell tumor,GCT)的短期疗效和安全性.方法 回顾性分析2014年2月至12月,于我院接受地诺单抗治疗的25例GCT患者,其中男12例,女13例,平均年龄33.7 (18～ 58)岁.所有患者均有明确GCT病理诊断,5例病理提示为GCT中的恶性.16例(治疗用药组)有影像学可评估病灶;9例(预防用药组)用药前已经接受外科治疗,体内无影像学可评估病灶,但因为外科边界不满意或病理提示恶性变,应用地诺单抗作为预防性治疗.全部患者每4周接受120 mg地诺单抗皮下注射,第8天和第15天增加2次负荷剂量.安全性评估指标主要包括药物副反应(临床症状和实验室检查异常).疗效评估包括:治疗用药组(16例)应用实体瘤疗效评价标准(response evaluation criteria in solid tumors,RECIST);预防用药组(9例)观察指标为无事件生存率(event free survival,EFS).除CT和MRI等常规影像学评估外,部分患者接受了二次活检手术和PET-CT检查,2例恶性GCT患者用药前进行了肿瘤组织核因子κB活化剂受体配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达水平的检测.结果 以初次用药为随访开始时间,末次随访时间为2015年3月1日.平均随访时间6(4～12)个月.用药期间无死亡病例,患者均按计划用药,平均用药次数7.4(6～17)次,依从性好.副反应包括骨痛(4例)、低钙血症(3例)、发热(3例)、肿瘤破溃形成窦道(2例)、疲劳骨折(1例).未见下颌骨坏死.治疗用药组16例中,RECIST评估显示:完全缓解1例、部分缓解8例、疾病稳定6例、疾病进展1例.3例接受二次活检手术,组织学均未见残留巨细胞瘤成分;1例复查PET-CT可见SUVmax摄取降至正常肌肉组织水平;2例用药前进行了肿瘤组织RANKL表达水平的检测,结果显示RANKL表达水平与疗效相关.预防用药组(9例)4个月和6个月的EFS均为100％.结论 地诺单抗对于复发难治的GCT患者是一种安全有效的治疗手段,恶性GCT和伴发肺转移的病例也应考虑接受地诺单抗治疗.在评估地诺单抗疗效时,应在RECIST标准基础上结合活检和PET-CT结果.肿瘤组织RANKL表达水平与疗效具有相关性.

波尔定对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响

目的 研究波尔定对NF-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的小鼠单核细胞(RAW264.7)向破骨细胞(OC)分化及骨吸收功能的影响.方法 采用RANKL(50 ng/ml)诱导RAW264.7细胞向OC分化,不同浓度波尔定(1、10、20、40、80μmol/L)联合分化培养.培养第4d采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,计算OC样细胞数量;比色法测定TRAP活性;Real-time PCR法检测各组OC标志性基因核因子κB受体活化因子(RANK)、活化T细胞核因子1(NFATc1)和c-fos基因的表达;CCK-8法检测波尔定对OC的毒性.培养至第9d,采用甲苯胺蓝染色并用Leica Qwin图像分析系统计算骨吸收陷窝面积.结果 与对照组比较,TRAP阳性OC数量、TRAP活性、OC标志性基因RANK、NFATc1和c-fos的表达量及骨陷窝面积,随着波尔定浓度增加而减少,与对照组比较,20 μmol/L、40μmol/L、80 μmol/L波尔定可明显减少OC数量和TRAP活性(P ＜0.05,P＜0.01),下调OC标志性基因RANK、NFATc1和c-fos的表达量及骨陷窝面积(P＜0.05),但以上浓度波尔定对OC均未产生毒性.结论 波尔定对RANKL诱导的RAW264.7细胞向OC的分化及骨吸收功能具有抑制作用.

OPG/RANKL/RANK系统在绝经后骨质疏松中的调节作用

绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是危及老年妇女健康的一种常见病和多发病,而在近年在骨质疏松研究中发现的OPG/RANKL/RANK系统是解释骨质疏松形成机制的一个重大突破.本文对OPG/RANKL/RANK系统及其在雌激素参与下的调节作用作一综述.

RANK信号调控破骨细胞分化与成熟的研究进展

破骨细胞来源于微环境造血前体细胞,它的生存、增殖、分化和激活需要巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)参与.RANKL与相应的RANK受体结合,从而刺激破骨前体细胞分化成为破骨细胞.这一过程由不同的调节蛋白和激酶来调控,并且依赖于RANKL-RANK信号.本文中,笔者总结了目前已知的在破骨细胞发生过程中调节RANK信号的机制.在早期阶段,RANK信号的调节通过募集调节蛋白如肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6),引起丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)以及转录因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的活化.活化的NF-κB进一步激活调节破骨细胞生成的重要因子-T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1).在信号传递的中间阶段,共刺激信号通过激活磷脂酶Cγ2(phospholipase Cγ2,PLCγ2)连同c-Fos/AP-1引起钙离子(Ca2+)振荡,同时Ca2+信号促进NFATc1的产生.在破骨细胞生成的晚期阶段,NFATc1入核诱导大量的破骨细胞特异性靶基因的表达,从而使细胞融合并发挥其功能.

地诺单抗联合手术治疗骨盆骨巨细胞瘤效果及安全性

目的 探讨围术期应用地诺单抗治疗骨盆骨巨细胞瘤(GCTB)的有效性和安全性.方法 回顾性分析2014年1月至2016年12月北京大学人民医院骨与软组织肿瘤治疗中心23例在围术期接受地诺单抗治疗的骨盆GCTB患者临床资料.采用主观不良反应、下颌骨X线片等指标评估安全性,采用X线、CT和磁共振成像(MRI)等常规影像学指标评估有效性.基于美国骨肿瘤学会(MSTS)-93评分评估术后功能.肿瘤学评估指标包括组织学反应率、客观反应率、临床受益率、无事件生存率等.术后功能与1999年至2009年在该中心接受外科治疗的骨盆GCTB患者进行统计学比较.结果23例患者初诊活组织检查均证实为GCTB,其中1例提示为恶性GCTB,同时伴有肺转移.全部患者均接受外科治疗,达到广泛外科边界10例,囊内或边缘切除13例.所有患者均按计划用药,平均用药8.43次.随访5~47个月,平均27.3个月,2例患者死于肿瘤进展.广泛切除组中无局部复发,囊内刮除组2例术后复发.术前用药后疗效评估显示部分缓解13例,疾病稳定7例,客观反应率65.0 %(13/20),组织学巨细胞清除率85.0 %(17/20).用药期间未出现下颌骨坏死病例,实验室安全性指标均未见异常.患者术后MSTS-93功能评分平均为26.87分.与1999年至2009年在该中心接受外科治疗的骨盆GCTB患者比较,囊内刮除组术后复发率差异无统计学意义[15.4 %(2/13)比30.8 %(4/13),P=0.514];累计髋臼病例术后功能较1999年至2009年组提高(P=0.002).结论 地诺单抗是治疗骨盆GCTB的有效手段,术前用药在缓解症状的同时,可使肿瘤血供减少、体积缩小,降低手术难度.术后用药可能会降低囊内刮除手术的复发风险,继发恶性变是值得关注的问题.

骨化三醇对人牙周膜细胞维生素D受体、RANKL和骨保护因子表达的调节

目的 探讨骨化三醇(又称1α,25-二羟维生素D3,以下简称VD3)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)和骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)表达的调节作用及相关机制.方法 原代培养12个供体来源的hPDLC群,传代培养至第3代,分别以10-8 mol/L VD3(VD,组)和0.1%无水乙醇处理(对照组),6 d后用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测VDR、RANKL和OPG mRNA的表达水平.分析12个细胞群RANKL基因转录起始位点上游调控区DNA碱基序列.结果 VD3组与对照组相比,VDR mRNA表达水平显著上调(P=0.003),为对照组的(3.04±1.06)倍;RANKL mRNA表达水平显著升高(P=0.001),为对照组的9.82(0.75～119.18)倍;OPG mRNA表达水平为对照组的(94.48±39.15)%,P=0.136;OPG/RANKL比值显著下调(P=0.003),为对照组的10.36%(1.01%～138.00%).未发现RANKL基因上游调控区序列突变位点;-1832(m7984870,C/G)多态性位点基因型与RANKL mRNA的表达和调节之间无显著相关性.结论 在hPDLC中,VD3可以促进VDR mRNA的表达;VD3可显著上调RANKL mRNA的表达从而降低OPG/RANKL比值,而对OPG mRNA的表达水平影响较小.在VD3作用下,细胞群间RANKL mRNA表达的差异性可能与RANKL基因上游调控区碱基序列无关.

AG490对成骨细胞和破骨细胞之间相互作用的影响

目的 体外建立MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养体系,观察AG490对共培养体系中破骨细胞形成的影响.方法 MC3T3-E1细胞经矿化诱导培养后,与RAW 264.7细胞进行间接共培养,经一定浓度AG490(1、5、10μmol/L)分别处理后,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,氮偶联法检测成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨细胞相关基因骨保护素(OPG)、Ⅰ型胶原(COL1)、ALP、骨钙素(OCN)的表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和苏木素染色检测破骨细胞的形成,蛋白印迹法(Western blot)检测破骨细胞中RANK的表达.采用单因素方差分析和双因素方差分析对数据进行统计分析.结果 AG490下调MC3T3-E1细胞矿化过程中OPG、COL1、ALP、OCN mRNA的表达(FOPG=30.120,POPG,AG4901μmol/L=0.021、POPG,AG4905μmol/L=0.221、POPG,AG49010μmol/L=0.003;FALP=67.352,PALP,AG4901μmol/L=0.034、PALP,AG4905μmol/L=0.001、PALP,AG49010μmol/L=0.156;FCOL1=28.158,PCOL1,AG4901μmol/L=0.054、PCOL1,AG4905μmol/L=0.002、PCOL1,AG49010μmol/L=0.4;FOCN=125.375,POCN,AG4901μmol/L<0.001、POCN,AG4905μmol/L<0.001、POCN,AG49010μmol/L<0.001).与RAW264.7细胞单独培养作为对照组相比,MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养明显促进成熟破骨细胞的形成,AG490在这个过程中对破骨细胞的形成起到抑制作用(F=85.391,P共培养组-对照组<0.001,P共培养+AG490组-共培养组=0.035),同时与对照组相比,明显抑制破骨细胞中RANK蛋白的表达(FRANK=376.25,PRANK,AG4901μmol/L=0.468、PRANK,AG4905μmol/L=0.003、PRANK,AG49010μmol/L<0.001).结论 AG490抑制MC3T3-E1细胞成骨向分化,并通过影响OPG/RANKL/RANK信号轴的传递抑制成骨细胞与破骨前体细胞间接共培养过程中破骨细胞的形成.

高+Gz暴露对种植体周围骨组织核因子κB受体活化因子配体及骨保护素mRNA表达的影响

目的 采用动物模型观察高正加速度环境对种植体周围骨组织核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor κB ligand ,RANKL)及骨保护素(osteoprotegerin ,OPG)信使核糖核酸(messenger RNA ,mRNA)表达的影响. 方法 按随机数字表将30只新西兰白兔随机分为3周对照组、3周实验组、5周对照组、5周实验组、12周对照组、12周实验组6组,每组各5只.拔除其双侧下颌切牙后即刻植入种植体各1颗.术后1周开始每周将实验组动物高正加速度(+Gz)暴露3次(周一、周三、周五);暴露方案为加速度增长率1 G/s、峰值4～9 G、峰值持续时间10～45 s 、间隔1 min的一组梯形加速度曲线.对照组不进行+ Gz暴露,常规饲养.在术后3周(+Gz暴露2周) 、5周(+Gz暴露4周) 、12周(+Gz暴露4周+常规饲养7周)分别各处死1组实验组和 1 组对照组白兔,取种植体周围骨质标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction ,RT-PCR)检测 RANKL及OPG的mRNA表达情况. 结果 实验组和对照组 RANKL及OPG的mRNA表达均在术后3周时高,然后逐渐降低.术后3周时,实验组RANKL 的mRNA表达以及 RANKL/OPG 比值明显高于对照组(P＜ 0 .05);术后 5周,实验组OPG的mRNA表达明显低于对照组,而 RANKL的mRNA表达以及RANKL/OPG比值仍明显高于对照组( P＜ 0 .05 ) ;12 周时两组各指标表达没有明显差异. 结论 高+ Gz暴露能够促进RANKL 的表达,提高 RANKL/OPG比值,促进骨吸收,不利于种植体骨结合.

IL-1α和RANK-RANKL-OPG系统在儿童及成人中耳胆脂瘤中的表达

中耳胆脂瘤是由上皮下结缔组织中的角质化鳞状上皮和角质碎片在鼓室或乳突形成的团状物,伴或者不伴有周围炎症反应,这是中耳的囊性结构性疾病.随着生物科学技术发展,众多学者的研究结果显示胆脂瘤的发生发展由多种细胞因子参与,并通过分子生物学研究揭示中耳胆脂瘤的形成,它可以为临床疾病治疗以及干预其病理形成过程提供理论基础.人类中耳胆脂瘤明显特征为骨质破坏,白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)和核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)在胆脂瘤对骨质的破坏中有着重要作用.本文总结了IL-1α和RANK-RANKL-OPG系统在儿童和成人中耳胆脂瘤发生中的作用.

脂联素对人成骨细胞护骨素和核因子κB受体活化素配体表达的影响

目的 探讨脂联素影响骨代谢的可能作用机制.方法 体外培养人成骨细胞,(1)分别加入0、3、10和30 mg/L的脂联素作用48 h;(2)加入0或30 mg/L脂联素分别作用12、24、48 h;采用荧光定量PCR和ELISA方法检测护骨素和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达.另将人成骨细胞与CD14+外周血单个核细胞(PBMC)共培养,加入30 mg/L脂联素作用14 d,行破骨细胞标志酶抗酒石酸磷酸酶染色.结果 0、3、10和30 mg/L的脂联素作用48 h,成骨细胞护骨素mRNA和蛋白表达分别为100%±9%、68%±7%、47%±8%、30%±5%与(9.2±0.3)、(6.6±0.4)、(4.1±0.4)、(2.6±0.4)ng/ml,RANKL mRNA和蛋白表达分别为100%±5%、165%±8%、213%±6%、316%±10%与(1.3±0.2)、(2.1±0.1)、(2.3±0.2)、(2.8±0.1)ng/ml.脂联素对护骨素表达的抑制和对RANKL表达的促进作用均呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).脂联素干预成骨细胞与CD14+PBMC共培养体系可诱导破骨细胞生成.结论 脂联素可通过抑制护骨素表达、诱导成骨细胞RANKL表达,诱导破骨细胞生成,这可能是脂联素影响骨代谢的作用机制之一.

RAW264.7细胞在体外分化成破骨细胞的研究

目的:观察小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的一般生物学特征及在重组细胞核因子kB受体活化因子配基(RANKL)诱导下形成成熟的有骨吸收能力的破骨细胞的可行性.方法:培养RAW264.7后,RANKL诱导RAW264.7,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察阳性多核细胞,电镜下扫描检测电镜骨吸收陷窝.结果:RANKL诱导RAW264.7第3天开始出现少数多核巨细胞,随时间的延长细胞数目逐渐增多,第7天多核巨细胞数达峰值,多核巨细胞TRAP染色阳性,电镜下可见骨片上的吸收陷窝呈圆形或椭圆形,边界轮廓清晰,陷窝底部纤维腐蚀吸收的纹路清晰可见,提示多核巨细胞具有骨吸收功能.结论:RAW264.7是一种较好的破骨前体细胞模型.RANKL诱导RAW264.7形成破骨细胞方法简便易行、可重复性好.

OCIL shRNA表达载体的构建及其对成骨细胞RANKL/OPG基因表达的调节

目的:探讨成骨细胞中破骨细胞分化抑制因子(OCIL)基因敲减后护骨素(OPG)和核因子κB受体活化因子配基(RANKL)mRNA的表达水平及其对破骨细胞分化的影响.方法:构建OCIL特异性shRNA表达载体并转染至细胞,分为pRNAT-N1组、pRNAT-N2组、pRNAT-N3组和阴性对照转染组.考察与阴性对照转染组比较,各组对OCIL mRNA水平的抑制率.将对OCIL mRNA干扰效果佳的shRNA表达载体(pRNAT-N1组)和对照载体pRNAT-U6.1/Neo/CTL(control组)分别瞬时转染UMR106细胞,考察2组RANKL和OPG表达水平.各转染组条件培养基干预骨髓细胞后,观察PBS+control shRNA(vehicle组)、PTH+control shRNA(PTH组)及PTH+ OCILshRNA(shRNA组)破骨细胞样细胞(OLC)数量.结果:(1)与阴性对照转染组比较,pRNAT-N1、pRNAT-N2、pRNAT-N3对OCIL mRNA水平抑制率分别为64％、28％和59％.(2)pRNAT-N1转染UMR106成骨细胞后,RANKL mRNA表达水平明显升高,而OPG mRNA表达水平明显降低,转染后24 h RANKL:OPG比值较control组升高5.1倍.(3)vehicle组、PTH组及shRNA组OLC数分别为(1.83±0.75)个/孔、(49.67±6.77)个/孔及(65.50±7.34)个/孔,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:RANKL/OPG系统参与了OCIL对破骨细胞分化的调节作用.

不同氧环境中破骨细胞特异性基因的表达

背景：课题组以往研究证实，氧浓度过低乃至处于低氧时(体积分数2%O2的分化和功能都受到抑制，但体外培养的破骨细胞在不同氧环境下的基因表达未见有相关报道。
　　目的：实验拟观察不同氧环境下破骨细胞各特异性基因的表达规律，探寻氧环境改变影响破骨细胞分化的表达机制。
　　方法：将破骨前体细胞株经质量浓度均为10μg/L的核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子联合诱导成为成熟的破骨细胞，然后分别置于常氧、组织氧、低氧(体积分数20%，7%，2%)条件下培养，用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞形成的变化，并分别在培养第1-7天收集细胞，通过定量PCR方法检测核因子κB受体活化因子，肿瘤坏死因子受体相关因子6，抗酒石酸酸性磷酸酶，组织蛋白酶K基因mRNA的表达。
　　结果与结论：低氧条件下抗酒石酸酸性磷酸酶阳性的破骨细胞数显著低于组织氧和常氧培养时形成的抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数(P<0.05)。不同氧环境下，破骨细胞中核因子κB受体活化因子mRNA的表达无明显改变，组织氧和常氧培养下肿瘤坏死因子受体相关因子6 mRNA的表达在培养第5天高(P<0.05)。随着氧浓度的降低，抗酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白酶K mRNA表达时间延后，组织氧培养条件下此2者的表达可以保持在高水平。结果证实，与常氧和低氧条件相比，破骨细胞在组织氧培养条件下培养时更易促进其分化，从而维持其活性和功能。

中等强度运动对2型糖尿病大鼠间充质干细胞的影响

目的 探究糖尿病大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向成骨细胞分化能力的改变及中等强度运动对糖尿病大鼠BM-SC的成骨诱导能力的影响.方法 40只6周龄雄性SD大鼠按体重分层分为对照组(n=8)和糖尿病建模组(n=32).通过高脂饲料喂养和注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,将建模成功的大鼠按体重分层分为糖尿病组(n=9)和糖尿病运动组(n=8).提取每组2只大鼠右腿胫骨的BMSC以每孔5×106的密度铺于6孔板上,利用平板计数法(CFU)方法检测其增殖情况;3只大鼠右腿胫骨的的BMSC分别种至大皿中,体外分离培养,7 d后提取BMSC中总RNA用RT-PCR法检测Runt相关转录因子(Runx)2、核因子κB受体活化因子(RANK)和RANK配体(L)mRNA的表达.结果 大鼠BMSC经过体外培养7 d,经碱性磷酸酶(ALP)染色,糖尿病运动组6孔板的成骨细胞数目多,并且显著多于糖尿病组.与对照组相比,糖尿病组Runx2 mRNA表达显著下调(P<0.05);与糖尿病组相比,糖尿病运动组Runx2 mRNA表达显著上调(P<0.01).与对照组相比,糖尿病组RANK和RANKL mRNA表达显著上调(P<0.01);与糖尿病组相比,糖尿病运动组RANK和RANKL mRNA表达显著下调(P<0.01).结论 中等强度运动可以改善糖尿病大鼠BMSC向成骨细胞分化的能力.

骨保护素、核因子-κB受体活化因子配基在氟砷联合染毒大鼠骨骼毒性中的调控作用

目的 探讨骨保护素(OPG)与核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)在氟砷联合染毒大鼠骨骼毒性中的调控作用.方法 选取192只8周龄清洁级Wistar大鼠,体重为(200±50)g,根据2×4析因实验设计按体重采用随机数字表法分成16组,每组12只,雌雄各半.用氟化钠(NaF,空白对照0.0 mg/kg、低氟5.0mg/kg、中氟10.0 mg/kg、高氟20.0 mg/kg)和亚砷酸钠(NaAs02,空白对照0.0 mg/kg、低砷2.5 mg/kg、中砷5.0mg/kg、高砷10.0 mg/kg)灌胃染毒6个月.依据上述处理因素将大鼠分为对照组(F0As0)、低氟组(F5.0As0)、中氟组(F10.0As0)、高氟组(F20.0As0)、低砷组(F0As2.5)、中砷组(F0As5.0)、高砷组(F0As100)、低氟低砷组(F5.0As2.5)、低氟中砷组(F5.0As5.0)、低氟高砷组(F5.0As100)、中氟低砷组(F10.0As2.5)、中氟中砷组(F10.0As5.0)、中氟高砷组(F10.0As10.0)、高氟低砷组(F200As2.5)、高氟中砷组(F20.0As5.0)、高氟高砷组(F20.0As10.0).采用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测大鼠骨组织中OPG及RANKL蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测OPG及RANKL mRNA表达水平.结果 与F0As0组[(2.678±0.136)ng/mg、(29.658±0.662)pg/mg]比较,F5.0As0、F10.0As0、F20.0As0组骨组织中OPG[(2.857±0.162)、(2.983±0.272)、(3.117±0.143)ng/mg]、RANKL[(32.533±0.999)、(32.698±1.932)、(33.331±1.140)pg/mg]蛋白表达水平随染氟剂量的升高均有升高趋势;与F0As0组比较,F0As2.5、F0As5.0、F0As10.0组骨组织RANKL蛋白水平[(32.348±2.838)、(31.589±1.359)、(28.843±1.908)pg/mg]随染砷剂量的升高而先升高后下降(P均＜ 0.05).与F0As0组(0.83±0.19、0.92±0.23)比较,F5.0As0、F10.0As0、F20As0组骨组织OPG(1.14±0.27、1.33±0.39、1.69±0.77)、RANKL mRNA水平(1.02±0.21、1.17±0.15、1.25±0.31)随染氟剂量的升高均有升高趋势.氟对OPG、RANKL蛋白和mRNA的表达有主效应(F=11.530、21.765、6.320、3.543,P均＜ 0.05),氟砷联合对RANKL蛋白和mRNA、OPG蛋白表达存在交互拮抗作用(F=9.496、2.217、3.375,P均＜ 0.05).结论 氟砷联合染毒对大鼠骨组织RANKL及OPG的影响中氟起主导作用,砷间接参与了氟致大鼠骨骼毒性作用,氟砷联合对OPG及RANKL表达的交互作用主要表现为拮抗作用.

重组可溶性核因子κB受体活化因子体外抑制甲状旁腺激素诱导的破骨细胞生成

新近发现的核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclearfactor-κB,RANK)/护骨素(osteoprotegerin,OPG)细胞因子系统提高了对破骨细胞生物学和骨稳态分子水平的认识.RANKL与RANK之间的相互作用决定了破骨细胞的分化.本研究通过体外实验评价可溶性RANK(soluble RANK,sRANK)是否可作为RANKL的拮抗剂下调破骨细胞生成和骨吸收陷窝的形成.构建sRANK的原核表达载体,转化入大肠杆菌表达菌株Origami B (DE3),成功表达了重组蛋白,亲和层析进行纯化.重组sRANK以剂量依赖方式抑制由甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)诱导的破骨细胞生成和骨吸收陷窝形成.RT-PCR实验证实,sRANK可显著抑制PTH刺激的小鼠骨髓细胞碳酸苷酶Ⅱ和抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA的表达.结果表明,sRANK具有抗骨吸收功能,可能成为一种治疗以骨吸收加强为特征的骨疾病的新方法.

抗抑郁剂对去卵巢抑郁模型大鼠骨质疏松相关蛋白的影响

目的 观察抗抑郁剂对去卵巢抑郁模型大鼠骨质疏松相关蛋白OPG、RANKL、RANK的影响.方法 40只成年雌性大鼠分为假手术+生理盐水组(Sn)、抑郁模型+生理盐水组(Dn)、去卵巢+生理盐水组(On)、去卵巢+抑郁模型+生理盐水组(ODn)、去卵巢+抑郁模型+舍曲林组(ODs)、去卵巢+抑郁模型+西酞普兰组(ODx)、去卵巢+抑郁模型十瑞波西汀组(ODr)、去卵巢+抑郁模型+文拉法辛组(ODw).双侧卵巢切除建立去卵巢大鼠模型.对抑郁模型组、去卵巢+抑郁模型组运用慢性轻度不可预知性刺激结合孤养制备抑郁模型,于实验前1d和第28天运用敞箱实验和糖水消耗实验评定大鼠行为学改变.用免疫组化、实时荧光定量PCR检测大鼠股骨颈OPG、RANKL和RANK的改变.结果 Dn组在应激后水平运动得分、垂直运动得分及糖水消耗百分比较Sn组显著降低(P＜0.05),ODn组也比On组显著下降(P＜0.05);与Sn组比较,Dn组和On组的RANK蛋白及其mRNA均升高(均P＜0.05),与Sn组比较,Dn组和On组的RANKL及mRNA水平均升高(均P＜0.05),ODs(5.94±0.79)、ODw(5.99± 1.08)、ODr(6.59±0.69)较ODn(4.96±0.51)组OPG基因表达降低(均P＜0.05);ODs(2.82±0.23)、ODx(3.03±0.04)较ODn(3.44±0.18)组RANK基因表达增高(均P＜0.05);ODs(4.82±0.94)、ODx(5.00±0.82)、ODw(5.23±0.88)较ODn (3.69±0.69) RANKL基因表达降低(均P＜0.05).结论 抑郁模型与去卵巢模型大鼠股骨颈RANK、RANKL的表达升高;抗抑郁剂对去卵巢抑郁模型大鼠股骨颈RANK的基因表达有一定上调作用,对OPG、RANKL的基因表达有一定下调作用,且以舍曲林作用强,瑞波西汀作用弱.