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HCV感染人肝癌Huh7.5.1细胞后差异表达的IncRNA及其对细胞增殖的影响
丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是导致人类肝脏疾病的重要病原体.长链非编码RNA(Long noncoding RNA,IncRNA)参与了许多疾病和生物过程的调控,但是lncRNA在HCV感染中的作用还了解很少.本研究旨在筛选HCV感染人肝癌细胞系Huh7.5.1后差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),并研究相关lncRNA对细胞增殖及周期相关基因表达的影响.首先,分析HCV感染Huh7.5.1细胞72h前后lncRNA芯片表达谱;然后采用实时荧光定量PCR(Reverse tanscription-quantitative real time PCR,RT-qPCR)的方法对芯片中差异表达明显的17条IncRNA进行细胞水平验证;进一步采用CCK8以及ki67细胞增殖实验研究差异表达明显的lncRNA对细胞增殖的影响;后采用RT-qPCR探讨lncRNA对细胞周期蛋白基因cyclin B1/D1/E1的mRNA表达的影响.lncRNA芯片检测结果与RT-qPCR验证的相符的lncRNA中,发现HCV感染Huh7.5.1细胞后上调和下调明显的两条lncRNA分别是RP11-288L9.1与ADAM20P1,而沉默RP1l-288L9.1能抑制细胞周期蛋白基因cyclin B1/D1/E1的表达水平,并抑制Huh7.5.1细胞增殖.首次发现HCV感染后上调的RP11-288L9.1能促进细胞周期蛋白基因的表达水平和Huh7.5.1细胞增殖,另一种下调的ADAM20P1对细胞增殖影响不大.研究结果为HCV感染及肝癌细胞增殖提供了潜在的诊断标志物和治疗的新型靶点,具有一定的参考价值.
关键词: 丙型肝炎病毒(HCV) 长链非编码RNA 细胞增殖 细胞周期相关基因 -
骨髓增生异常综合征相关基因研究进展
骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndrome,MDS)是一组以病态造血为特征的骨髓增殖性疾病.随着分子生物学技术的进步,针对MDS的基因研究广泛开展,已发现越来越多的基因异常与发病有关,涉及到原癌基因、抑癌基因、细胞周期相关基因、线粒体DNA突变等.这些研究不但为了解MDS发病机制提供了帮助,而且为基因治疗打下了基础.现就近年来MDS相关基因的研究进展作一综述.
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X射线对同步化的HeLaS3细胞Cyclin B1蛋白表达和转录水平的影响
中、高剂量电离辐射对生长的真核细胞的一个普遍效应是导致分裂延迟,这早已被放射生物学界所公认.但有关低剂量电离辐射对细胞周期及其分子调控的影响报道甚少,我室以往实验资料已揭示低剂量辐射可促进细胞的DNA合成与增殖,加速细胞周期的进程[1,2].为了进一步探讨低剂量电离辐射促进细胞周期进程的分子机理以及低、高剂量辐射作用机理的差异,我们运用TdR双阻断法、RNA分子杂交技术和免疫组织化学法观察并探讨X射线作用于同步化的HeLaS3细胞后,其细胞周期相关基因Cyclin B1蛋白表达和转录水平的变化.
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基础研究为乳腺癌诊断和治疗带来新机遇
细胞周期调控是一个精细的生物学过程,涉及复杂的信息网络调控系统.细胞周期的调控异常会导致基因组的不稳定性、引起细胞的恶性转化和癌变.阐明细胞周期相关基因的功能和调控机制,不仅能了解肿瘤发生发展的分子机制,也能为临床肿瘤诊断治疗提供分子标志物,确定肿瘤治疗靶点,设计特异性抑制肿瘤细胞生长的药物和发展个体化的临床治疗方案提供理论基础,从而达到早期、有效、特异治疗恶性肿瘤的目的.
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大肠腺癌中E2F1和p16蛋白的表达与预后的关系
肠道恶性肿瘤以腺癌常见,是消化道常见的恶性肿瘤之一,大肠癌的发生发展涉及多种因素的作用,其中包括与细胞周期相关基因的激活及抑癌基因的失活等,E2F1转录因子为细胞周期的正性调节因子,在细胞周期的调控中起着重要的作用,p16为细胞周期的负性调控因子,对细胞周期的进展起着负性调节作用,本研究通过检测二者在大肠腺癌中的表达,探讨其与大肠腺癌的发生发展及预后的关系.1材料和方法1.1材料:收集本院病理科2005-2010年所有大肠腺癌病例53例(不含黏液腺癌),术前未行放化疗,其中男性30例,女性23例,年龄31~79岁,平均57岁;其中高分化16例,中分化21例,低分化16例.癌组织切除远端为正常对照组,所有病例均重新切片,苏木素-伊红(HE)染色形态学符合大肠腺癌的特点.
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缺血再灌注损伤致Hsp ala蛋白在肝小叶中央静脉区早期表达的动态观察
研究结果显示[1]在大鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)过程中,早期有885个基因上调,包括细胞周期相关基因和热休克家族基因等.实验检测到Hsp ala较灌注前上调10.9倍,发挥保护作用.本研究旨在检测Hsp ala、细胞周期蛋白D1( CCND1)的表达,探讨IR对细胞周期的影响.
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细胞周期相关基因Cyclin D1在胆管癌中表达及其临床意义
为探讨Cyclin D1基因与胆管癌发生发展的关系.笔者采用免疫组织化学方法,检测48例胆管癌和8例慢性炎症胆管组织中Cyclin D1的表达情况.结果示:(1)胆管癌Cyclin D1阳性表达率为58.3%,而慢性炎症胆管组织阳性表达率为12.5%;(2)Cyclin D1的表达与胆管癌的分化程度及有无远处或淋巴结转移有相关,而与其它病理学指标无关.提示Cyclin D1参与胆管癌的发生发展,其蛋白表达可作为胆管癌的诊断及预后的参考指标.
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小分子干扰RNA沉默肝癌细胞CDK2基因对RB、CyclinE、E2F1基因表达的影响
[目的]观察小分子干扰RNA (siRNA)沉默细胞周期素依赖性蛋白激酶(CDK2)基因后,细胞周期相关基因RB、CyclinE、E2F1在肝癌细胞SMMC7721中mRNA的表达. [方法]将前期研究中已构建成功并筛选出的有效干扰抑制CDK2基因的siRNA序列片段,采用Lipofectamine TM2000脂质体转染法转染肝癌细胞株SMMC7721后分6组:重组质粒组190、重组质粒组191、SMMC7721肝癌组、转染试剂组、阴性对照组、空质粒组.采用实时荧光定量PCR法检测RB、CyclinE、E2F1 mRNA水平.[结果]CDK2的siRNA转染SMMC7721细胞后,RB基因mRNA表达上调,CyclinE、E2F1基因mRNA表达下调.[结论]抑制CDK2基因的表达能使肝癌细胞SMMC7721中RB基因mRNA表达上调,CyclinE、E2F1基因mRNA表达下调,提示肝癌细胞中RB、CyclinE、E2F1基因的表达与CDK2基因的表达具有明显的相关性.
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辛伐他汀依赖p53通路对K562细胞G1期调节的分子机制
目的 探讨辛伐他汀体外处理后的K562细胞p53通路和K562细胞C1期的分子水平的变化.以说明辛伐他汀是否依赖p53通路参与K562细胞细胞周期G0/G1期停滞的调控和抑制K562细胞增殖.方法 体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞术检测辛伐他汀作用后细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测K562细胞p53通路和细胞周期G1期相关基因表达的变化.结果 辛伐他汀能使K562细胞停滞在G0/G1期.明显诱导K562细胞凋亡,大多数p53通路基因和细胞周期相关基因的变化出现差异表达.结论 辛伐他汀可能通过作用于参与细胞增殖和凋亡的p53通路,抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡.
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细胞周期相关基因CDKN2A、TP53、RB1和BRCA2在恶性肿瘤中的研究进展
CDKN2A、TP53、RB1和BRCA2是细胞周期相关基因,主要通过转录合成细胞周期相关蛋白,在细胞增殖和凋亡的调控方面发挥重要作用.并且CDKN2A、TP53、RB1和BRCA2基因在多种肿瘤的发生发展以及肿瘤的治疗和预后方面扮演重要角色.本文就近年来对CDKN2A、TP53、RB1和BRCA2在肿瘤中作用以及对患者治疗疗效和预后影响的研究进展进行综述.