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基于微电子阻抗技术实时细胞监测系统在细胞凋亡检测时点选择中的应用
目的 探讨基于微电子阻抗技术的实时细胞监测系统用于确定细胞凋亡佳检测时间点.方法 应用顺铂诱导胶质瘤细胞U251凋亡,使用实时细胞监测系统连续74 h监测不同药物浓度作用于U251后细胞指数的动态变化,根据药物作用时间与细胞指数关系曲线确定凋亡佳检测时间点,采用流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 通过实时监测发现,2.5μg/mL、5 μg/mL、10μg/mL顺铂分别在作用49 h、60 h和74 h,U251细胞指数值达到低;在这些时间点,流式细胞仪检测细胞凋亡率分别达到高峰(15.6±1.4)％,(34.2±7.6)％,(63.9±4.6)％.结论 应用实时细胞监测系统可进行细胞凋亡佳检测时间点的辅助判断.
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流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用和研究进展
细胞凋亡实际上是细胞死亡的一种特殊方式,它在机体的组织发生、细胞分化、免疫应答和肿瘤发生等多种病理生理过程中发挥着重要作用.
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TUNEL与PI双染流式细胞术在细胞周期与细胞凋亡检测上的应用
电离辐射对细胞凋亡和细胞周期的各自影响已见诸多报道.但采用一种方法对凋亡和周期同时进行定量检测的流式细胞术,目前在国内尚未见报道.笔者将TUNEL与PI染色的方法加以结合,借以探讨这一新方法以及该方法所揭示出凋亡与周期阻滞的内在关系.
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Annexin A4-EGFP融合蛋白的表达纯化及其凋亡检测能力初探
膜联蛋白(annexin)是一类进化保守的多基因家族蛋白,可与细胞膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl-serine,PS)结合,由于PS与许多重要疾病密切相关,具有作为药物发现新靶点的潜力,使得annexin具有良好的药物发现价值和新药研发前景.AnnexinA4(以下称A4)是膜联蛋白家族成员之一,参与多项细胞功能,如胞吐作用和凝血反应,所有这些功能与膜联蛋白可结合酸性磷脂的能力相关.目前对A4的功能尚不完全了解,获得足量的A4是深入了解A4的结构与功能的基础.为了克服传统从生物组织中提纯人源A4的方法得率不高,且较为复杂等问题,本文通过原核系统重组表达A4,以获取大量可溶性蛋白,探究其与PS的结合能力,为后续研究奠定基础.利用分子生物学的手段构建融合表达质粒pET28a-annexin A4-EGFP,大量表达、选用并比较了两种获取可溶性annexin A4-EGFP(以下称A4-EGFP)融合蛋白的纯化方法,同时检测A4-EGFP对凋亡细胞的识别能力.通过亲和层析纯化获得纯度为80％的A4-EGFP;而选用膜吸附纯化方式,终获得了纯度达90％的蛋白.流式细胞仪检测结果显示:A4-EGFP融合蛋白可识别和标记早期凋亡细胞,其与PS亲和力为79.58±11.68nmol·L-1,与A5-EGFP和PS的亲和力同处一个数量级.本文成功实现了A4-EGFP在原核体系中的高效可溶性表达,建立了简易、高效的分离纯化方法,获得了产率高达75.2 mg·L-1的A4-EGFP,为深入研究A4的功能及其潜在的应用奠定了基础.
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骨巨细胞瘤肿瘤性细胞鉴定凋亡检测与预后关系的研究
巨细胞瘤是常见的原发性骨肿瘤之一,其发生率占全部骨肿瘤的20%,中国人发生率是欧美的3倍.该肿瘤介于良恶性之间,但局部侵袭性强,主要表现为溶骨性病变,部分良性骨巨细胞瘤可发生远处转移,具有潜在恶性,常规手术治疗复发率高.
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流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用
流式细胞仪(flow cytometer,FCM)是一项集激光、电子物理、光电测量、计算机、细胞荧光化学以及单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器.
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通心络胶囊治疗心血管疾病临床新进展
通心络胶囊由人参、水蛭、金蝎、虫、蜈蚣、蝉蜕、赤芍及冰片组成.具有益气、活血、通络功效.对冠心病心绞痛及缺血性心电图改变有良好的改善作用.可增加心脏作功,但不增加心肌耗氧量;可明显增加心脏冠状动脉血流量,改善心肌的血液供应.药理实验表明通心络对异丙肾上腺素致小鼠心肌损伤动物模型有保护作用.心肌细胞病理改变及心肌细胞凋亡检测和心肌细胞超微结构电镜检测表明,通心络干预后小鼠心肌细胞坏死及凋亡均显著减轻,从而对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤发挥保护作用[1].本文综合有关临床应用资料,对其临床应用进展予以综述.
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不同强度有氧运动对大鼠肝细胞的影响
背景:国内外大量实验研究证明,不同的运动强度容易造成大鼠肝脏的损伤,从而导致肝细胞凋亡,其具体机制尚不明确.目的:以期探讨长期不同强度运动对大鼠肝脏细胞形态和功能的影响,为缓解和预防运动性疾病提供一定的理论支撑.方法:由第一作者应用计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)、PubMed数据库和维普数据库有关有氧运动对肝脏细胞功能影响研究,在标题、摘要、关键词中以"运动强度;肝细胞;细胞凋亡;凋亡检测"或与"exercise intensity;hepatocytes;apoptosis;apoptosis detection"为检索词进行检索.选择与不同强度有氧运动对大鼠肝细胞影响研究有关的文献,且同一领域选择发表于权威杂志的文献.共纳入44篇文献进行分析.结果与结论:急性力竭运动可使大鼠肝细胞组织结构显著受损.大强度运动因自由基的生成和消除不均衡、肌浆网摄钙能力降低,启动大鼠肝细胞的凋亡,又因负荷量难以把握,因此研究难度较大,需要更多的实验来佐证.中等强度下大鼠的肝脏组织逐渐出现适应性改变,肝细胞的损伤减弱,机体趋向于恢复过程.递增强度和低氧状态下亦对大鼠肝细胞组织和功能产生了不同程度的损伤.结果表明,不同强度的有氧运动会对大鼠肝细胞的结构和功能造成不同程度的影响,提示在训练过程中遵循运动训练学的原则,以此缓解运动性疲劳和预防运动性疾病.
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细胞凋亡和丙二醛在长时间大强度运动模型大鼠骨骼肌中的表达
背景:骨骼肌细胞凋亡会导致多种骨骼肌疾病的出现,常规疗法效果都不太理想.目的:分析不同强度运动对大鼠骨骼肌形态结构和细胞凋亡的影响,可以起到预防骨骼肌细胞凋亡的作用.方法:健康3月龄雄性SD大鼠30只随机分为3组:安静对照组、一般有氧运动组和长时间大强度运动组.安静对照组不进行游泳运动,运动组运用游泳运动制备动物模型,运动组的训练周期都为10周,10周后对大鼠全部实施麻醉后取腓肠肌,用以苏木精-伊红染色观察骨骼肌形态和TUNEL检测细胞凋亡情况;并检测骨骼肌组织超氧化物歧化酶、丙二醛含量,做丙二醛与积分吸光度的相关分析.结果与结论:①骨骼肌苏木精-伊红染色结果:长时间大强度运动组肌纤维排列紊乱、结构模糊;②丙二醛和超氧化物歧化酶含量:与安静对照组相比,一般有氧运动组、长时间大强度运动组的丙二醛增加,一般有氧运动组与安静对照组相比较超氧化物歧化酶有显著性增加(P < 0.05),长时间大强度运动组与有氧组相比较超氧化物歧化酶显著性减少(P < 0.05);③TUNEL检测结果:长时间大强度运动组细胞凋亡积分吸光度值显著高于一般有氧运动组和安静对照组(P < 0.01);④相关分析:丙二醛与积分吸光度值之间显著相关,呈正相关关系;⑤结果说明,长时间大强度运动组骨骼肌组织中的长丙二醛增多,机体疲劳程度更为严重.有氧运动使机体骨骼肌逐渐有适应性,而由于过度运动负荷较大,对骨骼肌形态结构有一定损伤,使得细胞凋亡增加.随着运动强度增加导致丙二醛生成增加而清除相对不足,细胞凋亡积分吸光度值增大.
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Fluoro-Jade B染色与TUNEL比较检测乙醇诱导神经细胞凋亡
目的:建立利用Fluoro-Jade B(FJ-B)染色检测乙醇诱导PC12细胞及小鼠海马脑片上神经细胞凋亡的方法并与TUNEL比较.方法:利用不同浓度的乙醇分别诱导PC12细胞和小鼠海马脑片上神经细胞凋亡,用FJ-B染色检测神经细胞凋亡,同时用TUNEL检测进行比较,从凋亡率、单位面积阳性细胞数的统计结果分析、实验过程等方面评价2种方法的优缺点.结果:2种方法检测结果显示乙醇处理组与对照组相比差异有统计学意义,2种方法相同组间对比分析差异无统计学意义.结论:FJ-B染色与TUNEL在检测乙醇对神经细胞凋亡影响的结果无差异;且FJ-B染色更适合在脑片上检测神经细胞的凋亡.
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肝窦内皮细胞诱导T细胞免疫耐受
目的：探讨肝窦内皮细胞( LSEC)对T细胞的耐受作用。方法 CD3和CD28抗体活化的人T细胞和人LSEC混合培养,检测48 h时单独培养和混合培养T细胞的凋亡情况和细胞因子白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)和白细胞介素10(IL-10)的表达量及分泌量。结果和LSEC混合培养的T细胞凋亡率显著高于单独培养的T细胞,混合培养的T细胞中IL-2的表达量没有发生明显变化, IL-4的表达量显著升高,IL-2/IL-4的值降低,IL-10的表达量增加。IL-2、IL-4和IL-10细胞因子分泌情况和表达量一致。结论LSEC 可通过降低T细胞数目和改变细胞因子分泌两种途径诱导T细胞产生耐受。
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TRB3通过GSK－3β信号通路参与AGEs诱导胰岛细胞凋亡
目的：探讨TRB3在晚期糖基化终末产物（ AGEs）诱导β细胞凋亡中的作用及其与GSK－3β通路相关的分子机制。方法：首先检测糖尿病大鼠模型发病不同阶段体内AGEs水平、胰岛β细胞TRB3表达情况与β细胞凋亡的关系。细胞水平上，检测AGEs处理后大鼠胰岛β细胞系INS－1细胞TRB3表达水平与细胞凋亡的关系以及沉默或过表达TRB3对AGEs诱导INS－1细胞凋亡的影响，体内和体外的凋亡检测均采用TUNEL染色法。通过分子机制研究探讨AGEs以及TRB3对GSK－3β通路的影响。结果：随着AGEs水平的增加糖尿病大鼠胰岛β细胞TRB3表达水平增高，体外应用AGEs刺激INS－1细胞其TRB3表达水平也相应增高，而干扰或过表达TRB3后可以减弱或增强AGEs诱导的INS－1细胞凋亡。 AGEs诱导TRB3表达的同时GSK－3β活化并加重了INS－1细胞的凋亡，而抑制GSK－3β通路后明显减弱这种效应并保护AGEs导致的凋亡β细胞。结论：TRB3通过激活GSK－3β通路参与AGEs诱导的β细胞凋亡。
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中药黄斑颗粒灌胃对大鼠视网膜光损伤细胞凋亡的影响
目的:观察中药复方黄斑颗粒对大鼠视网膜光损伤细胞凋亡的影响.方法:雄性SD大鼠21只分为给药组、对照组和正常组,光损伤前10d用中药复方黄斑颗粒灌胃,对照组用等体积蒸馏水灌胃,正常对照组正常饲养.光损伤白色荧光灯平均光照强度2 800Lux, 暗适应24h后,散瞳光照5h后置暗环境饲养,光损伤后继续给药给水,3d后取眼球做石蜡包埋切片,用TUNEL方法进行染色,同时留取眼球进行电镜观察超微形态改变.结果:正常组视网膜结构规整,几乎无TUNEL染色阳性细胞,对照组外核层有大量黄色阳性细胞,结构紊乱,给药组散在少量阳性细胞;电镜下观察可见对照组色素上皮细胞微绒毛消失,光感受器外段排列紊乱,外核层有较多的固缩凋亡细胞核,而给药组则散在少量凋亡细胞.结论:中药黄斑颗粒可能通过对抗细胞凋亡而对大鼠视网膜光损伤起到保护作用.
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一种简单易行的细胞凋亡检测方法
目的 以青蒿素诱导人胶质瘤U251细胞凋亡为例,介绍一种简单易行的细胞凋亡检测方法.方法 将用青蒿素处理过的、悬浮培养的人胶质瘤U251细胞,用液氮冻融,然后加入3mmol/L的PI 30μL,室温下放置5min后,用流式细胞仪测定细胞的倍体特性,计算细胞凋亡率.结果 在1×10-4、1×10-5和1×10-6mol/L剂量下,青蒿素诱导人胶质瘤U251细胞的凋亡率分别为33.2%、24.0%和8.0%.结论 本实验结果显示,青蒿素有明显的诱导人胶质瘤U251细胞凋亡的作用,并显示有明显的剂量依赖关系.本方法简化了细胞处理过程,避免了许多影响因素,不失为一种简单、准确、快速的细胞凋亡检测方法.
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细胞凋亡检测方法及其研究进展
细胞凋亡(Apoptosis)是生理性的细胞死亡,是由基因控制的有序的细胞自主性死亡,其意义在于去除不需要、衰老和异常的细胞,在个体发育和维持内环境的稳定中起着必不可少的作用[1].细胞凋亡是多基因严格控制的一个主动过程,有复杂的分子生物学机制,涉及到一系列的基因激活、表达以及调控等[2].细胞凋亡近多年来是生物学和医学领域研究的一个热点,本文对细胞凋亡的检测方法及其进展作一综述.
