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人成骨细胞分化及骨保护素分泌：R-脊椎蛋白1通过Wnt/β-catenin通路的作用
背景：研究表明Wnt/β-catenin信号通路活性受抑是类风湿关节炎骨侵蚀的始动因素，增强该通路有望治疗类风湿关节炎关节破坏。R-脊椎蛋白1(RSpo1)可能是Wnt激活剂，尚无人成骨细胞相关研究。
目的：验证R-脊椎蛋白1抑制DKK1促进该细胞的分化成熟。
方法：给予S40转染人成骨细胞株hFOB 1.19 Wnt-3a、R-脊椎蛋白1及Wnt信号通路抑制剂DKK1不同刺激，通过检测细胞增殖、碱性磷酸酶活性及骨保护素水平，观察R-脊椎蛋白1在成骨细胞中的作用。
结果与结论：R-脊椎蛋白1对hFOB 1.19细胞增殖无影响，Wnt-3a上调碱性磷酸酶活性，与R-脊椎蛋白1共刺激可增强该作用；R-脊椎蛋白1可减少DKK1对hFOB1.19细胞碱性磷酸酶活力的抑制作用。R-脊椎蛋白1可提高骨保护素质量浓度，但R-脊椎蛋白1对骨保护素的增强作用大于DKK1对其的抑制作用。提示R-脊椎蛋白1通过抑制DKK1，参与Wnt/β-catenin信号通路，促进成骨细胞分化成熟，分泌骨保护素。 -
左归丸调控DKK1靶点防治糖皮质激素性骨质疏松
背景:中医药可有效防治糖皮质激素性骨质疏松,但其防治机制尚不明确.DKK1是Wnt/β-catenin信号通路的抑制剂,糖皮质激素可诱导其上调.因此,DKK1蛋白是防治糖皮质激素性骨质疏松的重要靶点.目的:探讨左归丸防治糖皮质激素性骨质疏松中对DKK1的调控作用.方法:18只3月龄雌性SD大鼠随机均分为3组:空白组、模型组和左归丸组.模型组和左归丸组大鼠皮下注射地塞米松建立糖皮质激素性骨质疏松模型;空白组给予等体积生理盐水;左归丸组皮下注射地塞米松同时给予左归丸水提液灌胃.1 个月后取大鼠腰椎进行 micro-CT 检测骨量及骨微细结构、压缩试验检测生物力学性能,qPCR测定腰椎DKK1、Runx2和CTSK mRNA表达;血清检测碱性磷酸酶活性.结果与结论: ①与空白组比较,模型组体积骨密度、相对骨体积、骨小梁数量和骨小梁厚度显著降低(P ＜0.05),骨小梁间距和结构模型指数较空白组显著增大(P ＜ 0.05),血清碱性磷酸酶活性较空白组呈降低趋势, DKK1 mRNA表达显著上调(P ＜ 0.05),成骨相关因子Runx2 mRNA表达呈下调趋势,破骨相关因子CTSK mRNA呈上调趋势;②与模型组比较,左归丸组体积骨密度、相对骨体积和骨小梁数量显著提升(P ＜ 0.05),结构模型指数显著降低(P ＜ 0.05),骨小梁间距有减小趋势但差异无显著性意义,血清碱性磷酸酶活性较模型组呈升高趋势,DKK1 mRNA表达显著下调(P ＜ 0.05),Runx2 mRNA表达呈上调趋势,CTSK mRNA呈下调趋势;③与模型组比较,左归丸组椎体压缩强度显著提升(P ＜ 0.05);④结果说明,左归丸可能通过下调DKK1的表达防治糖皮质激素性骨质疏松.
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XCT-790导致成骨细胞活性下降和骨形成不足的机制
背景:Wnt信号通路在骨细胞的形成、分化和成熟过程中起着重要作用,DKK1、Sost在调节骨量和成骨细胞分化中起负调节作用,是Wnt信号通路的负调节因子.XCT-790是雌激素相关受体α的特异性抑制剂,可调节雌激素信号通路对成骨细胞的功能活动.目的:观察XCT-790对Wnt信号通路抑制因子DKK1、Sost过表达腺病毒载体转染的人成骨肉瘤细胞MG63细胞及其骨形成相关蛋白LRP5、骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、骨保护蛋白、结缔组织生长因子的作用.方法:将MG63细胞分成8组:空白对照组、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组、XCT-790干预空载腺病毒组、XCT-790干预过表达DKK1组、XCT-790干预过表达Sost组、XCT-790干预过表达DKK1+Sost组,根据组别不同分别用上述重组腺病毒转染MG63细胞.应用MTT法检测MG63细胞的活性,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性,流式分析钙离子浓度;Western blot检测低密度脂蛋白相关蛋白5、骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、骨保护蛋白、结缔组织生长因子的表达.结果与结论:①与空白对照组对比,过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组及XCT-790干预空载腺病毒组均可降低细胞活性、碱性磷酸酶活性,提高钙离子浓度;降低低密度脂蛋白相关蛋白5、骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、骨保护蛋白、结缔组织生长因子的表达量,组间比较差异均有显著性意义(P<0.05);②而当XCT-790干预过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组的MG63细胞时,可进一步降低细胞活性、碱性磷酸酶活性,提高钙离子浓度;降低低密度脂蛋白相关蛋白5、骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、骨保护蛋白、结缔组织生长因子的表达量,组间比较差异均有显著性意义(P<0.05);③结果说明,XCT-790直接调节Wnt信号通路的传导,同时也可协同DKK1、Sost共同抑制Wnt信号通路的开放,从而降低成骨细胞活性和骨形成相关蛋白LRP5、骨形态发生蛋白2、骨保护蛋白等的表达量,导致成骨细胞分化、增殖能力减弱和骨形成不足.
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DKK1基因及其基因多态性与口腔疾病的关系研究进展
DKK1是Wnt经典信号通路的重要抑制剂,主要通过与低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6 (low density lipoprotein receptor-related protein5/6,LRP5/LRP6)受体及Kremen-1/2结合成复合物而阻断Wnt信号传导.DKK1基因参与胚胎发育、成骨分化等过程,与口腔多种疾病的发生、发展密切相关.近年来,DKK1基因多态性的研究成为热点,目前已发现其多态性位点与先天性缺牙有相关性.文章就近年来关于DKK1基因及其基因多态性与口腔疾病的关系研究进展做一综述,为进一步研究DKK1基因在口腔疾病发生、发展中的作用提供理论依据.
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人重组蛋白DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力作用
目的 探讨DKK1通过靶基因调节Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力的作用.方法 培养并鉴定口腔鳞癌干细胞,并将细胞分为3组,分别为空白对照组(A组),未转染siRNA;阴性对照组(B组),转染StealthTM RNAi的阴性对照;DKK1 RNAi组(C组),转染DKK1 StealthTMSelect RNAi.利用实时定量PCR(RT-PCR)检测3组的转染效率及口腔鳞癌干细胞中Wnt3a、Pitx2、Oct4 mRNA的表达情况.运用划痕实验和Transwell侵袭实验检测DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移和侵袭的影响.结果 流式细胞仪检测CD44及CD133表达量分别为88.0%及92.8%,提示所培养细胞为口腔鳞癌干细胞.瞬时转染后,应用RT-PCR检测提示,C组Wnt3a、Pitx2及Oct4 mRNA表达量较A组分别下降59.8%、70.7%和66.0%(P<0.05).细胞划痕实验结果显示,A、B、C组24 h的划痕愈合率分别为(54.32%±3.21%)、(49.46%±3.75%)和(14.13%±1.96%),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell实验结果显示,A、B、C组中穿透细胞膜的细胞数目分别为(115.6 ±14.3)个、(131.2 ±19.5)个和(37.3 ±6.8)个,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DKK1可以通过抑制Wnt3a,从而调控Wnt/β-catenin信号通路,进而抑制口腔鳞癌的转移及侵袭.
关键词： DKK1 Wnt/β-catenin信号通路 口腔鳞癌干细胞 迁移 侵袭 -
XCT-790对沉默Dkk1腺病毒载体转染MG63细胞活性和OPN、Lrp5、BMP2影响研究
目的:研究XCT-790对沉默Dickkopf-1(Dkk1)腺病毒转染MG-63细胞活性和OPN、Lrp5、BMP2的影响.方法:构建沉默Dkk1腺病毒载体,实验分为空白对照组、沉默Dkk1组、XCT-790处理空载腺病毒组、XCT-790处理沉默Dkk1组,根据组别不同分别用上述重组腺病毒转染MG63细胞,观察细胞增殖及OPN、Lrp5、BMP2表达情况.结果:①与空白对照组比较,沉默Dkk1组和XCT-790处理空载腺病毒组MG63细胞活性增强,OPN、Lrp5、BMP2的表达量升高((P＜0.05);②与Dkk1沉默组比较,XCT-790处理Dkk1沉默组的MG63细胞活性减弱,OPN、Lrp5、BMP2的表达量降低(P＜0.05).结论:XCT-790可以降低因DKK1沉默而增强的MG63细胞活性,可以降低因DKK1沉默而增高的OPN、Lrp5、BMP2的表达量.
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复发转移性乳腺癌患者外周血BRCA1、CDH1、DKK1和SFRP1甲基化检测意义的研究
目的 探讨BRCA1、CDH1、DKK1和SFRP1基因甲基化与乳腺癌患者肿瘤激素受体状态、复发转移的关系.方法 利用甲基化特异性PCR法(MSP)检测115例复发转移乳腺癌患者外周血BRCA1、CDH1、DKK1和SFRP1的甲基化情况,与65例健康对照组进行比较.结果 BRCA1、CDH1和SFRP1的甲基化状态在复发转移乳腺癌患者与对照组之间存在差异.ER阳性患者外周血CDH1甲基化阳性率27.5%,ER阴性患者47.8%.ER阳性患者外周血SFRP1甲基化阳性率52.2%,ER阴性患者23.8%.有远处转移者CDH1甲基化阳性率为30.2%,而仅有局部复发转移者为63.2%.结论 复发转移乳腺癌患者外周血BRCA1、CDH1和SFRP1甲基化率显著增加,CDH1和SFRP1甲基化与激素受体状态明显相关,为病情评估、治疗及愈后分析提供了一定的参考.
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两种Wnt通路抑制剂对牙周膜干细胞作用的比较研究
目的:本实验主要探讨Wnt通路抑制剂XAV-939相比DKK1在牙周膜干细胞增殖及矿化中的作用差异.方法:酶消化法培养牙周膜干细胞,鉴定后,用CCK8试剂盒检测XAV-939和DKK1对牙周膜干细胞增殖能力的影响,茜素红染色及定量检测XAV-939和DKK1对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响,qRT-PCR检测DKK1和XAV-939对牙周膜干细胞Wnt通路相关基因GSK-3β和β-catenin及成骨分化相关基因ALP,DSPP,BSP,OCN,RUNX-2的影响.结果:XAV-939和DKK1都可以通过抑制Wnt通路来抑制牙周膜干细胞的增殖及成骨分化.当没有外源性Wnt蛋白刺激时,XAV-939作为Wnt通路抑制剂的抑制作用要强于DKK1,而加入外源性Wnt蛋白后,XAV-939与DKK1的作用效果相当.结论:XAV-939对比DKK1,具有更为广泛而稳定的抑制效果.XAV-939可以作为高效的Wnt通路抑制剂应用于未来关于牙周膜干细胞和Wnt通路相关实验研究中.
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血清DKK1水平在肝细胞癌患者预后评估中的应用价值
目的 观察血清DKK1水平在肝细胞癌(HCC)患者预后评估中的应用价值.方法:以2009-01 ～2011-12在我院行手术治疗的42例肝细胞癌患者为研究对象.采用ELISA法检测HCC患者术前、术后血清DKK1水平的变化情况,总结DKK1水平与患者术后复发的相关性.结果 HCC患者经外科手术治疗后血清DKK1水平明显下降(P＜0.05).高表达组HCC患者无瘤生存率低于低表达组(P＜0.05).结论 对HCC患者行术前血清DKK1水平检测可筛选出具有高转移、高复发风险的患者,有助于对这类患者采取有针对性的监测与治疗措施.
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静态张应力对人牙周膜成纤维细胞Wnt10b及DKK1蛋白表达的影响
目的 研究不同静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs) Wnt10b和DKK1蛋白的表达.方法 采用酶解组织块法培养hPDLFs.用加载装置,对hPDLFs施加不同的静态张应力.按加力时间不同将细胞随机分为2h、4h和6h组,每组再按弹力形变不同分为0％、8％、12％和16％形变组,0％为对照组.Western blot技术检测不同时间点和不同形变率hPDLFs中Wnt10b,DKK1蛋白的表达.各组分别进行组内比较.结果 在2h、4h、6h组加力与未加力的hPDLFs比较,Wnt10b蛋白表达显著减少,DKK1蛋白表达显著增多.各组内随着形变率的增大,Wnt10b蛋白表达逐渐减少,DKK1蛋白表达逐渐增多.结论 静态张应力影响hPDLFs中Wnt10b及DKK1蛋白的表达.
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DKK1mRNA 在红藻氨酸致痫大鼠颞叶癫痫形成中的变化
目的：观察 Wnt／β－catenin 信号通路抑制剂 DKK1在红藻氨酸致痫大鼠在颞叶癫痫形成中的表达规律及丙戊酸钠对DKK1mRNA 基因表达的影响。方法利用出生30d 的雄性 SD 大鼠，经皮下注射 KA 制成颞叶癫痫动物模型后，应用 Real －time PCR 技术检测 KA 后1周、4周和8周三个时间点大鼠海马组织中 DKK1的表达，并观察抗癫痫药物丙戊酸钠对 DKK1表达的影响。结果研究结果显示 KA 致痫后在颞叶癫痫形成过程中，KA 组动物海马组织 DKK1 mRNA 的表达同生理盐水（NS）对照组（1．00±0．00）相比，在急性期显著下降（0．42±0．17，P ＝0．000），在自发性反复癫痫形成初期，较急性期表达增高但无统计学意义（1．04±0．24，P ＝0．896），至慢性癫痫稳定形成期较前两时期均明显增高且差异有显著性（1．35±0．25，P 值分别为0．000，0．045）。红藻氨酸＋丙戊酸钠（KA ＋VPA）组大鼠海马组织 DKK1 mRNA 的表达，同 NS 组相比在急性期表达显著下降（0．65±0．26，P ＝0．008），在慢性癫痫稳定形成期表达显著增高（1．30±0．31，P ＝0．039）。在慢性期的表达较急性期（0．65±0．26）和癫痫形成初期（0．94±0．18）均显著增高且有统计学意义（1．30±0．31，P 值分别为0．003，0．033）。 KA ＋VPA 组和 KA 组之间大鼠海马组织 DKK1mRNA 的表达在 KA 点燃后颞叶癫痫形成的不同阶段差异均无显著性。结论 DKk1可通过抑制 Wnt／β－catenin 信号通路参与颞叶癫痫的形成，丙戊酸钠的抗痫作用机制与大鼠海马 DKK1信号分子无关。
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氟染毒对大鼠皮肤成纤维细胞中SOST及DKK1蛋白表达的影响
[目的]观察氟染毒对体外培养新生大鼠皮肤成纤维细胞硬骨素(sclerostin,SOST)和Dickkopf-1(DKK1)蛋白表达的影响.[方法]采用原代培养方法,将大鼠皮肤成纤维细胞分为对照组(0mg/L)和7个染氟剂量组(0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、20mg/L),分别在4个染氟时间段(24、48、72、96h)收集细胞培养上清液,应用ELISA法测定SOST和DKK1蛋白表达水平.[结果]与染氟0mg/L组相比,SOST表达量在染氟48h的0.0001、0.001、0.01mg/L组,染氟72h的1、10 mg/L组及染氟96h的0.001、0.01、0.1、1mg/L组均明显下降(P＜0.05).与染氟24h组相比,SOST表达量在染氟48h的0.01 mg/L组,染氟96h的0.001、0.01、0.1、1、10mg/L组均明显下降(P＜0.05).与染氟0mg/L组相比,DKK1表达量在染氟48h的0.001 mg/L组,染氟72h的0.01、0.1、1、10、20mg/L组及染氟96h的0.01、0.1、1、10、20mg/L组均明显下降(P＜0.05).与染氟24h组相比,DKK1表达量在染氟48h的0.0001、0.001、0.01 mg/L组,染氟72h的0.001、0.01、1、10、20mg/L及染氟96h的0.01、0.1、1、20mg/L组均明显下降(P＜0.05).[结论]氟可导致大鼠皮肤成纤维细胞SOST和DKK1蛋白表达下调.
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Dickkopf-1在肝内胆管细胞癌组织及血清中的表达及其临床意义
目的:探讨Dickkopf-1(DKK1)在肝内胆管细胞癌组织及血清中的表达及其临床意义.方法:应用即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR) 检测16例肝内胆管细胞癌及其癌旁组织标本中DKK1的表达;应用酶联接免疫吸附试验(ELISA)方法检测15例肝内胆管细胞癌患者术前血清及20例健康志愿者中DKK1的表达;应用免疫组织化学检测50例胆管癌组织中DKK1的表达,分析DKK1与临床特征的关系.结果:16例肝内胆管细胞癌组织中DKK1 mRNA 的表达显著高于癌旁组织(P<0.05),ELISA检测显示胆管细胞癌患者术前血清中DKK1含量显著高于正常对照组(P<0.05).免疫组织化学检测显示DKK1阳性表达率为38%(19/50),且DKK1表达程度与肿瘤包膜、血管侵犯、肝门淋巴结转移、TNM分期密切相关,肿瘤无包膜、有血管侵犯、有肝门淋巴结转移和TNM分期III～IV的患者中DKK1表达显著上调(P<0.05).结论:DKK1高表达与肝内胆管细胞癌的肿瘤恶性表型相关,DKK1可能参与肿瘤侵袭和转移.血清DKK1有望作为肝内胆管细胞癌的血清学诊断指标.
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阿托伐他汀在低密度脂蛋白对成骨细胞增殖分化及低密度脂蛋白受体相关蛋白5、Dickkopf-1基因表达影响中的干预研究
目的：探讨低密度脂蛋白( low density lipoprotein, LDL)对小鼠成骨细胞增殖分化以及低密度脂蛋白受体相关蛋白5(low density lipoprotein receptor-related protein 5, LRP5)、dickkopf-1(DKK1)基因表达的影响,同时用阿托伐他汀对上述影响加以干预以分析阿托伐他汀在LDL对成骨细胞影响中的可能干预机制。方法分别运用CCK8、ELISA方法和荧光定量PCR方法检测浓度为0.05、0.10、0.20 mg/ml的LDL在24、48、72 h对成骨细胞增殖、骨钙素表达以及LRP5、DKK1基因mRNA表达的影响,然后检测10-6 mol/L和10-5 mol/L的阿托伐他汀在LDL对成骨细胞作用明显的浓度影响下上述指标的变化。结果在LDL浓度为0.20 mg/ml时对成骨细胞增殖、骨钙素表达以及LRP5、DKK1基因mRNA表达的影响明显。在LDL浓度为0.20 mg/ml的影响下,10-6 mol/L和10-5 mol/L的阿托伐他汀在48 h和72 h均能使小鼠成骨细胞增殖的抑制作用减弱,并明显增加骨钙素的表达,同时上调 LRP5 mRNA 表达水平,显著下调DKK1 mRNA表达水平,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论阿托伐他汀能使LDL对小鼠成骨细胞增殖和分化的抑制作用减弱,其机制可能与影响成骨细胞wnt信号通路中LRP5及其抑制剂DKK1基因表达有关。
关键词： 低密度脂蛋白 阿托伐他汀 成骨细胞 低密度脂蛋白受体相关蛋白5 DKK1 -
糖化低密度脂蛋白对小鼠成骨细胞增殖分化和低密度脂蛋白相关蛋白5、DKK1基因表达的影响
目的：研究不同浓度糖化低密度脂蛋白(糖化LDL)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖分化及低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)、DKK1基因表达的可能影响,探讨Wnt信号通路是否参与了糖化LDL对成骨细胞增殖分化的调节。方法在小鼠成骨细胞株MC3T3-E1培养液中加入0.1 mg/ml的不同浓度的糖化LDL,分别培养24、48、72 h后应用CCK-8检测其对成骨细胞增殖的影响,采用ELISA法检测成骨细胞骨钙素水平；采用realtime PCR方法检测糖化LDL对成骨细胞LRP5、DKK1基因表达的影响。结果在LDL糖化浓度为5.3%24 h时,明显抑制成骨细胞的增殖,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01), LDL糖化越高,对成骨细胞增殖的抑制越明显,在一定的时间和浓度范围内糖化LDL对成骨细胞增殖的作用呈剂量及时间依赖性；与对照组比较,糖化LDL明显抑制成骨细胞中的骨钙素表达,差异具有统计学意义(P<0.01),糖化LDL对成骨细胞骨钙素表达的作用在一定程度上具有剂量及作用时间依赖性；5.3%糖化LDL在48 h时明显下调成骨细胞中的LRP5 mRNA表达水平,显著上调DKK1 mRNA表达水平,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论糖化LDL显著抑制成骨细胞的增殖和分化,这可能与Wnt信号通路中LRP5及DKK1基因表达有关。
关键词： 低密度脂蛋白 成骨细胞 低密度脂蛋白相关蛋白5 DKK1 Wnt信号通路 -
肝癌DKK1基因的表达及突变分析
目的:探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无DKK1基因突变.方法:Northern blot方法分析12例肝癌患者癌和癌旁肝组织DKK1 mRNA表达水平.采用PCR-SSCP方法,检测20例肝癌患者(包括癌和癌旁肝组织)及8种人肝癌细胞株中有无DKK1基因突变,并采用DNA测序对PCR-SSCP突变分析结果加以验证.结果:Northern blot显示12例肝癌患者中7例存在癌组织DKK1 mRNA高表达而癌旁肝组织微弱表达或不表达.突变检测发现20例肝癌患者及8种人肝癌细胞株中仅1例肝癌患者存在DKK1基因的同义突变(单核苷酸多态现象).结论:DKK1在中国人肝癌中存在高表达,但未发现突变发生,提示DKK1基因参与肝癌的癌变过程可能并不依赖于该基因的突变.
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Dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种人肿瘤细胞系中的表达分析
目的:检测dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况.方法:采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT-PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测.结果:肝癌组织检测RT-PCR,10/15肝癌中高表达;Real-time PCR方法检测,8/8肝癌中高表达;Western blot方法检测,5/8肝癌中高表达.酶联免疫吸附实验检测到DKK1在多种恶性肿瘤细胞系的细胞培养液上清液中均有表达,蛋白质表达量波动于5～210 ng/mL之间;10种人恶性肿瘤细胞系在mRNA水平和蛋白质水平DKK1的表达均能检测到.结论:DKK1高表达于肝癌组织及广泛表达于多种恶性肿瘤细胞系,提示DKK1可能在肿瘤的发生、发展中起到重要作用.
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Er∶YAG激光治疗慢性牙周炎对龈沟液中Dickkopf-1水平和ALP活性的影响
目的:检测龈沟液中Dickkopf-1 (DKK1)水平和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,比较Er∶YAG激光辅助超声龈下刮治联合根面平整术(scaling and root planing,SRP)与单纯SRP对慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)疗效的影响.方法:采取半口对照设计方案,纳入11例CP患者,19对38颗患牙,以超声洁治后1周作为基线.按照随机原则,一侧(实验侧)应用Er:YAG激光辅助SRP,另一侧(对照侧)仅采用SRP.分别在基线、治疗完成后1周、1个月、3个月收集龈沟液并通过酶联免疫吸附法检测龈沟液中DKK1水平及磷酸苯二钠法检测ALP活性;并于基线、刮治后1个月、刮治后3个月记录受试牙出血指数(bleeding index,BI)、牙周探诊深度(probing depth,PD)、临床附着丧失(clinical attachment loss,CAL).采用SPSS19.0软件包对实验数据进行统计学分析.结果:无论是激光组还是对照组,治疗后1个月及治疗后3个月,BI、PD、CAL较基线均明显下降,但2组之间临床指标比较无显著差异(P＞0.05).实验组基线、治疗1周、治疗后1个月和治疗后3个月龈沟液中ALP活性逐渐下降,分别为(396.19±150.55)、(386.69±146.42)、(341.22±171.62)、(249.27±98.72) U/L;DKK1浓度亦逐渐下降,分别为(307.12:±45.63)、(297.32±91.34)、(265.87±41.40)、(244.43±43.09)μg/L.对照组同期ALP活性分别为(394.09±±120.25)、(374.72±131.27)、(344.42±127.80)、(252.36±90.4)U/L,DKK1浓度分别为(305.33±47.40)、(310.34±±84.68)、(270.04±±55.14)、(247.31±56.99) μg/L,ALP及DKK1均呈下降趋势,但2组同期ALP活性及DKK1水平无显著差异(P＞0.05).DKK1与CAL呈显著正相关(r=0.675,P=0.00).结论:Er:YAG激光作为非手术方法辅助SRP治疗慢性牙周炎安全有效,远期疗效有待进一步观察.
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血清DKK1水平在塞来昔布一线联合铂类化疗治疗晚期非小细胞肺癌随机对照研究中的临床意义
目的 通过塞来昔布一线与铂类化疗联合治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的随机对照研究评价环氧合酶2(COX-2)抑制剂的抗肿瘤作用及安全性;通过治疗过程中血清DKK1的监测探讨COX-2抑制剂相关的作用机制及疗效预测因子.方法 初治Ⅲ-Ⅳ期NSCLC患者81例,随机分为治疗(长春瑞滨/顺铂+塞来昔布)组及对照(长春瑞滨/顺铂)组.直至第4个疗程中和后随访病情进展.患者初次化疗前及化疗2个疗程后ELISA法检测血清DKK1水平.结果 治疗组客观缓解率(ORR)为34.1％,对照组为15.0％,两组差异具有统计学意义(P＜0.05),治疗组无进展生存期(PFS)略长,为6.3个月,对照组为5.9个月,但差异未达到统计学意义的显著性.治疗前两组患者血清DKK1水平均无差异,且分别与患者年龄、性别、病理分型、分期、吸烟状况和ECOG评分无统计学意义的相关性.化疗2个疗程后两组血清DKK1水平均呈现下降趋势,但治疗组血清DKK1的下降幅度明显大于对照组(中位降低值分别为37.58对2.83 pg/ml,P=0.01);治疗组治疗后血清DKK1水平明显低于治疗前(P＜0.05),对照组治疗前后差异不明显.两组治疗前后血清DKK1水平均未发现与化疗疗效显著相关(P分别为0.908,0.730,0.515,0.413).两组治疗前血清DKK1水平均未能与患者PFS呈现显著相关(P=0.090,0.890),但塞来昔布组化疗后血清DKK1的下降幅度与患者PFS显著相关(P=0.043).结论 COX-2抑制剂塞来昔布一线联合化疗能改善疾病控制率,患者耐受性好.血清DKK1水平可能是预测塞来昔布治疗疗效及预后的潜在生物标志物,尚需要大样本的研究证实.
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LDL对小鼠成骨细胞的影响
目的 研究不同浓度及同一浓度不同作用时间的LDL对小鼠成骨细胞增殖分化及LRP5、DKK1表达的影响,探讨Wnt信号通路是否参与了LDL对成骨细胞增殖分化调节.方法 在小鼠成骨细胞株MC3T3-E1培养液中加入0 05、0.1、0.2 mg/ml的LDL,分别培养24、48、72 h后应用CCK8检测其对成骨细胞增殖的影响,采用ELISA法检测成骨细胞骨钙素水平,分析LDL对成骨细胞分化的影响；采用荧光定量PCR方法检测LDL对成骨细胞LRP5、DKK1基因表达水平的影响.结果 在LDL浓度为0.05 mg/ml 24 h时,明显抑制戊骨细胞的增殖,与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).LDL对成骨细胞增殖的作用呈剂量及时间依赖性.ELISA实验结果显示LDL明显抑制成骨细胞中的骨钙素表达,与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).LDL对成骨细胞骨钙素表达的作用在一定程度上具有剂量及作用时间依赖性.荧光定量PCR实验结果显示LDL在48h浓度为0.05 mg/ml时明显下调成骨细胞中的LRP5mRNA表达水平,显著上调DKK1 mRNA表达水平,与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 LDL能够显著抑制成骨细胞的增殖和分化,这可能与wnt信号通路中LRP5及其抑制剂DKK1基因表达有关.
