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ABCG2在产科领域中的研究进展
ATP结合匣式转运子G2(ATP-Binding Cassette Family G2 Transporters,ABCG2)是胎盘表达的主动转运因子之一,ABCG2的生理作用是保护组织免受内源性毒素或异生物质的损害和维持细胞稳态.ABCG2在人胎盘中高表达,位于合体滋养细胞膜面向母血侧,可以有效地形成母胎循环间的屏障,限制药物、内毒素及异生物质透过胎盘而对胎儿产生影响,并与胎盘分化、细胞凋亡及一些妊娠并发症如子痫前期、妊娠期糖尿病、绒毛膜羊膜炎及胎儿生长受限的发生发展及治疗有关,了解ABCG2有重要的临床意义.综述ABCG2的结构、功能及其在产科领域的研究进展.
关键词： ATP结合匣式转运子 胎盘 妊娠并发症 ABCG2 -
结直肠癌中ABCG2表达与伊立替康为基础化疗疗效相关性研究
目的：明确结直肠癌组织中ABCG2（ATP-binding cassette superfamily G member 2，ABCG2）的表达及其与患者临床病理特征、以伊立替康（CPT-11）为基础化疗疗效的相关性，从而为结直肠癌患者实现个体化治疗提供理论依据。方法：筛选1996年1月至2011年12月于北京大学肿瘤医院行CPT-11化疗的晚期结直肠癌患者，收集患者完整病史资料及肿瘤组织样本。用免疫组织化学的方法检测样本中ABCG2蛋白表达情况。分析ABCG2蛋白表达与患者临床病理特征、CPT-11化疗疗效的相关性。结果：1）免疫组织化学染色显示ABCG2在结直肠癌组织中表达阳性率达93.2%，癌旁正常肠黏膜ABCG2蛋白阳性表达率为43.6%，癌组织较癌旁正常黏膜组织的表达水平明显增高（P<0.05）。ABCG2表达与患者年龄、性别、病理分化程度、病变部位、肝转移均无明显相关性。2）ABCG2蛋白表达与CPT-11化疗疗效无显著相关（P>0.05）。结论：在应用伊立替康为基础方案化疗的结直肠癌患者中，癌组织中ABCG2蛋白表达水平与患者化疗疗效无明显相关。
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慢病毒载体介导的RNAi双敲除ABCG2和UGT1A1的Caco-2细胞模型
目的:构建以Caco-2细胞为研究对象,由慢病毒载体介导ABCG2和UGT1A1基因RNAi干扰的肠道药物吸收和代谢模型.方法:应用慢病毒载体介导的RNAi技术敲除Caco-2细胞的ABCG2和UGT1A1基因,构建双RNAi干扰ABCG2和UGT1A1的Caco-2细胞系.应用RT-PCR,Real-time PCR,Western blotting等方法检测ABCG2和UGT1A1在mRNA及蛋白水平的表达.然后选择干扰高表达细胞株,连续传代监测干扰相应干扰基因的表达变化.结果:成功构建了慢病毒载体介导的RNAi双干扰Caco-2细胞模型,慢病毒ABCG2和UGT1A1单基因干扰效率分别为75％和88％；分组先RNAiABCG2后RNAiUGT1A1的双基因RNAi干扰效率分别为72.3％和85.7％；分组先RNAi UGT1A1后RNAi ABCG2的双基因干扰效率分别为69.7％和88.7％; ABCG2与UGT1A1基因的RNAi干扰先后顺序与终双干扰效果无显著性差异(P＞0.05).Western blotting方法验证ABCG2与UGT1A1的蛋白水平表达也分别相应地明显减少.结论:第一次应用慢病毒载体在Caco-2细胞上同时干扰ABCG2和UGT1A1基因表达.为研究肠道中ABCG2和UGT1A1对口服药物或外源化合物吸收和代谢的联合作用提供可靠细胞模型.
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女性原发性痛风性关节炎患者三磷酸腺苷结合盒蛋白G2基因表达的意义
① 目的 检测三磷酸腺苷结合盒蛋白G2基因(ATP-binding cassette superfamily G2 gene,ABCG2)在女性原发性痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)患者中的表达及其临床意义.② 方法 观察组女性GA患者125例,其中绝经期90例和非绝经期35例.根据疾病进程分急性痛风性关节炎(AGA)62例和间歇期痛风性关节炎(IGA)63例;根据年龄分为 ①a组<50岁 、②b组50～65岁 、③c组>65岁.健康体检女性40例为对照组.检测两组外周血单个核细胞(peripheral blood mono-nuclear cells,PBMCs)中ABCG2 mRNA表达水平及尿酸水平.③ 结果 对照组ABCG2 mRNA和尿酸水平均低于观察组,差异有统计学意义(P<0.05).观察组绝经期患者ABCG2 mRNA水平高于非绝经期患者,差异有统计学意义(P<0.05);a、b、c组ABCG2 mRNA表达水平依次升高,两两比较差异有统计学意义(P<0.05).观察组患者ABCG2 mRNA水平与尿酸水平正相关(r=0.35,P<0.001).④ 结论 绝经期女性GA患者ABCG2为高表达状态,该基因表达检测可能为GA发病机制提供一定理论依据.
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FTC-CD133纳米微粒抑制肝癌干细胞耐药性的研究
目的 制备包裹乳腺癌耐药蛋白(BCRP/ABCG2)多药转运体的特异抑制剂FTC且连接CD133抗体的纳米微粒,并评价其特性和治疗作用.方法 运用复乳蒸发法制备以聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)为载体的包封订C的载药纳米微粒,通过碳化二亚胺法在其表面连接CD133抗体,得到纳米微粒FTC-PLGA-NP-C;分析制备得到的纳米微粒的粒径分布、FTC包封率、载药量和纳米微粒的抗体连接效率;CD133+免疫磁珠法分选出CD133+ SP细胞,MTT法检测CD133+ SP细胞的增殖能力,Western blotting检测SP细胞中ABCG2的表达;荧光显微镜下观察FTC-PLGA-NP-C与CD133+SP细胞的结合效率;将CD133+ SP细胞加入不同浓度的FTC-PLGA-NP-C纳米微粒,Western blotting检测其ABCG2的表达;以同体积PBS为对照,在CD133+ SP细胞中加入FTC-PLGA-NP-C纳米微粒,同时加入阿霉素,HPLC检测孵育不同时间后细胞内阿霉素的浓度.裸鼠腋下荷瘤,成瘤后尾静脉注射FTC-PLGA-NP-C或者0.9％氯化钠溶液,48 h后再由尾静脉注射阿霉素,测量瘤体直径,并采用高效液相色谱法检测裸鼠肿瘤组织中阿霉素的浓度.结果 FTC-PLGA-NP-C呈规则球形,粒径分布为60 ～ 120 nm,载药量为11.27％,包封率为37.18％,与CD133 SP细胞有较好的结合能力;Western blotting检测显示ABCG2在CD133+ SP细胞中表达,且随着FTC-PLGA-NP-C纳米微粒剂量的增加,ABCG2的表达量逐渐降低,到4 mg/ml FTC-PLGA-NP-C时已几乎检测不到ABCG2的表达.从24 h开始,PBS中CD133 SP细胞内阿霉素浓度很快下降至1 μg/ml及以下;而FTC-PLGA-NP-C中CD133+ SP细胞内阿霉素浓度一直维持在2～3 μg/ml.生理盐水组小鼠瘤体直径为(1.845-±0.076) cm,高于FTC-PLGA-NP-C组的(1.238±0.072) cm (t=5.802,P＜0.001);生理盐水组瘤内阿霉素浓度为(2 005±0.154) μg/ml,低于FTC-PLGA-NP-C组的(3.853±0.261) μg/ml(t=6.088,P＜0.001).结论 制备的载药纳米微粒FTC-PLGA-NP-C可较好地靶向肝癌干细胞,并抑制其耐药蛋白ABCG2的表达,降低肿瘤细胞对常规治疗药物的耐药性,提高化疗药物的治疗效果.
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miR-15b通过靶向ABCG2信号通路抑制胶质瘤干细胞迁移及侵染
背景:miR-15b在肿瘤起始和发展过程中发挥重要作用,于是作者推测miR-15b可能参与调解胶质瘤干细胞细胞的迁移和侵染,而这目前尚无相关报道,并且其机制也不清楚.目的:探讨miR-15b对胶质瘤干细胞迁移和侵染的影响及相关分子机制.方法:实时荧光定量PCR检测胶质瘤组织、正常成人脑组织,胶质瘤干细胞及非胶质瘤干细胞中miR-15b的表达情况.①分别以ABCG2特异性siRNA、对照siRNA转染胶质瘤干细胞;②分别以miR-15抑制物、miR-15模拟物及miR-对照分别转染胶质瘤干细胞.转染后48 h,Transwel检测细胞迁移和侵染能力,ELISA法和明胶酶谱实验检测细胞培养上清中基质金属蛋白酶2/9蛋白量及活性变化.将胶质瘤干细胞及非胶质瘤干细胞分别注入裸鼠皮下,30 d内观察成瘤情况.结果与结论:①与正常脑组织相比,胶质瘤中miR-15b的表达明显较低且与胶质瘤所处阶段呈负相关性.与非胶质瘤干细胞相比,胶质瘤干细胞中miR-15b的表达显著下调;②与miR-对照组比较,miR-15b模拟物组细胞迁移及侵染能力显著下降(P<0.01),miR-15b抑制物组细胞迁移及侵染能力显著增加(P<0.01);TargetScan生物学软件预测表明ABCG2为miR-15b潜在的靶基因;③与对照siRNA组比较,ABCG2 siRNA组细胞迁移及侵染能力显著下降(P<0.01);④ELISA检测表明,上调miR-15b基因表达显著抑制基质金属蛋白酶2/9蛋白的表达;⑤ELISA法和明胶酶谱实验检测结果表明,ABCG2 siRNA转染可显著抑制基质金属蛋白酶2/9蛋白的活性,但不影响其表达量;⑥裸鼠体内实验表明,胶质瘤干细胞具有更强的成瘤能力;⑦结果表明,miR-15b通过靶作用于ABCG2调控胶质瘤干细胞的迁移和侵染,上调miR-15b表达可抑制胶质瘤干细胞的迁移和侵染.
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肺癌细胞株A549的常见肿瘤干细胞抗原分析和细胞分选比较
背景:多项研究表明癌症有可能是起源于肿瘤组织内一个细胞亚群即肿瘤干细胞,近期的研究发现肺癌内也存在肿瘤干细胞,但肺癌内存在的肿瘤干细胞的表型目前仍未取得一致.目的:对人类非小细胞肺癌细胞株A549通过目前常见的肿瘤干细胞表面抗原进行全面系统分析.方法:A549肺癌细胞株在常规高糖培养环境下,培养1周后进行表面抗原的检测.使用流式细胞术分析A549细胞CD133,CD44,CD24以及ABC运转蛋白家族G2的表达情况,并且通过流式分选的方法分离出CD44+/CD24+和CD44+/CD24-两类亚群细胞,在低黏附、无血清并添加生长因子的环境下观察肿瘤干细胞肿瘤球形成的能力.结果与结论:①细胞表型变化:A549细胞中度表达肿瘤干细胞常见的抗原CD44(64.23％)和CD24(58.62％),而CD133和ABC运转蛋白家族G2的表达率很低,均约为0.9％,其中CD133/CD44双阳性的细胞数比例极低.表型为CD44+/CD24+和CD44+/CD24-的细胞群比例分别为54.64％和23.38％.两类亚群细胞在碱性成纤维细胞生长因子及表皮生长因子存在的条件下,无血清培养均可形成肿瘤干细胞肿瘤球;②肿瘤球形成效率:CD44+/CD24+和CD44+/CD24-的细胞群其肿瘤干细胞肿瘤球形成效率与A549细胞相比差异无显著性意义;③结果说明:CD44和CD24也许并非肺癌肿瘤干细胞的特异性标志,对于肺癌内肿瘤干细胞的表型鉴别还需要更多的研究.
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胃癌组织中干细胞标志物ABCG2表达及临床病理特征联系
目的:探讨干细胞标志物 ABCG2在胃癌组织中的临床表达 ,并分析其表达状况与临床病理特征的联系.方法:本次研究选取邵阳市中心医院、邵阳医专附属医院间2009.01 -2010.12间40例病理证实的胃癌患者为研究对象 ,测定其胃癌组织中ABCG2表达情况 ,且分析临床病理特征之间的联系 ,了解其相关性.结果:胃癌组织中 ABCG2 阳性表达率为70.0%.胃癌组织中 ABCG2 的表达与分化程度以及淋巴结转移有关( P<0.05) ,统计学有意义.结论:临床中胃癌组织中 ABCG2异常表达 ,呈现高表达 ,且表达与分化程度以及淋巴结转移等紧密相关.
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乳腺癌组织中耐药相关蛋白和P-糖蛋白表达差异的研究
目的:探讨乳腺癌组织中耐药相关蛋白(ABCG2)和P-糖蛋白(P-gp)的表达情况.方法:选取2012年1月～2014年5月在河北医科大学第四医院手术治疗的乳腺癌患者组织标本65例,同时选取乳腺纤维腺瘤组织44例作为对照,采用免疫组化染色检测ABCG2和P-gp蛋白表达情况.结果:在乳腺癌标本中ABCG2和P-gp阳性表达率分别为49.23％和41.54％,均明显高于纤维腺瘤的20.45％和9.09％,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);乳腺癌标本中,肿瘤大直径＞2 cm患者中ABCG2蛋白阳性表达率为59.09％,明显高于肿瘤大直径≤2 cm患者(28.57％),两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而在年龄、临床分期和淋巴结转移间,ABCG2蛋白阳性表达率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);伴有淋巴结转移的患者中P-gp蛋白阳性表达率为62.96％,明显高于无淋巴结转移患者的26.32％,差异有统计学意义(P＜0.05),而在年龄、临床分期和肿瘤大直径间,P-gp蛋白阳性表达率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:ABCG2可能与乳腺癌的恶性增殖有关,而P-gp蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移有关.
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ABCG2单抗联合NPs-PTX体外抑制MM CSCs作用初探
目的 研究ABCG2单抗联合Fe3O4纳米紫杉醇(NPs-PTX)对人多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)癌干细胞(Cancer Stem Cells,CSCs)体外抑制作用.方法 经免疫磁珠分选方法,从人MM细胞系NCI-H929和RPMI8226细胞中分选出CD138-CD34-细胞,采用CCK-8检测、流式细胞仪分析法观察ABCG2单抗联合NPs-PTX对MM CSCs增殖、迁徙的抑制作用和其对凋亡及细胞周期的影响.结果 ABCG2单抗联合NPs-PTX能有效的抑制MM CSCs增殖,抑制率达80%,与单用NPs-PTX比较(55%),差异有显著性(P<0.05);ABCG2单抗联合NPs-PTX组迁徙率为0.6%,较NPs-PTX组(1.7%),差异有极显著性意义(P<0.01);ABCG2单抗联合NPs-PTX能有效诱导MM CSCs凋亡,凋亡率达43.15%,与单用NPs-PTX比较(18.35%),差异有显著性(P<0.05),并使MM CSCs发生G/M期阻滞.结论 ABCG2单抗联合NPs-PTX具有体外抑制人MM CSCs作用,其机制可能与其通过诱导细胞凋亡,发生细胞周期阻滞有关.
关键词： 多发性骨髓瘤 癌干细胞 Fe3O4纳米紫杉醇 ABCG2 体外抑制 -
ABCG2和CD24在乳腺癌组织中表达的临床意义
新发现了一种与肿瘤多药耐药机制相关的药物排出泵-三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(Adenosine triphosphate-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2),ABCG2被认为是侧群(side population,SP)细胞的表型,是一种潜在的干细胞分子标志[1].
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老年患者胃癌组织中CD44和ABCG2的表达及相关性
目的：探讨老年患者胃癌组织中干细胞标志物（CD44）和ATP-结合盒亚家族成员2（ABCG2）的表达及二者的临床相关性。方法采用免疫组化法检测40例老年患者胃癌组织标本中CD44和ABCG2的表达情况，并对两者的临床相关性进行对照观察。结果 CD44蛋白在癌旁胃黏膜、慢性胃炎组织中的阳性表达率分别为0和18.75％（3／16），而在胃癌组织中阳性表达率〔60％（24／40）〕明显高于慢性胃炎组织和癌旁组织（P＜0.05）。 ABCG2在慢性胃炎及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为25％（4／16）和4.54％（1／22），而在胃癌组织中的阳性表达率可达75％（30／40），明显高于慢性胃炎组织（P＜0.05）和癌旁组织（P＜0.01）。 ABCG2蛋白阳性表达的标本中CD44蛋白的阳性表达率较高〔66.7％（20／30）〕，AB-CG2蛋白阴性表达的标本中CD44蛋白的阳性表达率较低〔20％（2／10）〕，CD44与 ABCG2蛋白之间的关系表现为显著正相关（r＝0.94，P＜0.05）。Western印迹显示低分化癌（AGS）、中分化腺癌（SGC7901）和低分化黏液腺癌（MGC803）细胞中CD44与ABCG2均呈阳性表达，显示CD44与ABCG2在三株胃癌细胞中表达无明显差异。结论 CD44在癌变过程中有表达升高现象，CD44参与了胃癌的发生，ABCG2蛋白的高表达与胃癌的发生有关，CD44与ABCG2蛋白在胃癌中均高表达，表明两者共同参与了胃癌的发生。
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ABCG2、MDR1基因表达水平与5-氟尿嘧啶耐药的CD44＋SGC-7901／5-Fu多药耐药关系
目的：探讨乳腺癌耐药蛋白（ABCG2）、P-糖蛋白（MDR1）基因表达水平与5-氟尿嘧啶（5-Fu）耐药的 CD44＋SGC-7901/5-Fu多药耐药关系。方法采用反复短期暴露并逐步递增药物浓度法建立5-Fu耐药胃癌细胞株SGC7901/5-Fu，鼠抗人CD44抗体，流式细胞术（ FACS）检测分选CD44＋SGC-7901/5-Fu。四甲基偶氮唑蓝（ MTT）比色法测定SGC-7901/5-Fu、CD44＋SGC-7901/5-Fu 、CD44-SGC-7901/5-Fu细胞5-Fu耐药指数及交叉耐药性。 RT-PCR方法分别检测对数期生长的 SGC-7901、SGC-7901/5-Fu、CD44＋SGC-7901/5-Fu 、CD44-SGC-7901/5-Fu细胞 ABCG2、MDR1 mRNA表达。结果 CD44＋SGC-7901/5-Fu相对于SGC-7901细胞的耐药指数为12．5（P＜0．05），但CD44-SGC-7901/5-Fu相对于SGC-7901细胞的耐药指数为1．2（P＞0．05）。 CD44＋SGC-7901/5-Fu对ADM、MMC和DDP也有交叉耐药性，CD44-SGC-7901/5-Fu对ADM、MMC和DDP无交叉耐药性。与对照组（正常SGC-790）细胞比较，ABCG2、MDR1在5-Fu耐药的 SGC-7901细胞株中表达明显增强（P＜0．05）。与5-Fu 耐药的 SGC-7901细胞株比较， CD44＋SGC-7901/5-Fu细胞株ABCG2、MDR1表达继续增加（P＜0．05）；。与5-Fu耐药的 SGC-7901细胞株比较，CD44-SGC-7901/5-Fu细胞 ABCG2、MDR1表达差别无统计学意义（ P＞0．05）。结论 CD44＋SGC-7901/5-Fu 细胞株对5-Fu 耐药性明显增强，其多药耐药机制可能与 ABCG2、MDR1mRNA表达增加相关。
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耦联CD133／ABCG2抗体的荧光磁性纳米微粒的制备与靶向性实验
目的：制备耦联抗CD133及ABCG2抗体的荧光Fe3 O4纳米微粒，用于肝癌的早期诊断和癌细胞转移后的定位。方法采用共沉淀法制备Fe3 O4磁性纳米粒子，在其外面包裹羧基化葡聚糖，然后与带有荧光基团的CD133及ABCG2抗体耦联，制备成一种可以检测CD133和 AB－CG2双阳性细胞的免疫磁性纳米微粒，继而检测其表征和抗性；体外检测制备的磁性纳米微粒对人SP细胞的靶向性；肝癌 SP 细胞裸鼠皮下种植制作肝癌模型，尾静脉注射经筛选的纳米微粒，用荧光显微镜观察磁性纳米微粒的体内靶向作用。结果成功制备得到了具有磁性、粒度均匀的磁性纳米微粒，且在体内外均有荧光和对肿瘤干细胞的靶向性。结论成功制备得到了可用于检测CD133及ABCG2双阳性肝癌干细胞的免疫荧光磁性纳米微粒。
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ABCG2基因rs2231142位点多态性与汉族女性痛风的相关性
目的:ABCG2基因第5外显子区单核苷酸多态性位点rs2231142与中国汉族男性痛风密切相关,基于痛风易感基因存在性别差异的考虑,本研究旨在探讨该单核苷酸多态性位点与中国汉族女性人群痛风易感性之间的相关性.方法:选取185例女性痛风患者和311例女性正常对照者,提取外周血基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR技术),特异性扩增ABCG2基因所需要的目的片段并测序,比较痛风组和正常对照组的基因型频率及等位基因频率分布情况.结果:rs2231142位点的CC、CA、AA基因型频率在两组间存在显著差异(x2=16.519,P＜0.001),且痛风组中A等位基因频率显著高于正常对照组(分别为42.2％和29.3％,P＜0.001,OR 1.76 [95％CI:1.35-2.31]).结论:ABCG2基因第五外显子区rs2231142(C/A)位点的单核苷酸多态性与中国汉族女性人群痛风易感性密切相关,携带A等位基因的汉族女性人群有更高的痛风患病率.ABCG2基因首次被证实为中国汉族女性人群的痛风致病易感基因.
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核质双向转运受体Importin13在翼状胬肉中的表达及意义
目的:探讨核质双向转运蛋白Importin 13(IPO13)在翼状胬肉中的表达及意义.方法:收集2015年1月至2015年6月在中南大学湘雅医院眼科门诊确诊为“翼状胬肉”并行手术切除患者标本5例作为翼状胬肉组,收集人正常球结膜组织5例作为人正常结膜组织组,采用免疫组织化学方法检测两组结膜上皮和翼状胬肉组织IPO13、核转录因子p63、ABCG2、CD133的表达.结果:IPO13及p63表达定位于结膜上度和翼状胬肉组织上皮基底细胞核内,ABCG2表达定位于结膜上皮和翼状胬内上皮基底细胞层细胞浆及细胞膜,CD133表达定位于结膜上皮和翼状胬肉上皮基底细胞层细胞膜.IPO13、p63、ABCG2及CD133在人正常结膜组织中均呈低表达(光密度OD值IPO13:0.43± 0.30;p63:139.09± 40.15;ABCG2:63.63± 22.56;CD133:70.31±33.41);在翼状胬肉中表达均明显增高(OD值IPO13:155.1±21.80;p63:617.35± 87.43;ABCG2:214.03± 34;CD133:201.05± 46.38).两组之间差异显著(IPO13:t'=15.87,P＜0.005;p63:t'=1 1.92,P＜0.005;ABCG2:t=8.15,P＜0.005;CD133:t=5.08,P＜0.005).结论:IPO13、p63、ABCG2及CD133在翼状胬肉中高表达提示其可能在翼状胬肉异常增殖性病变中起着正向调控作用.
关键词： 翼状胬肉 Importin13 P63 ABCG2 CD133 -
多发性骨髓瘤RPMI-8226和NCI-H929细胞表达ABCG2和ABCB5及意义
研究ATP结合盒(ABC)转运体ABCG2、ABCB5在多发性骨髓瘤(MM) RPMI-8226和NCI-H929细胞的表达及意义.方法:用实时定量反转录酶-聚合酶链锁反应(qRT-PCR)及蛋白印迹(Western blot)法检测MM细胞中ABCG2、ABCB5的表达,并观察两株细胞在增殖、克隆、耐药及致瘤性等方面的差异.结果:qRT-PCR和Western blot显示ABCG2、ABCB5均表达于RPMI-8226和NCI-H929细胞,且前者的表达水平较后者明显增高(P＜0.05).与NCI-H929细胞相比,增殖、克隆、耐药实验,RPMI-8226细胞增殖速度快、克隆形成能力强、对长春新碱的耐受性高(P＜0.05).成瘤实验显示第10周时RPMI-8226组鼠出现了肿瘤而NCI-H929组鼠始终未出现肿瘤.ABCG2、ABCB5高表达于RPMI-8226细胞,可能是其耐药性较NCI-H929细胞增高的机制之一.这将为MM细胞化疗药物的筛选和靶向耐药分子ABCG2、ABCB5治疗MM提供实验依据.
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小鼠黑色素瘤细胞系B16F10中侧群细胞的分离及其耐药性初探
利用荧光活化细胞分选技术,我们分选小鼠黑色素瘤B16F10细胞系中的侧群细胞(SP细胞)和非侧群细胞(Non-SP细胞),用噻唑兰(MTT)法检测化疗药长春新碱对两群细胞的抑制率,计算半数抑制浓度(IC50),并通过RT-PCR和荧光定量PCR法比较两者ABCG2基因表达量.结果显示,B16F10细胞系中存在0.96%的SP细胞,化疗药长春新碱对SP细胞的IC50是1.26 μg/ml,对Non-SP细胞的IC50是0.37 μg/ml,两者差异有显著性意义(P＜0.05).荧光定量PCR法检测SP细胞的ABCG2分子表达量是Non-SP细胞的6.27倍.结果提示,小鼠黑色素瘤细胞系B16F10中存在SP细胞,其较Non-SP细胞显示出更强的耐药性,SP细胞较高表达ABCG2可能是其耐药机制之一.
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悬浮球培养法制备ABCG2阳性表达胃癌细胞株
目的:探讨悬浮球培养法制备具有干细胞特性(ABCG2阳性表达)胃癌细胞株MKN45的可行性.方法:采用悬浮球培养法在含成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)的无血清培养基中培养人胃癌细胞株MKN45,观察细胞球体的形成过程,并检测球体细胞及原代贴壁细胞中干细胞标志物ABCG2的表达水平.结果:在无血清培养基培养条件下,胃癌细胞MKN45能形成悬浮球体;球体细胞ABCG2表达水平高于原代贴壁细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:悬浮球培养法可制备具有肿瘤干细胞特性的ABCG2阳性表达胃癌细胞株,为后续研究奠定了基础.
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KEAP1基因突变调控Nrf2-ABCG2信号介导胃癌耐药的研究
目的：研究KEAP1基因突变通过Nrf2-ABCG2信号通路介导胃癌耐药的分子机制。方法：PCR测序法检测胃癌病人肿瘤组织中KEAP1基因突变，免疫组织化学分析胃癌组织中Nrf2及ABCG2表达情况。根据是否携带KEAP1突变分为突变组和未突变组，比较组间术后生存期及Nrf2和ABCG2表达量。结果：126例胃癌病人中检测到15例KEAP1基因突变，突变频率为11.9%。 KEAP1基因突变组胃癌病人术后中位生存期为14.0个月，低于KEAP1基因无突变组（40.5个月），其差异有统计学意义（χ2=4.360，P<0.001）。KEAP1基因突变的胃癌病人中，Nrf2及ABCG2蛋白表达量高于KEAP1基因未突变的病人，其差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：KEAP1基因突变通过上调Nrf2及ABCG2的表达，增强胃癌细胞的耐药性。
