抗CD80单克隆抗体Galiximab

Galiximab(IDEC-144)是一种猴源性的、抗CD80(B7-1) IgG1的单克隆抗体,包含短尾猴IgG1的可变区和人IgG1的恒定区.本品由美国Biogen Idec公司研制,并在研制中使用了一项名为PRIMATIZED的抗体技术以降低免疫原性.

雷公藤多甙和白细胞介素-1 0对人树突状细胞表面人类白细胞抗原-DR和CD80表达及白细胞介素-12 p40转录和分泌的影响

目的:研究雷公藤多甙和IL-10对人树突状细胞(DC)表面人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)和CD80表达及IL-1 2 p40转录和分泌的影响.方法:通过粒细胞-巨噬细胞型集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)体外培养体系,从人外周血单个核细胞中获得DC,细胞表面HLA-DR和CD80表达采用流式细胞仪分析,IL-12 p40转录和分泌分别采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术和ELISA法.结果:雷公藤多甙(5～20μg/m1)、IL-10(50～200 ng/ml)能下调DC表面HLA-DR和CD80的表达,同时雷公藤多甙、IL-10能抑制DC内IL-12 p40 mRNA的转录和分泌.结论:雷公藤多甙、IL-10能通过抑制表面分子的表达和细胞因子的合成而干扰DC的成熟和功能.

系统性红斑狼疮患者血清中IL-10抑制抗原递呈细胞表面HLA-DR和CD80的表达

目的:研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清中的IL-10对正常单核细胞分化形成的树突状细胞(dendritic cells,DCs)及其前体单核细胞抗原递呈相关膜表面分子表达的影响.方法:分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),并采用GM-CSF+IL-4方案诱导分化形成DCs,在此过程中加入不同IL-10水平的SLE患者血清或混有IL-10中和抗体的SLE患者血清,联合培养7天后收集细胞,经形态学鉴定,以流式细胞术检测HLA-DR、CD80、CD86的表达.结果:在SLE血清的作用下,DCs的HLA-DR、CD80的表达下调,CD86表达不受影响;中和SLE血清中的IL-10后,HLA-DR、CD80表达能够恢复.其前体细胞单核细胞的HLA-DR、CD80的表达也可被SLE血清下调,用中和抗体中和IL-10后,其表达可部分恢复.结论:高IL-10水平的SLE血清能够抑制DCs及其前体单核细胞表面分子HLA-DR、CD80的表达,对抗原递呈细胞的功能可能产生影响.

血管活性肠肽对裸鼠移植瘤CD80和CD86表达的影响

目的 研究血管活性肠肽(VIP)对裸鼠移植瘤CD80、CD86表达的影响.方法 建立裸鼠皮下实体瘤模型,当接种了MKN45实体瘤的裸鼠的肿瘤体积约为30mm3时随机分为VIP组、VIP受体拮抗剂组、对照组3组,每组6只.皮下注射VIP或VIP受体拮抗剂10 μg· 100 ml-1·d-1,对照组PBS 100 μl/d.4周后处死裸鼠,取出移植瘤,用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中CD80、CD86蛋白表达的变化.结果 CD80、CD86在VIP处理组、VIP受体拮抗剂处理组、对照组瘤块组织中均有表达.VIP组CD80的表达明显低于VIP受体拮抗剂组(P＜0.05)；VIP组CD86蛋白的表达显明低于对照组(P＜0.05)；而其他各组间两者的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 血管活性肠肽抑制裸鼠移植瘤中CD80、CD86的表达.

免疫共刺激分子增强自噬小体疫苗诱导的T细胞应答

自噬小体疫苗DRibble被证实可以有效诱导小鼠和人T细胞应答,为了进一步增强DRibble疫苗诱导人T细胞应答的能力,本研究将免疫共刺激分子OX40、CD80和对照质粒分别转染至表达CMV pp65蛋白的LI3-pp65细胞系中,制备3种类型的DRibble疫苗为:Ctrl/pp65 DRibble、OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble.通过ELISA法检测不同DRibble疫苗诱导树突状细胞表达IL-12的水平,结果显示,OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble诱导树突状细胞表达IL-12的水平显著高于Ctrl/pp65 DRibble.进一步将3种DRibble疫苗分别刺激树突状细胞后与扩增的CMV特异性T细胞共培养,通过流式细胞术检测表达IFN-γ的T细胞占总T细胞的百分比.实验结果显示,与Ctrl/pp65 DRibble相比,OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble诱导CD8+T细胞表达IFN-γ的能力显著增高,OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble 诱导CD4+T细胞表达IFN-γ的水平也显著高于CtrL/pp65 DRibble.实验证明免疫共刺激分子OX40和CD80修饰均可以加强DRibble疫苗体外诱导人T细胞应答的能力.

mTERT启动子调控的CD80-SEA基因重组腺病毒载体的构建及在不同肿瘤细胞中的表达研究

目的:构建小鼠端粒酶反转录酶(mTERT)启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体,并观察其介导的SEA和CD80在小鼠肝癌细胞Hepal-6、结肠癌细胞CT26、黑色素瘤细胞B16和成纤维细胞NIH3T3中的表达情况.方法:采用AdEasy腺病毒体系,亚克隆mTERT核心启动子区至穿梭质粒pShuttle2,并在其上游插入myc-Max反应元件MMRE,用来调控SEA及CD80基因的表达,构建SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS,转化Ad293细胞制备病毒并纯化,然后将病毒以感染复数为100的浓度分别感染上述四种细胞.采用免疫荧光染色法及流式细胞术检测SEA和CD80在细胞膜表面的表达情况.结果:以感染复数为100病毒量感染上述细胞后,CD80和SEA的不同肿瘤细胞上表达率不同,而病毒感染的NIH3T3细胞不表达SEA和CD80.结论:成功地构建了mTERT启动子调控的SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体,能够调控SEA和CD80基因在不同肿瘤细胞中的靶向表达,但表达效率有所不同.为进一步采用同一腺病毒对不同肿瘤细胞的进行靶向基因治疗研究奠定了基础.

氯胺T法标记B7-2单抗6C8的方法学研究

目的:建立125I标记B7-2单抗6C8的方法,探讨其佳标记条件.方法:氟胺T法标记单抗6C8,改变标记条件:抗体的量分别为3μg、6μg、9μg、12μg;125I的活度分别为0.925 MBq、1.85 MBq,3.7 MBq、7.4 MBq、14.8 MBq;CH-T的量分别为10μg、20μg、30μg、40μg、50μg;反应时间分别为30 s、1 min、2 min、4 min;每次实验均重复3次,根据实验结果调整标记条件.标记好后,找出佳标记条件,在生理盐水和人血清中分别作不同时间的标记率稳定性测定,以30 min、1 h、2 h、4 h、6 h,24 h为时间点,选出标记率高的时间点.纸层析法测定标记率及放化纯.结果:抗体量对标记率没有影响;Na125I3.7 MBq时标记率为(74.53±5.12)%,放化纯为(90.40±3.01)%;CH-T 20μg时标记率为(81.00±14.75)%,放化纯为(95.17±4.45)%;反应时间30 s时标记率为(80.67±13,32)%,放化纯为(88.93±10.16)%.室温下放置3 d标记率为(83.12±8.47)%,加八人血清后放置24 h标记率为(5.23±0.90)%.结论:上述氯胺T法佳标记条件为:Na125I 3.7 MBq,氯胺-T 20μg,6C8抗体6μg,Na2S2O5 μg,反应时间30 s.该方法具有较高的标记率和较差的稳定性.

B7-H4在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:制备小鼠抗B7-H4单克隆抗体后研究B7-H4在胰腺癌中的表达情况及临床意义.方法:以稳定表达B7-H4胞外段的3T3-B7-H4细胞为免疫原,免疫Babl/C小鼠;应用常规杂交瘤技术将免疫的小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,使用间接ELISA方法筛选分泌抗B7-H4单克隆抗体的杂交瘤细胞株.对所获得的单克隆抗体进行亚型鉴定,使用Western blot、免疫沉淀和免疫组化等方法对单克隆抗体特异性进行鉴定;应用免疫组织化学染色检测B7-H4分子在胰腺癌中的表达情况,并评价其与临床病理特征的关系.结果:获得1株亚型为IgM、轻链为K型的单克隆抗体,经鉴定该单克隆抗体能与B7-H4发生反应.免疫组化显示:胰腺癌组织中B7-H4在胞浆和(或)胞膜弥漫表达,表达量显著高于正常胰腺组织(P＜0.05).B7-H4在临床肿瘤分级较高患者的胰腺癌组织及有淋巴结转移患者的胰腺癌组织中表达显著增强.结论:成功获得了特异性抗B7-H4的单克隆抗体,B7-H4在胰腺癌组织中表达上调,并与患者肿瘤分级和淋巴结转移密切相关.

足细胞功能紊乱与微小病变性肾病

微小病变性肾病(MCD)是肾病综合征常见的病理类型之一,其病理主要表现为肾小球脏层上皮细胞足突广泛融合.目前越来越多的研究表明,足细胞损伤是MCD蛋白尿产生的关键环节.在MCD小鼠模型及人肾组织中均发现,足细胞裂隙膜蛋白nephrin、podocin和骨架蛋白synaptopodin的表达下调,且蛋白尿的多少与其表达下降程度相关;synaptopodin表达越多,患者对激素治疗反应越好.近年来,关于MCD足细胞损伤的焦点集中于足细胞来源的两种蛋白:CD80和血管生成素样蛋白4.来自外界的微生物或抗原作用于足细胞,通过激活κB基因序列致CD80过表达,进而破坏足细胞骨架蛋白,改变肾小球滤过率,引起蛋白尿;过表达的血管生成素样蛋白4可破坏肾小球基底膜电荷屏障,导致足突融合,诱发MCD.但有关诱发CD80和血管生成素样蛋白4持续过表达的关键因素以及两者与肾小球基底膜之间相互作用的具体致病过程并不明确,有待更深入的研究证实.基于MCD足细胞损伤机制的研究,NF-κB抑制剂和唾液酸化治疗措施在不久的将来也许可以作为MCD的一种新型的非免疫治疗方案.

负性共刺激分子B7-H4在泌尿系肿瘤中的研究进展

B7-H4是近年来新发现的共刺激分子B7家族成员之一,它通过抑制T细胞的增殖、活化以及细胞因子的合成来降低免疫应答.B7-H4高表达于人类的肿瘤组织,其与泌尿系肿瘤的进展和预后均有联系,通过对B7-H4的研究将有助于为泌尿系肿瘤的早期诊断、预后判断及免疫治疗提供新的策略和方法.本文就国内外关于B7-H4与泌尿系肿瘤的有关研究进展进行综述.

骨关节炎中软骨细胞的CD80/CD86的表达及白细胞介素18对其影响

目的探讨软骨细胞及γ-干扰素(γ-IFN)在骨关节炎发病中的作用.方法收集10例膝关节骨关节炎患者软骨标本为病例组,同时收集8例股骨颈骨折患者软骨标本为正常对照组.经过软骨细胞培养及γ-IFN的刺激,采用流式细胞技术检测CD80/CD86的表达情况.结果病例组软骨细胞表达CD80的阳性细胞百分率(2.47%±0.59%)比正常对照组软骨细胞(0.94%±0.25%)高(P＜0.01).病例组软骨细胞表达CD86的阳性细胞百分率(1.71%±0.71%)比正常对照组软骨细胞(0.93%±0.47%)高(P＜0.01).正常对照组软骨细胞在γ-IFN刺激后CD80阳性百分率(7.39%±3.18%)比刺激前明显增高(P＜0.01),CD86阳性百分率刺激后(4.96%±3.11%)明显升高(P＜0.01).OA组软骨细胞在γ-IFN刺激后CD80和CD86阳性百分率(7.54%±4.47%、6.52%±4.24%)比刺激前明显增高(P＜0.01).两组软骨细胞在γ-IFN刺激后CD80和CD86的表达差异均没有显著性.结论正常软骨细胞有抗原提呈的潜能,γ-IFN可以诱导正常软骨细胞表达CD80/CD86增加,γ-IFN在骨关节炎发病中可能发挥致炎因子的作用.

CD80、CD86表达与ITP患者免疫紊乱的相关性研究

目的 研究CD80、CD86表达与免疫性血小板减少症(ITP)患者免疫紊乱的相关性.方法 纳入90例ITP患者作为研究对象,采用流式细胞术检测所有患者外周血中CD19+CD80+、CD19+CD86+及CD19+B细胞内抗体IgG、IgM的表达水平.所有患者均接受重组人血小板生成素(rhTPO)+泼尼松治疗,随访记录完全缓解率,采用Logistic多因素分析探讨ITP预后高危因素,采用偏相关分析CD19+CD80+、CD19+CD86+与IgG、IgM表达水平的相关性.结果 随访3～11个月,平均随访时间(7.95±2.74)月,ITP完全缓解率为46.67％,多因素分析结果显示CD19+CD80+、CD19+CD86+、IgG及IgM是影响预后的高危因素(P<0.05).CD19+CD80+与IgG、IgM呈线性分布,经偏相关分析发现均具有正相关性(r=0.229,0.592;P=0.031,P<0.001).CD19+86+与IgG、IgM呈线性分布,经偏相关分析发现均具有正相关性(r=0.415,0.292,P<0.001,0.005).结论 CD80和CD86与免疫紊乱密切相关,是影响ITP患者预后的高危因素,CD80和CD86的过度表达可能是CD19+B细胞过度活化,并介导免疫功能紊乱的重要机制.

感染后肠功能紊乱大鼠肠道DCs和细胞因子IL-1β、IL-4的表达

目的 建立感染后肠功能紊乱大鼠模型,探讨大鼠肠道免疫耐受功能变化.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,用福氏志贺痢疾杆菌灌胃制造感染后肠功能紊乱大鼠模型.然后评价两组大鼠同肠末端和远端结肠大体形态和组织学评分,免疫组化检测肠道表面分子CD11c与共刺激分子CD80、CD86表达,检测IL-1β、IL-4表达.结果 建立感染后肠功能紊乱大鼠模型后,免疫组化示实验组大鼠远端结肠CD11c、CD80、CD86表达较对照组均明显增高(P＜0.05),且回肠末端和远端结肠IL-1β表达均显著增加(P＜0.05).结论 感染后肠功能紊乱大鼠肠道局部免疫耐受功能降低,影响肠道促炎因子与抑炎因子表达失衡,使肠道功能发生紊乱.

嵌合DNA hsp70/CD80真核表达质粒的构建及鉴定

目的构建hsp70/CD80嵌合DNA真核表达质粒,并对其进行鉴定.方法采用基因工程技术,分别以pBR322-hsp70和pcDNA3-CD80质粒为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增出hsp70/CD80嵌合目的基因,然后与pcDNA3载体进行连接重组,构建成hsp70/CD80嵌合DNA真核表达质粒,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定.结果 hsp70/CD80嵌合DNA重组真核表达质粒经证实构建成功.结论 hsp70/CD80嵌合DNA重组真核表达质粒的成功构建,为进一步制备结核病hsp70/CD80嵌合DNA疫苗奠定了基础.

单顺反子表达人GM-CSF和B7.1融合基因真核表达载体的构建和鉴定

目的构建单顺反子表达人GM-CSF和B7.1融合基因真核表达载体.方法应用巨引物PCR技术对hGM-CSF基因cDNA进行定点突变;应用PCR重叠延伸法,将hGM-CSF和hB7.1基因的cDNA编码序列通过一linker序列拼接,构建hGM-CSF与hB7.1融合基因hGM-B7.1,将其插入pcDNA3真核表达载体,测定核苷酸序列.结果序列分析表明:(1)hGM-CSF突变体基因cDNA编码序列的178位核苷酸由C变为A,其余核苷酸序列均未发生变化;(2)hGM-CSF、linker、hB7.1的连接顺序、方向及序列完全正确.结论构建pcDNA3-hGM-B7.1融合基因真核表达载体成功.

人B7.1基因cDNA的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

目的克隆人B7.1全长cDNA及构建相应的逆转录病毒表达载体。方法应用逆转录多聚酶链反应从人B淋巴瘤细胞系Raji中克隆B7.1全长cDNA,再将cDNA插入到质粒pBluescript中,经自动荧光测序证实无误后,再通过定向克隆构建相应的逆转录病毒表达载体PLXSNhB7。结果逆转录多聚酶链反应扩增产物长度与预期的889 bp一致;用M13正、反向引物进行荧光测序证实,克隆出的序列与GenBank的B7.1 cDNA序列完全一致;人B7.1全长cDNA被成功地插入到质粒PLXSN中。结论人B7.1全长cDNA的克隆及相应逆转录病毒表达载体的构建为今后应用B7.1进行肿瘤免疫基因治疗提供了可能性。

131I标记抗CD80单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的放射免疫显像

目的 探讨放射性核素131I标记抗CD80单克隆抗体及标记物在荷淋巴瘤裸鼠体内的放射免疫显像.方法 采用Iodogen法进行抗CD80单克隆抗体4E5的131I标记,并对标记抗体的免疫活性及稳定性进行分析.经荷淋巴瘤裸鼠模型尾静脉注入剂量为7.4 MBq/0.2 ml的131I-4E5抗体,分别于注药后24h、48 h和72 h进行SPECT平面显像,采用感兴趣区(ROI)技术进行半定量分析,计算肿瘤与非瘤组织的放射性计数比值(T/NT).显像结束后处死荷瘤裸鼠,分别取肿瘤、血等14种脏器或组织称重并测量其放射性计数,计算各脏器或组织的每克组织百分注射剂量率(％ ID/g).结果 131I标记单克隆抗体4E5的标记率为(78.3±2.4)％,放射化学纯度为(95.7±1.8)％;131I-4E5抗体与Raji细胞的大结合率为(36.1±2.6)％,131I-4E5抗体加入到血清中放置3天后放化纯度仍＞90％;荷瘤裸鼠注入131I-4E5抗体后,随时间的延长,肿瘤部位放射性浓聚逐渐增加,在72 h时肿瘤显影为清晰,T/NT值此时大达到3.2.结论 131I-4E5抗体在荷淋巴瘤裸鼠体内具有靶向定位能力,可获得良好的放射免疫显像图像,为进一步利用131I-4E5进行淋巴瘤CD80为靶点的放射免疫治疗奠定了基础.

卵巢上皮癌组织中HLA Ⅰ、 CD54和CD80的表达及其临床意义

目的:研究卵巢上皮癌(OEC)组织中人类白细胞抗原Ⅰ(HLAⅠ)、CD54和CD80的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化法检测HLAⅠ和CD54的表达,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测CD80 mRNA的表达.结果:44份OEC组织中,HLA Ⅰ、CD54的阳性表达率分别为59.09%和45.45%.CD80 mRNA的表达率为9.09%.HLAⅠ类分子的阳性表达在Ⅲ～Ⅳ期显著低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05),有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组(P＜0.05),肿瘤复发组显著低于未复发组(P＜0.01).CD54的表达率与临床指标及复发均无关,但在无HLAⅠ表达组,CD54表达患者的复发率显著升高(P＜0.05).CD80mRNA阳性4例均未复发,而CD80mRNA阴性者复发率为57.5%,两组差异有显著性(P＜0.05).HLAⅠ与CD80同时缺乏时,患者复发率较HLAⅠ与CD80共表达时复发率显著升高(P＜0.01).结论:OEC可能通过HLAⅠ、CD80、及CDD54的异常表达逃避机体的免疫监视.检测上述调节分子的表达,可能对判断OEC患者的预后及指导免疫治疗有一定的意义.

Objective:To determine expressions of HLA class I and CD80 in humanepithelial ovarian carcinomas(EOC) and the clinical significance.Methods:Expression of HLA class I was detected by immunohistochemical technique. Expression of CD80 mRNA was examined by reverse transcriptions-polymerase chain reaction(RT-PCR).Results:The positive rate of HLA classⅠ was 59.09%.CD80 mRNA was expressed on 9.09% of all 44 EOC tissues.HLA classⅠ expression rate in stage Ⅲ-Ⅳ was lower than that in stage Ⅰ-Ⅱ;in tumors of node-positive patients was lower than that of node-negative patients(P＜0.05).In patiens with tumors expressing HLA class Ⅰ antigens,recurrence rate was lower than that in patients with tumors deficient in HLA class Ⅰ(P＜0.01).In four patients with tumors expressing CD80 mRNA,recurrence did not occur,in contrast to patients with tumors lacking CD80 mRNA,in whom tumor relapse rate was 57.5%(P＜0.05).Relapse ratein tumors deficient both HLA class Ⅰ and CD80 was significantly higher than that of tumors coexpression the two molecules.Conclusions:EOC cells may escapefrom the immune surveillance of the host through downregulating expressions ofHLA class Ⅰ and CD80.Evaluation of expressions of these surface immunoregulatory molecules may be helpful for judging prognoses of EOC patients and guiding immunotherapy.

4-1BB与肿瘤特异性免疫治疗研究进展

4-1BB(CD137)是新近发现的一种新型共刺激分子,其单独作用(抗4-1BBMoAb或4-1BBL)及联用其他共刺激分子(如B7-1)或细胞因子(如IL-12)显示了强效的抗肿瘤作用,且联用较单用时更显著、持久.现主要从4-1BBL、抗4-1BB-MoAb及联用B7-1、IL-12等方面作一综述.