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非编码区基因突变对Tn+肿瘤细胞Cosmc mRNA的影响
目的 探讨Tn+肿瘤细胞分子伴侣(Cosmc)非编码区基因突变的方式及其对Cosmc转录水平的影响.方法 免疫磁珠分选肿瘤组织中Tn+、Tn-细胞,提取基凶组DNA(gDNA)和总RNA;RT-PCR检测T-synthase及Cosmc mRNA转录水平的表达状况;PCR扩增Cosmc非编码区基因,基因测序寻找突变位点.结果 Tn-细胞中未发现基因突变,但部分病人肿瘤组织Tn-细胞存在等位基因嵌合体.Tn+肿瘤细胞均可见基因突变,但突变方式和位点并不完全一致.部分病人表现为杂合缺失,部分病人表现为点突变.Tn+、Tn-细胞T-synthase mRNA转录水平无明显差异,Tn+细胞Cosmc mRNA转录水平明显降低.结论 Tn+肿瘤细胞Cosmc非编码区存在基因突变,可能影响Cosmc基因转录导致肿瘤细胞表达Tn抗原.
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胃癌微卫星不稳定性和抑癌基因杂合缺失
目的研究微卫星不稳和抑癌基因缺失在胃癌发生中的作用.方法采用PCR为基础的方法,检测了53例胃癌中6个微卫星标记突变及APC/MCC和DCC基因杂合缺失(LOH).结果胃癌微卫星不稳的检出率为32.1%(17/53). 7例(13.2%)为微卫星高频率不稳(3个以上微卫星标志),10例(18.9%)为微卫星低频率不稳(1或2个微卫星标记 ). 肠型胃癌微卫星高频率不稳的发生率(25.0%)显著高于弥漫型胃癌(3.4%)(P＜0.0 5). 高频率不稳组未发现有APC,MCC和DCC基因LOH,微卫星高频率不稳与APC/MC C和DCC基因LOH呈负相关.结论微卫星不稳在部分胃癌,特别是肠型胃癌早期发生中起重要作用, 高频率不稳胃癌与遗传性非息肉大肠癌有共同的特点. 与此相反,低频率不稳和无不稳胃癌可能通过LOH病理途径发生.
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结直肠癌缺失基因201单核苷酸多态性与结直肠癌的相关性研究
结直肠癌缺失基因(DCC)因位于结直肠癌高频杂合缺失区域18q21而被认为是抑癌基因[1].重组腺病毒携带DCC基因转染多种癌细胞株均发现其能诱发凋亡[2].研究表明,DCC能与.netrin-1结合共同介导轴突细胞间的黏附和分化,并在结直肠癌中发现netrin-1的异常表达[3-4].鉴于DCC基因序列中168位的单核苷酸多态性引起的氨基酸替换与恶性肿瘤淋巴转移相关联[5],本研究应用Taqman探针技术对我国上海地区散发性结直肠癌患者和非癌对照组进行DCC基因201Arg/Gly多态性基因型测定与比较,旨在从单核苷酸多态性的角度揭示DCC基因参与散发性结直肠癌发生和进展的情况.
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散发性结直肠癌4号染色体长臂的杂合缺失分析
目的:通过在4号染色体长臂高频杂合缺失(LOH)位点寻找结直肠癌相关的肿瘤抑制基因.方法:荧光标记的微卫星引物与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应(PCR).PCR产物在ABI 377DNA测序仪进行电泳分析,用Genescan 3.7和Genotype 3.7软件进行扫描及LOH分析.LOH结果与临床、病理因素进行χ2检验.结果:4号染色体长臂(4q)的平均LOH率为28.56%,发现明显的2个高频LOH区间,一个在D4S3000和D4S2915位点之间(4q12～21.1);另一个在D4S407和D4S2939位点之间(4q25～31.1).在D4S3018位点,肿瘤直径>5 cm的LOH明显高于直径<5 cm的LOH(56% vs 13.79%.P=0.01).在D4S1534位点.肝转移的LOH明显高于未发生肝转移的患者(80% vs17.25%,P=0.012).结论:2个4号染色体长臂的高频杂合缺失区域4q12-21.1、4q25-31.1可能存在散发性结直肠癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因.
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肺鳞癌和肺腺癌中抑癌基因缺失的比较研究
目的比较中国人肺鳞癌和肺腺癌中抑癌基因丢失的情况,分析抑癌基因在肺癌发生中的不同作用.方法选取位于13个抑癌基因侧翼(与基因紧密连锁)或位于基因内含子区的22个微卫星位点,对28例肺鳞癌和13例肺腺癌标本进行杂合缺失分析.结果 FHIT、p53、IFNA、VHL和p16基因在肺鳞癌和肺腺癌中均有高频率的杂合缺失,而PRLTS、PTEN和p57基因的杂合缺失率在肺鳞癌和肺腺癌中有明显差异.结论在肺鳞癌和肺腺癌发病过程中可能有不同的抑癌基因失活,其中PRLTS可能对肺腺癌的发生有重要作用.
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散发性结直肠癌20号染色体等位基因杂合缺失
目的抑癌基因的杂合缺失被认为是结直肠癌形成的关键步骤之一,本研究利用微卫星DNA标记杂合缺失分析法对散发性结直肠癌20号染色体杂合缺失情况进行研究, 并探讨其意义.方法 83例结直肠癌病人的肿瘤及正常组织的DNA,经PCR反应后,以ABI Pr ism 377自动荧光测序仪进行电泳,以GeneScan2.1和Genotyper3.1 软件进行基因分型. 结果整条染色体的平均杂合缺失率为22.8%,20号染色体短臂平均杂合缺失率为26.7%,长臂平均杂合缺失率为21.1%.20号染色体整个短臂及长臂20q11.1至20q1 3.1均表现出很高的杂合缺失率.结论在散发性结直肠癌中20号染色体存在明显的基因组不稳定现象,提示结直肠癌相关基因的存在.
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散发性结直肠癌3号染色体等位基因杂合缺失
目的 了解散发性结直肠癌（SCRC）3号染色体等位基因杂合缺失（LOH）发生情况，探讨其与临床病理特征间的关系，并对3号染色体上可能的SCRC相关基因进行初步定位。 方法 用覆盖3号染色体的13个微卫星标记对83例散发性结直肠癌进行LOH扫描分析。 结果 3号染色体至少有两个位点发生LOH者占39%（29/74），3p所选4个位点中至少有一个发生LOH者占37%（27/74），3q所选9个位点中至少有一个发生LOH者占53%（39/74）。整条染色体上以D3S1300（3p14.2）位点LOH率高，达54%（23/43）。3q LOH在远端结直肠癌较近端高发。3p及D3S1300 LOH阳性肿瘤多表现为浸润型生长和局部侵犯，并多发于大于50岁的老年患者。 结论 3号染色体存在散在分布及区域性高频等位基因LOH，并与SCRC临床病理资料相关，提示其上SCRC相关基因的存在。高频LOH位点D3S1300的发现，提示3p14.2附近区域的FHIT基因可能作为肿瘤抑制基因在结直肠癌的发生发展中发挥作用。
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散发性结直肠癌染色体10q23～24区域杂合缺失分析
目的抑癌基因的杂合缺失(LOH)被认为是结直肠癌形成的通路之一,本实验拟通过对染色体10q23～24区的LOH分析,发现高频杂合缺失区域并筛查与结直肠癌相关的抑癌基因.方法 7个荧光标记的微卫星引物(围绕D10S185位点)与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应(PCR)反应.产物在ABI Prism 377自动荧光测序仪进行电泳,以GeneScan3.1和Genotyper 2.1软件进行扫描以及杂合缺失分析LOH.与临床病理因素之间的关系比较采用χ2检验.结果 7个位点平均杂合缺失率为36.11%,以D10S583位点高,达54.84%;低是D10S205,21.3%.发现两个高频杂合缺失区域:一个在D10S583和D10S185之间,大约0.9 cM(10q23.33)的距离;另一个在D10S1709和D10S1265位点之间,大约1.5 cM(10q24.2～24.31)的距离.D10S1265位点的杂合缺失与Dukes分期显著相关,其余位点与临床病理因素均无显著相关.结论在散发性结直肠癌10q23-24发现了两个高频LOH区域:10q23.33和10q24.2～24.31.除对磷脂酶同族蛋白(PTEN)基因外,10q上可能存在与散发性结直肠癌相关的其他抑癌基因.
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口腔鳞癌临床因素与APC基因杂合缺失的研究
目的分析APC基因杂合缺失与口腔鳞癌病理分级、临床分期之间的关系,探索抑癌基因在口腔鳞癌发生、发展中的作用.方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP)对40例口腔鳞癌组织中APC基因的杂合缺失(LOH)进行检测.结果 APC基因的LOH频率为66.6%;病理分级中,低、中分化组APC基因的LOH频率均高于高分化组(P＜0.05);临床分期中,APC基因的LOH频率在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期两组间无差异(P＞0.05).结论 APC基因的失活在口腔鳞癌的发生、发展中起重要作用.
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Runx3基因与胃癌的关系
哺乳动物Runt domain家族包括Runx1、Runx2和Runx3三个基因,均与人类疾病的发生密切相关.其中Runx3基因被认为是一个新的抑癌基因,在胃黏膜上皮细胞调控中发挥重要作用.研究发现在人类胃癌细胞系和胃癌组织中普遍存在Runx3基因表达的缺失或下调,45%～60%的胃癌细胞由于甲基化及杂合缺失而出现Runx3基因表达的缺失或下调.此文对Runx3基因的序列结构、功能及其在胃癌发生进展过程中的作用机制等方面的研究现状作一综述.
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散发性结直肠癌22号染色体等位基因杂合缺失
目的抑癌基因的杂合缺失是结直肠癌形成的关键步骤之一,一个等位基因已经异常的抑癌基因杂合缺失(LOH)可导致肿瘤的形成.本实验研究结直肠癌22号染色体杂合缺失情况并探讨其意义.方法对83例结直肠癌肿瘤患者与正常组织抽提的DNA用6对荧光标记的微卫星标记引物行PCR反应.产物在ABI Prism 377自动荧光测序仪进行电泳,以GeneScan3.1和Genotyper 2.1软件进行基因分型.LOH与临床病理参数之间的关系比较采用x2检验.结果22号染色体平均杂合缺失率为27.27%,D22S280至D22S274(22q12.2-q13.33)区域表现出很高的杂合缺失率,以D22S280(22q12.2-q12.3)和D22S274(22q13.32-q13.33)两个位点高,分别为35.09%和34.04%.在D22S274位点直肠癌的杂合缺失率为50%(9/18),高于近端结肠癌的12%(2/17),差异有显著性(P=0.018).远端结肠癌的杂合缺失率为42%(5/12),较近端结肠的杂合缺失率高,但差异无显著性;远端结肠、直肠癌的杂合缺失率(14/30,47%)高于近端结肠癌(2/15,13%,P=0.015),提示远端结肠、直肠癌与近端结肠癌发生机制可能有所不同.结论在22号染色体长臂上可能存在与结直肠癌发生相关的抑癌基因,可能位于22q12.2-12.3和(或)22q 13.32-13.33这两个区域.
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胃癌组织5q微卫星不稳定性与APC/MCC基因杂合性缺失的研究
目的 探讨5q微卫星不稳定性(MSI)与APC/MCC基因杂合缺失(LOH)的关系.方法 应用PCR-SSLP及PCR-RFLP技术分析52例手术切除胃癌组织中MSI及APC/MMC基因LOH.结果 5q MSI检出率为34.0%(16/47),APC/MCC基因LOH率为31.4%(11/35).早期胃癌5q MSI阳性率为66.7%(2/3),APC/MCC LOH率为50%(1/2);进展期分别为31.8(14/44),30.3%(10/33).两组间无显著差别(P＞0.05).MSI及杂合缺失与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及临床分期无关.粘液(印戒)细胞癌APC/MCC LOH率(55.6%)显著高于高、中分化管状腺癌(P＜0.05).胃、肠两型胃癌5q MSI及APC/MCC LOH差异无显著性及5q MSI与APC/MCC LOH无相关性(P＞0.05).结论 染色体5q MSI有APC/MCC基因LOH在两型胃癌的早期发生及发展中起一定作用.染色体5q可能是胃癌的易感部位.
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抑癌基因CHD5在大肠癌组织中的定量表达
大肠癌的发生和发展是癌基因和抑癌基因共同作用的结果,其中抑癌基因的杂合缺失起主导作用.CHD5基因定位于1号染色体短臂3区6带(1p36),通过p19Arf/p53通路调控细胞增殖、衰老和凋亡,可能是整个抑癌体系的上游基因[1].大肠癌亦有1p36高频杂合缺失现象,提示该区域可能存在抑癌基因.
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散发性结直肠癌1号染色体等位基因杂合缺失
杂合缺失(LOH)是指来自父方或母方的一个等位基因的缺失.抑癌基因的LOH被认为是结直肠癌形成的关键步骤之一,一条等位基因已经异常的抑癌基因发生LOH可导致该基因失活,并进一步导致肿瘤形成.目前,通过微卫星DNA标记对散发性肿瘤进行LOH分析,找出其共同缺失的片段,这是对抑癌基因进行定位克隆的主要策略之一.本实验研究结直肠癌1号染色体LOH情况并探讨其意义.
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胃癌活检组织中p73基因mRNA表达
应用反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)及单链长度多态性分析法(SSLP),对45例胃镜活检取材的胃癌及相应正常组织标本中p73基因mRNA表达水平及p73基因微卫星位点的杂合缺失(LOH)进行分析,探讨该基因表达水平改变及杂合缺失与胃癌发生、发展的关系.
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广州市汉族哮喘儿童α1-抗糜蛋白酶杂合缺失分析
目的探讨α1-抗糜蛋白酶(α1-antichymotrypsin,d1-ACT)杂合缺失是否为广州市儿童哮喘发病的遗传机制以及地理环境是否影响α1-ACT杂合缺失在儿童哮喘中的分布.方法应用火箭免疫电泳技术对广州市50例哮喘儿童、50例健康儿童及100例健康成人血浆α1-ACT含量进行检测;经家系调查确定3组α1-ACT杂合缺失频率;比较了哮喘组α1-ACT杂合缺失及非缺失患儿的临床资料.结果α1-ACT杂合缺失频率哮喘组、儿童对照组以及成人对照组依次为14%、2%、1%,哮喘组较儿童对照组明显增高(X2=4.891,P＜0.05);广州市哮喘儿童α1-ACT杂合缺失频率(14%)明显高于重庆市哮喘儿童(4.4%),x2= 4.054,P＜0.05;哮喘组α1-ACT杂合缺失与非缺失患儿比较,前者哮喘住院次数多,放射性过敏原吸附试验阳性率显著增高.结论α1-ACT杂合缺失与儿童哮喘发病存在一定的联系;地理环境影响α1-ACT杂合缺失频率分布.
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83例散发性结直肠癌D22S274位点杂合缺失分析
目的抑癌基因的杂合缺失(LOH)被认为是结直肠癌形成的关键步骤之一,当一条等位基因已经异常的抑癌基因发生杂合缺失可导致肿瘤的形成.本实验通过对83例散发性结直肠癌D22S274位点杂合缺失情况作一研究,并探讨其意义.方法微卫星DNA标记D22S274与83例结直肠癌病例的肿瘤和正常组织进行PCR反应.83例散发性结直肠癌,男40例,女43例,年龄31至84岁,中位年龄66岁.PCR产物在ABI Prism 377自动荧光测序仪进行电泳3小时,以GeneScan3.1和Genotyper 2.1软件进行遗传位点扫描以及杂合缺失分析.LOH与临床病理参数之间的关系比较采用χ2检验,P<0.05被视为有统计学意义.结果 D22S274(22q13.32-13.33)位点的杂合缺失率34.04%.直肠癌的杂合缺失率为50%(9/18),高于近端结肠癌的12%(2/17)(P=0.018),远端结肠癌的杂合缺失率为42%(5/12)较近端结肠的杂合缺失率高,但无统计学差异,然而将远端结肠、直肠一起考虑,它们的杂合缺失率(14/30,47%)高于近端结肠(2/15,13%) (P=0.015),提示远端结肠、直肠癌与近端结肠癌发生机制可能有所不同.结论 22q13.32-13.33区域可能存在与结直肠癌发生相关的抑癌基因.
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口腔鳞癌染色体3p14-24区域不同位点杂合缺失的分析
目的探讨3号染色体短臂14-24区域等位基因杂合缺失与口腔鳞癌临床相关因素之间的关系,以及抑癌基因在口腔鳞癌发生发展中的作用.方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法,检测40例口腔鳞癌及正常组织中3p14-24等位基因的杂合性缺失.结果 40例口腔鳞癌组织中3p24位点EAβMD有24例为信息个体,12例出现杂合缺失,杂合缺失率为50%,EAβH有15例出现杂合缺失,杂合缺失率为62.5%;3p21位点杂合缺失率为0.07%;3p14位点杂合性缺失率为0.13%.3p24杂合缺失与口腔鳞癌临床分期关系明显,Ⅲ-Ⅳ期晚期鳞癌的杂合缺失率高于Ⅰ-Ⅱ期早期鳞癌,两组间有差异(P＜0.05);口腔鳞癌高分化组的杂合缺失率明显低于中低分化组,其差异有显著性意义(P＜0.01);淋巴结转移阴性与阳性组的杂合缺失率有显著性意义(P＜0.01).结论 3p24杂合缺失在口腔鳞癌中普遍存在,从而说明3p24位点处存在着某些与口腔鳞癌发生发展有关的抑癌基因,我们认为有可能成为检测口腔鳞癌中一项独立的预后指标.
关键词： 口腔鳞癌 染色体3p14-24 等位基因 杂合缺失 -
多内分泌腺瘤病研究进展
多内分泌腺瘤病1型(MEN1)发生的重要原因是MEN1基因突变,导致肿瘤细胞11号染色体不同程度的杂合缺失,menin蛋白消失,临床主要表现有甲状旁腺腺瘤、胃肠胰腺内分泌肿瘤和垂体前叶瘤.多内分泌腺瘤病2型(MEN2)主要由原癌基因RET突变所致,又分为MEN2A和MEN2B,临床表现为甲状腺髓样癌、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生和黏膜神经纤维瘤.RET基因突变类型有一定的规律性,即基因型和表现型之间有非常好的相关性.本文将主要介绍MEN1和MEN2发生机制方面的新研究进展.
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APC基因杂合缺失与口腔鳞癌生物学行为的关系
国外研究表明APC基因的杂合缺失(loss of het-erozygosity,LOH)除与结肠癌有关外,与食道癌、胃癌等鳞癌的发病也有密切关系[1],国内外有关APC基因杂合缺失与口腔鳞癌发病关系的研究较为少见.
