首页 > 文献资料
-
大鼠背根神经节持续受压后脊髓背角TRPV4蛋白表达及分布的变化
目的:探讨大鼠背根神经节持续受压(chronic compression of the dorsal root ganglion,CCD)后瞬时感受器电位离子通道香草素亚族受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)在脊髓背角中的蛋白表达及分布规律.方法:选取清洁级雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分组:空白对照组5只,手术组25只(术后4天、7天、14天、28天各5只;免疫荧光组5只).制备大鼠背根神经节持续受压模型,于术后4天,7天,14天及28天,测量机械刺激缩爪反应痛阈,观察机械痛阈的变化;利用western blot技术检测空白对照组及术后4天,7天,14天及28天,手术侧及对侧脊髓背角TRPV4蛋白表达的变化;利用免疫荧光技术检测术后4天,手术侧与对侧脊髓背角TRPV4阳性细胞分布.结果:大鼠背根神经节持续受压后4-14天,机械痛阈值明显下降(P＜0.001);术后4-7天,手术侧脊髓背角TRPV4表达升高(P＜0.01),对侧无明显变化;手术侧脊髓背角内TRPV4阳性细胞数目高于对侧(P=0.0008).结论:大鼠背根神经节持续受压后,机械痛阈下降的同时,手术侧脊髓背角内TRPV4蛋白表达上调及阳性数目增多,TRPV4可能参与CCD后病理性神经痛的中枢敏化机制.
-
痛觉感受相关的TRP离子通道蛋白研究进展
疼痛是机体对外界伤害性刺激产生的一种不愉快感觉,与临床上包括癌症、糖尿病、关节炎等在内的多种疾病的病理过程相关.瞬变感受器离子通道蛋白是一类非选择性阳离子通道蛋白超家族,目前已有七个亚族、30多个成员在哺乳动物中被相继发现.近年研究表明TRPV亚家族中TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPV4以及TRPM亚家族中 TRPM8和TRPA亚家族中TRPA1与痛觉的产生关系密切.本文主要对上述离子通道与各种伤害性刺激引起的痛觉增敏的病理机制进行简要综述.
-
益气化瘀方对大鼠腰神经根压迫损伤后背根节神经元TRPV4基因表达的影响
目的:观察益气化瘀方对压迫损伤后不同时间点大鼠DRG神经元TRPV4基因表达的影响.方法:大鼠随机分为假手术组10只、模型组40只、中药组40只.模型组和中药组又根据取材、给药时间点的不同分为3d组、7d组、14 d组、28 d组,每组10只.用Von Frey法测试大鼠造模后50％撤足阈值;应用RT-PCR法检测大鼠DRG神经元TR-PV4基因表达情况.结果:造模后,各模型组大鼠与假手术组相比50％撤足阈值均有显著性降低;中药干预后,在中药7d组、14 d组和28 d组大鼠50％撤足阈值均显著高于相应时间点各模型组.模型组各时间点TRPV4rmRNA的表达与假手术组相比显著增高.中药干预后第3天、第7天和第14天组TRPV4mRNA的表达仍高于假手术组,而中药28 d组TRPV4mRNA的表达与假手术组相比无显著性差异.在第7天、第14天和第28天,中药干预组和模型组各时间点TR-PV4mRNA表达相比均有显著性差异.结论:益气化瘀方可能通过下调TRPV4基因表达从而影响神经根压迫损伤后根性神经痛的产生.
-
TRPV4通道激活增加大鼠血肿瘤屏障通透性
目的 研究TRPV4通道激活对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障(blood tumor barrier,BTB)通透性的作用效果及机制.方法 制备脑胶质瘤模型,应用伊文氏蓝(EB)渗透评估TRPV4激动剂GSK1016790A作用后血肿瘤屏障通透性的变化;RT-PCR和Westen blot法检测脑胶质瘤组织中质膜微囊结构蛋白caveolin-1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 GSK1016790A可引起脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障通透性的改变,灌注15min后BTB通透性开始增加,灌注45min时达高峰,而后有所下降,3h基本恢复灌注前水平.在灌注GSK1016790A 15min后,caveolin-1mRNA和蛋白表达水平开始增加,在45min时表达多,而后有所下降,在3h基本恢复到灌注前水平.结论 TRPV4通道激活选择性开放血肿瘤屏障可能与跨细胞途径标志蛋白caveolin-1表达水平上调相关,本研究可为人脑胶质瘤的化疗提供新思路.
关键词： TRPV4 血肿瘤屏障 Caveolin-1 GSK1016790A -
TRPV4对脑血管平滑肌增殖及凋亡的影响
目的 探究新型钙离子通道香草醛受体4(transient receptor potential vanilloid receptor,TRPV4)对自发性高血压(spontaneously hypertensive rats,SHR)大鼠脑血管平滑肌增殖及凋亡的影响.方法 分离并培养大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs),采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)法检测细胞中TRPV4的表达.转染TRPV4 siRNA沉默TRPV4基因,CCK-8检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期及凋亡;Western blot检测cyclinD1、p-Rb、Bcl-2、cleaved-caspase-3/caspase-3、p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β蛋白表达.结果 qRT-PCR及Western blot结果显示自发性高血压大鼠BASMCs中TRPV4的表达明显高于对照组大鼠.而在自发性高血压大鼠BASMCs中,沉默TRPV4可抑制细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导其凋亡;此外还可下调cyclinD1、p-Rb、Bcl-2、p-AKT、p-GSK3β蛋白的表达,同时上调cleaved-caspase-3蛋白的表达. 结论 沉默TRPV4能够抑制自发性高血压大鼠BASMCs细胞增殖,同时促进细胞凋亡,机制可能与抑制AKT/GSK3β信号通路的激活有关,所以新型钙离子通道TRPV4可为今后靶向诊疗高血压脑血管疾病提供依据.
-
TRPV4在渗透压对大鼠心肌收缩性影响中的作用
本文旨在探讨低渗和高渗内环境对心肌收缩性的影响及机制.取Sprague-Dawley(SD)大鼠左心室乳头状肌,在电刺激引起兴奋的条件下,分别记录在低渗、等渗和高渗灌流液中肌条的收缩力;同样条件下观察在低渗、等渗和高渗灌流液中加入渗透压敏感蛋白瞬时感受器电位离子通道家族香草素受体亚家族IV型(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)的拮抗剂和激动剂后肌条收缩力的变化.结果显示:(1)与等渗(310 mOsm/L)时心肌收缩力相比,渗透压为290、270和230 mOsm/L时心肌收缩力分别增加11.5%、21.5%、25.O%(P<0.05);渗透压为350、370、390 mOsm/L时心肌收缩力分别降低16.0%、23.7%、55.2%(P<0.05).(2)在低渗液(270 mOsm/L)中加入TRPV4拮抗剂钌红(ruthenium red,RR),低渗对心肌收缩力的增强作用被抑制36%(P<0.01);在高渗液(390 mOsm/L)中加入RR,高渗对心肌收缩力的抑制作用增加56.1%(P<0.01).(3)在等渗液中(310 mOsm/L)加入TRPV4激动剂4-α-佛波醇-12,13-二癸酸(4-α-phorbol-12,13-didecanoate,4 α-PDD),心肌收缩力没有改变;在高渗液中(390 mOsm/L)加入4α-PDD,高渗对心肌收缩力的抑制作用增加27.1%(P<0.01).以上结果提示,TRPV4参与渗透压引起的心肌收缩力变化.
-
口腔黏膜多聚甲醛刺激后小鼠三叉神经节AQP1和TRPV4表达变化
目的：为验证三叉神经节神经元上表达的水通道蛋白1（AQP1）和瞬时感受器电位离子通道4（TRPV4）可能参与痛觉传导提供形态学依据。方法应用免疫荧光染色结合FG逆行追踪标记技术比较观察口腔黏膜下注射多聚甲醛（PFA）实验模型组和对照组小鼠三叉神经节内AQP1和TRPV4的表达。结果与对照组比较，模型组三叉神经节神经元AQP1和TRPV4的表达无明显差异。结论存在于三叉神经节神经元上的AQP1和TRPV4可能未参与口腔伤害性刺激所引起的三叉神经痛觉的传递。
-
瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4调控肝星状细胞活化增殖作用研究
目的：探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4(transient receptor potential vanilloid receptor 4, TRPV4)对肝星状细胞( hepatic stelate cell,HSC)活化增殖的作用及可能的作用机制。方法以含50% CCl4的花生油溶液(1 mL·kg-1)皮下注射,建立大鼠肝纤维化模型。应用蛋白印迹等方法在体观察 TRPV4及肌动蛋白α(α-smooth muscle actin,α-SMA)的蛋白表达变化。以转化生长因子-β1(trans-forming growth factor-β1, TGF-β1)(10μg·L-1)刺激肝星状细胞株(HSC-T6),离体观察TRPV4及α-SMA的蛋白表达变化。应用TRPV4非特异性抑制剂钌红( ruthenium red, Ru)及TRPV4-siRNA特异性沉默 TRPV4,观察 HSC-T6增殖及α-SMA、蛋白激酶B( protein kinase B, Akt/PKB)蛋白表达变化。结果肝纤维化组织与TGF-β1活化的HSC中TRPV4及α-SMA 蛋白表达明显增加。阻断 TRPV4可明显抑制HSC增殖,且α-SMA、Akt 蛋白表达明显降低。结论 TR-PV4参与调控HSC的活化增殖,调控Akt蛋白磷酸化。
-
高盐饮食增强内皮细胞TRPV4与cPLA2的空间偶联作用
目的：探究内皮细胞中香草素受体4型瞬时感受器电位通道（TRPV4通道）与胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）在空间上的偶联作用。方法通过设定梯度盐（培养基中外源加入20、40、80、160 mol·L－1 NaCl）确定高盐处理内皮细胞的适盐浓度；在细胞水平上，通过免疫荧光能量共振转移（im-muno-FRET）技术检测人微血管内皮细胞（HMEC）和小鼠胸主动脉原代内皮细胞中TRPV4与cPLA2的空间偶联作用；在动物组织水平，通过同样的技术检测正常小鼠与高盐诱导的高血压小鼠的胸主动脉血管环上的内皮细胞中TRPV4与cPLA2的空间偶联情况。结果高盐诱导内皮细胞的适盐浓度为40 mol·L－1 NaCl；在细胞水平和动物组织水平上，高盐处理的HMEC、小鼠胸主动脉原代内皮细胞和高盐诱导的高血压小鼠胸主动脉血管环上的内皮细胞中，TRPV4与cPLA2的空间偶联作用均明显增强。结论在细胞和组织水平上，高盐饮食能增强内皮细胞中TRPV4与cPLA2的空间偶联作用，这种空间偶联可能进一步引起两者的功能偶联，为血管内皮功能紊乱的研究提供了新的思路。
-
在LPS致大鼠发热过程中下丘脑TRPV4对体温及cAMP含量、[Ca2+]i浓度的影响
目的 探讨TRPV4在发热时是否参与体温调节过程.方法 用脂多糖复制大鼠发热模型,结合应用钌红抑制TRPV4的活性,观察发热时的下丘脑组织中TRPV4含量、钙离子浓度变化与cAMP含量的关系.结果 单独给予钌红组体温降低;钌红+LPS组与LPS组相比,△T、cAMP与[Ca2+]i增高幅度均降低;钌红组与钌红+LPS组TRPV4表达明显低于对照组.结论 ① TRPV4通道可能参与正常体温的维持;②通过激活TRPV4通道,使钙离子内流增多,进而中枢发热介质cAMP表达增多,这可能是LPS致大鼠发热的重要途径.
-
TRP离子通道在瘙痒中的作用及机制研究进展
瘙痒是由多种原因引起的令人不快的皮肤感觉,虽然瘙痒不会威胁到生命,但长期慢性瘙痒会严重影响患者的生活质量.瞬时感受器电位离子通道(transient receptor poten-tial ion channels,TRP)参与从感觉到皮肤平衡的生理过程.大量研究已经证实,许多瘙痒介质诱发的痒与TRP离子通道的激活有关.该文首先就瘙痒与疼痛的区别进行阐述,并就TRP离子通道在多种瘙痒介质诱发瘙痒中的作用及机制进行详细阐述,为瘙痒治疗提供新的思路.
-
TRP通道与偏头痛
偏头痛的发病原因和病理机制尚未得到充分解释,特别是对相关的初级感觉神经元的研究仍然存在诸多争议.近年来,脑膜末梢化学感受神经纤维上表达的瞬时受体电位通道(transient receptor potential,TRP)家族蛋白的重要性越来越受到人们的重视.这类非选择性阳离子通道蛋白对多种环境性和内源性刺激敏感,在体内参与多种组织器官对伤害性刺激的调节.该文将着眼于目前TRP家族蛋白在头痛特别是偏头痛中的作用进行总结.
-
TRPV4在小鼠脑血管内皮细胞中的表达及对血管张力调节作用研究
目的 比较瞬时受体电位(TRP)通道家族中香草素受体亚家族(TRPV)和经典瞬时感受器电位亚家族(TRPC)在小鼠脑、心和肝微血管内皮细胞表达差异,寻找脑微血管中具有特异性高表达亚型,阐明其对脑动脉血管舒张的调节作用.方法 挖掘GEO数据库中芯片表达谱数据,分析各个通道亚型差异表达情况,再采用免疫组化检测TRPV4、TRPP2和TRPC1在脑基底动脉中表达情况,血管张力实验检测TRPV4通道在调节小鼠脑基底动脉舒张中的效应.结果 通过分析表达谱数据显示,在小鼠脑、心和肝三种微血管内皮中,TRPV4通道在脑微血管内皮细胞显著高表达,而TRPC3通道显著低表达.TRPV4、TRPP2和TRPC1在脑基底动脉内皮和平滑肌层也显著表达.TRPV4通道激动剂GSK1016790A能浓度依赖地舒张苯肾上腺素引起的脑基底动脉收缩,而且其舒张效应可以被TRPV4通道阻断剂HC067047所阻断.结论 与心和肝血管内皮细胞相比,TR-PV4通道在小鼠脑血管内皮细胞中显著高表达,可能在调节脑血管内皮功能中具有重要意义.
关键词： 瞬时受体电位离子通道 内皮细胞 TRPV4 脑血管 -
TRPV4在高血压小鼠胸主动脉舒张中的作用
目的:研究瞬时受体电位香草素亚型4(transient receptor potential vanilloid type 4,TRPV4)在高血压小鼠胸主动脉舒张中的作用,并探讨其作用机制.方法:分离小鼠胸主动脉,取其离体胸主动脉血管环进行血管张力测试,以1 μmnol/L盐酸苯肾上腺素预收缩血管,分别观察对照组与TRPV4抑制剂HC067064处理组在乙酰胆碱(ACh)和GSK1016790A介导下血管张力变化,野生型与TRPV4基因敲除(TRPV4-/-)小鼠在ACh和GSK1016790A介导下血管张力变化;对于普通饮食组和高盐饮食组小鼠胸主动脉环进行血管张力测试,检测GSK1016970A舒张血管的张力变化.结果:HC067064组在ACh和GSK1016790A引起的动脉舒张反应明显低于对照组(P＜0.05);TRPV4-/-小鼠胸主动脉环在ACh和GSK1016790A引起的动脉舒张反应亦低于野生型小鼠(P＜0.05);高盐饮食组GSK1016790A引起的动脉舒张反应低于普通饮食组(P＜0.05).结论:TRPV4参与了小鼠胸主动脉的舒张作用,此作用是通过刺激TRPV4通道开放,促进内皮细胞外钙离子内流进入胞内,经过一系列信号转导,继而舒张血管;但是在病理模型,如高盐饮食下,TRPV4在胸主动脉中的舒张作用会被抑制.
-
TRPV1和TRPV4通道参与缺血/氧处理心血管保护的研究进展
TRPV通道属于瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道,含有TRPV1、TRPV2、TRPV3、TR-PV4、TRPV5和TRPV6等多种亚型,它们参与机体痛觉、味觉、体温等多种生理机能的调控.近期研究发现TRPV1和TRPV4通道可能参与缺血/氧处理诱导的心肌与血管保护.TRPV1通道的作用机制可能与降钙素基因相关肽(CGRP)及P物质的释放、花生四烯酸脂氧合酶(ALOX)的表达增多有关;TRPV4通道介导的血管保护机制可能与NO和EDHF介导的内皮源性舒张有关.本文将对TRPV1和TRPV4通道在不同形式缺血/氧处理诱导下的心血管保护机制进行综述,以期为心肌缺血的治疗提供新方向.
-
瞬时感受器电位通道vanilloid 4在机械牵张人脑微血管内皮细胞中对内皮型一氧化氮合酶的作用
目的:筛选人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC)中瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)通道亚型,检测该通道亚型在机械牵张刺激中对内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达的影响及探讨相关机制.方法:荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)、Western印迹及细胞免疫荧光筛选HBMEC上TRP通道亚型.根据筛选的TRP通道亚型将细胞分组,应用多功能小型生物撞击机给予机械牵张刺激;流式细胞仪检测细胞牵张前后胞内Ca2+荧光强度变化;Western印迹检测eNOS蛋白表达情况.结果:qRT-PCR结果表明:TRPV4及TRPC1的mRNA相对表达量较多;细胞免疫荧光及Western印迹显示TRPV4通道蛋白表达;流式细胞仪检测结果显示,特异性TRPV4通道抑制组较单纯牵张组Ca2+相对浓度低(P＜0.001),较未牵张组(P=0.072)、非特异性TRP通道抑制组(P=0.308)无明显差异.Western印迹检测结果显示:TRPV4通道抑制组和内皮型一氧化氮合酶抑制组eNOS蛋白表达水平较单纯牵张组明显降低(P＜0.05),较未牵张组无明显差异(p＞0.05).结论:TRPV4在HBMEC上有表达,机械牵张将其激活后,可以引起eNOS蛋白表达增多,其机制可能与胞外Ca2+的内流有关.
-
钌红在脂多糖致大鼠发热过程中对体温的影响
目的 探讨钌红在脂多糖(LPS)致大鼠发热过程中对体温的影响及可能的机制.方法 用LPS复制大鼠发热模型,观察不同浓度钌红对LPS发热曲线的影响及发热时下丘脑组织中TRPV4表达的变化.结果 (1)与单独给予LPS组相比,随着给予钌红浓度的增大,LPS致发热幅度均有不同程度的降低;(2)单独给予钌红与给予生理盐水的对照组比较,体温有所降低;(3)钌红组及钉红+LPS组TRPV4表达明显低于对照组.结论 (1)钌红对LPS致热性有抑制作用;(2)钌红能调节TRPV4通道的表达;(3)TRPV4通道可能参与正常体温的维持.
-
TRPV4沉默对帕金森模型小鼠的影响
目的 通过观察慢病毒介导的shRNA沉默TRPV4基因对帕金森模型小鼠的影响,探讨TRPV4在帕金森病发展中的作用.方法 慢病毒表达载体TRPV4shRNA感染小鼠黑质致密部,1周后腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(30 mg·kg-1)造模.小鼠随机分为5组,分别为正常对照组、MPTP组(模型组)、Scrimble shRNA组(空载病毒组)、TRPV4shRNA组(TRPV4沉默组)、TRPV4shRNA+MPTP组(TRPV4沉默且制备模型组).开场、悬尾、强迫游泳实验检测行为学变化,免疫印迹及免疫荧光技术检测酪氨酸羟化酶含量变化.结果 TRPV4 shRNA+MPTP组小鼠与MPTP组相比,行为学评价和酪氨酸羟化酶含量明显提高(P＜0.05).结论 TRPV4沉默能够有效改善帕金森模型小鼠症状及酪氨酸羟化酶含量,表明TRPV4在帕金森病发展中起到重要作用,并有可能成为帕金森病潜在的治疗靶点.
-
TRPV4调节血管张力作用的研究进展
瞬时感受器电位通道 (transient receptor potential chan-nel,TRP 通道 ) 是一类非选择性阳离子通道,主要对钠离子和钙离子通透,几乎在机体的所有细胞均有分布. 根据DNA和蛋白质的序列同源性差异,TRP 通道被分为 TRPC、TRPM、TRPV、TRPP、TRPML、TRPN 和 TRPA 7 个亚家族,每一个亚家族又包含许多离子通道[1]. 目前已发现在血管平滑肌上表达的TRP通道亚型已超过19种. 血管平滑肌细胞TRP通道参与血管收缩和增生的调控, 内皮细胞上分布的TRP通道对血管的内皮依赖性舒张作用、 血管壁的通透性及血管增生具有重要作用. 香草素受体 4 型瞬时感受器电位通道 (transient receptor potential vanilloid 4 channel,TRPV4通道 )是TRP通道家族,TRPV亚家族的一员[2],除了在肺,脾,心,肝脏,脂肪和大脑组织中有表达外,TRPV4在脉管系统中表达广泛, 在内皮细胞和血管平滑肌细胞中均有表达,对血管张力调节发挥着重要的作用.TRPV4通道功能失调与缺氧性肺动脉高压,高血压等疾病相关.
