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FOLFOX联合放射治疗对局部晚期结直肠癌患者CDX2、ING4表达的影响
目的 研究FOLFOX联合放射治疗对局部晚期结直肠癌患者CDX2、ING4表达的影响.方法 收集2011年2月至2014年5月在山西省运城市红十字会医院肿瘤内科治疗的局部晚期大肠癌患者79例,对其病历资料进行回顾性分析,根据治疗方法分为A组和B组.A组39例,B组40例,A组患者直接行手术治疗,B组患者手术前行FOLFOX联合放射治疗.对两组患者病情进展,并发症发生情况及CDX2、ING4表达水平进行测定.结果 术前检查结果显示B组18例患者部分缓解,3例完全缓解,7例进展,12例稳定,缓解率52.5%.B组患者肿瘤切除率、保肛率显著高于A组,差异有统计学意义(P<0.05).B组患者术后2年内复发率显著低于A组,差异有统计学意义(P<0.05).A组患者各类并发症发生率显著高于B组,差异有统计学意义(P<0.05).A组患者手术时CDX2、ING4光密度值显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 FOLFOX联合放射治疗能够抑制局部晚期结直肠癌病情的进展,同时增加CDX2、ING4表达水平,具有较高的临床应用价值.
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非小细胞肺癌中ING4和XIAP的表达及临床意义
目的研究ING4和XIAP基因在非小细胞肺癌组织及其对应的正常组织中的mRNA的表达情况及其相关联系。方法采用RT-PCR实验技术检测ING4和XIAP基因mRNA在56例非小细胞肺癌组织及其对应的正常组织中的表达情况。结果 RT-PCR结果显示：（1）ING4 mRNA在非小细胞肺癌组织及其对应正常组织中的表达有统计学意义差异（ P＜0.05）。 XIAP mRNA在非小细胞肺癌组织及与其正常组织中的表达量有差异，且有统计学意义（P＜0.05）；（2）ING4 mRNA的表达和非小细胞肺癌组织的分化情况有关（ P＜0.05），与年龄、性别、病理分型、病理分期等临床病理分组都无关（ P＞0.05）；XIAP mRNA的表达只和癌组织分化及分期有关（ P＜0.05），与年龄、性别、病理分型等临床病理因素均无关（ P＞0.05）。结论 ING4和XIAP mRNA与非小细胞肺癌的发展联系紧密；且ING4和XIAP mRNA在非小细胞肺癌组织及其对应的正常组织之间有统计学差异，和非小细胞肺癌的分期、分化程度有关，预示着可能与非小细胞肺癌的复发与转移有一定关系。
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Ad-ING4对乳腺癌的生长抑制作用研究
目的 研究腺病毒(adenovirus,Ad)介导的ING4基因(Ad-ING4)表达对人乳腺癌的生长抑制作用.方法 采用Ad-ING4腺病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,RT-PCR、Western blot 法检测ING4基因在肿瘤细胞中的转录和表达;四唑盐(MTT)法、Hochest33258染色法和流式细胞仪(FCM)检测ING4基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制、周期变化和凋亡效应;半定量RT-PCR检测凋亡相关基因的转录;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人血管生成素1(Ang-1)的分泌水平;在乳腺癌的裸鼠移植瘤动物模型上检测Ad-INCA对移植瘤生长的抑制作用,并检测Bc1-2,Bax,Caspase-3等细胞凋亡相关因子的表达.结果 ING4基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞有明显增殖抑制及促凋亡作用,G_2/M期阻滞达(24.86±1.24)%;Ad-ING4显著抑制移植瘤生长,瘤重抑制率达49%;免疫组化结果显示Ad-ING4上调Bax和Caspase-3的表达,下调Bc1-2、Survivin和CD34的表达.结论 ING4基因在体内外均可明显抑制MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡.
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胃癌组织ING4和HIF-1α及VEGF表达的相关性分析
目的:研究ING4、HIF-1α和VEGF在胃癌组织中的表达情况,探讨它们在胃癌发生发展中的作用.方法:应用免疫组化SP法检测66例胃癌和30例正常胃组织中ING4、HIF-1α和VEGF的表达情况,同时测定CD31标记的微血管计数(MVD),分析与胃癌临床病理因素的关系,探讨ING4、HIF-1α和VEGF之间的相关性及与MVD的关系.结果:ING4在胃癌组织中的表达明显低于正常胃组织(P=0.001),HIF-1α和VEGF的表达则明显高于正常胃组织(P值均＜0.01)；胃癌组织ING4的表达与性别(P=0.018)和侵犯程度(P=0.018)有关,HIF-1α和VEGF阳性表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM分期相关(P值均＜0.05)；胃癌组织中ING4与HIF-1α、VEGF的表达呈负相关(r=-0.31,P=0.011;r=-0.26,P=0.032),HIF-1α与VEGF的表达呈正相关(r=0.69,P＜0.001)；ING4与MVD的表达呈负相关(r=-0.29,P=0.018),HIF-1α、VEGF与MVD的表达呈正相关(r=0.75,P＜0.01 ;r=0.79,P＜0.01).结论:ING4、HIF-1α和VEGF在胃癌和正常胃组织中的表达存在明显差异；三者之间有相关性且均与临床病理因素以及肿瘤血管生成相关,它们的相互作用调控着胃癌的发生和发展,联合检测有助于判断胃癌恶性程度和预后.
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ING4在乳腺癌患者肿瘤组织及外周血中的表达
目的 探讨ING4表达水平与原发乳腺癌的关系.方法 收集原发乳腺癌患者的肿瘤组织和外周血标本,免疫组织化学法检测乳腺癌组织标本中的ING4及NF-κB表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测乳腺癌患者外周血中ING4的表达.结果 乳腺癌组织中ING4及NF-κB表达阳性率较癌旁组织高[100.00％(30/30)比12.50％(3/24),93.75％(45/48)比6.67％(1/15)];乳腺癌患者术后外周血ING4水平较术前降低(P=0.044).结论 ING4的整体表达在临床原发乳腺癌患者中并未降低,可能是由于在肿瘤早期,机体应激反应性高分泌ING4以对抗肿瘤的发展.
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候选抑癌基因ING4的研究进展
ING4基因是近年来发现的一个ING(生长抑制因子家族)新成员,可能通过抑制细胞生长,增强其化学敏感性、增强P53的活性、抑制HIF活性、抑制肿瘤血管增生等途径抑制肿瘤的生长.ING4基因在正常组织中表达丰富,而在肿瘤组织中表达异常与发生突变,但其在肿瘤发生、发展过程中的确切作用尚不清楚.
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ING4、PHDs在低氧性肺动脉高压大鼠中的表达及意义分析
目的：对低氧性肺动脉高压大鼠（HPH）中的ING4和PHDs的表达水平及其意义进行探讨。方法利用低氧性肺动脉高压大鼠模型，检测不同缺氧时间点上的大鼠右心室肥大指数（RVHI）、平均肺动脉压（mPAP）以及观察肺小动脉重塑（HPVR）。采用RT-PCR和Western blot检测ING4、PHDs以及HIF-1α的mRNA表达水平及蛋白表达水平。结果结果显示，从缺氧第7天开始实验组大鼠的mPAP显著高于空白对照组（P＜0.05），且第14天达到高值，且大鼠的RVHI也开始增加，且已形成右心室肥厚和官腔狭窄。在mRNA水平上ING4、PHD2以及PHD3的表达在缺氧第3天开始显著增高（P＜0.05），且HIF-1α在起初无显著变化直到第14天才开始增高（P＜0.05），而PHD1的mRNA表达水平在缺氧后与空白对照组相比，无显著差异（P＞0.05）；在蛋白水平上ING4的蛋白表达水平在缺氧第7天时表达显著增高（P＜0.05）， PHD2、PHD3以及HIF-1α的蛋白表达水平在缺氧第3天开始增高（P＜0.05），而PHD1的蛋白表达水平在缺氧起初无显著变化，直到第14天时，与空白对照组比较，有显著降低，且随后一直维持较低水平（P＜0.05）。结论在低氧性肺动脉高压大鼠中ING4和PHDs的表达变化会影响低氧性肺动脉高压的产生和发展。
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生长抑制因子4基因表达对K562细胞生长的影响
目的 研究生长抑制因子4(ING4)基因表达对K562细胞增殖的影响.方法 将经过定点突变技术人源化改造的ING4(鼠→人)生长抑制因子4基因酶切并连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,然后与腺病毒质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-hING4,将它转染QBI-293A细胞后收获重组腺病毒Ad-hING4(以下简称为Ad-ING4).将Ad-ING4感染K562细胞,光学显微镜下观察病毒感染前后细胞形态的变化,免疫细胞化学分析凋亡因子的改变,激光扫描共聚焦显微镜观察K562细胞的凋亡,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果 成功构建了人ING4腺病毒质粒,获得高滴度的重组腺病毒Ad-ING4,用它感染K562细胞72 h后,FCM法测定细胞凋亡率为19.7%,与空病毒对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01),ING4基因能下调K562细胞bcl-2的表达并上调bax的表达,多种方法检测结果表明ING4基因能抑制K562细胞生长,诱导凋亡.结论 重组腺病毒Ad-ING4可以显著抑制K562细胞的生长.
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Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体的构建及表达
目的:构建IRES介导的携带人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白介素24(IL-24)双基因的重组腺病毒共表达载体(简称为Ad-ING4-IRES-IL-24),研究其表达产物对A549肺癌细胞生长的影响.方法:将PCR扩增的IRES、ING4和IL-24基因片段分别插入pAdTrack-CMV载体中构建pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24双基因共表达重组转移载体.按腺病毒载体常规构建方法获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24,并在QBI-293A包装细胞中进行包装和病毒扩增.将扩增后的Ad-ING4-IRES-IL-24腺病毒感染A549肺癌细胞,并用RT-PCR和Western blot法鉴定ING4和IL-24基因在QBI-293A细胞或A549肺癌细胞中的表达,MTT法和流式细胞仪检测其对A549肺癌细胞生长抑制和诱导凋亡的功能和抑癌增效作用.结果:DNA测序结果显示pAdTrack-CMV转移载体中插入的ING4、IRES和IL-24片段的序列与GenBank报道的完全一致,Ad-ING4-IRES-IL-24能成功介导ING4和IL-24基因在QBI-293A和A549细胞中表达,不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡(72小时生长抑制率为62.82%±0.65%,凋亡率为19.40%±1.29%),而且与Ad-ING4-IRES(72小时生长抑制率为42.31%±0.43%,凋亡率为13.30%±1.85%)和Ad-IRES-IL-24单基因组(72小时生长抑制率为47.44%±0.39%,凋亡率为12.40%±1.05%)相比具有显著性差异(P＜0.05).结论:成功构建了IRES介导的Ad-ING4-IL-24双基因共表达重组腺病毒载体,Ad-ING4-IL-24不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡,而且与Ad-ING4和AdIL-24单基因组相比具有抑癌增效作用.
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ING4和HIF-1α在口腔鳞癌中的表达及临床意义
目的:探讨人口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中生长抑制因子4(ING4)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其临床意义.方法:选择我院确诊的口腔鳞癌患者共计65例,均经过手术治疗,术前未行放化疗,切除标本经过石蜡包埋切片,同时选取20例正常口腔黏膜作为对照.采用免疫组化S-P法检测人口腔鳞状细胞癌和正常口腔黏膜组织中ING4和HIF-1α的表达,并分析其与OSCC患者临床病理特征的相关性及人口腔鳞状细胞癌组织中ING4和HIF-1α表达的相关性.结果:OSCC组织中ING4的阳性表达率为41.5 ％(27/65),显著低于正常口腔黏膜组织(P＜0.05);OSCC组织中HIF-1α的阳性表达率为64.6 ％(42/65),显著高于正常口腔黏膜组织(P＜0.05).ING4和HIF-1α的表达与OSCC的病理分级、TNM分期和是否有淋巴结转移显著相关(P＜0.05);OSCC组织中,ING4的表达与HIF-1α的表达呈显著负相关(P＜0.05).结论:口腔鳞状细胞癌组织中ING4的表达下调,HIF-1α的表达上调,二者可能通过负向调控作用在口腔鳞状细胞癌的发生、发展、侵袭和转移中发挥着重要作用.
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实时RT-PCR与半定量RT-PCR检测胃腺癌中ING4表达的比较研究
目的 探讨Real-time RT-PCR和半定量RT-PCR在检测胃腺癌中ING4 mRNA表达的特异性、敏感性和灵敏度的差别.方法 本实验采用半定量RT-PCR法和Real-time RT-PCR法分别检测13例胃腺癌及癌旁组织ING4 mRNA的表达.结果 两种PCR法均可验证胃腺癌组织ING4 mRNA表达量低于癌旁组织,有统计学意义.结论 Real-time RT-PCR检测ING4 mRNA在胃腺癌中表达的结果更为可靠、更为灵敏.
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ING4基因真核表达载体的构建及其功能
目的:构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4,观察ING4基因对人肝癌SMMC7721细胞周期及凋亡的影响.方法:小鼠肝组织经RT-PCR扩增,构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4,分别用双酶切、PCR、基因测序进行鉴定,将其转导进入人肝癌SMMC7721细胞,检测ING4基因的表达情况及其对细胞周期的影响,应用荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况.结果:RT-PCR产物为约750 bp的条带,基因测序正确,转导进入人肝癌细胞株SMMC7721后可延长G2期,其凋亡率(23.66%)明显高于对照组(13.75%).结论:成功分离得到了小鼠ING4基因并成功构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4,该质粒转染人肝癌SMMC7721细胞后可延长G2期并可促使细胞凋亡.
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ING4和CD34蛋白在人前列腺癌组织中的表达及其相关性研究
目的 探讨ING4及CD34蛋白在人前列腺癌组织中的表达及相关性.方法 采用免疫组织化学ElivsionTM Plus二步法检测28例人前列腺癌及32例良性前列腺增生组织中ING4及CD34的表达情况,分析其结果 与前列腺癌病理分级及危险等级关系.结果ING4基因蛋白在人前列腺癌组织中的阳性表达率明显低于良性前列腺增生组织,且随肿瘤病理分级、PSA及临床分期的增加而降低.而CD34标记的微血管密度(microvessle density,MVD)在前列腺癌组织中表达明显较良性前列腺增生组织高,其MVD值随肿瘤病理分级及危险等级增加而升高.前列腺癌组织中ING4表达与MVD值呈负相关,r值为-0.827,相关性具有统计学意义(P<0.05).结论 ING4基因蛋白在人前列腺癌组织表达异常,可能参与了肿瘤的发生及进展,同时可以作为前列腺癌临床评价诊断、指导治疗的辅助指标之一.
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TPF诱导化疗联合术后放疗治疗口腔鳞癌的疗效及对ING4、Annexin A1的影响
目的:观察TPF诱导化疗联合术后放疗治疗口腔鳞癌的临床疗效,及其对ING4、Annexin A1的影响.方法:选择2013年6月-2015年6月收治的口腔鳞癌患者146例,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组各73例.观察组给予TPF诱导化疗+手术切除+术后放疗,对照组给予手术切除加术后放疗.比较2组患者的临床疗效,检测治疗前、后2组患者ING4和Annexin A1的表达水平,记录2组患者不良反应的发生率和1年、2年生存率.采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:观察组和对照组的总缓解率分别为88.41％和58.57％,观察组的总缓解率显著高于对照组(x2=23.690,P=0.000).治疗前,2组患者ING4的阳性表达率和Annexin A1相对表达水平相当(P＞0.05).治疗后,2组患者的ING4的阳性表达率均显著升高,Annexin A1相对表达水平均下降,但观察组的改变幅度显著高于对照组(P＜0.05).观察组的1年及2年生存率均显著高于对照组(P＜0.05).观察组的恶心、呕吐、口腔黏膜受损、白细胞降低及放射性皮疹等不良反应发生率均显著高于对照组(P＜0.05).结论:TPF诱导化疗联合术后放疗治疗口腔鳞癌能够有效提高临床疗效和短期生存率,其作用通过升高ING4表达水平、降低Annexin A1表达水平,促进细胞凋亡而实现.
关键词： 口腔鳞癌 TPF诱导化疗 术后放疗 ING4 annexin A1 -
人骨髓间质干细胞ING4基因的克隆及其慢病毒表达载体构建
目的:克隆人骨髓间质干细胞ING4(inhibitor of growth famility,member4)基因,构建其慢病毒表达载体PNL-ING4.方法:提取人骨髓间质干细胞(hMSCs)总RNA,经RT-PCR扩增出ING4cDNA,克隆至PMD19-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和测序,构建慢病毒表达载体PNL-ING4,用双酶切、基因测序进行鉴定.结果:RT-PCR产物为750 bp的条带,双酶切和基因测序正确.结论:成功从hMSCs克隆了ING4基因并成功构建其慢病毒表达载体PNL-ING4,为进一步研究ING4基因的作用与抗肿瘤机制奠定了基础.
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ING4的原核表达及多克隆抗体的制备
目的 在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体.方法 构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测.结果 构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结果正确,用IPTG诱导转化菌有30KD大小的目的 条带,表达的目的蛋白占菌体总蛋白10%以上,以包涵体形式存在,纯化后其纯度可达70%以上.用纯化的ING4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体.结论 制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料.
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ING4及SKP2在不同级别脑胶质瘤组织中的表达
[目的] 研究抑癌基因ING4及癌基因SKP2在正常脑组织及不同级别胶质瘤组织中的表达,以及其表达水平与脑胶质瘤生物学特征的关系.[方法] 采用免疫组织化学技术检测70例手术切除的不同级别胶质瘤组织人及正常脑组织中ING4及SKP2的表达情况.[结果] ING4主要表达于细胞核和/或浆,正常脑组织中ING4的表达明显高于低级别与高级别胶质瘤,差异显著(t=11.8及22.5,P<0.05);低级别胶质瘤组织中ING4的表达明显高于高级别胶质瘤,差异显著(t=17.9,P<0.05).SKP2主要表达于细胞核,部分为胞浆,正常脑组织中SKP2的表达明显低于低级别与高级别胶质瘤,差异显著(t=13.7及29.5,P<0.05):低级别胶质瘤组织中SKP2的表达明显低于高级别胶质瘤,差异显著(t=16.5,P<0.05).[结论] ING4基因在胶质瘤组织巾表达明显下调,且ING4表达下调与胶质瘤的分级有密切关系;SKP2基因在胶质瘤组织中表达显著上调,且SKP2表达上调与胶质瘤的分级有密切关系.
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ING4在结肠和直肠的胃肠间质瘤表达的研究
目的 研究ING4与结肠和直肠的胃肠间质瘤的恶性程度的关系.方法 收集原发于结肠和直肠的胃肠间质瘤共62例,并用RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测ING4 mRNA和ING4蛋白在胃肠道间质瘤高危组、中危组、低危组和极低危组中的表达情况.结果 RT-PCR技术测定胃肠道间质瘤高危组、中危组、低危组和极低危组中ING4与β-actin光密度比值平均值分别为0.32、0.51、0.56和0.78胃肠道间质瘤高危组、 中危组、 低危组和极低危组中ING4 mRNA的量也依次增加,差别有统计学意义(P<0.05).62例ING4免疫组织化学结果:高危组阳性3例(阳性率18.8%);中危组阳性6例(阳性率26.1%);低危组阳性10例(阳性率55.6%);极低危组阳性3例(阳性率60%).胃肠道间质瘤高危组、中危组、低危组和极低危组中ING4蛋白表达阳性率也依次增加,差别有统计学意义(P<0.05).结论 ING4可以作为一个新的评价胃肠道间质肿瘤恶性程度的指标.
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ING4 和HIF-1α在人脑不同级别星形细胞瘤中表达的研究
目的 研究ING4及HIF-1α在星形细胞瘤中的表达,探讨它们在星形细胞瘤发生和发展中的作用.方法 采用免疫组化法检测45例星形细胞瘤标本及11例正常脑组织中ING4和HIF-1α的表达.结果 ING4在正常脑组织和星形细胞瘤中的阳性表达率分别为100%、42.4%;Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级星形细胞瘤中的阳性表达率分别为58.3%、23.8%,差异均有统计学意义(P<0.05).HIF-1α在正常脑组织和星形细胞瘤中的阳性表达率分别为0、71.1%;在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级星形细胞瘤中的阳性表达率分别为54.2%、90.5%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 ING4和HIF-1α基因的表达与星形细胞瘤分级有密切关系,在其发生和发展过程中起重要作用.
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人ING4的基因克隆及真核表达
目的 克隆人生长抑制因子家族(inhibitor of growth famility member4,ING4)基因,构建其真核表达载体pEGFP-ING4.方法 提取人胎盘总RNA,经RT-PCR扩增出ING4 cDNA,克隆至pEGFP-C2载体,构建的真核表达载体pEGFP-ING4用双酶切、基因测序进行序列鉴定;转染MCF-7细胞用荧光显微镜和免疫组化检测重组质粒的表达.结果 RT-PCR产物为750 bp的条带,双酶切和基因测序正确,转染可见目的 蛋白融合表达.结论 从人胎盘组织中成功克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达,为进一步研究ING4基因的作用及抗肿瘤机制奠定了基础.
