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p53基因突变与肺癌放射治疗敏感性的研究进展
p53基因突变是肺癌中常见的遗传改变,与肺癌发生、发展关系密切.现就抑癌基因p53与肺癌的预后、淋巴结转移、放疗敏感性及肺癌的基因治疗研究进展作一综述.
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肝癌细胞放射敏感性与survivin蛋白表达的关系
目的 探讨肝癌细胞放射敏感性与survivin表达的关系.方法 肝癌细胞HepG2和SMMC-7721在接受不同剂量γ射线照射后,分别采用克隆形成法、免疫细胞化学法、流式细胞术、比色法等检测细胞存活率、survivin蛋白表达、细胞周期变化和Caspase-3活性.结果 在2Gy照射下HepG2和SMMC-7721细胞的存活分数分别为0.43±0.01与0.70±0.02,SMMC-7721较HepG2放射抗拒.γ射线对SMMC-7721细胞的G2/M期阻滞时间较HepG2细胞长(48 h对24 h),在阻滞峰各剂量点SMMC-7721细胞的G2/M期比例也更高.γ射线可上调两株肝癌细胞survivin蛋白的表达,照射后48～72 h,SMMC-7721细胞的survivin蛋白表达水平显著高于HepG2细胞(t值为2.81～5.20,P值均＜0.05).而Caspase-3的活化水平在放射敏感的HepG2细胞中更高(t值为6.05～6.72,P值均＜0.01).结论 射线诱导的survivin表达上调及survivin对Caspase-3的负调控可能是SMMC-7721细胞较HepG2细胞放射抗拒的原因之一.
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放射控导的wt-p53蛋白正反馈基因环路对肺腺癌细胞周期、凋亡及放射敏感性的影响
目的 研究体外环境放射控导的wt-p53蛋白正反馈基因环路对肺腺癌细胞细胞周期、凋亡率及放射敏感性的影响.方法 采用直线加速器8 MV-X线,400 MU/min、4 Gy、源皮距100 cm的照射条件照射治疗组pE6R4-p53-EGFP/H1299转染细胞和对照组H1299(p53~(-/-))、pE6-p53-EGFP/H1299和pR4-p53-EGFP/H1299转染细胞,12 h后收集各组细胞,流式细胞仪分析该环路在放射线诱导下对肺腺癌细胞周期和细胞凋亡率的影响;绘制细胞放射剂量-存活曲线,计算平均致死剂量(Do)值及放射增敏比(sensitive enhancement ratio,SER).结果 4 Gy 8 MV-X线照射治疗组和对照组细胞后12 h,治疗组细胞在照射后(75.13±1.42)%发生明显G_0/G_1期阻滞;照射后各组细胞凋亡率均高于照射前,照射后治疗组细胞凋亡率为(23.73±0.21)%,分别是对照组H1299(p53~(-/-))细胞[(4.17±0.12)%]、pE6-p53-EGFP/H1299细胞[(15.67±0.32)%]、pR4-p53-EGFP/H1299细胞[(9.23±0.15)%]的5.69、1.51倍和2.57倍.治疗组pE6R4-p53-EGFP/H1299细胞和对照组pE6-p53-EGFP/H1299、H1299(p53~(-/-))细胞Do值分别0.91、1.073、1.413 Gy,根据Do值计算SER分别为2.63和1.34.结论 放射可诱导wt-p53蛋白正反馈基因环路上调wt-p53蛋白表达,从而调控肺腺癌细胞发生显著G_0/G_1阻滞,使细胞凋亡比例增加,显著提高了肺腺癌细胞放射敏感性.
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姜黄素通过影响NF-κB信号通路促进肺癌细胞的放射敏感性
目的 探讨姜黄素联合放射治疗对肺癌NCl-H460细胞的活性及肺癌小鼠放射敏感性的影响.方法 把肺癌NCI-H460细胞分为4组:空白对照组、姜黄素组、γ射线组及γ射线照射与姜黄素的联合组;然后对各组分别应用噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Annexin-V/PI染色法检测细胞周期分布及凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达,RT-PCR检测核因子κB(NF-κB)基因表达情况.另外,建立小鼠肺癌模型同样分为对应的4组,姜黄素按照1 mg/kg经尾静脉注射于小鼠,肿瘤局部进行剂量为5 Gy射线照射,处理28 d后,比较不同处理组小鼠瘤体体积.结果 与空白对照组、姜黄素组和γ射线组比较,联合组NCI-H460增殖率明显降低(P＜0.05),凋亡率明显增加(P＜0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低(P＜0.05),促凋亡蛋白Bax表达明显增高(P＜0.05),NF-κB mRNA表达明显降低(P＜0.05),并且肿瘤的体积有明显减少(P＜0.05).结论姜黄素可通过抑制γ射线处理条件下NF-κB的表达并促进细胞的G2/M期阻滞来增强肺癌NCI-H460细胞对γ射线的敏感性.
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肿瘤细胞的放射抗拒特性与免疫调节
在癌症患者治疗的过程中，大约有70％的患者需要放射治疗，然而肿瘤细胞的辐射抗拒特性是肿瘤放射治疗失败的根源。影响肿瘤细胞放射敏感性的因素有很多，归结起来有3个方面：（1）肿瘤细胞的外环境和肿瘤组织基质因素；（2）在细胞层次上的因素；（3）肿瘤细胞内分子或基因改变因素。目前，放射肿瘤学已经面临了一个新概念的出现，即免疫系统能够调节放射治疗中的抗肿瘤效应。以下就机体免疫系统在放射治疗中的作用及肿瘤细胞产生辐射抗拒特性的机制，和目前白细胞介素‐12（IL‐12）在放射治疗中的意义作一综述。
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人类乳头状瘤病毒与头颈部肿瘤放疗的关系
随着近年来对头颈部鳞癌（head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC），尤其是口咽鳞癌（oropharyngeal squamous cell carcinoma，OPSCC）发病机制的不断研究发现，人类乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）阳性 HNSCC 患者在生存率及病死率方面明显优于HPV阴性者（多因吸烟等传统因素所致）[1]。有研究表明，这与HPV阳性患者吸烟率低，从而减少吸烟带来的相关合并疾病及继发的头颈部恶性肿瘤而致死的可能有关[2]。HPV 阳性是提示 HNSCC 预后良好的指标，这与HPV阳性HNSCC细胞的放疗敏感性增加有关，但该类研究尚存在局限性。而如何增加放疗敏感性、提高放疗疗效是目前HNSCC放疗的热门话题[3]。本文主要介绍国外目前关于HPV阳性HNSCC放疗敏感性是否增加及其生物学机制的研究，以期为临床治疗提供更多的论据支持。
关键词： 乳头状瘤病毒科 头颈部肿瘤/放射疗法 辐射耐受性 综述 -
吉非替尼对肺癌细胞株HCC827和H358放射敏感性的影响及其机制研究
背景与目的 表皮生长因子受体( epidermal growth factor receptor,EGFR)是决定放疗效应的一个重要因素,其过表达或是下游通路的激活与包括非小细胞肺癌在内的肿瘤的放疗抵抗相关,因而阻断EGFR的信号通路可能会增强放疗敏感性.本研究旨在探讨小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼能否增加肺癌细胞株HCC827和H358的放疗敏感性及其能的机制.方法 选取HCC827和H358这两个非小细胞肺癌细胞株,分为单纯X线组和X线+吉非替尼两组.单纯X线组采用单纯X线照射,X线+吉非替尼组经1 μmol/L吉非替尼作用24 h后再行X线照射.克隆形成实验比较两株细胞中不同分组细胞放射敏感性,免疫荧光激光共聚焦显微镜观察X线照射后各时间点细胞核中的磷酸化H2AX(γ-H2AX)及EGFR焦点在细胞中的定位情况,Western blot法检洲放疗后胞质胞核蛋白中EGFR的表达.结果 克隆形成实验中.H358细胞实验组与对照组在各放疗剂量点的SF2值分别为0.355和0.433; HCC827细胞实验组与对照组在各放疗剂量点的SF2值分别为0.223和0.242,差别不明显.激光共聚焦显微镜观察照射4 Gy后各时间段实验组H358细胞核中g-H2AX斑点相比对照组要多,且持续时间更长.而对照组和实验组的HCC827细胞g-H2AX斑点在各时间段并无明显差异;激光共聚焦显微镜观察照射4 Gy后对照组H358的EGFR蛋白在1h内入核,而经吉非替尼处理后EGFR蛋白几乎不入核;实验组及对照组HCC827细胞的EGFR表达位置均在细胞质中,胞核中很少或者没有,可以认为并无入核现象;Western blot结果显示,H358细胞在经4Gy放射处理后有入核现象,而预先经吉非替尼处理后,EGFR蛋白几乎不存核内表达而仍位于细胞浆内.对于HCC827细胞,实验组及对照组的EGFR蛋白均在细胞质中表达,胞核中很少或没有,且两组并无明显差异.结论 吉非替尼可增加肺癌细胞株H358的放射敏感性,这可能与其阻止放疗后EGFR入核、影响放疗后双链断裂(double strand break,DSB)修复有关;而对HCC827细胞无影响,可能与其放疗后EGFR不入核相关.
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口腔颌面部修复组织瓣的放射反应观察
目的:探讨术后放疗过程中口腔颌面部各类修复组织瓣的放射反应表现.方法:观察29例带有31块口腔颌面部修复组织瓣的术后放疗患者,参照RTOG国际标准对各类组织瓣的急性放射反应进行分级.结果:口内外各类组织瓣均出现类似于正常组织的放射反应,同时也有一些特殊表现,但无一例坏死.结论:口腔颌面部各类修复组织瓣对术后常规放疗都具有良好的放射耐受性.
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膀胱移行细胞癌细胞凋亡与放疗敏感性关系
目的研究膀胱移行细胞癌的细胞凋亡与放疗敏感性的关系. 方法光镜观察41例原发性膀胱移行细胞癌放疗前肿瘤组织细胞凋亡指数(AI)、分裂相指数(MI)及放疗后组织坏死程度. 结果膀胱移行细胞癌AI和MI随肿瘤分化程度降低而增高，各组织学分级之间有显著性差异(P<0.01)，放疗后组织坏死程度亦随癌组织分化程度降低而加重，各组织学分级之间差异显著(P<0.01). 结论分化越差的膀胱移行细胞癌增殖活性和细胞凋亡数越高，对放疗越敏感. AI可以作为选择放疗的一项指标.
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辐射耐受性宫颈癌细胞系的建立及DNA损伤修复相关基因的差异表达
目的 筛选来源相同辐射耐受性不同的宫颈低分化鳞癌细胞DNA损伤修复相关基因的差异表达,探讨宫颈癌辐射耐受的机制.方法 用9MeV-β射线反复多次间歇大剂量照射人宫颈低分化鳞癌细胞株SiHa,建立辐射耐受性细胞SiHaR,用DNA损伤修复相关PCR基因芯片检测SiHa与SiHaR差异表达基因,并对筛选出的部分基因进行Western blot验证.结果 SiHa及SiHaR细胞经射线照射后呈指数性杀灭,同一剂量照射后SiHaR细胞存活分数(survival fraction,SF)值更高,SiHaR细胞在2Gy照射后细胞存活分数(SF2)是SiHa的2.26倍;二者有差异表达的DNA损伤修复相关基因41个,其中上调基因27个,下调14个.有13个位点出现6倍以上或低于0.1的差异.Western blot对4个差异表达蛋白质验证结果提示,与SiHa细胞相比,糖尿病关联Ras 相关基因(ras-related associated with diabetes,RRAD1)、复制因子C2[replication factor C (activator 1) 2,RCF2]在SiHaR表达水平明显下调,而X线修复交叉互补基因1(X-ray repair complementing defective repair,XRCC1)及切除修复交叉互补基因(excision repair cross-complementing,ERCC1)蛋白质明显上调.结论 人宫颈癌细胞系SiHa经间歇性大剂量射线多次照射后筛选获得的SiHaR细胞具有稳定的辐射耐受性;这与DNA损伤修复能力在基因水平上发生了某些突变明显相关.这为通过调控相关基因进行放射敏感性调控提供了依据.
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c-erbB-2基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的相关性
目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线.结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,有显著性差异(P 均＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P＞0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,有显著性差异(P 均＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P＞0.05).存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株间D0值无显著性差异(F=0.287,P＞0.05),CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株间Dq值均有显著性差异(P值分别＜0.05、＜0.05、＜0.01).结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;3种细胞株中,CALU-3对γ射线不敏感,NCL-H520敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关.
关键词： 癌 非小细胞肺/放射疗法 基因 erbB-2/代谢 辐射耐受性 -
凋亡相关基因与直肠癌放射敏感性相关关系的研究
目的:探讨凋亡相关基因ATM、p53、Bcl-2与直肠癌放疗敏感性的关系.方法:采用免疫组化LSAB方法检测直肠癌活检组织中ATM、p53、Bcl-2基因表达水平.病人接受放射治疗,观察疗效,分析基因表达与放射敏感性的关系.结果:ATM蛋白表达阳性者放射敏感性明显低于表达阴性者,p53蛋白表达阳性者略差于阴性者;Bcl-2基因表达与放射敏感性无关.结论:ATM、 p53、Bcl-2等凋亡相关基因表达产物的检测及综合分析有助于直肠癌放疗疗效的预测.
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siRNA干扰slug基因表达对IEC-6细胞放射线敏感性影响
目的 探讨siRNA干扰slug基因表达对体外肠隐窝上皮细胞IEC-6接受X线照射的敏感性影响及其机制.方法 以体外培养大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,将转染siRNA-slug(实验组)、转染siRNA(阴性对照组)和未转染siRNA(空白对照组)的细胞进行X射线照射处理,24 h后,用Western blot法检测各组细胞的Slug和细胞P53正向凋亡上调因子(PUMA)蛋白的表达,CCK8法检测细胞在不同剂量X射线照射下的生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 实验组Slug蛋白表达与阴性对照组和空白对照组比较明显降低,PUMA蛋白表达明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有显著性(F=1 760、421,P＜0.01).与阴性对照组和空白对照组比较,实验组细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(F=33.02,P＜0.01).在0～6 Gy剂量范围内,随着X线照射剂量的增加,各组细胞的增殖活性均降低(F=6.595～31.470,P＜0.05);在6 Gy剂量X线照射下,实验组细胞生长抑制率、早期+晚期凋亡率较阴性对照组和空白对照组明显增高,差异有统计学意义(F=47.700、33.020,P＜0.01).结论 siRNA干扰slug基因的表达能够使促凋亡的PUMA蛋白表达增加,从而增强IEC-6细胞对X射线的敏感性.
关键词： Slug基因 RNA干扰 P53正向凋亡上调因子 辐射耐受性
