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TRX及TXNIP在溃疡性结肠炎患者中的表达及作用
目的 检测UC 患者血清及结肠组织中TRX 及TXNIP 的表达,分析这两种氧化应激因子与UC 病情严重程度的相关性,探讨二者在UC 发生发展中可能的作用.方法 收集29 例UC 患者(病例组)及25 例正常人(对照组/C 组)的外周静脉血和结肠黏膜活检组织.按照Sutherland DAI 评分标准予以患者评分后,分为轻中度活动组(A 组= 17 例)、重度活动组(B 组= 12 例).分别采用免疫组织化学染色法和酶联免疫检测技术(ELISA) 检测各组患者血清和结肠组织中TRX 及TXNIP 的表达.根据检测结果,对TRX 、TXNIP 与UC 患者病情严重程度的相关性进行统计学分析.结果 血清学检测显示:TRX 和TXNIP 在各组中的表达水平为:C 组0.05),余各组之间均有明显差异(P<0.05).免疫组织化学染色显示:TRX 在各组中的表达水平为:C 组A 组>B 组.各组间的表达均有明显差异(P<0.05).相关性分析:血清中TRX 及TXNIP 的表达与UC 患者病情的严重程度均具有显著相关性(r = 0.421,P <0.01; r = 0.439,P <0.01); 结肠组织中TRX 和TXNIP 的表达与UC 患者病情的严重程度均具有显著相关性(r = 0.940,P <0.01; r = -0.940,P<0.01).结论 活动期UC 患者血清中及结肠组织中TRX 与TXNIP 的表达与病情的严重程度密切相关,二者可能通过氧化应激机制参与了UC 的发病,其表达在一定程度上可以反映疾病的活动度.
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硫氧还蛋白、硫氧还蛋白相互作用蛋白与消化系疾病的关系
硫氧还蛋白系统是一类具有氧化还原活性的小分子蛋白系统,由硫氧还蛋白(TRX)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)和硫氧还蛋白还原酶(TRX-R)3部分组成,具有调节细胞氧化还原状态、对抗氧化应激、激活转录因子促进细胞生长以及抑制细胞凋亡等作用.硫氧还蛋白相互作用蛋白\硫氧还蛋白结合蛋白2\维生素D3上调蛋白1(TXNIP\TBP-2\VDUP-1)属于硫氧还蛋白结合蛋白的家族成员,通过抑制硫氧还蛋白系统的功能而发挥介导氧化应激、抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡等作用,是TRX的负性调节因子.氧化应激与细胞凋亡参与了许多消化系疾病的发生发展.TRX与TXNIP作为氧化应激相关因子,可能在消化性疾病中发挥一定的作用.本文就TRX及TXNIP的结构特点、生物学功能以及与消化系疾病的关系等方面作一综述.
关键词： 硫氧还蛋白 硫氧还蛋白相互作用蛋白 氧化应激 消化系疾病 -
2型糖尿病肾病患者血清中Trx，Txnip的变化及意义
目的：探讨硫氧还蛋白( Trx),硫氧还蛋白相互作用蛋白( Txnip)与2型糖尿病肾病患者的关系。方法用ELISA法检测T2DM组(96例)及同期门诊健康体检者D组(23例)人群血清中Trx,Txnip水平,其中按照尿微量白蛋白与尿肌酐值的比值(ACR),将T2DM组分为A组(<30 mg/g ,35例),B组(30~300 mg/g,37例),C组(>300 mg/g ,24例),同时检测糖化血红蛋白( HbA1c)、空腹血糖( FPG)、尿素氮( BUN)、肌酐( Cr)、总胆固醇( TC)、体重指数( BMI )、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)。结果糖尿病组患者血清中Trx的水平较健康对照组显著降低(P<0.01), Txnip的水平较健康对照组明显升高(P<0.05),A组与B组两因子水平未见统计学差异(P>0.05),B组与C组比较两因子有统计学差异(P<0.05),糖尿病组ACR和Trx正相关(r ＝0.706, P<0.001),和Txnip负相关(r ＝－0.607,P<0.001)。结论 Trx和Txnip表达与DN的病变发展有关,有可能作为检验DN的敏感指标,为早期诊断糖尿病肾病及分期提供方法。调节二者表达及活性可成为糖尿病肾病诊治的新思路。
关键词： 2型糖尿病 糖尿病肾病 硫氧还蛋白 硫氧还蛋白相互作用蛋白 尿微量白蛋白/肌酐值 -
2型糖尿病前期患者硫氧还蛋白相互作用蛋白的变化
目的 探讨2型糖尿病前期患者硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)等的变化.方法 选取2型糖尿病前期患者(PD组)141例、2型糖尿病患者(DM组)24例、正常糖耐量组(NGT组)36例,检测血糖(FBG)、胰岛素(INS)、血清硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、硫氧还蛋白(TRX)水平,并对结果进行分析.结果 3组空腹血糖值、胰岛素(INS)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、硫氧还蛋白(TRX)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TXNIP、TRX在2型糖尿病前期已出现升高,提示在糖尿病前期已启动慢性氧化应激.
关键词： 糖尿病前期 硫氧还蛋白相互作用蛋白 硫氧还蛋白 氧化应激 -
糖尿病肾病早期大鼠肾脏中硫氧还蛋白相互作用蛋白的表达研究
目的:探讨糖尿病肾病(DN)早期大鼠肾组织中硫氧还蛋白相互作用蛋白(Txnip)表达的变化.方法:Wistar大鼠随机分成正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(DM组).腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型,4周时取大鼠肾脏,HE染色观察大鼠肾组织的病理变化,免疫组化检测大鼠肾组织中Txnip的表达分布,Western blot和RT-PCR进一步检测Txnip蛋白和基因的表达.结果:在DN早期,与NC组肾组织相比,DM组的肾小管和肾小球中均发现Txnip蛋白和基因的表达增加.结论:Txnip表达的变化在大鼠DN早期发挥重要作用.
关键词： 糖尿病肾病 硫氧还蛋白相互作用蛋白 大鼠 -
NLRP3炎症复合体与2型糖尿病发生发展关系的研究
NLRP3炎症复合体是近年发现的重要炎症复合体之一,与机体的免疫炎症密切相关,可以识别多种病原体和损伤信号,在许多疾病的发生发展中发挥着重要作用.目前研究结果发现NLRP3炎症复合体与2型糖尿病关系密切,它与活性氧、硫氧还蛋白相互作用蛋白等形成级联机制,共同参与了2型糖尿病的发生发展,且NLRP3作为引起免疫炎症反应的核心,为今后2型糖尿病的治疗提供了新的方向.
关键词： NLRP3炎症复合体 2型糖尿病 肥胖 活性氧 硫氧还蛋白相互作用蛋白 -
硫氧还蛋白相互作用蛋白介导胰岛β细胞凋亡及功能障碍研究进展
硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)不仅与细胞的氧化还原状态密切相关,在胰岛B细胞功能障碍和细胞凋亡中也扮演了重要角色.高糖通过招募碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)到TXNIP的启动子,ChREBP与组蛋白乙酰转移酶p300相互作用,引起TXNIP的转录,TXNIP介导高糖诱发的氧化应激、内质网应激、NOD样受体3炎症小体激活、凋亡和自噬障碍等.可通过诱导微小RNA-204的表达下调鸟类MafA蛋白哺乳动物同系物而抑制胰岛素基因转录,抑制胰岛素信号转导途径,进而抑制葡萄糖刺激的胰岛素分泌;TXNIP通过抑制硫氧还蛋白系统影响细胞的生存,同时还是介导细胞线粒体凋亡和内质网应激凋亡途径的枢纽分子.抑制TXNIP可能是一个阻止糖尿病进程的有效靶点.本文就TXNIP在胰岛细胞凋亡和胰岛功能障碍方面的相关研究进行回顾和总结分析.
关键词： 硫氧还蛋白相互作用蛋白 胰岛细胞 糖尿病 细胞凋亡 -
硫氧还蛋白相互作用蛋白与多囊卵巢综合征代谢紊乱的研究进展
多囊卵巢综合征（ PCOS）是一种复杂的生殖内分泌疾病，主要特征为月经稀发或闭经、高雄激素血症、卵巢多囊样改变以及代谢紊乱。其中，胰岛素抵抗在PCOS患者中很常见。高糖通过糖类反应元件增加了血清硫氧还蛋白相互作用蛋白（ TXNIP）的表达，导致胰岛素抵抗，从而加强了氧化应激，引起β细胞凋亡。由于 PCOS 妇女血清 TXNIP 水平较正常妇女明显偏高，因此通过探究TXNIP 与PCOS的相关性，可以为寻找PCOS代谢紊乱治疗靶点提供新的依据与线索。
关键词： 多囊卵巢综合征 硫氧还蛋白相互作用蛋白 胰岛素抵抗 β细胞功能障碍 -
TXNIP过表达对INS-1细胞凋亡通路的影响
目的 本研究使用腺病毒转染技术,观察在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞过表达TXNIP是否引起细胞凋亡,并对TXNW介导细胞凋亡的通路进行初步分析.方法 将处于对数生长期在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞分为3组,即正常培养组、空病毒(Ad-eGFP)组和TXNIP过表达(Ad-TXNIP-eGFP)组,均于转染48h后收集细胞进行指标测定.结果 转染细胞48 h时病毒转染率达到高峰,并且荧光蛋白表达量基本一致.同Ad-eGFP组相比,Ad-TXNIP-eGFP组TXNW mRNA(38.68±7.35比0.73±0.39,P＜0.01)和蛋白表达量(1.28±0.25比0.62±0.16,P＜0.01)均明显增高,说明转染及TXNIP过表达成功.与Ad-eGFP组相比,Ad-TXNW-eGFP组Caspase-3相对活性明显增高[(3.823±0.238)nmol·h-1·mg-1比(0.956±0.107)nmol·h-1·mg-1,P＜0.01];反映下游不同通路的Caspase-8[(132.10±27.33)pg/ml比(81.01±15.34)pg/ml,P＜0.01]、Caspase-9[(290.76±43.15)pg/ml比(88.94±14.68)pg/ml,P＜0.01]和Caspase-12活性[(266.96±18.50)pg/ml比(52.05±6.13)pg/ml,P＜0.01]均明显增高.结论 单纯过表达TXNIP可以引起正常糖脂浓度培养下INS-1细胞凋亡.线粒体凋亡途径、死亡受体活化途径和内质网应激介导途径均参与了TXNIP引起的INS-1细胞凋亡的发生.
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腺病毒过表达TXNIP对INS-1胰岛细胞损伤和凋亡的影响
目的 观察TXNIP过表达是否可以引起正常培养条件下的胰岛细胞发生损伤和凋亡,分析TXNIP引起细胞损伤和凋亡的下游途径,以进一步明确TXNIP在糖尿病中引起各器官细胞损伤的机制.方法 将使用正常糖脂浓度培养的胰岛细胞分为4组:正常培养组、Ad-eGFP空病毒组、Ad-TXNIP过表达组和Ad-TXNIPC247S点突变过表达组.结果 与Ad-eGFP空病毒组相比,两个过表达组的TXNIP mRNA水平、TXNIP蛋白水平均显著升高,表明病毒转染成功,TXNIP成功过表达.与空病毒组相比,Ad-TXNIP过表达组TXNIP与Trx的结合量升高(1.67±0.08比1.06±0.05,P＜0.05),而Trx活性显著降低(0.42±0.11比1.13±0.14,P＜0.01);LDH活性[(498.8±55.62)U/L比(266.2±36.49)U/L,P＜0.01]、caspase-3活性[(3.799±0.330)nmol·h-1·mg-1 pro比(0.979±0.100)nmol·h-1·mg-1 pro,P＜0.01]及p38激酶活性(2.45±0.22比1.10±0.08,P＜0.01)均显著增高.与Ad-TXNIP过表达组相比,C247S点突变的TXNIP过表达组TXNIP与Trx的结合量减少,Trx活性明显升高,LDH活性[(421.6±41.31)U/L比(498.8±55.62)U/L,P＜0.05]和caspase-3活性[(3.377±0.290)nmol·h-1·mg-1 pro比(3.799±0.330)nmol·h-1·mg-1 pro,P＜0.01]较低,p38激酶活性(0.80±0.07比2.45±0.22,P＞0.05)明显降低.结论 单纯过表达TXNIP可以引起正常糖脂浓度培养条件下的胰岛细胞发生损伤和凋亡.TXNIP介导细胞损伤和凋亡的机制一方面与其抑制Trx活性、增加自由基损伤、增加ASK1-p38激酶依赖的凋亡途径有关,同时也有不依赖结合抑制Trx的途径存在.TXNIP的表达上调是糖尿病引起胰岛细胞损伤和凋亡的重要原因.
关键词： 硫氧还蛋白 硫氧还蛋白相互作用蛋白 胰岛细胞 凋亡 突变 -
在INS-1细胞中构建胰腺组织硫氧还蛋白相互作用蛋白过表达模型:两种腺病毒感染方法的差异
背景:目前,通过腺病毒感染方法在细胞中构建蛋白质过表达模型的方法主要有2种,一是在腺病毒感染细胞4 h后补充1640完全培养基,24 h后换为完全培养基,再继续培养到48 h(方法Ⅰ);另一种是在腺病毒感染细胞4 h后用PBS洗去含有腺病毒的1640培养基,更换4 mL完全培养基培养到48 h,中间不做任何处理(方法Ⅱ).前者病毒的作用时间较长,感染效果较好,但病毒本身对细胞的损害程度较大,对实验模型的稳定性产生干扰.而后者病毒的作用时间短,对细胞的毒性低,但有时病毒感染效率较低,目的蛋白的表达效果欠佳.目的:在大鼠INS-1胰岛β细胞中,通过比较相同腺病毒载体介导的不同感染细胞的方法而寻找一种更加稳定而高效的硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-interacting protein,TXNIP)过表达模型.方法:构建含有绿色荧光蛋白的腺病毒载体(Ad-GFP)和TXNIP过表达腺病毒载体(Ad-TXNIP-GFP).分别设立正常组、空病毒组和TXNIP过表达组,按照上述2种不同的方法进行病毒转染.结果与结论:①方法Ⅱ中的绿色荧光蛋白荧光强度和阳性效率高于方法Ⅰ;②方法Ⅱ中的细胞形态更好且细胞存活率更高;③方法Ⅱ中,目的基因TXNIP在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况明显高于方法Ⅰ.由以上结果得出结论,腺病毒感染INS-1细胞4 h后,使用PBS将旧培养基洗去并更换新培养基,继续培养到48 h的方法更有利于在INS-1细胞中构建TXNIP过表达模型.
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硫氧还蛋白和硫氧还蛋白相互作用蛋白与糖尿病及其并发症关系的研究进展
硫氧还蛋白系统是由硫氧还蛋白、NADPH和硫氧还蛋白还原酶三部分组成的氧化还原敏感的多功能小分子蛋白系统.硫氧还蛋白系统在细胞内外行使着多种功能,如调节细胞氧化还原状态以对抗氧化应激,激活转录因子如NF-kB和AP-1促生长,以及与ASK-1作用抑制细胞凋亡等.硫氧还蛋白相互作用蛋白\硫氧还蛋白结合蛋白2\维生素D3上调蛋白1为硫氧还蛋白结合蛋白之一,是硫氧还蛋白功能和表达的一种负性调节因子,通过抑制硫氧还蛋白系统功能而发挥介导氧化应激、诱导细胞凋亡及对抗细胞增殖等作用.高糖可以通过相互作用蛋白启动子上的CREs(碳水化合物反应元件)刺激硫氧还蛋白相互作用蛋白的产生而抑制硫氧还蛋白,进而促进氧化应激,损伤胰岛B细胞;诱导B细胞凋亡增加,促进糖尿病及其并发症的发生.因此,硫氧还蛋白相互作用蛋白或许在糖毒性和B细胞凋亡、糖尿病及其并发症之间起着重要作用.
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硫氧还蛋白和硫氧还蛋白相互作用蛋白与糖尿病肾病关系的研究进展
糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见的微血管并发症之一,临床上一旦发生,肾脏损害常呈不可逆进展,透析病人中DN患者占20%~40%[1],故DN的早期诊断及治疗对于改善患者生活质量及预后具有重要的临床意义.
关键词： 硫氧还蛋白 硫氧还蛋白相互作用蛋白 氧化应激 糖尿病肾病 -
糖尿病肾病与硫氧还蛋白及其相互作用蛋白关系的研究进展
随着人们生活行为,饮食结构及人口老龄化的改变,糖尿病(DM)的发病率与日剧增,成为严重威胁人类健康的慢性代谢性疾病,据国际糖尿病联盟统计,2000年全球有DM患者约1.51亿,而估计到2030年全球将5亿人患DM,DM是DM肾病(DN)重要的微血管并发症之一,临床上一旦产生,其肾脏损害不可逆进展,比例约占40％～50％[1,2],是欧美国家导致肾脏尿毒症期重要原因之一,其病理上表现为肾小球基底膜增厚,系膜基质增生,引起肾小球纤维化、硬化,引起肾小球高滤过及蛋白尿,也称为DN肾小球硬化症.其发病机制仍未阐明,目前,关于DN的氧化应激学说倍受关注,有DM动物模型显示硫氧还蛋白相互作用蛋白通过降低硫氧还蛋白活性是血管氧化损伤的一个重要机制[3],调节两者的活性有可能成为新的药理靶点.
关键词： 硫氧还蛋白 硫氧还蛋白相互作用蛋白 糖尿病肾病 -
硫氧还蛋白相互作用蛋白在糖尿病发病中的作用机制
糖尿病分为1型和2型糖尿病,1型糖尿病系自身免疫性疾病,其胰岛受到巨噬细胞及T细胞所产生细胞因子、干扰素及肿瘤坏死因子(TNF)-α等作用后导致胰岛β细胞凋亡;而2型糖尿病与胰岛β细胞凋亡及胰岛素抵抗有关[1～3].β细胞减少可导致血糖增高;而长时间高血糖作用能促使β细胞群数量逐渐减少.高水平葡萄糖所导致的胰岛炎症、氧化应激、线粒体应激、内质网应激等在胰岛β细胞凋亡中起重要作用[4].加之人类胰岛β细胞转化率较慢[5],故胰岛β细胞受损后将导致糖尿病.然而,有关糖尿病发病机制尚不清楚.硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在糖尿病发病中起重要作用,是目前研究糖尿病的重要靶点.因此,本文对TXNIP在糖尿病中的作用机制的研究进展做一综述.
关键词： 硫氧还蛋白相互作用蛋白 糖尿病 胰岛 -
潜在抑癌基因TXNIP对胃癌MKN-45细胞生物学特性的影响
目的:探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)基因对胃癌MKN-45细胞生物学特性的影响,阐明TXNIP与胃癌发生发展的关系.方法:将TXNIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-TXNIP真核表达载体,并将其转染胃癌MKN-45细胞建立稳定转染细胞系(MKN-TXNIP),利用RT-RCR法、免疫细胞化学法检测转染细胞中的TXNIP基因及细胞原位蛋白表达.每种检测实验均分为MKN-TXNIP组、MKN-PC组和MKN-45组(空白对照组).采用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞术和Transwell小室实验法等检测稳定表达TXNIP胃癌细胞株生长、增殖状态、细胞周期和侵袭能力等生物学特性.结果:与MKN-PC组和MKN-45组比较,MKN-TXNIP组中TXNIP基因可稳定表达.与MKN-PC组和MKN-45组比较,MKN-TXNIP组稳定表达的细胞株生长速度明显减慢(P＜0.05).平板克隆形成实验,MKN-TXNIP组细胞平均克隆形成率明显低于其他2组(P＜0.05).细胞周期检测,与MKN-45组比较,MKN-TXNIP组处于G0/G1期的细胞百分比明显升高(P＜0.05),而处于G2/M期的细胞百分比明显降低(P＜0.05).流式细胞术,各组细胞的凋亡率均约为2.0％,各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).Transwell小室实验,MKN-TXNIP组MKN-45细胞穿膜率低于其他2组(P＜0.05).结论:TXNIP基因对胃癌细胞增殖、分裂及侵袭转移能力可能具有抑制作用,并可同时影响胃癌细胞的细胞周期,但其对细胞凋亡的影响作用较小.
关键词： 胃肿瘤 硫氧还蛋白相互作用蛋白 细胞周期 转染 -
硫氧还蛋白相互作用蛋白与糖尿病致病机制关系的探讨
测定不同糖耐量人群血浆中硫氧还蛋白相互作用蛋白( thioredoxin-interacting protein, TXNIP)水平及与胰岛素抵抗/胰岛功能失调的关系,并进一步分析 TXNIP 与炎症介质白细胞介素-1β( IL-1β)的相关性。根据口服葡萄糖耐量试验将93名健康体检者分为糖尿病组,糖尿病前期组和正常糖耐量组。分别测每组血糖、TXNIP、IL-1β等生化学指标,并分析TXNIP与血糖、IL-1β、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数( HOMA-IR)、稳态模型评估的胰岛β细胞功能指数( HOMA-β)等的关系。血浆TXNIP水平在糖尿病前期组明显高于正常糖耐量组,而低于糖尿病组[(355.35±31.88对274.36±33.86,426.16±63.15)pg/ml, P<0.01或P<0.05]。 TXNIP与IL-1β、HOMA-IR呈正相关,与HOMA-β呈负相关。血浆中TXNIP水平的变化受血糖浓度的影响。 TXNIP与炎症介质IL-1β有关。在糖尿病前期患者中,TXNIP水平即有显著升高。
关键词： 硫氧还蛋白相互作用蛋白 白细胞介素-1β 糖尿病 2型 胰岛素抵抗 -
血管紧张素Ⅱ通过其1型受体诱导胰岛β细胞TXNIP的表达
本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)对INS-1胰岛细胞凋亡及硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)表达的影响,并分析其可能的作用机制.体外常规培养大鼠胰岛细胞株INS-1,使用CCK-8试剂盒检测不同浓度和不同作用时间的Ang Ⅱ对细胞存活率的影响,确定佳作用浓度及作用时间为1×10-6 mol/L和24 h;在上述浓度及作用时间条件下,使用流式细胞术及Western blot检测细胞凋亡;Western blot检测Ang Ⅱ对TXNIP、碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element-binding protein,ChREBP)及血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)蛋白表达的影响;Real-time PCR检测TXNIP及ChREBP mRNA表达;IF/ICC法观察TXNIP、ChREBP及AT1R的表达变化.结果显示Ang Ⅱ可浓度依赖性及时间依赖性地降低细胞活力(P＜ 0.05,n=6)并上调TXNIP的表达(P＜ 0.05,n=6);与对照组相比,Ang Ⅱ组细胞凋亡率、ChREBP及ATlR的表达均明显增高(P＜ 0.05,n=6).使用AT1R受体抑制剂替米沙坦(telmisartan,TM)后,Ang Ⅱ对INS-1细胞TXNIP及ChREBP的诱导作用被抑制(P＜0.05,n=6),Ang Ⅱ诱导的细胞活力降低及细胞凋亡升高被逆转.上述结果表明,Ang Ⅱ可通过ATlR增加ChREBP活化而上调TXNIP的表达,促进细胞凋亡,提示TXNIP可能在糖尿病时Ang Ⅱ诱发胰岛细胞凋亡中发挥作用,并有望成为糖尿病新的治疗靶点.
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腺病毒过表达TXNIP抑制INS-1胰岛β细胞增殖
糖尿病可以引起硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interaction protein,TXNIP)表达增加,而TXNIP可以结合内源性硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)并抑制其活性.本研究旨在探讨TXNIP对INS-1胰岛β细胞增殖的影响及机制.构建TXNIP过表达(Ad-TXNIP-GFP)和半胱氨酸247位点突变的TXNIP过表达(Ad-TXNIPc247s-GFP)腺病毒载体并感染INS-1细胞,用EdU法和Ki67法检测细胞增殖,用Western blot检测ERK和AKT蛋白磷酸化水平.结果显示,TXNIP和TXNIPc247s(不能与Trx特异性结合并抑制其活性)蛋白过表达均显著抑制INS-1细胞增殖,且TXNIP过表达细胞增殖的受抑制程度大于TXNIPc247s过表达细胞.另外,TXNIP和TXNIPc247s过表达均抑制INS-1细胞ERK和AKT的磷酸化.以上结果提示,TXNIP过表达可能通过Trx依赖途径以及非Trx依赖途径抑制ERK和AKT的磷酸化,进而抑制INS-1细胞增殖.
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自噬在TXNIP过表达诱导的INS-1胰岛细胞凋亡中的作用
硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)是内源性硫氧还蛋白结合抑制蛋白,在糖尿病患者血清和组织中均高表达.本研究观察TXNIP过表达对正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞自噬水平的影响,并分析自噬在TXNIP诱导的细胞凋亡中的作用.常规培养的INS-1胰岛细胞分为正常培养组、空病毒(Ad-eGFP)组和TXNIP过表达(Ad-TXNIP-eGFP)组,后两组转染相应腺病毒,48 h后测定TXNIP mRNA和蛋白的表达情况;用Western blot检测各组自噬相关的Beclin-1、LC3和P62的蛋白表达情况,以cleaved caspase 3/caspase 3比值和流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;用IF/ICC法检测各组细胞内自噬体数量的变化.结果显示,与Ad-eGFP组相比,Ad-TXNIP-eGFP组TXNIP mRNA和蛋白表达量均明显升高;与Ad-eGFP组相比,Ad-TXNIP-eGFP组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平升高,P62蛋白表达降低,自噬体荧光强度增强,细胞凋亡率升高,cleaved caspase 3/caspase 3比值上升.使用自噬抑制剂3-MA干预后,与TXNIP过表达组相比,TXNIP过表达+3-MA组自噬明显受到抑制,同时凋亡明显减轻.以上结果提示,在正常糖脂浓度培养下的INS-1细胞过表达TXNIP可以通过诱导自噬促进细胞凋亡.
关键词： INS-1细胞 硫氧还蛋白相互作用蛋白 自噬 凋亡
