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热盐水致胃黏膜细胞凋亡及对热休克蛋白表达影响
目的:研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(CAG)胃黏膜组织中的凋亡细胞、增生细胞和Bcl-2、Fas、HSP60、HSP70、HSP90α及P53表达状态,以探讨CAG发病机制及长期热咸饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系.方法:采用脱氧核糖核酸转移酶介导等缺口末端标记(TUNEL)技术及免疫组织化学染色技术.细胞凋亡时DNA含量分析采用流式细胞检测技术.结果:TUNEL检测细胞凋亡显示:在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎中凋亡细胞数明显增多,在黏膜全层均可见到,呈弥漫性分布.萎缩性胃炎中凋亡细胞指数显著高于正常大鼠胃黏膜(P<0.05);免疫组化法检测凋亡相关基因和PCNA,显示:Bcl-2、Fas、HSP60、HSP70、HSP90α、P53及PCNA在热盐水灌胃所致的萎缩性胃炎中的表达率显著高于正常胃黏膜(P<0.05);流式细胞检测显示:在萎缩性胃炎时,在G0/G1峰前可见一个亚G0/G1峰,也即凋亡细胞峰出现,而在正常胃黏膜时未显示亚G0/G1峰.结论:热盐水灌胃可导致大鼠胃黏膜组织细胞增生和细胞凋亡异常,其调控基因(Bcl-2、Fas)及HSP60、HSP70、HSP90α、P53在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎发生中起重要作用.
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幽门螺杆菌感染与胃癌前病变演化的关系
目的:了解幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)长期感染是否促进胃黏膜肠上皮化生和异型增生的形成与发展,评价5a随访根除Hp感染对胃癌前病变的作用并探讨其机制.方法:采用前瞻性队列研究方法,对首次胃镜检查诊断为慢性胃炎而不伴有肠上皮化生和异型增生的患者作为入选病例,入选时Hp阳性患者80例,Hp阴性者30例.Hp阳性患者根据自愿原则采用根除Hp治疗或采用对照治疗.全部病例跟踪随访5a.并采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术及免疫组织化学染色对Hp阳性患者Hp根除前后及Hp阴性者胃黏膜上皮细胞凋亡和增生情况进行原位观察和比较.结果:Hp阳性观察组肠上皮化生的发生率(32.6%)显著高于Hp阴性对照组(12.0%,x2=4.147,3.893,P<0.05)和2p根除观察组(12.9%,x2=3.869,P<0.05).Hp阳性观察组异型增生的发生率(19.6%)显著高于Hp阴性对照组(4.0%,x2=3.893,P<0.05).Hp根除观察组肠上皮化生和异型增生的发生率与Hp阴性对照组无统计学差异.2p阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数及PCNA指数(12.7%,14.6%)均显著高于Hp阴性患者(2.9%,8.0%,t=7.241,6.368,P<0.01),2p根除后胃黏膜上皮细胞PCNA指数和凋亡指数(14.3%,12.9%)均显著下降(9.2%,3.6%,t=5.642,7.410,P<0.01),而Hp未根除者上述指标则无显著性变化.结论:Hp感染可能通过刺激胃黏膜上皮细胞凋亡与增生的调节紊乱,使胃黏膜的不稳定性增加,促进胃黏膜肠上皮化生和异型增生的形成与发展,从而增加患胃癌的危险性.根除Hp感染能明显降低肠上皮化生和异型增生的发生率.
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自发性高血压大鼠心肌凋亡及bcl-2、bax蛋白的表达
1材料与方法8周龄自发性高血压大鼠(SHR)30只,雌雄各半.随机分为两组,分别为缬沙坦组和无药组各15只.8周龄雄性Wistar大鼠15只作为正常血压对照组.缬沙坦组给予血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂,缬沙坦20mg·kg-1·d-1,溶解于饮用水中每天1次胃管灌入.无药组及正常血压对照组每天饮用水10 ml/kg灌胃.每2周测尾动脉血压.至16周龄所有大鼠乙醚麻醉后断头处死,迅速取左心室组织(包括室间隔)称重.计算心脏指数=心脏重量/体重(mg/g).采用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术原位检测凋亡细胞.采用免疫组织化学定位研究心肌组织bcl-2及bax蛋白表达情况.同时应用Western印迹定量研究心肌bcl-2及bax蛋白表达.研究数据以-x±s表示,P<0.05为差异有显著性意义.
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宫颈癌中癌基因、细胞增殖和细胞凋亡的定位观察
宫颈癌的发展缓慢且多由癌前病变发展而来.本研究采用免疫组化技术及DNA缺口末端标记(TUNEL)技术对正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈鳞癌患者的手术石蜡标本进行癌基因、细胞增殖和细胞凋亡状况的检测,同时对该组患者的临床及病理资料进行分析.
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慢性压力负荷性心衰大鼠心肌细胞凋亡的研究
目的探讨慢性心衰时是否有心肌细胞凋亡.方法利用末端转移酶介导的切口末端标记法(TUNEL)及TEM法,检测慢性压力负荷性心衰大鼠左、右心室心肌的凋亡细胞.结果在心衰大鼠的左、右心室心肌组织中存在有凋亡的心肌细胞,而在对照组大鼠心肌组织中未见到心肌细胞调亡.结论慢性心衰与心肌凋亡之间有紧密联系.
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血管发生和血管新生的体外模型
血管发生 (vasculogenesis)和血管新生 (angiogenesis)是新血管形成的基本过程 [1].为探讨血管发生与血管新生的调控机理,评价各种因子和药物对血管形成的影响,可通过体内外模型.本文重点介绍研究血管发生和新生的体外模型.目前应用较多的为,内皮细胞 (endothelial cell,EC)的增殖试验,EC的迁移试验.前者通过定量 3H-胸腺嘧啶掺入内皮细胞的 DNA测定放射活性评价细胞增殖,也有用比较前后细胞计数评价细胞增殖;迁移实验较多利用标准或改良的 Boyden盒的方法,此盒中含有一定孔径的聚碳酯膜或硝酸纤维素膜,将盒分为上下两层,一侧种入细胞,另一侧加入趋化物,经过一定时间后分析迁入膜中的 EC数.此外,亦有利用融合的单层内皮细胞划横线损伤分析 EC的迁移( wound healing assay).内皮细胞凋亡可通过 TU_ NEL(末端脱氧核糖核酸转移酶介导 dUTP-生物素缺口末端标记 )或定量特殊的标记如 Caspase方法进行测定.尽管上述方法在分析血管形成的各个阶段非常有用,但血管形成是多步骤多因子的过程,因此需要较综合的血管形成体外模型,使之更接近于体内血管形成的过程 [2].
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尖锐湿疣患者角质形成细胞凋亡与增殖
有关尖锐湿疣(CA)患者角质形成细胞凋亡与增殖平衡方面的研究少见,故值得探讨.本研究采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测CA皮损角质形成细胞凋亡,采用免疫组化亲和素-生物素复合物(ABC法)检测CA皮损角质形成细胞增殖细胞核抗原(PCNA),以探讨CA皮损角质形成细胞凋亡和增殖及其平衡在CA发病中的作用.
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双重标记法定性检测AS斑块中的凋亡细胞
长期以来,人们一直认为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种以平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)增殖和变性为主要病变的疾病,但近年的研究表明,细胞凋亡作为一种生理性死亡形式不仅在正常的血管内存在,而且以高于正常情况下的凋亡率参与了AS的发病过程,并调节着动脉管壁中SMC的数量[1]。目前,细胞凋亡与AS关系的研究已成为探索AS发病机制的一条新途径。 尽管已有大量的形态学证据支持细胞凋亡参与AS发生发展的观点,但由于AS斑块组成的相对复杂性,要阐明AS血管壁中凋亡细胞的性质及各种发生凋亡的细胞之间的相对凋亡率等问题尚存在一些困难,本文为进一步开展这一领域的研究在技术上进行了初步探索,建立了利用DNA缺口末端标记(即末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记,TUNEL)技术和免疫组织化学技术相结合的双重标记方法对AS斑块中的凋亡细胞进行了定性检测。
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巨噬细胞移动抑制因子缺失加重苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥厚
目的:研究巨噬细胞移动抑制因子( MIF)缺失对皮下注射苯肾上腺素( PE)诱导的小鼠心肌肥厚的影响。方法:利用MIF敲除( MIF-KO)小鼠及其野生型对照小鼠,分别建立皮下注射PE诱导的小鼠心肌肥厚模型。小动物心脏B超检测小鼠心脏的结构功能改变。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记( TUNEL)法检测小鼠心肌细胞凋亡。分别用荧光定量PCR和Western blot方法分别检测SOD1、SOD2和Trx2的表达。结果:连续3 d皮下注射20 mg? kg-1? d-1 PE可诱导小鼠发生心肌肥厚,注射PE诱导MIF-KO小鼠发生心肌肥厚的程度高于野生型对照小鼠。 TUNEL结果显示,注射PE诱导MIF-KO小鼠心肌发生凋亡的程度高于野生型对照小鼠。注射PE诱导MIF-KO小鼠心肌中SOD1和Trx2表达降低,而且MIF-KO小鼠心肌中Trx2水平显著低于野生型对照小鼠。结论:MIF缺失降低SOD1和Trx2表达,进而加重苯肾上腺素诱导的小鼠心肌
细胞凋亡和心肌肥厚。 -
乙醇诱导的肝癌细胞HCC-9204凋亡及其与Bax和Bcl-2蛋白的关系
[杨连君,王文亮,司晓辉. 细胞与分子免疫学杂志,2001;17(4):315-317] 目的探讨乙醇对肝癌细胞凋亡的诱导作用及其与凋亡相关基因bax和bcl-2表达的关系. 方法用噻唑蓝(MTT)法检测浓度分别为20~100 mL·L-1的乙醇对肝癌细胞系HCC-9204的杀伤作用. 然后,用60 mL·L-1乙醇作用6 h诱导HCC-9204细胞凋亡. 以May-Grunwald-Giemsa (MGG)染色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化. 用免疫细胞化学染色图像分析法,检测诱导凋亡前、后Bax和Bcl-2蛋白表达水平的变化. 结果随着乙醇浓度的增加,其对HCC-9204细胞的杀伤作用逐渐增强. 60 mL·L-1乙醇可使HCC-9204细胞发生明显的细胞凋亡的形态学变化,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色.流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰. 诱导凋亡后的HCC-9204细胞Bax蛋白的表达水平明显增高,而Bcl-2在诱导凋亡前、后的HCC-9204细胞中均未见表达. 结论低浓度乙醇对肝癌细胞HCC-9204具有明显的凋亡诱导作用,其凋亡的发生与Bax蛋白表达水平的增高有关.(何扬举)