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BC047440基因调控HepG2的NF-κB活性机制的实验研究
目的 应用基因芯片进行高通量分析沉默基因BC047440后相关基因表达谱的变化,以了解BC047440通过NF-κB信号途径上游的何种分子调控NF-κB活性.方法 应用博奥公司提供的人全基因组基因芯片检测沉默BC047440基因后相关基因表达谱的改变,利用其数据库和MAS分析系统进行分析筛选,寻找NF-κB发生表达改变的上游分子并进行RT-PCR验证.结果 沉默BC047440基因后有189个基因表达改变,其中130个基因上调表达2倍以上,59个基因下调表达超过50%,其中NF-κB信号途径上游分子中仅TRAF6下降为对照组的23.06%.RT-PCR验证TRAF6的mRNA的表达下降为对照组的29.5%,与基因芯片结果类似.结论 应用基因芯片可以高通量高效率地分析沉默BC047440基因后的基因表达谱,BC047440基因可通过调控上游分子TRAF6作用于NF-κB信号途径来调控肝癌增殖.
关键词： 基因表达调节 BC047440基因 RNA干扰 DNA微阵列 -
瞬时转染HBx基因到人正常胆管上皮细胞并观测其对hTERTmRNA的表达影响
目的通过研究HBx基因转染到人正常胆管上皮(HBECs)后对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的转录调节作用,以阐明HBV感染在胆管癌发生中的作用机制.方法瞬时转染HBx基因到体外培养的HBECs,同时转染含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的克隆载体以判定转染率;RT-PCR分析转染后HBECs内hTERT mRNA的表达变化;并通过细胞免疫组化技术了解转染细胞内HBx蛋白的表达.结果经EGFP判定的转染率约为15%;未经转染或转染空载体的HBECs不表达hTERT mRNA,而转染HBx基因的HBECs可表达明显的hTERT mRNA;只有在转染了HBx基因的HBECs可检测到HBx蛋白表达.结论 HBx基因转染能激活hTERT mRNA的转录表达,这种顺式调节作用可能是胆管上皮增殖、分化并恶化的主要机制.
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肝硬化大鼠肝脏内皮素受体基因的表达与门静脉压力的关系
目的研究四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝脏内皮素(endothelin, ET)受体基因的表达,并探讨其与门静脉压力的关系.方法采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定大鼠肝组织ETA受体和ETB受体mRNA的表达水平, 并测量门静脉压力.结果肝硬化大鼠肝组织ETA受体(0.4245±0.0612 vs 0.2792±0.1115,P<0.05) 和ETB受体(0.5984±0.1047 vs 0.2938±0.1399, P<0.05) mRNA的表达均较对照组均显著升高;肝硬化大鼠门静脉压力较正常大鼠明显升高(16.08±2.19 vs 8.25±2.56 cmH2O,P<0.05),并且ETA受体mRNA的表达与门静脉压力显著正相关(r=0.8074,P<0.05).结论四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝组织ET受体mRNA的表达显著升高,并且ETA受体mRNA的表达与门静脉压力显著正相关, 表明ET受体的高表达在门静脉高压症的发病机制中起重要作用.
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血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂抗纤维化及对Ⅰ型胶原基因表达影响的实验研究
目的研究血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ)Ⅰ型受体(AT1)拮抗剂losartan对肝硬化大鼠Ⅰ型胶原(Type Ⅰ collagen col Ⅰ)基因表达的影响及抗纤维化作用.方法 41只雄性SD大鼠被随机分为4组:对照组(10)、模型组(11)、及治疗组(20)--早期和中期各10只,除对照组外所有大鼠均给予50% CCl4灌胃,3 ml/(kg·5d)一次,共9周.治疗组:早期组同时给予血管紧张素受体拮抗剂losartan灌胃,中期组于造模中期(5周)开始给药,用量10 mg/(kg·d)至处死前.实验结束后,处死取肝脏液氮冻存及福尔马林固定标本,分别行HE及Masson染色,光镜下观察组织学改变,图像分析系统测量胶原面积.免疫组化及RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋白及mRNA的表达.结果光镜下组织学检查纤维化分级、图像分析系统测量胶原面积losartan治疗组低于模型组(P<0.05).与模型组相比,Losartan治疗组使Ⅰ型胶原蛋白及mRNA的表达明显降低(P<0.01).结论 Losartan对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有良好的防治作用.
关键词： 基因表达调节 血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 肝纤维化 -
RASSF1基因在肝外胆管癌组织中转录表达及其临床意义的研究
目的探讨RASSF1基因3种不同转录本在肝外胆管癌中的表达及其临床意义.方法用RT-PCR的方法检测48例肝外胆管癌组织及12例癌旁正常组织中RASSF1A、RASSF1B和RASSF1C mRNA的表达情况.结果 RASSF1A在肝外胆管癌组织中的转录表达缺失高达68.75%,其缺失与肝外胆管癌的淋巴转移(P<0.05)及TNM分期(P<0.01)相关.RASSF1B、RASSF1C的表达与肝外胆管癌的组织学类型、分化程度、淋巴转移不相关.结论 RASSF1基因3种转录本在胆管癌组织中的表达存在明显差异,转录本RASSF1A与肝外胆管癌淋巴转移及TNM分期相关,是一种肝外胆管癌的候选抑癌基因.
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热休克蛋白的分子生物学研究进展
热休克蛋白(heat shock protein,HSP),又称应激蛋白(stressprotein,SP),是一组在结构上高度保守的多肽,广泛存在于自然界原核、真核细胞中,参与细胞的损伤与修复.近年来,其在生物学上的作用已引起了医学界的广泛关注.
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组蛋白去乙酰化酶在慢性气道炎症性疾病中的作用
生物DNA紧密缠绕在组蛋白(H2A、H2B、H3、H4)八聚体上构成染色质的基本单位--核小体.核心组蛋白N端富含赖氨酸残基的长末端与基因表达调节密切相关.
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15-脂氧酶-1基因表达调节研究进展
15-脂氧酶-1(15-LOX-1)是脂质过氧化物酶,分别以亚油酸、花生四烯酸为底物氧化生成13-羟基-十八碳二烯酸(13-HODE)、15-羟基-二十碳四烯酸(15-HETE).15-LOX-1基因表达在转录、翻译、翻译后修饰各个水平都受到多种因素的调节,影响着15-LOX-1的表达量和酶催化活性.本文就15-LOX-1转录、翻译、翻译后修饰各个环节的调节因素作一简要介绍.
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长链非编码 RNA 在结直肠癌中的研究进展
长链非编码RNAs（Long non－coding RNAS，lncRNAs）是一类不编码蛋白质，长度大于200个核苷酸的RNA。结直肠癌的发生发展与lncRNA的异常表达密切相关。本文结合近年来国内外的文献报道，对lncRNA在结直肠癌中的表达情况及作用机制做一综述，以期为临床诊断和靶向治疗提供可能的依据。
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益气活血法与血管平滑肌细胞基因表达调节
多种心血管疾病的发生发展都与血瘀证有关,采用益气活血法作为治疗该类疾病的主要治则已广泛用于临床.研究证实,益气活血中药可调整舒缩血管活性肽在血管平滑肌细胞中的表达活性;并通过抑制血管平滑肌细胞表型转化和细胞增殖相关基因表达而减缓血管内膜增生程度.该类药物还具有调节细胞外基质代谢从而抑制基质重构和血管平滑肌细胞黏附与迁移的作用.本文将近年有关益气活血中药调节血管平滑肌细胞行为及其分子机制的研究作一评述.
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补肾法调节肾阳虚证T细胞凋亡的规律--重塑基因平衡
在"肾"本质的研究中,我们初得到肾阳虚证具有下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴功能紊乱的结论[1].中医认为"肾"为先天之本,主生长、发育、衰老的过程,肾虚证的辨证标准如腰脊酸痛、腿软、耳鸣耳聋、齿落发脱、性功能减退等都是老年人生理机能衰退的表现.肾虚与衰老显然具有共同的外部证候.因此,在观察肾阳虚证的甲状腺与性腺(男)轴功能时,各增加了相应的老年人组[2],结果显示老年人组的甲状腺轴与性腺(男)轴功能的异常值与成年人的肾阳虚证甚为类似,说明肾虚证是未老先衰,而衰老就是生理性肾虚.
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非编码小RNA T64对伤寒沙门菌基因表达的影响
目的:对由转录组测序获得的伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)非编码小RNA(small non-coding RNA,snRNA) T64的表达进行验证,并对其功能进行初步探讨.方法:选取特异性引物采用反转录PCR(RT-PCR)和普通PCR确认T64在S.Typhi中的表达;将含有T64 snRNA序列的重组质粒导入S.Typhi野生株构建T64高表达株;结合应用S.Typhi全基因组芯片分析技术,比较S.Typhi T64高表达株和空载体对照株在对数期基因表达谱差异,并对部分基因芯片结果进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证.结果:RT-PCR结果显示,snRNA T64在S.Typhi确有表达;基因芯片分析结果显示,与空载体对照株比,snRNA T64高表达株在对数期有20个基因表达上调,7个下调;4个被选基因表达的qRT-PCR结果与芯片分析结果相符.结论:snRNA T64在S.Typhi中表达,可能在基因的表达调节中发挥重要作用.
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伤寒沙门菌调节因子UhpA的功能研究
目的:探讨伤寒沙门菌调节因子UhpA的功能.方法:用载体pBAD介导回补uhpA至伤寒沙门菌uhpA基因缺陷变异株,用qRT-PCR观察cysM和treB基因表达,用表达载体pET-22b原核表达UhpA蛋白,用凝胶阻滞试验观察UhpA蛋白与cysM和treB启动子区域DNA片段的结合.结果:成功构建pBADuhpA重组质粒,在uhpA缺陷变异株中回补uhpA基因后,cysM和treB的表达明显恢复,但UhpA-His6蛋白与cysM和treB的启动子区域DNA片段无明显结合.结论:伤寒沙门菌UhpA在高渗应激条件下能促进硫代谢及海藻糖代谢相关基因表达,且可能为间接作用.
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Fis对伤寒沙门菌基因表达的系统调节作用
目的: 探讨伤寒沙门菌调节因子fis对基因表达的系统调节作用.方法: 用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌fis基因缺陷变异株,用脉冲场凝胶电泳分析fis缺陷变异株的基因组结构.利用伤寒沙门菌全基因组DNA芯片分析技术,比较伤寒沙门菌野生株和fis基因缺陷变异株的基因表达谱差异.用重组载体pBADfis回补fis缺陷变异株,选择部分差异表达基因进行qRT-PCR验证,用半固体平板培养观察野生株、fis缺陷变异株和回补株的动力.结果: fis基因缺陷变异株含有二相鞭毛素编码基因的线性质粒缺失,且动力消失;基因表达谱比较分析结果表明,伤寒沙门菌fis基因缺陷变异株在对数生长期94个基因出现表达差异;qRT-PCR分析所选基因表达的结果与芯片分析结果相符;fis缺陷变异株在回补fis基因后,动力及差异表达基因都获得明显恢复.结论: Fis在伤寒沙门菌中对动力、侵袭及多种代谢相关基因的表达发挥重要调节作用.
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乳腺癌组织中p16基因的甲基化状态研究
目的:探讨乳腺癌组织中p16基因启动子区域的甲基化状态.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测82例乳腺癌组织及30例乳腺良性病变的甲基化状态.结果:乳腺癌组织p16基因启动子甲基化阳性率为30.5%.乳腺癌患者癌组织p16基因启动子区域甲基化状态与肿瘤分期、肿块的大小、病理类型、月经状况、淋巴结转移、激素受体和家族史均无明显关系(P>0.05).结论:p16基因启动子区域甲基化参与了乳腺癌的发生,是一个早期事件,有可能作为乳腺癌的早期诊断和筛查的一个分子生物学指标.
关键词： 乳腺肿瘤 基因表达调节 p16基因 甲基化特异性聚合酶链反应 -
人源肝癌细胞系中甲胎蛋白基因表达及甲基化的研究
目的:了解不同人源肝癌细胞系甲胎蛋白(AFP)基因表达及不同区域甲基化状态,探讨肝癌发生的表达遗传学调控机制.方法:采用亚硫酸氢盐-基因组测序(bisulfite-assisted genomic sequencing,BAGS)技术,检测人源HepG2、SMMC-7721肝癌细胞系和人成纤维细胞中AFP基因启动子区及CpG岛区的甲基化水平,RT-PCR检测基因的表达,并分析相关性.结果:HepG2细胞高表达AFP,SMMC-7721细胞低表达AFP,成纤维细胞不表达AFP;在启动子区,HepG2细胞的非甲基化修饰位点发生率较高,尤其是第一个和第二个CG位点,SMMC-7721细胞的甲基化程度较之高,而成纤维细胞甲基化程度整体很高;在CpG岛区,成纤维细胞的非甲基化修饰位点发生率较高,主要是第6个和第7个CG位点,SMMC-7721、HepG2细胞的甲基化程度较之高.结论:AFP基因启动子甲基化程度与基因表达水平存在负相关,AFP基因CpG岛甲基化程度与基因是否表达有关,AFP基因启动子低甲基化可能是AFP高表达的分子机制.
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大鼠野生型钾通道亚基Kir2.3基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达
目的:克隆大鼠野生型钾通道亚基基因Kir2.3并构建真核表达载体pcDNA3-flag/Kir2.3,观察其在大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞中的表达.方法:从成年大鼠纹状体中提取总RNA,用RT-PCR方法获得大鼠野生型Kir2.3基因的全长cDNA,经限制性内切酶双酶切后,克隆至真核表达载体pcDNA3-flag质粒中.Kir2.3基因测序结果与基因库登录序列比对,序列正确的重组质粒用脂质体转染PC12细胞,Western blot和荧光显微镜观察基因表达情况.结果:Kir2.3基因测序结果与基因库登录序列比对显示完全一致.Western blot证实pcDNA3-flag/Kir2.3转染PC12细胞24 h后有Kir2.3的过表达,且至少持续72 h.结论:成功构建了大鼠野生型Kir2.3基因的真核表达载体,获得了瞬时表达大鼠野生型Kir2.3基因的PC12细胞克隆,为进一步研究Kir2.3的生物学功能以及Kir2.3在帕金森病发病机制中的作用奠定了良好的基础.
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PET15b-BCG HSP65-GP2重组质粒的构建与鉴定
目的:构建表达卡介苗热休克蛋白65(BCGHSP65)与人HER-2/neu细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位(GP2)构成的融合蛋白(BCG HSP65-GP2)的重组质粒.方法:将用PCR方法扩增并回收的BCGHSP65-GP2基因片段与原核表达质粒PET15b重组,经过酶谱分析筛选出正向重组质粒,DNA序列分析正向重组质粒.结果:筛选出3个正向重组质粒.结论:重组表达质粒PET15b-BCG HSP65-GP2的构建是成功的,为进一步表达奠定基础.
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BCG HSP65-人HER-2/neu T细胞表位融合蛋白基因的扩增及序列分析
目的:获得卡介苗热休克蛋白65(BCG HSP65)与人HER-2/neu T细胞表位(GP2)构成的融合蛋白(BCG HSP65-GP2)基因,并对其进行测序.方法:从卡介苗结核杆菌中提取其基因组DNA,设计一对寡核苷酸引物,采用聚合酶链反应(PCR)获得BCG HSP65基因,再设计一对寡核苷酸引物,再次PCR,获得BCG HSP65-GP2基因,DNA序列分析BCG HSP65-GP2基因.结果:本实验采用两轮PCR方法获得的基因片段长度为1 700 bp,DNA序列分析确证为编码BCG HSP65-GP2融合蛋白的序列. 结论:采用PCR获得BCG HSP65-GP2基因序列是正确的,为进一步基因克隆和表达奠定基础.
关键词： 基因表达调节 卡介苗热休克蛋白65 DNA -
胃癌组织中的HBV-DNA检测
目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染在胃癌中的意义.方法:采用基因扩增检测60例胃癌中的HBV-DNA存在的情况.结果:60例胃癌中2例可见HBV-DNA阳性,阳性率3.3%.结论:HBV感染可能在某些胃癌中起一定作用.
