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p21WAF1蛋白的表达与非小细胞肺癌增殖和预后的关系
目的:检测人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的p21WAF1/CIP1表达水平,探讨NSCLC中p21WAF1/CIP1的表达与细胞增殖活性和预后的关系.方法:采用流式细胞术检测60例NSCLC中p21WAF1/CIP1的表达量及DNA含量;分析p21WAF1/CIP1表达水平与S期细胞比例、预后的关系.结果:正常肺组织中未见p21WAF1/CIP1的表达,60例NSCLC组织中p21WAF1/CIP1阳性率为60%(36/60),p21WAF1/CIP1阳性表达者的S期细胞比例(10.87±0.69)%低于阴性表达者(13.30±0.93)%,t=3.232,P= 0.001.p21WAF1/CIP1的表达与患者的术后累积生存月数和5年生存率有关,p21WAF1/CIP1 阳性表达者的术后平均生存月数(40个月)明显高于阴性表达者(25个月),t=2.885,P=0.003;5年生存率(29%)也高于阴性表达者(9%),t=2.712,P=0.004.结论: p21WAF1/CIP1表达是判断NSCLC预后的一个可参考指标.
关键词： 癌 非小细胞肺/病理学 原癌基因蛋白质p21(ras) 流式细胞术 预后 -
p21WAF1在小儿肾母细胞瘤组织中的表达及临床意义
目的:探讨p21WAF1在肾母细胞瘤中的表达水平,评价p21WAF1的检测对肾母细胞瘤的诊断和预后判断的应用价值.方法:用免疫组织化学技术检测32例小儿肾母细胞瘤(肿瘤组)和7例小儿非瘤肾组织(对照组)石蜡标本中p21WAF1的表达,分析p21WAF1的表达与肾母细胞瘤组织学分型、临床肿瘤分期和淋巴结转移间的关系.结果:1)p21WAF1在非瘤肾组织中存在基础水平的表达;2)p21WAF1在肾母细胞瘤中的表达与其组织学分型、临床肿瘤分期和淋巴结转移相关.结论:p21WAF1的表达在一定程度上有助于肾母细胞瘤的诊断和预后判断.
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Forskolin对人胃癌细胞增殖影响的实验研究
目的:探讨毛喉萜(Forskolin)的抗胃癌作用.方法:采用MTT比色法、克隆形成法观察Forskolin对SGC-7901细胞的作用,利用免疫细胞化学方法检测其对rasp21、p53蛋白表达的影响.结果:Forskolin可明显抑制SGC-7901细胞增殖,经Forskolin处理细胞3 d后,rasp21、p53蛋白表达均有明显下降,P<0.01.结论:Forskolin能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,其作用可能与降低rasp21、p53蛋白表达有关.
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高危人乳头状瘤病毒和p53、p21 WAF1、MDM2在子宫颈鳞癌中的表达
目的 探讨子宫颈浸润性鳞状细胞癌(ISCC)中人乳头状瘤病毒(HPV)16/18、31/33感染及p53、p21WAF1、双微体2(MDM2)蛋白的表达,研究其相关性及在ISCC发生、发展中的作用.方法 利用组织芯片、原位杂交和免疫组织化学法检测106例ISCC、10例子宫颈上皮内瘤变(CIN)、10例正常子宫颈鳞状上皮(NCE)中HPV16/18、31/33和p53、p21WAF1、MDM2的表达.应用SPSS12.5统计软件分析结果.结果 HPV16/18、p53、p21WAF1、MDM2在ISCC中的表达明显高于CIN和NCE组,差异有统计学意义;HPV31/33表达与淋巴结转移呈正相关(P＜0.05);p53蛋白与组织学分级、淋巴结转移呈正相关;p21WAD1阳性表达率与子宫颈管壁浸润深度呈正相关;MDM2蛋白与临床各参数均无相关性(P＞0.05).结论 高危HPV和突变型p53在ISCC的发生、发展中起重要作用,p53的下游基因MDM2作为癌基因在进展中起作用,而p21WAF1基因可能不是单纯作为抑癌基因在起作用.
关键词： 子宫肿瘤 乳头状瘤病毒 人 蛋白质p53 原癌基因蛋白质p21(ras) -
胰腺癌组织中p21ras蛋白表达与微血管密度的关系及其临床意义
目的检测胰腺癌组织中p21ras蛋白的表达及微血管密度(MVD)计数,探讨两者的关系及其临床意义.方法选择病理证实为胰腺导管腺癌的48例患者的石蜡切块标本,应用EnVision显色系统免疫组织化学方法进行p21ras蛋白检测和MVD计数.结果 p21ras蛋白表达率胰腺癌组织为60.41%,癌旁组织为37.5%(P＜0.05).MVD计数p21ras表达阳性组为22.207±5.815,p21ras阴性组为18.053±5.502(t=3.597,P＜0.01).结论胰腺癌组织中p21ras的表达与MVD计数相关,提示ras基因突变可能促进肿瘤微血管的形成.
关键词： 胰腺肿瘤 原癌基因蛋白质p21(ras) 微血管密度 免疫组织化学 -
小白菊内酯抑制胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及信号转导机理
目的探讨小白菊内酯的抗动脉粥样硬化机理与IκBα, 环氧合酶-2(COX-2), p21, p27蛋白表达的关系.方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),Western印迹杂交法检测IκBα, COX-2, p21, p27蛋白表达,流式细胞仪检测VSMC周期情况,[3H]TdR参入测定VSMC的DNA合成.结果小白菊内酯(30 μmol·L-1)以时间依赖关系上调IκBα, p21, p27蛋白表达和以时间依赖关系抑制COX-2蛋白表达,10～30 μmol*L-1以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[3H]TdR参入.结论①小白菊内酯可能通过上调IκBα蛋白表达抑制核因子-κB活性,从而抑制COX-2蛋白表达,通过抑制COX-2蛋白表达来抑制VSMC增殖;②小白菊内酯可能通过上调调控G1-S周期转换的p21,p27蛋白来抑制VSMC增殖.
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地塞米松抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖的分子机制:RhoB信号通路的作用
目的观察地塞米松(Dex)对人卵巢癌细胞HO-8910增殖的影响,探讨小G蛋白RhoB信号通路在其中的作用.方法四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和软琼脂实验检测细胞的增殖;RT-PCR法检测RhoB mRNA的表达;Western印迹检测RhoB及其上下游信号分子磷酸化Akt(p-Akt)、p21cip1/waf1和p27蛋白质的表达;报告基因技术检测p21cip1/waf1基因的转录.结果Dex可以明显抑制HO-8910细胞锚依赖性和非依赖性方式的增殖,100 nM Dex处理细胞6 d,抑制率为31%.100nM Dex处理细胞可以明显上调RhoB mRNA和蛋白质的表达(为对照的2.5倍);同时伴有p-Akt蛋白质表达的降低(24 h时约为对照的50%)、p27蛋白质表达的增加(36 h时比对照增加了3.3倍)以及p21cip1/waf1转录和蛋白质表达增多(24h时约为对照的1.7倍).RhoB过表达可以降低细胞的生长速度,并能增强Dex的增殖抑制作用(100 nM Dex处理6 d,抑制率为44%);而RhoB表达阻断后可逆转Dex的这一效应(抑制率约为13%).结论Dex抑制HO-8910细胞增殖的机制可能与抑制PI3K/p-Akt信号,从而上调RhoB蛋白质,使RhoB下游信号分子p21cip1/waf1和p27蛋白质表达增加有关.
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子宫内膜息肉的研究进展及转化医学
近年来随着生殖医学和宫腔镜检查的发展,子宫内膜息肉的诊断率显著提高,受到临床的广泛重视.局部内膜的激素受体表达失衡以及细胞增生和凋亡的失衡导致内膜息肉的发病,内膜息肉长期处于雌激素刺激无孕激素对抗的状态,合并有腺体的癌前病变如腺体的不典型增生或内膜上皮内瘤样病变,P21ras蛋白的免疫组化强阳性或PTEN染色区域的缺失、MTP53蛋白的过表达等因素,有可能导致其内膜癌发病风险增高.各项基础研究成果为临床上子宫内膜息肉的诊治提供了大量有价值的提示,为转化医学的实现注入了新的动力.
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氧自由基对胃癌细胞MGC-803的P53、P21ras蛋白表达的影响
目的:观察氧自由基对人胃癌细胞系MGC-803细胞的P53、P21ras蛋白表达的影响,探讨氧自由基在胃癌发生发展中的作用.方法:通过细胞培养、采用硫代巴比妥酸反应物质法检测细胞内氧自由基中间产物丙二醛(MDA)的含量,应用免疫组织化学技术检测MGC-803细胞内不同浓度的氧自由基对P53、P21ras蛋白表达的影响.结果:氧自由基含量升高可增强MGC-803细胞内P53、P21ras蛋白表达(P＜0.01),氧自由基水平降低则P53、P21ras蛋白表达减弱(P＜0.01).结论:胃癌细胞系MGC-803内氧自由基水平的改变可影响其P53、P21ras蛋白表达.
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人剪切修复基因XPD对p52和p21基因的影响
目的:探讨人剪切修复基因XPD转染人HepG2肝癌细胞后p52和p21基因表达的变化以及对肝癌细胞生长的影响.方法:人肝癌细胞HepG2为靶细胞,XPD基因通过Lipofectamine 2000脂质体转染HepG2.将细胞分为重组质粒HepG2-pEGFP-N2-XPD组(XPD组)、空载质粒HepG2-pEGFP-N2组(N2组)和HepG2空白对照组.分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)法检测各组细胞中XPD、p52以及p210的mRNA和蛋白质的表达量,并用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测各组细胞的增殖能力.结果:XPD组中的p52的mRNA表达较其他2组显著下调,XPD、p21的mRNA表达较其他2组明显上调(均P<0.01).Westem blot检测结果显示各组细胞中XPD、p52及p21的蛋白表达各组间差异与其mRNA各组间差异一致.MTT检测显示XPD转染入HepG2后细胞增殖能力减弱.结论:XPD基因可以抑制癌细胞的生长和基因p52的表达,促进p21的表达.
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慢性脑低灌注状态缺血再灌注后大鼠海马P21和P53蛋白的表达
目的:通过建立大鼠慢性脑低灌注模型,观察慢性脑低灌注状态下正常脑灌注压恢复过程中P21和P53蛋白的表达情况.方法:实验于2003-12/2004-12在锦州医学院动物实验中心进行.取Ⅱ级Wistar雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型不灌注组和模型再灌注组:每组动物按正常灌注压恢复后不同时间点分组(12,24,48,72 h组),每个时间点各5只.采用右侧颈外静脉-颈总动脉端侧吻合和对侧横窦引流静脉结扎的方法,建立慢性脑低灌注动物模型,术后90 d阻断颈部动静脉分流造成模型组大鼠脑组织再灌注.各组在恢复正常灌注后12,24,48,72 h取材,应用免疫组化和显微图像分析方法检测慢性脑低灌注状态下正常脑灌注压恢复过程中大鼠海马P21和P53蛋白的表达.结果:P21和P53蛋白在对照组大鼠脑组织中无表达,48 h灰度值分别为155.34±1.18和172.91±1.37;在模型不灌注组中弱表达,48 hP21和P53蛋白分别为125.12±3.56和112.10±4.46;在模型再灌注组大鼠脑组织中P21和P53蛋白于术后12 h开始有表达,48 h达高峰,分别为53.32±2.84和54.12±0.34,随后逐渐降低.结论:慢性脑低灌注状态下,正常脑灌注压恢复过程中可诱导P21和P53蛋白的表达.
关键词： 动静脉畸形 脑 原癌基因蛋白质p21(ras) 蛋白质p53 大鼠 -
维甲酸抑制人胃癌细胞株层粘素受体基因和原癌基因C-Ha-ras mRNA的表达
目的:研究维甲酸(RA)对人胃癌细胞株(SGC7901)层粘素受体(LNR)基因和原癌基因C-Ha-ras表达的影响.方法:应用原位杂交方法标记LNR探针和C-Ha-ras探针,对人胃癌细胞(分为经RA处理及未经RA处理两组)中LNR和C-Ha-ras基因的mRNA表达进行检测.结果:经RA处理的人胃癌细胞LNR mRNA表达较未经RA处理者显著降低(P＜0.01～0.001);C-Ha-ras转录水平亦显著降低(P＜0.01～0.001).结论:RA可显著抑制人胃癌细胞LNR和C-Ha-ras基因的表达.
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羟氯喹及没食子酸酯对HaCaT细胞光照射的影响
目的探讨羟氯喹和绿茶活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)损伤永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)的保护作用及其机制.方法采用UVB定时及定量照射培养的HaCaT细胞,分别加入羟氯喹和EGCG干预处理,以RT-PCR法检测各受试组p53、p21、c-fos基因表达水平.结果 UVB照射后可明显增加HaCaT细胞中p53,p21,c-fos mRNA表达,羟氯喹和EGCG可不同程度地下调上述基因表达水平.结论羟氯喹和EGCG的光保护作用在HaCaT细胞可能与其抑制p53,p21,c-fos基因表达有关.
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肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和CDK4蛋白的影响
目的 检测肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)蛋白表达的影响.方法 肉桂醛(3.13、1.56、0.78、0.39、0.20、0.10 g/L)作用肝癌HepG2细胞后,MTT比色法检测HepG2细胞增殖活性和半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50).流式细胞术检测肉桂醛对HepG2细胞凋亡影响.免疫荧光法检测HepG2细胞p21和CDK4蛋白的表达.结果 肉桂醛能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性,24小时、48小时和72小时IC50值分别为0.68、0.45、0.35 g/L(P＜0.01).肉桂醛组(0.900、0.450、0.225 g/L)肝癌HepG2细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).肉桂醛能增加p21蛋白和降低CDK4蛋白在HepG2细胞中的表达,各浓度肉桂醛组的p21、CDK4蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 肉桂醛可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,可能与调节p21和CDK4的蛋白表达有关.
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洛伐他汀或辛伐他汀协同组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人非小细胞肺癌的抑制作用
目的：研究他汀类药物能否协同增强组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（ SAHA ）对非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。方法：采用磺酰罗丹明B比色法检测不同浓度的SAHA与洛伐他汀／辛伐他汀合用对 A549细胞存活率的影响；采用Annexin V／PI双染结合流式细胞术检测2.5μmol／L SAHA与不同浓度的洛伐他汀联合应用对A549细胞凋亡的影响；并采用蛋白质印迹法检测2.5μmol／L SAHA与5μmol／L 洛伐他汀联合作用对凋亡相关标志蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（ c-PARP ）及 p21蛋白表达水平影响。结果：与SAHA组比较，洛伐他汀／辛伐他汀与SAHA合用组减少A549细胞的存活率。不同浓度的洛伐他汀能协同增加SAHA对A549细胞的凋亡诱导作用，同时合用组c-PARP的表达较单用两组增加，说明洛伐他汀能协同SAHA诱导A549细胞凋亡。2.5μmol／L SAHA单独作用A549细胞48 h可以上调A549细胞p21蛋白的表达，5μmol／L洛伐他汀与2.5μmol／L SAHA合用可以回调p21蛋白的表达。结论：洛伐他汀及辛伐他汀能增加SAHA对非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制作用，其中洛伐他汀增强SAHA对A549细胞的生长抑制作用可能与其共同作用后 p21蛋白表达下调相关。
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癌基因蛋白cyclinD1、p21 ras在大肠癌和腺瘤组织中的表达
为探讨cyclinD1与p21ras癌基因蛋白表达失调在大肠癌发生机制中的作用并尝试以cyclinD1作为大肠癌早期诊断的肿瘤标记,本研究用免疫组化法检测大肠良、恶性病变中cyclinD1和p21 ras蛋白的表达,现报道如下.
关键词： 结肠肿瘤 腺瘤 癌基因蛋白质类 原癌基因蛋白质p21(ras) -
12-脂氧化酶影响胃癌细胞AGS中P21及bcl-2的表达
目的 研究12-脂氧化酶(12-LOX)对胃癌细胞中P21、bcl-2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2) 表达的影响及与ERK1/2信号传导通路的关系.方法 胃癌细胞AGS常规培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中24 h至对数生长期,改用无血清RPMI-1640培养基培养24 h加入干预药物.P21、bcl-2及p-ERK1/2表达采用Western blot法测定.分别采用100 nmol/L的12-LOX催化合成产物12-羟基廿碳四烯酸(12-HETE)及40 μmol/L的12-LOX特异性抑制黄苓素干预AGS细胞24 h,测定P21、bcl-2及p-ERK1/2含量;采用ERK抑制剂PD98059预处理AGS细胞2 h后,再分别用100 nmol/L的12-HETE及40 μmol/L 黄苓素干预24 h后再测定P21、bcl-2及p-ERK1/2含量.结果 经100 nmol/L的12-HETE干预24 h后,p-ERK1/2、P21、bcl-2均显著高于末干预组(P<0.05),而40 μmol/L 黄苓素干预24 h后,p-ERK1/2、P21、bcl-2显著低于对照组(P<0.05);采用ERK抑制剂PD98059预处理AGS细胞2 h后再分别用100 nmol/L的12-HETE及40 μmol/L 黄苓素干预与未采用PD98059预处理组相比,PD98059预处理后12-HETE干预组bcl-2水平低于仅用12-HETE干预组,PD98059预处理后黄苓素干预组bcl-2水平高于仅用黄苓素干预组(P<0.05).而PD98059预处理后2组P21水平含量均无明显差异.结论 12-LOX对胃癌细胞P21及bcl-2表达具有调节作用,12-LOX通过其合成产物12-HETE促进ERK1/2的磷酸化,并通过ERK1/2途径调节bcl-2的表达,P21的表达不受ERK1/2途径调控.
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p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1、p53在结肠癌的表达
目的探讨p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1(cyclin D1)及p53在结肠癌的表达及三个基因产物间的相关性.方法应用原位杂交技术及免疫组织化学技术检测p21WAF1/CIP1、cyclin D1的mRNA及p53蛋白在结肠癌中的表达.结果 p21WAF1/CIP1 mRNA在癌组织的表达率为84.13%,明显高于癌旁组织61.90%(P<0.05).cyclin D1 mRNA在癌组织表达率为63.49%,明显高于癌旁组织44.44%(P<0.05).p53蛋白在结肠癌的阳性表达率为38.09%,p53过表达组p21WAF1/CIP1 mRNA表达较p53阴性组为低,二者存在显著差异(P<0.05),p53过表达组cyclin D1 mRNA表达较p53阴性组为高,差异具有显著性(P<0.05).p21WAF1/CIP1 mRNA与cyclin D1 mRNA表达存在相关性(P<0.05).结论 p21WAF1/CIP1、cyclin D1、p53的异常表达及它们之间可能存在的相互作用,可能在结肠癌的癌变过程中发挥重要作用.
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甲状腺乳头状癌p53基因突变及其与p21WAF1/CIP1蛋白定量表达的关系
目的初步探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中p53基因突变及其与p21WAF1/CIP1蛋白定量表达的关系.方法采用PCR-SSCP、DNA序列分析、免疫组织化学、图像分析等技术,检测41例PTC和10例甲状腺滤泡性腺瘤标本组织中p53基因突变情况和p21蛋白染色状况.结果 (1)伴p53基因突变(Ⅰ组)和不伴突变(Ⅱ组)PTC的原发肿瘤(T)、淋巴结转移(N)及远处转移(M)差异无显著性(P＞0.05).(2)Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ之间,Ⅰ和Ⅱ、Ⅱ和Ⅲ、Ⅰ和Ⅲ的平均积分光密度值(D)差异具有显著性意义(P＜0.01).结论(1)PTC的演进和p53基因突变与否无直接关系,p53蛋白的空间构象可能发挥关键作用.(2)在PTC的发生、发展中存在依赖野生型p53蛋白诱导P21WAF1/CIP1表达的途径.
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miR-1280通过激活p21基因的表达对膀胱癌细胞周期及增殖的影响
目的 探讨微小RNA-1280(miR-1280)对膀胱癌细胞株BIU-87细胞p21基因表达的激活作用及对膀胱癌细胞周期及增殖的影响.方法 实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达水平.选取表达量低的膀胱癌细胞,分别转染miR-1280模拟物(实验组)和miR-NC(对照组),qRT-PCR检测两组细胞中miR-1280和p21 mRNA表达水平.染色质免疫共沉淀(ChIP)实验验证miR-1280与p21基因启动子的靶向作用.Western blotting分别检测两组细胞中p21、细胞周期依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白A2(Cyclin A2) mRNA和蛋白的表达.流式细胞术检测细胞周期.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力.结果 qRT-PCR结果提示,膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达分别为0.503±0.094、0.611±0.054、0.567±0.077、0.257±0.032和1.014±0.090,差异有统计学意义(F=1.880,P＜0.001).与膀胱癌细胞株T24、5637、J82相比,BIU-87细胞株中的miR-1280表达量低(P =0.026,P=0.003,P=0.008).与对照组相比,实验组BIU-87细胞中miR-1280表达显著升高(1041.000±157.500∶1.023±0.118,t=6.606,P＜0.001),p21 mRNA表达亦显著升高(5.280±0.660∶1.007±0.070,=6.440,P＜0.001).Western blotting结果显示P21蛋白表达上调,CDK1和Cyclin A2蛋白表达下调.ChIP实验结果显示,相比miR-NC转染组,生物素修饰的miR-1280在p21基因启动子区域的富集倍数显著增加(1.246±0.171∶0.519±0.087,t=3.787,P=0.009).实验组BIU-87细胞G0-G1期细胞比例较对照组明显升高(68.360％±3.064％∶46.970％±3.971％,t=4.263,P=0.005).MTT结果显示,与对照组相比,转染miR-1280后的BIU-87细胞从第3天(0.826±0.099∶1.224±0.057,t=3.505,P=0.013)开始增殖能力明显降低.结论 miR-1280可通过结合p21基因启动子区域,激活膀胱癌细胞BIU-87中p21基因的表达,从而阻滞细胞周期的进展,抑制细胞的增殖,为膀胱癌的靶向治疗提供了一个新靶点.
关键词： 微RNAs 膀胱肿瘤 原癌基因蛋白质p21(ras) RNA激活
