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肺炎支原体动物感染模型的建立及病原感染控制现状的研究
肺炎支原体(Mp)是儿童和青少年呼吸道感染的常见病原体,大环内酯类抗生素是治疗Mp感染的首选药物.以红霉素为代表的大环内酯类抗生素作用机制是通过抑制蛋白质的合成而发挥抗菌作用,即大环内酯类抗生素结合于核糖体50S亚基的转肽酶中心与肽输出通道狭窄之间的部分,通过机械性的阻塞通道而抑制肽的延伸,从而阻碍蛋白质的合成[1-3].其在大亚基上(50S亚基)的结合位点是23SrRNA结构域V中心环的保守碱基A2058-A2062和U2609[4-5].
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伯氏疏螺旋体分子生物学分型进展及其意义
姆病是一种蜱传全球性动物源性疾病,病原体由W.Burgdorfer首次分离并被命名为伯氏疏螺旋体.根据DNA和蛋白质分析,伯氏疏螺旋体可以分为10个基因型或基因群,即B.burgdorferi sensu stricto(B31T,标准株为B31;B.为Borrelia.的简写)、B.afzelii(VS461)、B.garinii(20047)、B.japonica(HO14)、B.andersonii(21123)、B.lusitaiae(PotiB2)、B.valaisiana(vs116)、B.tanukii(HK501)、B.turdae(Ya501)和基因群DN127[1~7].分子生物学分型包括表型分型和基因分型,评价不同分子生物学分型方法主要依据可分型性、可重复性、分辨率、易操作性、及结果易解释性.分子生物学分型方法较多,包括G+C mol%、DNA-DNA杂交、核糖体分型、PCR-RFLP、染色体DNA脉冲电泳、蛋白质电泳和多位点酶电泳、PCR-杂交、基因型特异性PCR及核酸序列聚类分析技术等.
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天然的人源性核糖体展示抗体库的构建与初步鉴定
目的 构建库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体(ScFv)库,为进一步筛选ScFv奠定基础.方法 从健康自愿者的外周血淋巴细胞提取mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)DNA,进而连接形成ScFv DNA.将其连接T-Vector转化E.coli JM109大肠埃希菌,经蓝白筛选,挑取9个阳性克隆测序以鉴定ScFv组装.通过体外转录和翻译对抗体文库进行初步鉴定.结果 VH、VL和ScFv DNA分别约为350、650和1 100 bp.本试验成功构建ScFv核糖体展示模板.结论 成功构建天然的大容量核糖体展示人源性ScFv文库,为下一步利用亲和富集筛选技术获得各类ScFv奠定基础.
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地高辛标记探针检测卫氏并殖吸虫的方法
目的 制备卫氏并殖吸虫线粒体细胞色素C氧化酶亚单位I(COI)基因和核糖体DNA第二间隔区(ITS2)地高辛标记探针,探讨其对并殖吸虫的种别鉴定和诊断的作用. 方法 利用引物分别体外扩增获得卫氏并殖吸虫目的基因后凝胶电泳鉴定并且胶回收纯化上述两个基因片段.将酶切后的COI基因和ITS2基因回收,地高辛标记成探针,尼龙膜上行斑点杂交观察. 结果 COI探针有较好的特异性和敏感性.ITS2探针缺乏特异性. 结论 尼龙膜斑点杂交结果显示卫氏并殖吸虫的COI基因片段可以作为种群鉴定的后备探针.
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网织红细胞质控品研究进展
1概述网织红细胞(reticulocyte.Ret.RET)是幼稚的红细胞.南骨髓中有核红细胞脱去细胞核形成,大约3d后被释放入血液,并进一步通过降解、自噬、胞吐等复杂机制丢失核糖体、线粒体等细胞器和膜脂、部分血红蛋白、水等成分而获得典型的双凹圆盘状形态,成为成熟红细胞.这一成熟过程不但能在活体血液内完成,在离体抗凝状态下同样可以进行[1~3].
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纳米技术在医药领域的研究进展
纳米是一种度量单位,1纳米为1/100万mm(即1μm),为1/10亿米.据专家预测,到2020年将出现一个崭新的领域-纳米医学,又称纳米医药、纳米生物技术.它是人工纳米技术与天然纳米技术的结合.活的细胞是造化所赐的天然纳米技术.细胞就像纳米机器的仓库,这个仓库由微管构成,而微管只能以纳米测量其直径.细胞的蛋白质在核糖体的纳米流水线上制造,并被另外一种叫做戈尔吉器的纳米装置包裹起来.
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产凝集素乳杆菌的筛选及PCR—16S rDNA鉴定
目的 从泡菜汁中分离产凝集素乳杆菌并鉴定.方法 通过凝集实验筛选产凝集素的乳杆菌,用聚合酶链式反应(PCR)扩增16S rDNA可变区基因鉴定产凝集素乳杆菌.结果 此菌株呈革兰阳性,短杆状,产乳酸.通过同源性比较,此菌株与Lactobacillus plantarum strain p215的同源性为99%.结论 分离得到了产凝集素的菌株,鉴定表明此菌株为植物乳杆菌.
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部分辛温解表类中药的元素含量及临床作用分析
人体必需的微量元素,不仅存在于细胞膜、细胞液、核糖体、蛋白质和核酸之中,而且成为机体生命过程中在生理、生化作用上具有重要意义的激素、酶、维生素等的组成部分[1].因此提供可靠的微量元素含量数据.具有一定的实用意义.本文用原子吸收分光光度法对中药中元素含量进行了测定,为中药药效的进一步研究和利用提供了新的科学依据[2].
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克林霉素磷酸酯阴道凝胶刺激性试验
克林霉素磷酸酯为半合成抗生素,是林可霉素的衍生物.克林霉素磷酸酯在体外无效,在体内可以迅速转化成抗菌有效的克林霉素.克林霉素抑制细菌核糖和蛋白体的蛋白合成,其优先结合到50s核糖体亚基影响肽链初始化过程.克林霉素体外对已经报道的与细菌性阴道炎有关的多数微生物菌株是一个活性抗菌剂.本品对细菌性阴道炎治愈率高且疗程短,局部用药治疗细菌性阴道炎可以避免和减少全身性用药的不良反应.
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基于纳米技术上的纳米医学的应用展望
随着纳米技术的发展,在医学上该技术也开始崭露头角。当如合成蛋白质的核糖体,DNA复制所需要的酶等出现故障或工作失常时,就会导致细胞死亡或异常。从分子的微观角度来看,目前的医疗技术尚无法达到分子修复的水平。而纳米医学则是在分子水平上,利用分子工具和人体的知识,所从事的诊断、医疗、预防疾病、止痛、保健和改善健康状况等科学技术,广义地讲都属于纳米医学的范畴。首先需……
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RAD001对胃癌细胞株MKN-28、N-87生长的实验研究
目的 探讨RAD001作用于胃癌细胞株MKN-28、N-87后细胞生长的影响及其作用机制.方法 体外培养胃癌MKN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Western-blot电泳检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布及mTOR、p70S6K、S6蛋白表达及磷酸化情况.结果 细胞计数结果显示RAD001作用24h即开始出现对细胞生长的抑制作用,作用具有时间依赖性.流式细胞术结果显示RAD001作用后两细胞株细胞周期均发生改变,停滞在G0-G1期细胞比例增加,作用亦具有时间依赖性,其中N-87相对敏感.Western-blot结果显示RAD001作用24h后两细胞株nTOR、p70S6K及phosphate-mTOR蛋白表达无改变,MKN-28 S6表达下降,phosphate-p70S6K表达下调,phosphate-S6表达缺失;N-87 S6无明显变化,phosphate-p70S6K表达下调,phosphate-S6表达明显下降.结论 RAD001通过与mTOR的FRB相结合,从而抑制mTOR所调节的下游p70S6K-S6蛋白通路,阻断了p70S6K及S6蛋白的磷酸化和蛋白质翻译进而调节着细胞周期以发挥抑制胃癌细胞生长的作用.
关键词: 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 胃肿瘤 核糖体 -
口腔常见厌氧性细菌感染检测基因芯片的研制
目的 研制一种用于检测口腔常见无芽胞厌氧性细菌感染的基因芯片.方法 选择口腔感染中常见的无芽胞厌氧性细菌作为菌种,将16S rDNA作为靶基因.借助生物信息学方法,设计通用引物和特异性探针,选择与反义引物互补的核酸序列作为阳性质控探针;大肠杆菌16S rDNA基因序列为阴性质控探针,制备微阵列.进行厌氧性细菌DNA的提取、扩增、杂交、结果分析以及微阵列质量检测.结果 制备的用于检测口腔常见无芽胞厌氧菌感染的基因芯片特异性、灵敏度、重现性和稳定性均符合实验要求.结论 利用生物信息学方法设计的引物和探针合理,制备的芯片可用于口腔常见无芽胞厌氧性细菌感染的诊断.
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106例特殊人群中生殖道沙眼衣原体的PCR检测
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)是衣原体属微生物,它具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA,有合成蛋白质、核酸和脂类的能力.越来越多的证据支持生殖道沙眼衣原体是引起性传播疾病的主要病原体之一.2004年8月,我们对本省某地106例特定人群中采集的宫颈拭子标本用PCR法进行沙眼衣原体感染的实验室检测,以了解这一人群中生殖道沙眼衣原体的感染情况和流行特征,为进一步采取干预措施提供依据.
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16株霍乱弧菌23srRNA基因的多态性分析
核糖体RNA的编码基因检测及多态性分析已广泛应用于分子流行病学的研究中[1,2].分子杂交技术是现代流行病学的主要研究手段,它在追踪菌株的来源以及探讨造成不同地区流行的菌株之间的关系上有重要意义.为了探讨不同来源、不同地区分离到的埃尔托霍乱弧菌在染色体分型上有无差异,我们采用了23srRNA基因的Southern杂交技术进行了初步研究,现报告如下:
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沙眼患者病原体基因型的鉴定分析
背景 沙眼是眼科的常见疾病,近年来,其病原体类型在中国鲜有报道.目的 鉴定门诊沙眼患者病原体的基因类型.方法 收集2003年1月至2006年8月在北京同仁医院跟科确诊为沙眼的16例患者的眼部样本,应用沙眼衣原体特异性引物,采用套式聚合酶链反应(n-PCR)扩增沙眼衣原体主要外膜蛋白基因第4可变区序列(vS4)片段,扩增产物测序后,采用分子生物学软件Clustal X及MEGA2对所测序列进行分析,与基因库中已有序列及中国沙跟流行地区病原体类型进行比较,分析门诊沙眼衣原体的基因型特点及与其他国家和地区沙眼衣原体株的基因型异同.结果 沙眼衣原体的MOMP基因扩增产物为277 bp的基因片段,收集的16例临床标本中,有3种类型的沙眼衣原体株,其中B型者9株,占56.3%;C型者4株,占25.0%;D型者3株,占18.7%.本研究中沙眼衣原体B型和C型株与基因库中及中国沙眼流行地区同类型者基因序列差异较小,高度同源,但D型株间则有一定差异.结论 沙眼衣原体的基因型鉴定可以对流行性沙眼和包涵体性结膜炎患者进行鉴别.
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核糖体肽链输出通道对基因表达的调控作用
核糖体大亚基上的肽链输出通道起始于肽酰转移酶中心附近,横穿大亚基,主要由rRNA和少量蛋白质组成,是新生肽链离开大亚基的通道.近年研究发现这是通道的一个动态的结构,它不仅能够与新生肽链中的效应模体相互作用调节翻译效率,而且能够调节通过通道的多肽链的共翻译折叠、修饰,还可协助它们在细胞中定位.
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含tk和EGFP双顺反子重组腺病毒载体的构建及其在鼠内皮细胞中的表达
目的:构建含有单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HSV-tk)和增强绿色荧光蛋白(EGFP)的重组腺病毒载体,体外转染鼠内皮细胞,并检测其表达.方法:利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖体进入位点(IRES)将HSV-tk与EGFP连接,构建携带HSV-tk和EGFP双顺反子的穿梭质粒,经细菌内同源重组获得复制缺陷腺病毒载体.转染鼠内皮细胞,并检测腺病毒表达情况.结果:成功构建了含有HSV-tk和EGFP双顺反子重组腺病毒载体,荧光显微镜下可观察到绿色荧光的转基因细胞;体外检测结果表明丙氧鸟苷(GCV)对转染有tk-EGFP的鼠内皮细胞有明显杀伤作用,而对未转染的鼠内皮细胞无明显的毒性.结论:含HSV-tk和EGFP基因双顺反子腺病毒载体的构建可以为肿瘤抗血管形成基因治疗提供了新的手段.
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乳腺癌癌细胞器形态参数的定量分析
用体视学方法分别对20例中期和20例晚期女性乳腺浸润性硬性单纯癌的四种癌细胞细胞器的23个形态参数进行测定和分析,并用t值检验方法筛选出区别度高的7个佳参数及有显著差异的9个形态参数.研究发现突出的是晚期癌与正常组比较线粒体的3种膜的比表面明显下降,而体积明显增大.同时,还提示了中期癌与晚期癌比较,游离核糖体在晚期比表面Sr2及面密度Svr2均明显增大.
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内部核糖体进入位点控制人癌胚抗原与IL-2的共表达
目的构建能在真核细胞内高效表达的癌胚抗原(CEA)/IL-2共表达核酸疫苗,为进一步研究CEA核苷酸疫苗、佐剂及它们的特异性抗肿瘤作用奠定基础.方法通过RT-PCR及基因重组技术获得CEA的真核表达质粒pcDNA3-CEA,并利用酶切、连接等手段与IL-2基因重组通过内部核糖体进入位点连接的含有两个表达单元的真核共表达质粒pIRES-CEA/IL-2.结果全自动电化学法定量测定CEA表达量为(23.73±0.26)ng/ml,ELISA试剂盒测定IL-2表达量为(20.17±0.13)ng/ml.结论 CEA/IL-2共表达载体在真核细胞中能高效表达CEA和IL-2,并在表达量上无明显差异.
关键词: 癌胚抗原/遗传学 白细胞介素-2/遗传学 核糖体 基因表达 -
聚合酶链反应检测细菌16S rRNA基因
根据细菌16S rRNA基因的高度保守性,设计合成所有细菌、革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌的共同引物,采用聚合酶链反应检测已知细菌13株,三对引物分别扩增的阳性率为100%,倍比稀释法能检出细菌的低浓度为4?!CFU·ml-1,同时检测临床样本40份,阳性率为67.5%(27/40),同期细菌培养阳性率为45%(18/40),二者比较差异有显著性(P<0.05).结果提示聚合酶链反应检测细菌16S rRNA基因具有高度的特异性和敏感性.