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雷帕霉素在慢性肾脏病治疗中的应用研究
雷帕霉素( rapamycin),又名西罗莫司,初是由复活岛土壤菌落中分离出来的一种抗真菌药物.此后相继发现了雷帕霉素特异性抑制蛋白——哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其下游的磷酸化核糖体S6蛋白激酶( pS6K)[1].雷帕霉素与其细胞内受体FK506 -结合蛋白(FKBP-12)结合后形成mTOR蛋白抑制复合物,从而发挥特异性抑制mTOR信号通路的生物学作用[2].
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脑梗死患者肠道菌群紊乱与恢复研究
目的 探索脑梗死患者肠道菌群的紊乱特征和恢复情况.方法 收集28例脑梗死患者和28例健康对照人群的粪便样本,提取粪便中细菌DNA并进行16S rRNA测序分析.结果 和对照组相比,脑梗死患者肠道菌群显著改变(P<0.001),肠道中机会致病菌肠杆菌科、韦荣球菌科和链球菌科等显著增加而常驻菌如普氏菌属和拟杆菌属等显著减少.4周后其肠道菌群结构开始趋向于对照组但伴随菌群多样性的显著下降(P<0.05).结论 本研究发现了脑梗死患者肠道菌群紊乱与恢复的特征,但其菌群变迁的意义需要进一步研究.
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本期关注
近年来,临床抗感染治疗面临的挑战不断增加。由多重耐药菌(MDRO)引起的院内感染严重影响了医疗安全和患者安全。替加环素作为新近上市的抗菌药,能克服常见的外排泵和核糖体保护等细菌耐药机制,不易产生耐药性。然而近FDA发出一项警告,声称这款药物会增加患者的死亡风险。
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哺乳动物雷帕霉素靶蛋白及其抑制剂与肾脏疾病的研究进展
雷帕霉素靶蛋白(TOR)是近年来发现的一类进化上非常保守的蛋白激酶家族,广泛存在于各种生物细胞中.1994年,Brown等证实并克隆了哺乳动物TOR基因,其产物只有一种蛋白,即哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)[1].mTOR有两个不同的复合物,即mTORC1和mTORC2.这两个复合物分别含有不同的骨架蛋白raptor和ricter,使mTOR连接到不同的信号通路.mTORC1可以刺激蛋白质翻译、核糖体合成和抑制细胞自我吞噬,mTORC2的激活有助于肌动蛋白的调节和细胞骨架的形成.雷帕霉素是一种有效的mTOR特异性抑制剂,它除了抑制mTOR外不抑制任何其他蛋白激酶,由于其对mTOR特异性高,雷帕霉素已建立了mTOR在细胞生物学和疾病发病机制的重要作用.雷帕霉素进入细胞后与FK506结合蛋白12(FKBP-12)结合形成FKBP-雷帕霉素复合物,再与mTORC1的FKBP-雷帕霉素复合物结合区结合进而抑制mTORC1活性[2].
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反义寡核苷酸技术研究进展
反义寡核酸技术,是应用反义寡核苷酸类药物通过Waston-Crick碱基配对与细胞内核酸(DNA或RNA)特异结合形成杂交分子,从而在转录和翻译水平抑制特定基因表达的基因治疗技术,是一种新的药物开发方法.其机制是:①反义寡核苷酸与靶mRNA结合形成DNA-RNA杂合分子,可以激活RNase H,该酶可以切割杂合分子中的RNA链,导致靶mRNA降解.②不能激活RNase H活性的反义寡核苷酸可以通过空间位阻效应阻止核糖体结合来抑制靶mRNA的翻译;另外还可以通过封闭剪接位点有选择的促进蛋白某个可变剪接体的表达,从而纠正错误的剪接.
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核糖体DNA聚合酶链反应诊断新生儿败血症
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吸虫种株基因差异的研究进展
吸虫分类是一个复杂而又有争议性的话题,长期以来,学者们对吸虫分类进行了各种各样的研究。传统的吸虫分类主要依据虫体形态、中间宿主地理分布、交叉繁殖及生理生化等参数,后来应用了蛋白质和酶学方法。随着分子生物学的技术发展,应用DNA技术研究种株的基因差异,分析种株的遗传变异及分类被认为是一种直接而可靠的方法。本文就近10年来吸虫种株在核糖体RNA、线粒体DNA、随机扩增的多态性DNA分析等方面的研究进展作一综述。
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人苍白杆菌深圳分离株16S rRNA基因部分核苷酸序列分析
目的 对深圳市布吉人民医院分离鉴定的1株人苍白杆菌进行16S rRNA基因的部分核苷酸序列分析,以探讨该菌株在分类学上的准确地位.方法 对该菌株进行PCR扩增及16SrRNA基因序列测定,并与人苍白杆菌标准株及羊种布氏杆菌比较.结果 3株细菌均可扩增到大小约900bp的16S rRNA基因片段,经核苷酸序列分析比较,发现人苍白杆菌深圳分离株与人苍白杆菌标准株和羊种布氏杆菌具有高度同源性,同源程度大于98%.结论 该院分离的人苍白杆菌不仅与购自美国的人苍白杆菌ATCC株有高度同源性,而且与北京保存的羊种布氏菌在遗传学上也具有非常密切的亲缘关系.
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16S rRNA基因及16S~23S rRNA基因间区在微生物鉴定中的应用
目前临床上引起感染的病原菌种类繁多,抗菌药物的不正规使用导致细菌培养阳性率进一步降低[J].因此,传统分类方法的不足随着新型微生物菌株的分离的增多而越来越明显,亟需一种能快速准确鉴定出微生物种类的新技术以便及时指导抗菌药物的合理使用从而控制临床感染疾病的进展.文章综述了16S rRNA及16S~23S rRNA基因间区快速鉴定微生物的基本原理、方法、存在的问题及进一步解决方案等.原核生物的rRNA有3类:5S rRNA、16S rRNA和23S rRNA,其编码基因(rDNA)长度依次为120、1 540及3 300个核苷酸.它们位于同一操纵子序列中,但被一些间隔区域所分开,从5’~3’端依次是:16S、间隔区、tRNA、间隔区、23S、间隔区和5SrRNA[2],一个操纵子进行转录后处理成为成熟的16S、23S和5S rRNA.rRNA结构既具保守性又具高变性,保守性反映生物物种的亲缘关系,高变性则揭示生物物种的特征核酸序列,是属种鉴定的分子基础[J].因此,可以利用保守区设计通用引物扩增细菌的相应靶序列,再利用可变区的差异鉴别菌种.其中以16S rRNA基因及16S~23S rRNA基因间区在细菌鉴定中的应用为成熟及广泛.
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16S rRNA在医学微生物鉴定中的应用
随着分子生物学的快速发展以及该技术在医学微生物研究中的应用,16S rRNA作为微生物分类依据已得到广泛认同,本文就其基因特征、技术步骤、临床应用及注意事项的新进展作一简要综述.
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伴del(5q)的骨髓增生异常综合征的分子生物学研究进展
骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)是一组起源于多能造血干/祖细胞的异质性恶性血液病,其发病机制尚不清楚.5号染色体长臂缺失是其常见的分子生物学改变之一,与MDS的发病密切相关.RPS14、SPARC单倍剂量不足、microRNA、P53基因突变等分子生物学改变均在del(5q)患者中发现,其中RPS14已证实在5q-综合征中发挥抑癌基因的作用.本文拟对近年来发现的伴del(5q)的MDS患者的分子生物学改变做一综述.
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黄芩提取物逆转细菌耐药性及对16S rRNA甲基化酶基因表达影响的研究
目的 研究黄芩提取物对临床常见3种耐药菌的体外抑制效果及对16S rRNA甲基化酶基因表达的影响.方法 采用纸片扩散法分别测量环丙沙星、黄芩提取物、黄芩提取物+环丙沙星、万古霉素和氨曲南对耐药金黄色葡萄球菌、耐药铜绿假单胞菌和耐药肺炎克雷伯杆菌的抑菌圈大小,同时采用荧光定量聚合酶链反应方法及琼脂糖凝胶电泳法测定不同药物对细菌16S rRNA甲基化酶mRNA的转录水平.结果 黄芩提取物对耐药金黄色葡萄球菌具有良好的抑制作用;黄芩提取物+环丙沙星对耐药铜绿假单胞菌和耐药肺炎克雷伯菌的增殖具有良好抑制作用;黄芩提取物可以抑制耐药铜绿假单胞菌及耐药肺炎克雷伯菌16S rRNA甲基化酶基因的转录.结论 黄芩提取物可以降低16S rRNA甲基化酶mRNA转录,提高耐药菌对抗菌药物的敏感性.
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酸性核糖体磷酸化蛋白P0的研究进展
原核生物和真核生物的核糖体大亚基上都存在着一类与蛋白质翻译密切相关的酸性核糖体磷酸化蛋白.在真核生物它们是酸性核糖体磷酸化蛋白P0,P1,P2(acidic ribosomal phosphoproteins P0,P1 and P2),而在原核生物如Escheriehia coli体内,它们分别为L10和L7,L12蛋白,其中与P0蛋白相对应的蛋白为L10,与P1、P2蛋白相对应的蛋白为L7/L12.
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一株产广谱细菌素乳酸菌S3菌株的菌种鉴定
乳酸菌广泛分布于自然界,细菌素是由某些细菌通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌生物活性的蛋白质,抑菌范围不仅仅局限于同源的细菌,产生菌对其细菌素有自身免疫性.
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生长因子对精原干细胞增殖、分化影响的研究现状
1精原干细胞的一般特性精原干细胞(Spermatogonial stem cell,SSC)位于睾丸曲细精管基膜上,细胞及核大,多呈圆形,核仁位于中央;胞质中有核糖体,线粒体丰富靠近核膜,呈圆形或椭圆形,内有板层状线粒体嵴,其余细胞器并不发达.它可分为A、B两型.在体内,A型精原细胞有3种命运:一是保持为A型精原干细胞;二是分化为中间型和B型精原细胞;三是发生凋亡.吴绍华,通讯作者,男,教授,硕士导师,主要从事精原干细胞的研究.
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红霉素抗菌作用及细菌产生红霉素抗性的机制
红霉素是一类广谱的大环内酯类抗生素,随着红霉素在临床上的大量使用,红霉素也和其他抗生素一样出现了病原菌耐药性问题.从分子水平上将红霉素的抗菌机制与细菌产生耐药性机制联系起来对研制新一代的红霉素抗生素起指导性作用.红霉素通过从空间上阻滞新生肽链的延伸和促进pt-tRNA的脱落而起抗菌作用,而细菌则通过影响红霉素在胞内的积累、破坏红霉素的结构、改造或修饰红霉素在核糖体上的结合作用位点这三个途径达到抵制红霉素的抗菌作用.
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抗生素的耐药性与菌株的优化
由于抗生素的广泛使用和误用导致致病菌的耐药性不断增加,降低了传统抗生素的使用效率。目前,许多耐药机制已经被发现,包括降低细胞膜的通透性,修饰抗生素作用靶位的结构,酶分解或修饰抗生素,活化泵出系统等。每一种微生物通常拥有多种耐药机制,对一种抗生素可能使用一种或多种机制。在这些耐药机制中,改变核糖体的结构和RNA聚合酶的结构成为十分重要的发现。菌株优化的方法由传统的诱变剂诱导随机突变发展到应用分子遗传学的方法和技术,更加理性地改造微生物的遗传和操作特性,原生质体融合、转化和接合以及体外分子克隆和定点突变等方法均成功地应用于一些抗生素或其他生物活性物质产生菌的优化。在对核糖体的研究的推动下,越智研究室发现改变核糖体或RNA聚合酶的结构不仅产生了耐药性,同时改变了抗生素生物合成的调控系统,诱导微生物过量合成抗生素。这一发现被成功地开发为一种新的、基于引入特定的抗生素耐药突变的优化抗生素生产菌的方法。详细考察突变类型与活化抗生素合成之间的关系,发现特定的突变导致特定的结构变化是活化抗生素生物合成所必须的。为了大幅度地提高抗生素的生产水平,我们发明了组合抗生素耐药突变的方法,连续地提高天蓝色链霉菌合成放线紫红素的水平。
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抗生素与抗微生物多肽的联合-荧光假单胞菌和其耐药突变株的协同抑制
耐药菌的激增已经给公众健康带来严重的影响,但开发新型抗生素往往成本很高且困难重重.将不同作用机理(如不同作用靶点)的抗生素与抗微生物多肽联合应用,则可使细菌经受多重突变的阻力,从而能够相对减缓耐药菌的进一步蔓延.加拿大农业食品Lightbridge研究中心的Naghmouchi等人研究中选择了荧光假单胞菌及其耐药突变株菌作为试验菌,因荧光假单胞菌是革兰阴性嗜冷菌,也是高度异种致病性强的细菌;并选择了具有不同作用靶点的抗生素,如青霉素干扰细胞壁肽聚糖的合成、链霉素作用于30S核糖体亚基、林可霉素作用于50S核糖体亚基、利福霉素结合RNA聚合酶β-亚基等等,它们均属于作用机理不同的抗生素.Naghmouchi等人从黏菌素敏感的荧光假单胞菌中分离并培养了抗青霉素(RvP)、抗链霉素(RvS)、抗林可霉素(RvL)以及抗利福霉素(RvR)的突变株.测定了细胞中脂肪酸组成、K+的外流以及这些菌株单独对抗微生物多肽或在与抗生素联合使用时对抗微生物多肽(乳链球菌肽Z,片球菌素PA-1/AcH及粘菌素)的敏感性.
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利奈唑胺-黄酮杂合体的合成与抗菌活性研究
目的 针对利奈唑胺日益严重的细菌耐药问题,将具有外排泵抑制作用的黄酮骨架引入利奈唑胺分子中,以提高抗耐药菌活性.方法 通过黄酮的氧烷基化反应,连接臂酯基的选择性水解,TBTU存在下的缩合反应,得到黄酮-利奈唑胺杂合体5;采用MTT法测定其抗菌活性,采用荧光分光光度法测定其外排率,用SYBYL软件研究5与靶点可能的结合模式.结果 化合物5抗金黄色葡萄球菌MIC50为0.39μg/mL,活性是利奈唑胺的近2倍;金黄色葡萄球菌对化合物5的外排率(13.1%)远低于其母体化合物利奈唑胺(49.0%);化合物5和利奈唑胺具有相同的靶点结合模式.结论 化合物5对革兰阳性和阴性菌均具有优良的抗菌活性;对核糖体具有高亲和性;对外排泵具有显著抑制作用.
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幽门螺杆菌引起的消化性溃疡防治
幽门螺杆菌是从人胃粘膜中分离出的一种螺旋状的微生物,属革兰阴性菌.该菌初被命名为幽门弯曲菌(campylobacter pylori),后经核糖体RNA序列分析和超微结构观察,将其定为幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp).