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丹参酮ⅡA对人乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究
目的 研究丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA)对雌激素受体阴性人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的生长抑制作用及机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)、克隆形成试验检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞周期的影响.结果 丹参酮ⅡA处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(P<0.05),半效抑制浓度(IC50)为0.125μg/ml,克隆形成率下降(P<0.05),均呈时间-剂量-效应关系;倒置显微镜观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞数减少(P<0.05);并能诱导其凋亡.结论 丹参酮ⅡA使人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖受到抑制,促进肿瘤细胞凋亡,具有抗肿瘤作用.
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夫拉平度对人宫颈癌CasKi细胞裸鼠皮下种植瘤生长的抑制作用研究
目的 研究周期蛋白激酶(CDKs)抑制剂夫拉平度(Flavopiridol,FP)对人宫颈癌CasKi细胞裸鼠皮下移植瘤生长和转移的影响.方法 2017年7-8月在聊城市人民医院中心实验室建立CasKi细胞裸鼠模型,随机分为对照组、顺铂组、FP组及FP和顺铂联合用药组,每组8只裸鼠,4组均于肿瘤抑制成功后瘤体直径平均为0.8 cm开始给药,给药3周,2次/周.后一次给药5 d后处死全部裸鼠,测量移植瘤的体积和重量,采用免疫印迹法检测对各组中肿瘤组织凋亡蛋白Caspase 3表达的影响,并采用分光光度法测定裸鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平.结果 与对照组相比[(567.02±89.38)V/mm3;(0.63±0.07)m/g],顺铂组[(114.50±18.07)V/mm3,(0.12±0.04)m/g]、FP组[(106.74±21.39)V/mm3;(0.10±0.02)m/g]及FP和顺铂联合用药组[(88.59±19.84)V/mm3,(0.07±0.02)m/g]荷瘤体积和重量明显减小(P<0.05);顺铂组、FP组及FP和顺铂联合用药组Caspase 3表达均显著增加(P<0.05);与对照组相比[(134.68±45.63)U/mL,(3.45±1.47)mmol/L],顺铂组[(143.72±44.45)U/mL,(2.76±2.83)mmol/L]、FP组[(156.51±32.53)U/mL,(2.64±0.66)mmol/L]及FP和顺铂联合用药组[(208.37±63.35)U/mL,(2.38±1.13)mmol/L]血清SOD的活性显著升高(P<0.05),MDA的含量显著降低(P<0.05).结论 夫拉平度对人宫颈癌CasKi细胞皮下种植瘤生长具有抑制作用,且与促进癌细胞的凋亡,抑制机体氧化应激反应有关.
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盐酸米托蒽醌诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的研究
目的 探讨盐酸米托蒽醌诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡作用和机制.方法 用CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测盐酸米托蒽醌对CNE-2细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞内药物积聚量与细胞凋亡率之间的关系,共聚焦检测盐酸米托蒽醌在细胞中的定位.结果 盐酸米托蒽醌对CNE-2细胞生长具有抑制作用,呈时间和剂量依赖性,并能有效诱导细胞凋亡,其在细胞中主要以斑点形式分布在细胞质中.结论 盐酸米托蒽醌能抑制人鼻咽癌细胞CNE-2细胞生长,并诱导细胞凋亡,CNE-2细胞的药物敏感性与药物在细胞内的分布位置有直接关系.
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干扰素在血液系统恶性肿瘤的治疗价值
干扰素是50年代后期被发现的一种具有干扰病毒增殖活性的因子,现已证实干扰素至少存在着5种类型,即干扰素α,β,γ,δ,ω.干扰素具有多种生物学活性,能够调节细胞功能、病毒复制、细胞分化、生长抑制和免疫功能等.其中,对干扰素α的研究较多,它不仅具有抗病毒作用,而且还具有抗肿瘤和免疫调节作用.通过重组DNA技术生产出多种基因来源的重组干扰素α,为其广泛应用提供了可能性.本文将重点介绍干扰素α治疗血液系统恶性肿瘤的临床应用.
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丹参酮ⅡA体外治疗肺癌的研究进展
Jemal等[1]在2008年统计癌症发生率的一项研究发现,全球范围内,肺癌是男性常见的癌症和癌症死亡的首要原因.在女性中,它是第4个常见的癌症和癌症死亡的第2大原因.肺癌的发生率为13％(160万人),病死率为18％(140万人).肺癌是两个主要亚型的异质性疾病:非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC).早期肺癌主要是通过手术切除治疗,对患者的辅助化疗为ⅠB、Ⅱ和Ⅲ期阶段,局部晚期患者通常是综合治疗,晚期肺癌仍然是一种无法治愈的疾病[2].丹参酮ⅡA(TanⅡA,C19H18O3)提取于中药丹参,在中国早是用于治疗心血管疾病,具有明显的抗炎和抗氧化作用[3～5].此外,也有研究表明,丹参酮ⅡA具有显著的生长抑制及诱导凋亡人体肿瘤细胞(白血病细胞、乳腺癌细胞和结肠癌细胞)的作用[6～8].本文主要对丹参酮ⅡA在治疗肺癌中的研究进行回顾和综述,以了解丹参酮ⅡA在肺癌治疗中的应用价值.
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沙巴棕提取物对肺癌细胞增殖抑制及促凋亡的实验研究
目的 观察沙巴棕提取物与人肺癌细胞增殖和凋亡之间的关系,并探索其作用机制.方法 应用MTT比色法、流式细胞仪法观察人类肺癌细胞成活、凋亡情况.应用Western blot法观察PARP、CASP3、P27、CDKN1B、p-STAT3蛋白的表达情况.结果 沙巴棕提取物以剂量依赖性的方式抑制了肺癌细胞的增殖,并通过上调PARP、CASP3、P27等凋亡相关蛋白促进凋亡.沙巴棕提取物降低了p-STAT3水平；STAT3磷酸化的一种选择性抑制剂——AG490,同样通过降低p-STAT3的水平而抑制了肺癌细胞的生长.相比于以上二者任意一种的单独治疗,沙巴棕提取物和AG490的联合治疗显著降低了肿瘤细胞的增殖(P＜0.05).结论 沙巴棕提取物可通过促进凋亡信号和下调p-STAT3蛋白而抑制肺癌细胞增殖.这些观察可能为沙巴棕提取物诱导肿瘤生长抑制的机制研究提供有价值的参考.
关键词： 沙巴棕提取物 肺癌 生长抑制 信号传导与转录激活因子 凋亡 -
温阳散结中药干预乳腺癌细胞SK-BR-3的生长抑制及诱导凋亡研究
目的 研究体外实验中阳和化岩汤与曲妥珠单抗及PI3K抑制剂LY294002对乳腺癌细胞株SK-BR-3(HER-2高表达型)的增殖抑制及诱导凋亡作用.方法 制备温阳散结方肠吸收液,将SK-BR-3乳腺癌细胞株分为空白对照组、中药组、曲妥珠组、曲妥珠+中药组、Ly组、Ly+中药组.MTT法观察24、48、72 h药物对细胞的生长抑制率,流式细胞仪测定药物干预72 h后细胞凋亡率和细胞周期的变化.结果 与空白对照组相比,中药组、曲妥珠组、曲妥珠+中药组、Ly组、Ly+中药组细胞抑制率和细胞凋亡率增加,S期细胞比例明显增高,G2/M期呈下降趋势(P＜ 0.05).且各给药组细胞抑制率随着药物作用时间延长(24、48、72 h)逐渐增加,呈现时间依赖效应(P＜0.05).曲妥珠+中药组、Ly+中药组抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期的作用分别优于单纯曲妥珠组、Ly组(P＜0.05).结论 阳和化岩方肠吸收液能够有效抑制细胞增殖及诱导凋亡,联合曲妥珠及LY能够进一步抑制细胞增殖的能力、诱导细胞凋亡能力、增强S期阻滞,抑制细胞进入G2/M期,提示温阳散结中药联合曲妥珠及PI3K抑制剂治疗HER-2高表达型乳腺癌可能存在协同作用.
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不合理用药实例分析(9)
66妊娠-土霉素实例:患者,女,28岁.因腹泻2天就诊.停经6个月.初步诊断:①急性肠炎;②宫内孕6个月.应用土霉素控制肠道感染.处方:土霉素0.5g qid po分析:土霉素能与新形成的骨、牙中所沉积的钙相结合.妊娠5个月以上的妇女服用土霉素时,出生的幼儿乳牙可出现荧光、变色、牙釉质发育不全、畸形或生长抑制.土霉素不仅影响胎儿,而且易致孕妇肝损害.
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小白菊内酯对多发性骨髓瘤细胞的生长抑制及其凋亡诱导作用
目的 探讨小白菊内酯(parthenolide,PTL)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的体外作用及其机制.方法 培养人MM细胞系PRMI8266,在不同浓度的PTL作用不同时间后,以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)及台盼蓝拒染检测细胞增殖及活性,用AO/EB染色荧光显微镜及Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,应用膜联蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)染色流式细胞仪检测细胞凋亡率,酶底物法测定细胞半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性.结果 (1)1～10μmol/L的PTL对MM细胞生长曲线和活性有明显抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,5 μmol/L作用48 h,可达到接近50%的活性抑制;(2)5μmol/L PTL作用48 h后可见到细胞出现明显形态学改变,细胞形态变小、胞质减少、胞体胞核固缩、出现凋亡小体;(3)2μmol/L、5 μmol/L、10μmol/L的PTL作用48 h后MM细胞的凋亡率分别为17.1%±2.6%、33.6%±3.8%、40.9%±3.1%,与对照组5.6%±1.2%相比,差异有显著统计学意义(均P＜0.01);(4)PTL作用48 h后,MM细胞caspase-3活性明显增强,且呈浓度依赖性(P＜0.01).结论 PTL能明显抑制MM细胞体外生长及活性,其作用机制为增强caspase-3活性而诱导MM细胞凋亡;PTL作为新的MM细胞凋亡诱导剂,其作用靶点及体内效应值得深入研究.
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典型抗生素对羊角月牙藻的生长抑制及其联合毒性
目的 研究两种使用量较大的头孢类抗生素(头孢氨苄、头孢拉定)及其主要降解产物7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)和四环素类药物(四环素和金霉素)对羊角月牙藻(Selenastrum capricornutum)生长的作用及其联合毒性.方法 将5种物质分别暴露于羊角月牙藻,设置5个浓度梯度(四环素和金霉素均为0.25～4 μg,/ml,头孢氨苄、头孢拉定均为0.1～1 000 μg/ml,7-ACA为60～960 μg/ml)及空白对照；同时,依据毒性单位法设计四环素+金霉素及四环素+7-ACA的联合毒性实验,5个浓度梯度的混合物总毒性单位(TU)为0.2、0.4、0.8、1.6和3.2 TU,培养72 h后测定藻液密度并计算相应抑制率和半数抑制浓度(IC50值).结果 羊角月牙藻的72 h-IC50分别为:四环素0.50 μg/ml、金霉素0.47 μg/ml、7-ACA 775.6μg/ml.头孢拉定在测试浓度范围(0.1～1 000 μg/ml)的抑制率均为负值；头孢氨苄在低浓度(0.1、1和10μg/ml)时的抑制率为负值,但在高浓度(100和1 000 μg/ml)下产生抑制作用；且当头孢氨苄浓度为1 000 μg/ml时,抑制率小于50％.因而头孢拉定和头孢氨苄在所测试范围内不能计算出72 h-IC50值.四环素+金霉素组的IC50值为0.99 TU；而四环素+7-ACA组的IC50值为1.5 TU.结论 四环素类药物对羊角月牙藻的生长产生抑制作用；但头孢拉定在测试浓度却刺激羊角月牙藻的生长；头孢氨苄和7-ACA对羊角月牙藻的作用存在明显hormesis现象,且7-ACA的毒性明显高于其母体.四环素和金霉素的联合毒性表现为相加作用,而四环素+7-ACA的联合毒性则为拮抗作用.
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血清对DHA抑制肺癌A549细胞生长的影响及DHA的抗癌机制
目的 研究血清对体外培养条件下二十二碳六稀酸(DHA)抑癌作用的影响及DHA的抗癌机制.方法 采用M1tr法观察血清刺激和无血清情况下DHA对体外培养的肺癌A549细胞的生长抑制作用,同时采用免疫印迹方法检测DHA对血清诱导的蛋白激酶B(Akt)磷酸化的影响.结果 在无血清和低浓度血清(<2%)下,DHA明显抑制A549细胞的生长;在高浓度血清下,DHA则呈现促进A549生长的作用.无血清下,DHA对血清诱导的Akt的活化具有抑制作用.结论 体外培养条件下,培养基中无血清时DHA可能通过脂质过氧化降低Akt的活化、抑制A549细胞的生长;高血清含量则明显干扰DHA的抗癌活性.
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醉香含笑树皮挥发性成分GC-MS分析及其对HepG2细胞体外生长抑制作用
目的 分析醉香含笑树皮乙醇总提取物(EBMM)的挥发性成分,并考察其对人肝肿瘤HepG2细胞的体外生长抑制作用.方法 水蒸气蒸馏法提取EBMM的挥发性成分,采用GC-MS分析,并用峰面积归一化法测定各成分相对质量分数.采用MTT方法检测75、100、200、300、400 tg/mL EBMM对HepG2细胞体外生长抑制作用.结果 共检出54个色谱峰,确定了其中34种化合物,占挥发性成分总量的67.73％.EBMM对HepG2细胞的抑制率呈浓度依赖关系.结论 EBMM 的挥发性成分以棕榈酸及其衍生物、各种烯、不饱和醇、不饱和酸、不饱和酮、不饱和酯类为主,EBMM能明显抑制HepG2细胞的生长.
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白藜芦醇抑制C6及TJ905胶质瘤细胞生长的研究
白藜芦醇是近年来发现的具有预防肿瘤发生的天然植物成分[1,2],属于非黄酮类多酚化合物,广泛存在于种子植物中,并以新鲜葡萄皮中所含的量为高(50～100μg/g),而在红葡萄酒中也可高达1.5～3 mg/L.白藜芦醇是植物在遇到真菌感染、紫外线照射不利条件时所产生的植物补体,对植物本身起保护作用,同时对人体也具有调节脂质代谢、抑制血小板聚集、保护心血管、抗炎、抗肿瘤等多种生物学活性和药理作用,具有很大的药用价值.目前的研究表明,白藜芦醇对鼠肝细胞癌、人肝母细胞、乳腺癌等多种肿瘤细胞均有显著抑制作用.但白藜芦醇对脑胶质瘤作用的研究国内还未见报道.本实验初步研究白藜芦醇对大鼠C6及人脑TJ905胶质瘤细胞的生长抑制和杀伤作用.
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三种反义c-myc RNA对HL-60细胞分化的影响
HL-60是一种c-myc高表达的恶性肿瘤细胞。大量研究显示，当HL-60细胞被多种化学诱导剂诱导产生分化、凋亡及生长抑制时几乎都有c-myc表达的明显下降，甚至在自发产生分化的HL-60细胞中也有c-myc基因扩增消失的现象，提示c-myc表达与HL-60细胞分化之间有密切关系。我们将构建成功的三种反义c-myc逆转录病毒表达载体aM1、aM2和aM3(分别载有c-myc的第1,2和3外显子反义片段)导入HL-60细胞，并观察基因导入对靶细胞分化的影响。
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人突变p27基因对大肠癌细胞SW480生长的影响
目的:观察人突变p27基因(p27mt)对人大肠癌细胞生长的影响,探讨p27mt基因在大肠癌基因治疗中的作用机制.方法:以携带突变p27基因复制缺陷型腺病毒(Ad-p27mt)为载体,转染大肠癌细胞SW480;用Westernblot方法检测p27mt蛋白的表达;细胞计数法检测p27mt对SW480细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪检测细胞周期;用DNA片段分析法检测细胞凋亡.结果:通过免疫印迹分析Ad-p27mt转染SW480细胞后,p27在细胞中出现了蛋白高表达.PI染色流式细胞仪检测77.96%的细胞阻滞于G0/G1期,而Ad-LacZ组及空白对照组分别为27.57%和25.29%;生长曲线显示Ad-p27mt对细胞生长就有明显的抑制作用;DNA片段分析示p27mt基因可诱导细胞的凋亡.结论:p27mt对细胞周期有明显的阻滞作用,主要阻滞于G0/G1期;p27mt基因对细胞的生长抑制机制与诱导细胞凋亡和细胞周期的阻滞有关.
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三磷酸腺苷氯化镁对肺癌细胞(A549)端粒酶活性的影响
目的:探讨三磷酸腺苷氯化镁(ATP-MgCl2)对肺腺癌细胞的影响及其作用机理.方法:采用连续细胞记数方法观测ATP-MgCl2对A549肺腺癌细胞生长的抑制情况,应用端粒重复序列扩增法(TRAP)观察ATP-MgCl2对癌细胞端粒酶活性的影响,并与ATP作对比.结果:ATP-MgCl2显著抑制癌细胞生长(P＜0.01),且使大量癌细胞死亡,而加药后前两天ATP-MgCl2的抑制、杀伤癌细胞程度较ATP明显(P＜0.05).ATP-MgCl2组和ATP组的端粒酶阳性表达率明显低于对照组(P＜0.01),而前两者间无明显差异(P＜0.05).结论:ATP-MgCl2对肺腺癌细胞有抑制、杀伤(细胞毒)作用.其抗癌作用机理与ATP相似,与抑制癌细胞端粒酶活性有关.MgCl2与ATP结合形成一种活性复合物,增强了ATP的抗癌作用,ATP-MgCl2具有较好的临床应用价值.
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肿瘤休眠治疗-癌治疗的新战略
1 肿瘤休眠的概念 肿瘤休眠(Tumor dormancy)指肿瘤的生长处于休止状态,但休眠的肿瘤细胞仍具有增殖潜能。细胞学上肿瘤细胞处于分裂停止(G0期) (cell cycle arrest)或增殖与凋亡(apoptosis)的平衡状态[1]。当肿瘤从原发灶转移到机体其他部位时往往要经历一个数月至数年的休眠期。对肿瘤休眠的研究具有重要的临床意义,如在肿瘤休眠期实施手术治疗往往得到良好预后,而在不适当时期进行手术则有可能促进癌呈暴发性生长、增殖以及转移。目前对于肿瘤休眠的机制尚未完全清楚,它可能是机体的一种重要抗癌机制,与宿主的免疫功能,细胞周期调控,内分泌状态及肿瘤营养血管等综合因素有关。通常认为以下因素可能诱发肿瘤休眠:1)缺乏诱导血管生成的反应或产生抗血管生成的肽,造成肿瘤血管缺乏;2)免疫系统的激活,诱发细胞介导的细胞溶解作用;3)增生的调节作用:如缺乏生长激素的刺激和细胞因子诱导的生长抑制及分化诱导。其中肿瘤血管缺乏或选择性消除肿瘤血管生成的反应近来尤引人注目[2]。
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异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖影响的实验研究
目的：探讨异紫堇定碱（Isocorydione）对人宫颈癌Siha细胞增殖的影响。方法：以100、200、400、800、1200μmol/L浓度的异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞体外干预，分别作用24、48、72 h后，采用MTT法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞生长增殖的作用；流式细胞仪检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞周期的影响；结合Hoechst染色观察处理后Siha细胞核微形态的变化；Western Blot法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞作用后凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果：MTT结果显示不同浓度的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后具有明显的抑制其增殖的作用，呈剂量-时间依赖关系（P<0.05）；流式细胞仪检测结果显示400μmol/L的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后，细胞周期发生明显改变，其中G1和S期细胞比例变化不明显，但G2期细胞明显减少（P<0.05）；Hoechst染色结果显示，与对照组比较，400μmol/L的异紫堇定碱作用于Siha细胞48 h后形态缩小、细胞核固缩，出现核碎裂形成凋亡小体；Western Blot结果显示400μmol/L的异紫堇定碱分别作用于人宫颈癌Siha细胞24、48、72 h后，其Bax蛋白表达增加，而Bcl-2蛋白表达逐渐减少，Bax/Bcl-2比值增加，Caspase-3蛋白表达逐渐增多。结论：异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖具有明显的抑制作用，其促使细胞发生凋亡行为可能与线粒体凋亡途径的蛋白有关。
关键词： 异紫堇定碱 人宫颈癌Siha细胞 生长抑制 凋亡 -
生长抑制因子基因1及其与p53基因的相互关系
生长抑制因子基因1(inhibitor of growth-l gene,INGl)为生长抑制类基因,研究发现此基因与另一目前公认的抑癌基因p53具有复杂的协同关系,INGl蛋白不仅可以抑制p53蛋白的降解,而且在许多方面与p53蛋白具有相互协作的关系,本文拟对它们之间相互关系的新研究进展进行综述.
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蟾蜍灵对K562细胞生长抑制及凋亡诱导作用
目的:研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵(bufalin)对人白血病细胞的作用.方法:应用MTT比色法观察bufalin对细胞的抑制作用,用荧光双染观察细胞结构的改变,DNA凝胶电泳分析细胞的凋亡.结果:bu-falin明显抑制K562细胞的生长,半数抑制浓度(IC50)约为0.0125μmol/L;0.10μmol/L的bufalin作用24h即可明显诱导白血病细胞的凋亡,凋亡率呈剂量和时间依赖性;琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带.结论:bufalin对白血病细胞有极强的生长抑制和诱导凋亡作用.
