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他莫昔芬诱导C6胶质瘤细胞凋亡及其作用机制
[目的]探讨他莫昔芬(TAM)对C6胶质瘤细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.[方法]①TAM经不同浓度、不同时间处理C6胶质瘤细胞后,用台盼蓝染色法检测细胞死亡现象,DAPI组化染色观察凋亡细胞核形态,DNA阶梯法和FACS检测细胞凋亡,Western blot法分析PKCα磷酸化水平.②PKCα特异性抑制剂Go6976与TAM联合处理C6胶质瘤细胞后,DNA阶梯法和FACS检测C6胶质瘤细胞凋亡.[结果]①TAM能诱导C6胶质瘤细胞死亡,且与TAM浓度、TAM处理时间呈正相关;TAM组可见典型的细胞凋亡的形态学变化(如核固缩)和明显的DNA梯度条带;C6胶质瘤细胞凋亡率和PKCα磷酸化水平具有TAM浓度依赖性和时间依赖性.②Go6976与TAM联合处理C6胶质瘤细胞后,可进一步促进TAM诱导的C6胶质瘤细胞凋亡.[结论]TAM能诱导C6胶质瘤细胞凋亡,且PKCα参与介导TAM诱导的C6胶质瘤细胞凋亡.该研究可为临床神经胶质瘤的治疗提供实验依据.
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替莫唑胺联合姜黄素对C6胶质瘤细胞凋亡的作用
目的：研究替莫唑胺联合姜黄素用药对 C6胶质瘤细胞的抑制作用和诱导凋亡作用。方法：SRB 法考察替莫唑胺联合姜黄素对 C6细胞的抑制作用；流式细胞法检测联合用药对 C6细胞的凋亡作用；激光共聚焦扫描显微镜观察联合用药对细胞的诱导作用及在细胞中的定位作用。结果： SRB 法结果显示替莫唑胺联合姜黄素在48 h 时对 C6细胞的抑制率为（91．22±0．51）％，显著高于24 h 的抑制率（83．66±0．18）％（P ＜0．05）；流式细胞仪检测结果表明，替莫唑胺（10μmol／L）联合姜黄素（5μmol／L）用药时 C6细胞的早期凋亡率为（33．15±0．79）％；通过激光共聚焦扫描显微镜观察，姜黄素联合替莫唑胺组诱导 C6细胞的凋亡细胞数量多于游离药物组。结论：替莫唑胺联合姜黄素用药能够抑制 C6细胞的生长，同时可诱导C6细胞的凋亡。
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羟基喜树碱对C6胶质瘤细胞的抑制作用
目的:研究羟基喜树碱(HCPT)对大鼠脑胶质瘤细胞的抑制作用.方法:采用MTT法检测不同浓度(1～0.031 25 mg·mL-1) HCPT对大鼠脑胶质瘤细胞的体外细胞毒作用,同时以脑胶质瘤常规治疗药物作对照,并比较开环与闭环HCPT抑瘤活性.结果:HCPT在高浓度时对细胞抑制率高达(69.43±4.5)%,与对照药比较差异无显著性,且其作用呈浓度依赖性.开环与闭环HCPT比较,前者抑瘤效果较低,二者IC50分别为3.626、0.135mg·mL-1.结论:HCPT对C6胶质瘤细胞的增殖具有明显抑制作用,且其闭环形式抑瘤活性更强.
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大鼠脾脏来源内皮祖细胞对C6胶质瘤细胞增殖能力影响的体外研究
目的 研究体外内皮祖细胞对C6胶质瘤细胞增殖能力的影响.方法 取SD大鼠脾脏采用密度梯度离心法获取内皮祖细胞,通过观察其分化过程中的形态特征,激光共聚焦检测其吞噬乙酰化低密度酯蛋白(DiI-acLDL)和结合荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)的特异性,免疫荧光检测细胞表面抗原CD34和CD31的表达,对EPCs进行鉴定.按0、10%、20%、30%、40%、50% 6个浓度将内皮祖细胞条件培养基加至C6胶质瘤细胞的常规培养基中观测其对C6胶质瘤细胞增殖的影响;分别采用内皮祖细胞条件培养基和常规培养基孵育C6胶质瘤细胞24 h,流式细胞仪检测2组的细胞周期.结果 激光共聚焦鉴定DiI-acLDL和FITC-UEA-1双染色阳性细胞即为正在分化的内皮祖细胞;免疫荧光检测内皮祖细胞一致性表达CD34和CD31.随着内皮祖细胞条件培养基含量的增加,36 h和48 h各浓度组的光密度值也随着增加,且50%内皮祖细胞条件培养基组D(490)值(2.018±0.220)、(2.388±0.448)均高于对照组(1.163±0.103)、(1.106±0.174),且差别有统计学意义(P＜0.01).50%含有内皮祖细胞条件培养基培养的C6胶质瘤细胞的增殖率(即S+G2/M)明显高于对照组[(34.650±1.492)% vs (29.587±2.504)%, P＜0.05].结论 体外内皮祖细胞条件培养基能促进C6胶质瘤细胞的增殖,其机制可能与其分泌的各种血管生成类细胞因子有关.
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雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞凋亡及TNF-α、NF-κb和Caspase-3表达的影响
目的:检测雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞TNF-α、NF-κb和Caspase-3表达的影响,探讨其诱导胶质瘤细胞凋亡机制.方法:将大鼠C6胶质瘤细胞培养于含10％ FBS,100 mg/L青霉素链霉素的DMEM培养液中,设立雷公藤甲素给药组和空白组,给药组设0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 μg/L雷公藤甲素6个剂量,置37℃5％ CO2培养箱中培养,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的抑制作用,酶联免疫(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)试剂盒检测TNF-α表达,Western Blotting (WB)检测NF-κb和Caspase-3的表达.结果:与空白组相比,浓度大于0.8 μg/L的雷公藤甲素能诱导C6胶质瘤细胞凋亡(P＜0.05),且其诱导效应具有浓度依赖性.同时,雷公藤甲素可以下调NF-κb表达,而上调TNF-α和Caspase-3表达,且Caspase-3被部分活化.结论:雷公藤甲素可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,同时,可降低NF-κb表达,增强TNF-α和Caspase-3表达,且部分活化Caspase-3.
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Bm-12促C6胶质瘤细胞生长及凋亡作用的研究
目的 探讨Bm-12促C6胶质瘤细胞生长及凋亡的作用.方法 显微镜观察不同浓度Bm-12对C6胶质瘤细胞生长的影响,用PBS溶液作为对照组.并用流式细胞仪检测不同浓度Bm-12对C6胶质瘤细胞凋亡的影响.结果 不同浓度Bm-12加入C6胶质瘤细胞培养液后,C6胶质瘤细胞生长明显受抑制,细胞形态及数量明显发生变化,且凋亡率均较对照组显著增加(P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论 Bm-12可以抑制C6胶质瘤细胞生长,并诱导其凋亡.
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鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖影响的实验研究
目的 探讨鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖的影响.方法 体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,MTT法检测鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用;免疫细胞化学染色法和western blot法检测鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞caspase-3蛋白表达的影响.结果 MTT法显示,鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖的抑制具有剂量依赖性.免疫细胞化学染色和western blot检测显示,随着鸦胆子油乳注射液浓度增加,caspase-3蛋白表达明显上调.结论 鸦胆子油乳注射液能通过促进凋亡基因caspase-3蛋白表达的上调,从而抑制C6胶质瘤细胞增殖.
关键词： 鸦胆子油乳注射液 C6胶质瘤细胞 抑制 Caspase-3蛋白 -
鸦胆子油乳注射液联合普通放疗对C6胶质瘤细胞作用的实验研究
目的 探讨鸦胆子油乳注射液联合普通放疗对C6胶质瘤细胞增殖的影响.方法 体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,用MTT比色法检测鸦胆子油乳注射液联合普通放疗对C6胶质瘤细胞的抑制作用.用免疫组化检测鸦胆子油乳注射液联合普通放疗对C6胶质瘤细胞caspase-3表达的影响.结果 MTT比色法显示鸦胆子油乳注射液联合放疗对C6胶质瘤细胞抑制率高于单次普通放疗；免疫组化显示鸦胆子油乳注射液联合放疗使C6胶质瘤caspase-3表达效果高于单次普通放疗.药物作用呈剂量依赖性.普通放疗联合鸦胆子油乳注射液与单纯用药相比对肿瘤细胞抑制率及肿瘤细胞caspase-3表达无明显差异(P＞0.05).用药后行普通放疗对C6胶质瘤细胞的抑制率及细胞caspase-3表达低于用药前行放疗.结论 体外鸦胆子油乳注射液能增加C6胶质瘤细胞凋亡基因cas pase-3表达,抑制细胞增殖.鸦胆子油乳注射液联合普通放疗对C6胶质瘤细胞抑制作用高于普通放疗.药物联合放疗与单独用药对C6胶质瘤细胞作用无明显差异.放疗后用药优于放疗前用药.
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C6/SD大鼠胶质瘤模型的建立及C6胶质瘤细胞增殖动力学研究
目的建立C6/SD大鼠脑胶质瘤模型,并在其基础上研究C6胶质瘤细胞的增殖动力学.方法应用免疫组化、HE染色和流式细胞仪测定,观察C6胶质瘤细胞的增殖动力学指标,并进行相关性分析.结果肿瘤细胞接种2周后,肿瘤模型建立,HE染色见肿瘤细胞增殖活跃,各项指标显示该肿瘤增殖活性较强.
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IL-24对C6细胞JNK及caspase-3表达的影响
目的:白细胞介素24(interleukin 24,IL-24)是由黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation -associated gene-7,mda-7)编码的一种分泌蛋白.以转入外源性IL-24基因的C6/IL-24细胞、空载体C6/pLXSN细胞以及亲代C6细胞为研究对象,探讨外源性IL-24体外抑制胶质瘤细胞增殖的相关机制.方法:应用MTT法体外观察IL-24对胶质瘤细胞增长的抑制作用.Western blot方法检测c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun NH2-terminal kinases,JNK)和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白的表达.探讨外源性IL-24体外抑制胶质瘤细胞增殖的相关机制.结果:C6/IL-24细胞与C6/pLXSN和亲代C6细胞相比,其吸光值降低,细胞生长曲线显示其体外增殖能力降低.与C6/pLXSN及C6细胞比较,C6/IL-24细胞的JNK和caspase-3蛋白表达增高(P＜0.05).C6/pLXSN与C6细胞比较无显著性差异(P＞0.05).结论:外源性IL-24基因可抑制C6胶质瘤细胞增殖.外源性IL-24基因对胶质瘤细胞诱导凋亡作用,与其上调并激活JNK及caspase-3表达有关.
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地塞米松对C6胶质瘤细胞细胞周期的影响
目的:研究地塞米松(Dex)对C6胶质瘤细胞细胞周期和增殖的影响.方法:在培养的C6胶质瘤细胞中加入不同浓度(0 mol/L、10-5 mol/L、10-4 mol/L和10-3 mol/L)的Dex,作用不同的时间(6、12和24 h)后取材,运用细胞计数和流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞的增殖情况、细胞周期及凋亡.结果:10-3mol/L的Dex诱发了C6胶质瘤细胞的凋亡.24 h时,4个组的C6胶质瘤细胞凋亡率依次为0.37、0.52、0.39和8.24;4个组的C6胶质瘤细胞个数依次为4.37×106、4.29×106、3.57×106和3.44 ×106,后3组与第1组有明显的差异;4个组的C6胶质瘤细胞增殖指数依次为17.58、6.79、6.29和22.48,前3组随浓度增加而增加,第4组例外.结论:Dex对C6胶质瘤细胞的细胞周期进程有明显的抑制作用.10-4mol/L以下的浓度抑制其由G1期向S期的转换,10-3 mol/L剂量的Dex可能抑制C6胶质瘤细胞由G2期向M期的转换或阻滞细胞在S期.大剂量的Dex(10-3 mol/L)可引起C6胶质瘤细胞凋亡.
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外源性TRAIL基因转染对胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究
目的 探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因对大鼠C6胶质瘤细胞的凋亡作用.方法 C6细胞在杜伯改良的Eagle培养基(DMEM),37℃,5％ CO2条件下培养；质粒提取与转染；用Hoechst试剂盒检测C6细胞凋亡.结果 转染重组质粒PDC315-TRAIL的C6细胞组凋亡率明显高于未转染的C6细胞组及转染空载体PDC315的C6细胞组(P＜0.05).结论 外源性TRAIL基因可引起C6细胞凋亡.
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环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 以不同浓度塞来昔布分别作用于C6胶质瘤细胞不同时间段,采用甲基噻唑蓝比色法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,并用光镜及透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化.结果 经不同浓度塞来昔布作用后,C6胶质瘤细胞活性受到抑制,且呈剂量时间依赖性,实验组与对照组之间以及实验组各亚组之间均有显著性差异(P<0.05).细胞周期检测发现实验组S期细胞减少,G2期细胞显著增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.05);同时,塞来昔布还可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,凋亡率在实验组与对照组之间有显著性差异(P<0.05).结论 选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布可抑制C6胶质瘤细胞增殖,诱导C6胶质瘤细胞凋亡.
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三氧化二砷诱导C6胶质瘤细胞凋亡实验研究
目的 研究三氧化二砷(As2O3)在体外是否具有抗鼠胶质瘤作用,并对其作用机制进行初步探讨.方法 应用不同浓度As2O3,且在不同时间点分别处理C6胶质瘤细胞株及原代培养的正常鼠神经胶质细胞,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法,观察As2O3对C6胶质瘤细胞株及正常鼠神经胶质细胞生长的影响,以透射电镜、Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)双重荧光染色检测两种细胞凋亡的形态变化,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的Annexin-V和PI双标记法通过流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 MTT法发现,As2O3 0.5～8.0 μmol/L的浓度均可显著抑制C6胶质瘤细胞株的生长,而对正常原代神经胶质细胞株的抑制作用较弱.经As2O3作用后,透射电镜、Hoechst 33342/PI双染荧光均观察到C6胶质瘤细胞发生了显著的凋亡形态改变;运用Annexin-V-FITC/PI双标记法在流式细胞仪检测显示,随As2O3浓度的增大和时间的延长,C6胶质瘤细胞株的凋亡率明显上升,而正常神经胶质细胞的凋亡率要明显小于C6胶质瘤细胞株.结论 As2O3在体外可显著抑制C6胶质瘤细胞株生长,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关,且凋亡率随As2O3作用的时间和剂量的增加而增加.但As2O3对正常神经胶质细胞生长的抑制作用较弱,提示As2O3抑制细胞生长的作用具有一定的选择性.
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小鼠endostatin基因的克隆与C6鼠脑胶质瘤的治疗
目的克隆小鼠endostatin基因,检测其表达蛋白的生物学活性,应用该蛋白治疗大鼠C6脑胶质瘤.方法从小鼠胶原ⅩⅧ cDNA用PCR法克隆endostatin基因,重组入pUC19,测序后构建非融合表达载体pDH-endostatin,使其在DH5α内经温度诱导表达,纯化该表达蛋白并用鸡胚绒毛膜尿囊膜实验和内皮细胞抑制实验检测其活性.经荷瘤大鼠皮下注射该蛋白治疗其脑胶质瘤.结果成功获得551 bp的endostatin基因,经测序正确.该诱导表达蛋白Mr 20000,具有抗血管生成活性.应用该蛋白10或20 mg.kg-1.d-1可抑制荷瘤大鼠脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长.结论 Endostatin基因的表达和初步应用,为采用抗血管生成方法治疗脑胶质细胞瘤的研究奠定了实验理论基础.
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建立大鼠C6脑胶质瘤模型与观察颅内肿瘤生长
目的建立大鼠C6脑胶质瘤模型,行一般观察和MRI检查以确定颅内肿瘤生长情况,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标. 方法体外培养大鼠C6胶质瘤细胞 ,应用立体定向法将含10 g.L-1琼脂糖和1×106 C6细胞悬液10 μL注入大鼠右脑尾状核. 接种后行一般观察和MRI 检查,对5组接种大鼠分别在第10,15,20,25日和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定 , 对脑组织和肿瘤标本进行切片观察和HE染色. 结果 50只接种大鼠均有脑内肿瘤生长(100% ),远处和颅外转移率为0～4%. 结论成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型,接种后脑内肿瘤呈球状生长,很少出现颅外转移. 大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标.
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外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞增殖及相关基因表达的影响
目的:研究IL-18基因转染对C6胶质瘤细胞增殖活性及相关基因表达的影响. 方法:用流式细胞仪观察C6/IL-18细胞周期、增殖指数的变化;用RT-PCR,蛋白印迹、免疫细胞化学方法分析C6/IL-18细胞cyclin D1,cyclin B1,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达. 结果:与亲代C6细胞相比,C6/IL-18细胞表现为G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,细胞增殖指数(PI)降低. C6/IL-18细胞的cyclin D1和cyclin B1,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低. 结论: 外源性IL-18基因可降低C6细胞的增殖活性,其机制可能与Bcl-2,cyclin B1和cyclin D1表达下调有关.
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旁分泌形式作用的人AngiostatinK(1-3)抑制大鼠C6脑胶质瘤的研究
目的:研究人AK(1-3)[Angiostatin Kringle(1-3)]对大鼠C6脑胶质瘤的抑瘤效应.方法:利用基因转染的方法获得重组人AK(1-3)基因的C6胶质瘤细胞;以细胞增殖试验及免疫组化等方法检测转染细胞株是否表达了具有生物活性的人AK(1-3).正常大鼠C6脑胶质瘤模型作对照,研究转染细胞株在大鼠脑内的致瘤性.脑组织切片进行Ⅷ因子染色.结果:大鼠C6胶质瘤细胞稳定表达的人AK(1-3),在体外明显抑制牛主动脉内皮细胞的增殖;在体内明显抑制了大鼠C6脑胶质瘤的生长.试验组脑切片内仅见显微瘤灶,Ⅷ因子染色少见新生毛细血管.结论:旁分泌形式作用于大鼠C6脑胶质瘤内血管内皮细胞的人AK(1-3)可明显抑制肿瘤的血管生成,进而抑制肿瘤的生长和转移.
关键词： Angiostatin 旁分泌 C6胶质瘤细胞 基因疗法 -
125IUdR对大鼠胶质瘤细胞靶点放疗后的细胞凋亡研究
目的在建立C6/Wistar胶质瘤大鼠模型的基础上,研究125IUdR介导俄歇电子释放对大鼠C6胶质瘤DNA靶点放疗后的肿瘤细胞凋亡.方法建立C6/Wistar胶质瘤大鼠模型后,应用流式细胞仪检测研究C6胶质瘤细胞的增殖动力学指标.结果实验组肿瘤细胞的S期百分比与对照组相比显著降低(P＜0.001),G2+M期的细胞也随之减少,肿瘤细胞大量停滞在G0/G1期.实验组增殖指数明显低于对照组(P＜0.001),而凋亡指数则显著增加(P＜0.001).结论 125IUdR通过电离作用导致G1期细胞增殖阻滞及DNA断裂、诱导肿瘤细胞凋亡.
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125 IUdR对大鼠胶质瘤细胞靶点放疗的研究
目的在建立C6/Wistar胶质瘤大鼠模型的基础上,研究125IUdR介导俄歇电子释放对大鼠C6胶质瘤DNA靶点放疗的作用及其机制.方法将Wistar大鼠分为实验组(20只)、对照组(20只)和空白组(10只)3组,前两组再分为5日处死和生存分析两个亚组.实验组在肿瘤增殖高峰期于肿瘤接种原位分次注入125IUdR,0.2mCi/10μl/次;对照组同法注入等摩尔浓度的127IUdR、5.6uM/10μl次;空白组同法注入同量生理盐水,10μl/次.行免疫组化染色及核仁组织区银染检查,了解125IUdR和127IUdR治疗后C6胶质瘤细胞的增殖动力学改变.结果1.大体病理改变;治疗5d后,实验组大鼠肿瘤直径和重量均明显小于对照组(P＜0.05).2.HE染色:对照组坏死区增大,其他变化不明显,实验组C6肿瘤细胞的核分裂像计数减少,细胞坏死区增大较对照组更明显,肿瘤细胞的凋亡现象也更为多见.3.AgNOR染色;实验组AgNOR计数和面积均明显低于对照组(P＜0.01).4.免疫组化染色:实验组PCNA阳性表达低于对照组(P＜0.05).结论应用125IUdR内放射治疗肿瘤,可以有效的抑制肿瘤细胞的增殖,已成为肿瘤治疗的一种新途径.
