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原癌基因C-met和雌激素受体在子宫内膜癌中的表达及相关性的探讨
目的了解子宫内膜癌组织中原癌基因C-met和雌激素受体(ER)的表达状况,探讨内膜癌中C-met的表达与ER的关系.方法采用免疫组化SP法.结果判断采用组织化学记分(H值),H值≥70为阳性表达.结果宫内膜癌中C-met表达随手术-病理分期及组织学分级的增加而增强,ER的表达随着手术-病理分期及组织学分级的增加而减弱.C-met表达与ER呈负相关趋势(r=-0.5842,P<0.05).结论在子宫内膜癌中,C-met的表达与ER表达呈负相关,两者联合使用对宫内膜癌的激素治疗,预后判断等方面有重要意义.
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原癌基因C-met在子宫内膜癌中的表达的探讨
目的:本研究通过对子宫内膜腺癌及正常内膜组织中原癌基因C-met表达状况的检测探讨:正常内膜与内膜癌组织中C-met表达及内膜癌中C-met的表达与临床分期、组织学分级、肌层浸润、年龄、淋巴浸润的关系.研究方法:采用免疫组化SP法对55例子宫内膜腺癌及30例正常内膜组织中C-met表达状况进行检测.采用组织化学记分(H值).H值≥70为阳性表达.统计处理采用两样本均数t检验,多个样本均数间两两比较用q检验,偏态分布用秩和检验.结果:正常子宫内膜中,腺上皮有C-met表达,主要定位于细胞膜上,在细胞浆内也有表达,其表达的阳性及强度均较低.C-met在增生期内膜的表达明显强于分泌期宫内膜的表达,两者之间有统计学意义,P＜0.05.内膜癌C-met较正常子宫内膜有明显强的表达,两者之间有统计学意义,P＜0.05.宫内膜癌中C-met表达随组织学分级和手术-病理分期的增加而增强,P＜0.05;而与年龄、肌层浸润、淋巴浸润无关.结论:C-met对正常内膜细胞的增生、分化起重要的调节作用,同时C-met在宫内膜癌中的表达明显增高,推测对肿瘤的发展、预后有关.C-met可能成为判断宫内膜预后的重要指标之一.
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SF/HGF受体c-Met在人脑胶质瘤中的表达与肿瘤恶性表型及预后的关系
目的研究扩散因子(SF/HGF)的受体c-Met在胶质瘤中的表达及其与临床表现的关系,从蛋白、基因水平进一步揭示胶质瘤的生物学行为.方法应用免疫组化方法检测60例星形胶质细胞瘤中c-Met受体的表达情况,结合临床随访资料,用统计学方法分析其表达与临床因素的相关性及意义.结果 c-Met在正常脑组织及Ⅰ级星形胶质细胞瘤中无明显表达,随着胶质瘤恶性程度的增高其表达增强,其表达水平与胶质瘤恶性程度呈正相关;c-Met表达水平与胶质瘤患者预后呈负相关.结论在人脑胶质瘤中存在c-Met的表达,其恶性表型及侵袭特性与c-Met的表达水平密切相关,此表达水平随着胶质瘤恶性程度的增高而上调.c-Met的表达水平与胶质瘤患者预后之间存在负相关关系,是胶质细胞瘤患者预后的一个独立预测因素.
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Notchl和c-Met在结直肠癌中的表达及其与血管生成拟态和预后的关系
目的 探讨Notchl和c-Met在结直肠癌中的表达及其与生成拟态及预后的关系.方法 选择2005年5月～2010年5月我院病理科收集与保存的结直肠癌病理标本60份(观察组)与正常结直肠组织标本60份(对照组),都进行Notchl和c-Met蛋白表达的免疫组化分析,同时进行淋巴结转移、Dukes分期、分化类型、血管生成拟态与预后情况等一般资料调查.结果 Notchl和c-Met在观察组中的阳性表达率分别为83.3％和60.0％,在对照组中的阳性表达率分别为5.0％和6.7％,组间差异有统计学意义(P＜0.05).观察组中血管生成拟态阳性16例(26.7％);1年生存率为83.3％;Notchl和c-Met表达在结直肠癌组织的不同Dukes分期、分化程度与淋巴结转移组织中的阳性表达率对比,差异亦有统计学意义(均P＜0.05),Notchl和c-Met表达与结直肠癌组织的血管生成拟态及预后情况存在明显正向相关性(P＜0.05).结论 Notchl和c-Met在结直肠癌中呈现高表达,能反应结肠癌组织的Dukes分期、分化程度与淋巴结转移情况,也能影响血管生成拟态及预后状况,值得在临床上进行组化分析.
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结直肠癌中C-MET、COX-2、MSS、Ki-67的表达及其与预后的相关性分析
目的 分析C-MET、环氧合酶2(COX-2)、微卫星稳定(MSS)、Ki-67在结直肠癌组织中的表达及其与患者预后的相关性.方法 通过免疫组织化学方法检测106份结直肠癌组织及20份癌旁组织中C-MET、COX-2、MSS、Ki-67的表达.Spearman相关分析法分析MSS与C-MET、COX-2、Ki-67的关系,且通过Cox逐步回归分析影响预后的相关因素.结果 结直肠癌组织C-MET、COX-2、Ki-67阳性率及MSS比例均显著高于癌旁组织(P＜0.05);C-MET、COX-2、Ki-67阳性及MSS患者3年存活率均分别明显低于C-MET、COX-2、Ki-67阴性及非MSS患者(P＜0.05);相关性分析显示MSS与C-MET、COX-2、Ki-67表达水平均呈正相关(P＜0.05);Cox逐步回归分析显示C-MET、COX-2、MSS、Ki-67、TNM分期及淋巴结转移为影响患者3年生存率的危险因素.结论 C-MET、COX-2、MSS、Ki-67参与了结直肠癌发生、发展过程,其表达、TNM分期、淋巴结转移为影响患者预后的危险因素.
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靶向人c-Met蛋白单链抗体的制备及其对肺腺癌A549细胞的杀伤作用
目的 制备并纯化出靶向细胞间质上皮转化因子(c-Met)蛋白的人源单链抗体(scFv),鉴定其靶向c-Met蛋白的特性及其对肺腺癌细胞的作用.方法 将scFv基因插入至pFuse载体构建真核表达载体,表达融合鼠源Fc段的融合蛋白Met-scFv,经AKTA蛋白纯化系统纯化;将纯化的Met-scFv进行功能性检测:ELISA检测Met-scFv亲和力;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色检测Met-scFv识别并结合肺腺癌细胞的特性;CCK-8法检测Met-scFv对细胞增殖的影响;通过补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC),用乳酸脱氢酶(LDH)释放试剂盒检测Met-scFv对靶细胞A549细胞的毒性影响.结果 ELISA结果提示,Met-scFv与c-Met呈量效关系;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色实验结果提示,与对照组相比,Met-scFv组信号呈阳性,提示Met-scFv与A549细胞特异性结合;Met-scFv抑制A549细胞增殖并产生细胞毒性,且毒性大小与Met-scFv剂量呈正相关.结论 制备出靶向c-Met蛋白的Met-scFv,并可在体外识别并介导杀伤A549细胞.
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抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测
目的 用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测.方法 设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1 D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性.结果 感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链(Knob)三条带.且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性.结论 成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体.
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肝细胞生长因子及其受体在肿瘤中的研究进展
肝细胞生长因子是一种多肽生长因子,与其受体结合后,具有强促分裂、组织成形、诱导肿瘤细胞迁移、侵袭以及诱导血管生成等作用.肝细胞生长因子受体c-Met广泛存在于多种正常组织细胞和体内外恶性肿瘤细胞内,肝细胞生长因子与其受体和肿瘤的发生、发展以及肿瘤新生血管形成有密切关系.
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c-Met靶向成像在肿瘤诊断中的应用
肝细胞生长因子受体(c-Met)是一种酪氨酸激酶型受体,对于肿瘤的发生发展至关重要,c-Met靶向治疗已初步应用于临床,其对于癌症患者的治疗具有显著的益处.目前,由于无法对c-Met表达阳性的肿瘤患者进行有效的早期筛选,使得c-Met靶向治疗在肿瘤治疗中总体有效率偏低.c-Met靶向分子成像借助靶向分子成像探针能够实现肿瘤c-Met表达水平及活化状态的定量检测和直观揭示,对于肿瘤的早期诊断、治疗和预后具有重要意义和巨大的潜在价值.结合近年来c-Met靶向分子成像的研究,本文将深入分析、探讨c-Met靶向分子成像探针的构建及其在肿瘤诊断中的应用.
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c-Met及Notch-1对非小细胞肺癌患者预后的影响
目的:通过检测c-Met及Notch-1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)手术切除患者中的表达,探究其对患者预后的影响.方法:应用免疫组化方法检测收集到的106例NSCLC石蜡标本中c-Met和Notch-1的表达情况,分析c-Met和Notch-1表达与患者预后之间的关系.结果:c-Met表达与N分期、pTNM分期相关,Notch-1表达与N分期相关.c-Met和Notch-1阳性表达的患者均较阴性表达患者预后差(P<0.001).相关分析显示,c-Met与Notch-1正相关(P<0.001).c-Met与Notch-1联合分析发现,双阳性组患者预后差,单阳性组其次,双阴性组佳(P<0.001).COX单因素分析发现,c-Met、Notch-1、T分期、N分期、pTNM分期是预后的风险因素.进一步COX多因素分析,结果显示c-Met表达为预后的独立风险因素(P<0.001),而Notch-1表达与预后无关(P=0.732).结论:c-Met及Notch-1联合检测可更精确的预测NSCLC患者预后风险.
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血清中CD44v5及c-met检测对食管鳞癌高危人群的筛检价值
目的:检测食管鳞癌患者CD44v5及c-met表达情况,并分析其在癌组织及癌旁组织的表达差异;探讨采用ELISA法检测两者在血清中含量用于食管鳞癌筛检的价值.方法:采用RT-PCR技术和Western-Blot法分别检测CD44v5及c-met基因在食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达;并采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定CD44v5及c-met蛋白在100例食管鳞癌患者及60例健康体检者血清的含量.结果: CD44v5、c-met mRNA在食管鳞癌组织中IA值(0.737±0.116,0.748±0.122)高于相应癌旁食管组织(0.140±0.065,0.147±0.064),差异均具有统计学意义(P<0.01);CD44v5及c-met蛋白相对表达量在癌组织(1.099±0.230,1.054±0.227)中亦高于相应癌旁组织(0.265±0.105,0.245±0.097)(P<0.01);CD44v5蛋白在食管鳞癌患者血清中的含量[(31.308±10.123) μg/L]高于健康体检者[(19.364±1.680) μg/L],差异具有统计学意义(P<0.01),c-met蛋白在食管鳞癌患者血清中的含量[(101.183±15.335) μg/L]亦高于健康体检者[(56.165±8.979) μg/L](P<0.01).CD44v5与c-met在食管鳞癌患者血清中的含量具有相关性(r=0.880,P<0.01).ELISA法检测CD44v5、c-met、二者并联及串联诊断食管鳞癌的ROC曲线下面积分别为0.865、1.000、0.800及0.950,灵敏度分别为91.0%、99.0%、100.0%、90.0%,特异度分别为60.0%、100.0%、60.0%、100.0%.结论:CD44v5与c-met的高表达与食管鳞癌的发生有关,二者具有相关性;ELISA法检测血清中c-met蛋白含量,并联合CD44v5蛋白检测,或许有助于在食管鳞癌高发地区对高危人群进行大规模筛检.
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上调miR-34b表达可增强HCC827细胞对埃克替尼的敏感性
目的:探讨上调miR-34b的表达对HCC827细胞对埃克替尼敏感性的影响及其机制.方法:应用细胞转染技术获得miR-34b高表达的HCC827细胞,并将HCC827细胞分为空白对照组、转染组、埃克替尼组及埃克替尼与转染联合组,采用MTT法测定各组细胞增殖的情况,运用流式细胞术分析各组细胞凋亡率及生长周期的变化,同时应用Real-time PCR及Western Blot方法检测各组c-MET基因mRNA及蛋白的表达水平.结果:miR-34b转染后,HCC827细胞的增殖能力下降,凋亡率升高(P<0.05);miR-34b转染后,埃克替尼对HCC827细胞的抑制率较埃克替尼组明显上升,半数抑制浓度(IC50)明显下降(P<0.05);转染组及埃克替尼与转染联合组的c-MET水平较对照组有所下降(P<0.05).结论:上调miR-34b表达可以抑制HCC827细胞增殖,促进其凋亡,并可以增强HCC827细胞对盐酸埃克替尼的敏感性;其机制可能与miR-34b反馈抑制c-MET有关.
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c-Met在人非小细胞肺癌A549细胞系中表达活性与放疗抵抗的关系
目的:探讨c-Met对A549人非小细胞肺癌细胞系的放疗抵抗作用及发生机制.方法:采用人肺癌细胞系A549体外培养作为研究对象.将经不同浓度c-Met抑制剂处理后的A549细胞经或不经X线照射,用Western blot法检测c-Met及c-Src蛋白磷酸化形式表达水平,观察不同浓度c-Met抑制剂对c-Met和c-Src蛋白活性的抑制作用,同时用MTT法检测不同处理组细胞增殖抑制情况,流式细胞仪(FCM)检测不同处理组的细胞凋亡情况.结果:X线照射可使A549细胞系c-Met及c-Src磷酸化水平升高(P＜0.05),经或不经X线照射c-Met抑制剂(PHA665752)均可使c-Met及c-Src磷酸化水平降低,即有效抑制其蛋白活性表达(P＜0.05).MTT法及流式细胞法检测结果显示c-Met蛋白活性表达得到有效抑制后,A549细胞经X线照射后增殖抑制率及凋亡率较单纯放疗时明显增高(P＜0.05).结论:X线照射后c-Met信号通路活化使A549人非小细胞肺癌细胞系产生放疗抵抗,c-Src可能位于c-Met信号通路下游共同参与放疗抵抗,有效抑制c-Met蛋白活性表达可提高A549细胞放疗敏感性,其机制与抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡有关.
关键词： 非小细胞肺癌(NSCLC) c-met c-Src 放疗抵抗 -
c-Met蛋白在CCL5诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中的作用
目的:探讨c-Met蛋白在CC型趋化因子5(CCL5)诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中的作用.方法:Western-Blot检测乳腺癌MDA-MB-231细胞表面CCL5受体(CCR5)的表达情况;Transwell法检测CCL5诱导的MDA-MB-231细胞迁移能力的变化;Western-Blot检测CCL5刺激后MDA-MB-231细胞c-Met及磷酸化c-Met(p-Met)的表达.结果:乳腺癌MDA-MB-231细胞表面高表达CCR5蛋白;CCL5增强MDA-MB-231细胞的迁移能力,沉默CCR5基因后抑制了CCR5蛋白表达,MDA-MB-231细胞迁移能力降低;MDA-MB-231细胞表达的p-Met水平在CCL5刺激10 min后明显升高.结论:CCL5/CCR5信号通路可以促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移能力,c-Met蛋白参与CCL5诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移.
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幽门螺杆菌感染的胃粘膜病变中c-met、PCNA与CD44v6间关系研究
目的研究幽门螺杆菌(HP)感染后胃粘膜病变中c-met基因蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)及CD44v6的表达及三者间关系.方法采用免疫组化法检测经病理证实的114例不同胃粘膜病变c-met、PC NA、CD44v6基因表达;快速脲酶法和W-S法检测HP感染.结果 HP阳性与HP阴性相比较c-met,PCNA与CD44v6均有显著升高.HP 感染的胃粘膜病中,c-met基因蛋白与CD44v6的表达之间有显著正相关,PCNA与CD44v6之间也有显著正相关且与胃粘膜增殖程度有关.结论 HP感染促进了胃粘膜病变的发生发展过程,且促进了胃粘膜癌前病变向癌转变过程中相关癌基因的表达.HP感染使相关癌基因之间具有了一定的相关性.
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甲状腺乳头状癌中c-met和c-src的表达与临床病理特征的关系
目的:探讨c-met和c-src在甲状腺乳头状癌(thyroid papillary cancer,TPC)中的表达及其相关性与临床病理特征的关系.方法:免疫组化SP法检测80例甲状腺乳头状癌和38例良性病变切除标本中c-met和c-src的表达,并分析表达情况与临床病理特征之间的关系.结果:c-met和c-src在TPC中的表达阳性率分别为96.3％和63.8％,与在甲状腺良性病变组织中表达有显著差异(P＜0.01).c-met在TPC组织中的表达与患者年龄相关(P＜0.05).c-src在TPC组织中的表达与肿瘤大小和淋巴结转移相关(P＜0.01).TPC中c-src和c-met的表达呈正相关(r=0.698,P＜0.01).结论:c-src和c-met的异常表达在TPC的发生、发展中具有重要意义,并且c-src可为TPC的淋巴结转移提供依据.
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MACC1和C-met蛋白在食管癌中的表达及意义
目的：观察结肠癌转移相关基因（ MACC1）和肝细胞生长因子受体（ C-met）蛋白在食管癌中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学EnVinsion法检测88例食管癌组织中MACC1和C-met蛋白的表达情况，分析两者与食管癌病理分级、临床分期的关系及两者在食管癌组织中表达的相关性。结果：MACC1和C-met在食管癌组织中的阳性率分别为88.64%和75.00%。在食管癌中MACC1和C-met蛋白高表达与临床分级、分期显著相关（ P＜0.001）。进一步分析显示食管癌组织中MACC1和C-met蛋白表达具有相关性。结论：食管癌组织中MACC1、C-met及其蛋白表达水平增高，C-met通路的激活和MACC1过表达可能与食管癌的发生、发展有关，MACC1和C-met具有作为食管癌分子标志物的潜在价值。
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miR-27 b通过c-MET抑制胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移
目的：找出调控胃癌细胞c-MET的miRNA，研究该miRNA能否通过c-MET抑制胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移。方法：预测软件筛选出可能调节胃癌c-MET的miRNA。荧光定量PCR检测胃癌细胞株（N87、MKN45、AGS）及正常胃黏膜细胞（GES1）中该miRNA的表达水平。过表达miRNA后检测胃癌细胞株AGS中c-MET的表达水平，选择对c-MET抑制强的miRNA行双荧光素酶实验。平板克隆及Tran-swell实验检测过表达该miRNA后胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移能力，过表达c-MET后再次检测胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移能力。结果：预测软件显示miR-34a、miR-27b及miR-31可能调节胃癌c-MET表达。miR-34a、miR-27b及miR-31在胃癌细胞株中表达较正常胃黏膜明显降低（ p<0.05）。West-ern bolt显示miR-27b对c-MET的抑制能力强。双荧光素酶实验同样证实了c-MET是miR-27b的直接作用靶点。平板克隆及Transwell实验显示过表达miR-27b能抑制胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移能力，而过表达c-MET后能恢复胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移能力。结论：miR-27b能作用于c-MET 3′UTR端从而抑制c-MET的表达，并能通过c-MET抑制胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移。
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C-Met抑制剂对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用
目的:探讨C-Met抑制剂K252a对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用.方法:取原代培养人晶状体上皮细胞加入HGF、HGF+K252a,以DMEM为对照,应用四唑盐法(MTT法)观察K252a对晶状体上皮细胞生长的抑制作用,蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测K252a对Bcl-2,Caspase-3蛋白表达的影响.结果:HGF(50nmol/L)+K252a(30nmol/L)组与对照组光密度值无显著差异(P＞0.05),Bcl-2和Caspase-3的表达水平变化都不明显.结论:c-Met抑制剂K252a对人晶状体上皮细胞增殖有抑制作用.
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肝细胞生长因子对口腔鳞癌裸鼠移植瘤的作用及其机制研究
目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对人口腔鳞癌裸鼠移植瘤的作用及其机制.方法:对36只裸鼠皮下接种Tca8113细胞悬液,将32只成瘤鼠随机分为阴性对照组(n=8)、PBS组、HGF 20 ng组、HGF 40 ng组和HGF 100 ng组(n=6),瘤内分别给予不做处理、注射同体积的PBS液、注射HGF 20 ng、HGF 40 ng、HGF 100 ng.经过连续5 d的注射后,测量各组裸鼠肿瘤体积、重量及破溃情况,采用免疫组化染色观察不同剂量HGF对荷瘤裸鼠肿瘤HGF、c-Met及VEGF-C的表达的影响.结果:成功建立口腔鳞癌裸鼠移植瘤模型.分组后各组荷瘤裸鼠体重差异无统计学意义(P>0.05),HGF处理后肿瘤体积、瘤重及肿瘤破溃情况差异无统计学意义(P>0.05).免疫组化显示,与阴性对照组和PBS组相比,荷瘤裸鼠肿瘤HGF、c-Met的表达在HGF 40 ng组和HGF 100 ng组明显增高(P<0.05);荷瘤裸鼠肿瘤VEGF-C的表达在HGF40 ng组多,与阴性对照组及PBS组相比(P<0.05).结论:HGF参与口腔鳞癌肿瘤的生长及破溃,可能通过调控c-Met及VEGF-C的表达起作用.
关键词： 肝细胞生长因子(HGF) 口腔鳞癌 裸鼠 c-met VEGF-C
