利用液相色谱对原粮的真菌毒素检测——HPLC法测定玉米赤霉烯酮

真菌毒素是一种真菌产生的有毒代谢产物.常见的污染粮食的真菌毒素包括:玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEN)、赭曲霉毒素A(ochratoxin A, OTA)、黄曲霉毒素B1(aflatoxins, AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)以及T-2毒素等.根据大量研究文献及实验室的长期监测数据,出现很多粮食中同时遭到多种真菌毒素污染的情况.

粮食及其制品中真菌毒素的检测方法

真菌毒素是真菌产生的有毒次级代谢物，它广泛存在于粮油食品和饲料中，对人类和动物有害。一种真菌可能产生多种毒素，多种真菌可能产生同一种毒素。通常粮食或饲料中的真菌毒素并非单独存在，可能以一种或数种毒素为主，当不同毒素同时存在时，真菌毒素的毒性有累加效应（如黄曲霉毒素和赭曲霉毒素、呕吐毒素和玉米赤霉烯酮等），但并非是相加或相乘的关系。真菌毒素的毒性变化很大，它取决于毒素的种类、数量、摄入量、持续摄入时间、环境因素（包括环境卫生、空气质量、温度、湿度）等。目前，全世界已经发现了400多种结构不同的真菌毒素，其中已经被分离鉴定的有20多种，危害较大的主要有黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、赭曲霉毒素A、伏马毒素和T2/HT2毒素等。其中，黄曲霉毒素是天然物中致癌性强的毒素，被世界卫生组织（W H O）的癌症研究机构划定为1类致癌物，也是世界各地农产品及食品中易受其污染的一种真菌毒素。据联合国粮农组织估计，全世界谷物供应的25%受真菌毒素污染，这些真菌毒素会通过被污染的谷物、饲料和由这些饲料喂养的动物所提供的动物性食品进入人们的食物链，从而对人畜表现出致癌性、遗传毒性和致畸性。目前，全世界已有100个国家规定了粮食中主要真菌毒素的限量，我国GB 2761-2011也明确规定了食品中真菌毒素的限量。因此，准确检测真菌毒素含量的技术手段变得极为重要。

石家庄市131株食源性蜡样芽胞杆菌毒力基因的分布

目的 研究石家庄市食源性蜡样芽胞杆菌毒力基因的分布及毒力活性,了解蜡样芽胞杆菌的潜在威胁.方法 采用PCR方法,对食品风险监测中分离到的131株蜡样芽胞杆菌进行肠毒素、呕吐毒素9种毒力基因扩增检测,用血平板检测的方法分析蜡样芽胞杆菌的毒力.结果 毒力基因携带率较高,至少携带一个毒力基因的菌株达到检出菌总数的99.2％(130/131),溶血素BL基因(hblACD)和肠毒素FM基因(entFM)是石家庄市食源性蜡样芽胞杆菌的主要毒力基因;检出的蜡样芽胞杆菌均产生溶血素BL,检出率为100％.结论 腹泻型肠毒素在食品中的分布比较广泛,检出的蜡样芽胞杆菌均具有溶血素,对进食者存在潜在的危险性,今后应加强监控蜡样芽胞杆菌的污染,预防和控制蜡样芽胞杆菌食源性疾病的发生.

2012-2014年江西省市售婴幼儿配方食品中蜡样芽胞杆菌调查及呕吐毒素基因分析

目的 了解2012-2014年江西省市售婴幼儿配方食品中蜡样芽胞杆菌的污染情况并对呕吐毒素基因进行分析.方法 在全省市县中选取13个采样点,包括超市、百货商场、便利店、农贸市场、网店、批发市场,随机抽取婴幼儿配方食品397份,对蜡样芽胞杆菌进行检测和鉴定,同时应用叠氮溴化丙锭内参多重PCR方法检测分离株的呕吐毒素基因.结果397份食品中蜡样芽胞杆菌阳性率为13.10％ (52/397),其中2013年阳性率高.不同采样点的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),不同产地、不同流通环节和不同年龄段的阳性率差异无统计学意义(P＞0.05),52份阳性食品中检出呕吐型蜡样芽胞杆菌2份,呕吐毒素阳性率为3.85％.结论 江西省市售婴幼儿配方食品中存在蜡样芽胞杆菌及呕吐型蜡样芽胞杆菌的污染,存在一定的安全隐患,相关监管部门应继续加强监管,预防食源性疾病的发生.

婴幼儿奶粉和米粉中蜡样芽胞杆菌及其毒素、毒力基因的调查研究

目的 了解婴幼儿奶粉及米粉中蜡样芽胞杆菌污染状况及其毒素、毒力基因的携带特点.方法 采用稀释培养计数(MPN计数)法分离蜡样芽胞杆菌,采用PCR技术检测10种蜡样芽胞杆菌的腹泻毒素及呕吐毒素基因,在流动相A为0.1％甲酸-乙腈溶液,流动相B为0.1％甲酸-0.2 mmol/L乙酸铵溶液条件下,用Acquity BEH300C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)对样品进行分离,采用超高效液相色谱-串联质谱法检测样品中的呕吐毒素(cereulide).结果 本研究共监测39份样品,28份检出蜡样芽胞杆菌,检出率为71.79％ (28/39);2份检出呕吐毒素,检出率为5.13％ (2/39).检出的蜡样芽胞杆菌菌株大多属于携带复合型毒素的菌株,均携带3种以上的腹泻毒素基因,非溶血性的肠毒素nhe基因(nheA、nheB和nheC)和肠毒素FM基因(entFM)为主要的毒力基因,其中nheABC基因携带率为100％,entFM基因携带率为35.71％ (10/28),cytK基因是检测到的少的一种毒力基因.结论 应加强婴幼儿奶粉及米粉中的蜡样芽胞杆菌污染监测及其毒力基因致病性研究,以科学评估蜡样芽胞杆菌对婴幼儿食品可能构成的食品安全风险.

卫生部办公厅关于小麦和麦麸中呕吐毒素限量标准相关问题的复函

大骨节病病区粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和硒元素检测报告

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)又称呕吐毒素(vomitoxin,VT),属单端孢霉烯族毒素,由镰刀菌(fusarium)产生[1].DON是全球性的、常见的谷物真菌毒素污染物,广泛存在于粮食和动物饲料中,且难以降解,因此容易进入食物链引起人畜急慢性中毒[2].

液相色谱-质谱测定小麦中B类单端孢霉烯族毒素

单端孢霉烯族毒素包含有200余种化合物,是镰刀菌毒素中非常重要的一类.脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物属于单端孢霉烯族B类,基本结构为四环的倍半萜,以C8位上的羰基为特征.脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)又称呕吐毒素,化学名称为3α,7α,15-三羟基草镰孢菌-9-烯-8-酮,它对谷物污染率和污染水平居于镰刀菌毒素之首,给人、家畜的健康造成巨大威胁.其明显的毒性作用是引起呕吐、腹泻、腹痛等症,并延缓生长、降低免疫机能.雪腐镰刀菌烯醇(nivalenol,NIV)化学名称为3α,4β,7α,15-四羟基-12,13-环氧单端孢烯-9-烯-8-酮,其污染率和毒性相对较低,但也广泛存在于农作物中.DON、NIV的结构式见图1.

呕吐毒素对小鼠精液质量和生育力的影响

目的 探讨呕吐毒素即脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)染毒对小鼠精液质量和生育力的影响.方法 将40只2～3月龄健康清洁级昆明雄性小鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和10、30、50 mg/kg DON染毒组,每组10只.采用腹腔注射方式进行染毒,染毒容量为10 ml/kg,每天1次,连续染毒7d.与未染毒的雌性小鼠合笼(雌雄比为2∶1);于妊娠15d时,检测雄性小鼠精液质量和雌性小鼠生育力的变化情况.结果 与对照组比较,各剂量DON染毒组小鼠的精子畸形率升高,而精子存活率和顶体完整率降低,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);且随着DON染毒剂量的升高,小鼠的精子存活率和顶体完整率均呈下降趋势,而精子畸形率呈上升趋势.与对照组比较,各剂量DON染毒组小鼠睾丸总精子数和精子日生成量以及20和30 mg/kg DON染毒组小鼠的附睾尾总精子数均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且随着DON染毒剂量的升高,小鼠的总精子数、精子日生成量和附睾尾总精子数均呈下降趋势.与对照组比较,各剂量DON染毒小鼠可使交配母鼠的妊娠率、着床胚胎数、活胎数降低,而妊娠流产率升高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且随着DON染毒剂量的升高,与各剂量DON染毒小鼠交配母鼠的妊娠率、着床胚胎数、活胎数均呈下降趋势,而妊娠流产率呈上升趋势.结论 DON染毒可降低雄性小鼠精液质量和生育力.

L-精氨酸对缓解呕吐毒素刺激大鼠损伤作用的研究

目的 探讨补充精氨酸对低剂量呕吐毒素应激损伤的保护作用.方法 30只雄性SD大鼠随机分为空白对照组,1.0mg/kg bw呕吐毒素应激组和应激补充350 mg/kg bw精氨酸组.以观察精氨酸对呕吐毒素应激大鼠摄食与生长情况、脏器指数和血液各项指标的影响.结果 在21d的试验期内,精氨酸能改善呕吐毒素应激造成的日增重下降,胸腺萎缩以及血清谷草转氨酶和丙二醛浓度升高的状态,达显著水平.结论 精氨酸具有的营养及免疫调节双重作用,能在一定程度上缓解呕吐毒素应激损伤.

广州地区面粉及其加工食品中呕吐毒素的污染状况调查

目的 了解广州地区面粉及其加工食品中呕吐毒素(DON)的污染状况,为相关部门进行食品安全监管,制定相关的卫生法规、标准提供参考依据.方法 建立测定食品中DON的超高效液相色谱串联质谱法,在广州市农贸市场和超市对面粉及其加工食品进行采样检测.结果 检测100份样品,DON总检出率为71.0％,平均含量为49.5 μg/kg.结论 广州市面粉及其加工食品中DON整体污染程度较低,但污染范围广.

谷氨酰胺对缓解呕吐毒素刺激大鼠损伤作用的研究

目的:为探讨补充谷氨酰胺(Gln)对呕吐毒素应激损伤的保护作用.方法:将40只大鼠随机分为正常对照组(NC组),呕吐毒素模型组(DC组),低剂量(153.32mg/kg)Gln组(LG组)和高剂量(306.64mg/kg)G1n组(HG组).观察Gln对呕吐毒素应激大鼠摄食与生长情况、器官指数和血液生化指标的影响.结果:在21d的试验期内,HG能显著缓解呕吐毒素造成的肝增生和胸腺萎缩现象,降低转氨酶水平(P＜0.05).对清除丙二醛(MDA)损伤,改善lgM分泌抑制,提高ALB浓度也有一定的作用.除了对胰岛素样生长因子(IGF-1)的分泌调节,高剂量Gln组作用效果均优于低剂量Gln组.结论:Gln具有营养和免疫调节双重作用,特别是其在保护肝功能的突出效果,在一定程度上具有缓解呕吐毒素应激损伤的疗效.

HPLC法测定粮谷中的呕吐毒素

目的:建立粮谷中呕吐毒素的HPLC的检测方法.方法:样品经提取、过免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-紫外检测器进行分析.结果:呕吐毒素在2～100 ng范围内线性关系良好,＞0.999.回收率在80%～110%之间,定量限为2 ng,检测限为0.5 ng.结论:该方法快速、简便、准确,可作为粮谷中呕吐毒素定量测定的有效手段.

LC-MS-MS法测定4种中药中的呕吐毒素

目的：建立酸枣仁、淡豆豉、薏苡仁、补骨脂等4种中药中呕吐毒素的高效液相色谱-串联三重四极杆质谱( LC-MS-MS)测定方法。方法：样品经水提取、免疫亲和柱净化后,用LC-MS-MS法进行分析测定。结果：呕吐毒素在2~50 ng·ml-1范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,r>0.999,加样回收率在68.7%~88.3%之间。结论：本法简便快速、灵敏度高、结果准确,可用于酸枣仁等4种中药中呕吐毒素的测定分析。

高效液相色谱-串联质谱法测定谷物中呕吐毒素及其衍生物

目的 建立同位素稀释-高效液相色谱-串联质谱法测定谷物中呕吐毒素及其衍生物残留量的方法.方法 样品经(86+ 14,v/v)乙腈水超声提取,HLB小柱净化,经C18色谱柱分离后,在质谱负离子多反应监测模式下测定.结果 DON和3-ADON在2.0～500 μg/L,15-ADON在10.0～1 000 μg/L时,具有良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.9990.DON及其衍生物的LOD在0.10～ 1.6 μg/kg之间,LOQ在0.35～6.0μg/kg之间,加标回收率范围为80.3％～115.4％,相对标准偏差(RSD,n=6)在5.1％～ 14.6％之间.结论 该方法快速简便,定量准确,可满足谷物中呕吐毒素及其衍生物的残留检测要求.

化学发光酶免疫分析法检测食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

[目的]建立检测食品中脱氧雪腐(慷)刀菌烯醇(DON)快速灵敏化学发光酶免疫方法.[方法]采用棋盘(滷)有定法确定化学发光检测DON佳工作条件(抗原包被浓度、包被量、一抗和二抗时工作浓度、线性范围和检出限等),建立化学发光检测DON的方法并对实际样品进行检测,同时将检测结果与LC-MS/MS结果进行对比.[结果]经多次实验,化学发光检测DON的工作条件为:DON-BSA佳包被浓度为0.1 μg/ml,包被量卉100 μl/孔,抗DON单克隆抗体的佳工作浓度为1∶10000,标准曲线线性范围5-200ng/ml,50％抑制浓度为1.02 ng/ml,DON的量低检出浓度为0.05ng/ml,样品中DON的低检出量为1μg/kg,在100-2000μg/kg添加水平的回收率范围为81％～125％.用所建方法对23个食品样品进行了分析,检测结果与LC-MS/MS结果高度相关(r2=0.98).[结论]所建方法准确、灵敏,适用于食品中DON污染水平的批量筛选.

抗呕吐毒素多克隆抗体的制备、纯化及鉴定

目的:制备呕吐毒素(DON)的多克隆抗体,并对抗体效价、特异性和抑制率进行鉴定.方法:采用EDC法合成了呕吐毒素的完全抗原DON-BSA,并通过免疫新西兰大白兔,得到呕吐毒素的多克隆抗体.结果:ELISA检测出多抗中含有呕吐毒素的特异性抗体,其效价高为12 800,其抑制率为50%时,DON的浓度为10 mg/L,DON的低检测浓度为0.1 mg/L.与结构类似物T-2毒素和NIV的交叉率分别为9.1%和4.9%.结论:呕吐毒素经过衍生化后制备出完全抗原,经免疫新西兰大白兔后得到的多克隆抗体可以完全满足ELISA检测的需要.

大豆加工食品中呕吐毒素污染水平调查与分析

建立了酱油和豆腐乳中呕吐毒素免疫学检测的前处理方法,并首次调查了市场上酱油、豆腐乳、豆腐和大豆中呕吐毒素的污染水平,分析并证实了豆腐乳中呕吐毒素的污染主要来自原料豆腐(源头仍是大豆)而不是生产加工过程,酱油中呕吐毒素污染主要来自原料大豆.因此对大豆加工食品中呕吐毒素的污染控制,重点应放在原料大豆.

出入境粮谷中呕吐毒素检测方法的研究

建立了两种采用免疫亲和净化及固相萃取净化结合高效液相色谱法测定粮谷中呕吐毒素的新方法.方法的检测限为0.1 mg/kg,相对标准偏差8.40%～9.79%,回收率80.0%～95.0%.方法简便快速、灵敏准确,满足出入境检验工作的要求.

喝普洱茶会不会致癌

普洱茶有没有黄曲霉毒素分析一下争论双方对普洱茶中是否含有黄曲霉毒素的依据,可以判断其结论是否合理.正方:普洱茶普遍含有黄曲霉毒素正方认为:“市场上普洱茶普遍含有黄曲霉毒素和其他真菌毒素,有的含量还非常高.”依据是:在国际和国内的期刊论文中,查到普洱茶检出黄曲霉毒素的论文.其中,广州市疾病预防控制中心、南昌大学、深圳市疾病预防控制中心等相关人员发表的3篇论文中,分别报道了抽查广州市场、南昌市场和深圳市场上的湿仓普洱茶共计190份,140份检出黄曲霉毒素,占比73.7％,有的还检出伏马毒素和呕吐毒素;云南农业大学、中国农科院油料作物研究所等相关人员发表的4篇论文中,分别抽查了市场上的普洱茶共计185份,45份检出黄曲霉毒素,占比24.3％.依据这些检测结果,并以普洱茶生产、储存无法保证不会污染有害真菌为由,该方认为,市场上普洱茶普遍合有黄曲霉毒素和其他真菌毒素,有的含量还非常高.