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脑血管狭窄患者Nf1全基因的DHPLC分析(附5例报告)
目的 探讨脑血管狭窄患者Nf1基因的突变热点及突变方式.方法 从全血中提取DNA,采用变性高效液相色谱分析(DHPLC)对5例脑血管狭窄病例进行Nf1全基因突变筛查;对DHPLC检测有差异洗脱峰型的区域进行测序分析.结果 5例无危险因素的脑血管狭窄患者Nf1全基因筛查发现:①1例出现5号外显子无义突变位点,c.541C-T;②5例均有14号和15号外显子之间内含子的基因突变;③4例有7号外显子c.702G-A的同义突变位点;④1例出现32号(c.4177G-A,Val-Ile)和46号外显子(c.6918T-G,Asn-Lys)的错义突变.结论 在目前无其他基础疾病的脑血管狭窄患者体内的Nf1基因并非以稳定野生型存在,而是具有不同类型的突变,这些突变集中在第5、7、14、32和46等外显子上.
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NF1～180mut表达载体构建及其在脑血管细胞中的表达
目的前期研究中发现一合并脑血管狭窄的Ⅰ型神经纤维瘤病家系,为探索血管狭窄的病因,本研究构建该家系患者NF1基因共同突变产物NF1 ～ 180mut的过表达质粒,观察该质粒在脑血管细胞中的表达.方法设计NF1 ～ 180mut全长序列的相应引物,采用pEGFP-N1作为载体框架,构建pEGFP-N1/NF1 ～ 180mut表达载体,通过Western blot法及共聚焦检测其蛋白表达;之后采用脂质体转染重组质粒于脑血管平滑肌细胞或内皮细胞中观察NF1 ～ 180mut在两种脑血管细胞中的表达.结果①成功构建了NF1 ～ 180mut表达载体;②该表达载体可在脑血管内皮细胞及平滑肌细胞内表达;③初步通过细胞计数研究及增殖实验显示NF1 ～ 180mut对脑血管平滑肌细胞和血管内皮细胞的生长及增殖有一定的作用.结论 本研究中构建了NF1-Q181X突变后的产物NF1～ 180mut表达载体,为进一步深入研究NF1 ～ 180mut导致脑血管狭窄发生的通路提供了良好的体外研究工具.
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神经纤维瘤肿瘤抑制基因的研究
Ⅰ型神经纤维瘤病(neurofibromatosis type 1,NF1)是一种常染色体显性遗传病,发病率为1/3 500.Nf1基因突变导致Ⅰ型神经纤维瘤病,因此Nf1基因为肿瘤抑制基因,表达产物neurofibromin为肿瘤抑制蛋白.导致NF1疾病发生的一个重要机制是C→U RNA编辑.
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Ⅰ型神经纤维瘤病遗传学发病机制的研究进展
Ⅰ型神经纤维瘤病(neurofibromatosistype 1,NF1)是起源于神经嵴发育异常的常染色体显性遗传病,国外的患病率为1/3 500,其新发突变率高,大约有30%～50%为散发病例.致病基因NF1基因定位于17q11.2,表达的产物为神经纤维蛋白,又称NF1蛋白.其临床表现主要为神经系统以及皮肤组织等的损害.对其遗传学发病机制的研究将对我们今后的基因及药物治疗提供重要的理论依据.
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NF1基因突变致1型神经纤维瘤病8例临床分析
目的：了解1型神经纤维瘤病（NF）的临床表型特征及异质性。方法回顾分析8例NF患儿的临床及基因检测资料。结果8例患儿中男5例、女3例，均因生后多发牛奶咖啡斑就诊，2例伴丛状神经纤维瘤，1例伴多处皮肤神经纤维瘤。8例患儿有7种突变形式，NF1基因全部缺失2例；4种缺失突变，分别为c.4974_4977delCTAT, p.Y1659TfsX17、c.3987_3988delAG, p.S1329fsX4、c.1511delC, p.P504QfsX22和c.6388delC, p.L2130fsX3；1种c.3975-2delA剪切突变；1种c.3721C＞ T, p.R1241X无义突变。除全基因大片段缺失和无义突变之外，其余均为未报道的新突变。患儿父母外周血均未检测出相应的突变。结论NF1基因突变可致1型NF，此研究发现5种新的突变，且均为de novo突变。多发牛奶咖啡斑是1型NF早的临床表现，对疑似患者应尽早行基因分析确诊。
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1型神经纤维瘤病合并阴蒂肥大1例报告
目的 探讨1型神经纤维瘤病(NF1)的临床表现、诊断和治疗.方法 回顾分析1例利用高通量测序技术确诊的合并阴蒂肥大的1型神经纤维瘤病患儿的临床资料,并复习相关文献.结果 女性患儿,生后即发现牛奶咖啡斑伴阴蒂肥大.NF1基因检测结果c,655-7-655-2delTTTATA,为新发突变,有致病性.结论 NF1同时合并外生殖器异常者临床罕见.NF早期临床诊断困难,对疑似病例应尽早行基因检测确诊.
关键词： 1型神经纤维瘤病 阴蒂肥大 先天性肾上腺皮质增生症 Nf1基因 -
Ⅰ型神经纤维瘤病分子遗传学研究进展
Ⅰ型神经纤维瘤病(neurofibromatosis,NF1)又称Recklinghausen病或周围神经纤维瘤病,是一种常见的常染色体显性遗传性疾病,其基因突变种类多,可侵犯身体的多个系统,临床表现多种多样.NF1发病率为1/3 000～1/3 500,主要表现为皮肤及皮下神经纤维瘤、咖啡斑和雀斑、Lisch结节、虹膜错构瘤以及神经胶质瘤、恶性周围神经鞘瘤(malignantperipheral nerve sheath tumor,MPNST)、骨发育异常和智能障碍,约15.0%～19.87%合并中枢神经系统肿瘤,如星状细胞瘤和其他恶性肿瘤.近年来,随着分子生物学和细胞生物学技术的广泛应用,国内外学者对其遗传学发病机制进行了深入的研究,本文将对NF1的分子遗传学研究进展作一综述.
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三例散发I型神经纤维瘤病患者NF1基因突变检测
目的:对三例散发I型神经纤维瘤病(neurofibromatosis type 1,NF1)患者进行NFl基因检测.方法:提取3例患者及5名正常家系成员和100例无NF1家族史的正常人外周血DNA.PCR扩增NF1基因全部外显子及侧翼序列,经纯化后采用Sanger测序法对目标基因区域进行测序.结果:患者1,患者2和患者3分别检测到39号外显子发生碱基G缺失(c.5635 delG),47号外显子大片段碱基缺失(c.7041～7062+4del),21号外显子发生碱基A、C缺失(c.2714-2715delAC).患者家属及100例正常对照均未检测到上述突变.结论:本研究在3例NFl患者中发现NFl基因3种新突变.
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I型神经纤维瘤病NF1基因突变检测
目的：检测I型神经纤维瘤病患者的NF1基因突变。方法：提取I型神经纤维瘤病1家系、1例散发患者及200名正常对照外周血DNA，PCR扩增NF1基因全部外显子及侧翼序列并进行Sanger测序。结果：在家系的先证者及其母亲外周血DNA中检测到NF1基因c.3975-2 A>T突变，其他家系成员未发现突变位点；在散发病例中检测到c.3619delA突变，为国际上首次报道。结论： I型神经纤维瘤病具有遗传基因异质性。
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两例I型神经纤维瘤病NF1基因突变检测
目的: 检测2例I型神经纤维瘤病(NF1)患者NF1基因的突变情况.方法: 采用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序法对2例NF1患者及100例无亲缘关系的正常人进行NF1基因突变检测.结果: 在2例NF1患者中检测到两个突变:无义突变c.1009G>T和移码突变c.3443-3444delCA,在患者家属中正常人及100例无亲缘关系的正常对照中均未检测到上述突变,该2个突变以前在国内外均未见报道.结论: 2例NF1患者中NF1基因的新发现的无义突变c.1009G>T和移码突变c.3443-3444delCA,不是罕见的单核苷酸多态,可能是致病突变,通过影响NF1基因的功能而引发患者发病.
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1型神经纤维瘤病的基因学研究进展
1型神经纤维瘤病(NF1)又称为Von Recklinghausen病,为起源于神经嵴细胞分化异常而导致多系统损害的一种常染色体显性遗传病,患病率为1/3000～1/3500,其发病与NF1基因的缺失有关.近年来对NF遗传和基因学的研究取得了很大进展,通过基因连锁和"定点克隆"技术获得了该病基因序列、突变及其表达信息.对近年在NF1基因和遗传学方面的研究成果、NF1基因的结构和功能、NF1基因的异常表达、该病基因型和表现性的关系、基因的易突变区域等进行综述.
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骨桥蛋白对Ⅰ型神经纤维瘤病小鼠破骨细胞功能的影响
Ⅰ型神经纤维瘤病( NFI)患者有明显的骨质疏松和骨量减少[1-2],我们报道了神经纤维瘤病破骨细胞功能增强是引起骨改变的机制之一[3].骨桥蛋白(OPN)具有细胞因子和基质蛋白两种性质,能影响骨代谢平衡,造成骨质疏松.我们应用Nf1基因杂合型小鼠模型,研究外源性骨桥蛋白对其破骨细胞生物学功能的影响,并与同源野生型小鼠破骨细胞功能进行统计学比较.
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神经纤维瘤病Ⅰ型的基因研究
神经纤维瘤病Ⅰ型(NF1)是一种常见的常染色体显性遗传病.NF1基因位于17q11.2,跨距350kb的基因组DNA,转录形成包含60个外显子的13kbRNA,负责编码由2818个氨基酸组成的神经纤维蛋白.其基因的突变可以导致神经纤维蛋白的截断及下调ras基因功能丧失.因此NF1基因的研究为NF1发病和防治的探索提供了理论依据.
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一例Ⅰ型神经纤维瘤病患者的NF1突变检测及家系分析
目的 对1例临床拟诊为Ⅰ型神经纤维瘤病(neurofibromatosis type 1,NF1)患者进行致病基因突变研究. 方法 提取先证者及其家系成员外周全血基因组DNA,通过目标捕获二代测序技术(targeted next-generation sequencing,TNGS)对先证者Ⅰ型神经纤维瘤蛋白基因(neurofibromin 1,NF1)的全部编码区外显子及其侧翼序列进行高通量测序检测可疑突变,并用Sanger测序法进一步验证;对其家系成员NF1相同突变位点进行Sanger测序检测. 结果 基因检测发现先证者NF1第45号外显子1个已知致病突变c.6790_6791insA(p.Tyr2264Ter),有类似临床表现的父亲和姐姐检出相同突变,表型正常的母亲和妻子未检测到此突变,其4岁儿子也检测出该突变. 结论 NF1的c.6790_6791insA(p.Tyr2264Ter)突变存在与该家系NF1的发病密切相关.
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镶嵌基因OMGP与Ⅰ型神经纤维瘤病发病的相关性研究
目的研究NF1基因27b内含子上的镶嵌基因OMGP与Ⅰ型神经纤维瘤病(NF1)的发病是否相关.方法设计5对互相嵌套能扩增OMGP基因整个表达序列的引物,应用PCR-SSCP(聚合酶链反应-单链构象多态性)/HA(异源双链分析)-银染-直接测序技术检测32例NF1患者与20例正常人中OMGP基因的突变.结果 3例NF1患者的3个片段在SSCP中出现泳动异常,经直接测序分析并无碱基的改变,与Genebank中报告的序列完全一致.结论 OMGP基因可能与NF1发病没有必然联系.
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Ⅰ型神经纤维瘤病微卫星DNA在中国人中的多态性
目的为了评估中国人I型神经纤维瘤病(NF1)基因内微卫星ALU、IVS38GT53.0、EVI20CA、IVS27GT28.4的基因多态性及在基因诊断中的价值.方法应用聚合酶链反应(PCR),变性聚丙烯凝胶电泳(PAGE)和银染法分析112名无血缘关系的中国南方汉人的片段长度多态性.结果ALU的信息含量(PIC)为0.312,共有4种等位片段;IVS38GT53.0有9种等位片段,PIC为0.782;EVI20CA有10种等位片段,PIC为0.835;IVS27GT28.4的PIC为0.814,有14种等位片段.结论研究人群与文献报道的白种人群相比,这四种微卫星在种类和分布上有差异;IVS38GT53.0,EVI20CA,IVS27GT28.4是高度多态的遗传标记,可用于NF1的连锁基因诊断、法医学的个体鉴定和亲权鉴定.
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一个Ⅰ型神经纤维瘤家系NF1基因的新突变
目的 对一个Ⅰ型神经纤维瘤家系进行NF1基因突变的检测和分析,探讨其发病的分子遗传学病因.方法 采集先证者及其父母的外周血标本,应用PCR-Sanger测序方法进行NF1基因外显子区域以及侧翼序列分析,鉴别可能存在的突变.采用Polyphen-2和Provean等软件对突变进行致病性分析.结果 先证者检测到两个突变,分别为c.702G＞A(同义突变)和c.1733T＞G(杂合突变),先证者父母并未检测到上述突变,在50名正常对照的NF1基因中并未发现此突变.Polyphen-2和Provean软件均预测c.1733T＞G突变可能致病,突变的蛋白质在不同的物种间高度保守.结论 NF1基因的c.1733T＞C(p.Leu578Arg)突变可能是该患者的致病原因.
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11例散发型Ⅰ型神经纤维瘤病患者NF1基因突变分析
目的 探讨散发型Ⅰ型神经纤维瘤病的遗传病因,为家系的遗传咨询和产前诊断提供理论依据.方法 应用芯片靶向性捕获高通量测序检测11例散发型Ⅰ型神经纤维瘤病患者的NF1、NF2基因突变.通过多个突变数据库及实验室外显子组测序的数据库过滤,Sanger测序进行家系分析.结果 在11例散发型Ⅰ型神经纤维瘤病患者检出11个突变,包括2个剪接位点突变、1个错义突变、2个无义突变、6个移码突变.在公共数据库及1775名正常对照外显子测序数据中,均未检索到这11个突变位点.经家系验证,先证者父母均不携带该突变.其中,7个突变位点与Ⅰ型神经纤维瘤病相关已有报道,4个突变位点为未报道过的致病突变.两个家系的产前基因检测结果显示胎儿均未携带与先证者相同的突变.结论 明确了11例散发型神经纤维瘤病的遗传病因,为家系的遗传咨询和产前诊断提供了理论依据;新突变的检出丰富了NF1基因突变谱.
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两例Ⅰ型神经纤维瘤散发病例的NF1基因突变检测
目的 对两例Ⅰ型神经纤维瘤散发病例NF1基因进行突变分析,探讨其分子发病机制.方法 收集两例散发Ⅰ型神经纤维瘤病例临床资料,提取患者及其父母和100名正常对照外周血基因组DNA,设计特异性引物避开假基因,PCR扩增NF1基因,并对PCR扩增产物进行测序.结果 测序结果显示在两例患者分别检测到NF1基因第9外显子c.1019-1020delCT突变与第48外显子c.7189G＞A突变,在其父母及100名正常对照中均未检测到相同突变.结论 NF1基因突变可能为这两例患者的致病原因.
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一例散发1型神经纤维瘤病患者的NF1基因嵌合突变分析
目的 对1例散发1型神经纤维瘤病患者的NF1基因进行嵌合突变分析.方法 提取先证者外周血基因组RNA,PCR扩增NF1基因编码区序列并进行序列测定；找到突变后,基因组DNA途径证实突变,并对先证者儿子的NF1基因相应外显子也进行序列分析；针对NF1基因第51外显子已发现的突变,取先证者全血淋巴细胞、口腔上皮细胞和尿路上皮细胞基因组DNA进行PCR扩增,PCR产物T克隆及测序.结果 先证者的临床表现符合1型神经纤维瘤病.先证者外周血RNA途径检测出无义突变c.7911C＞T(p.Q2510X)；基因组DNA途径证实患者外周血淋巴细胞、口腔上皮细胞和尿路上皮细胞中均有该突变,尿路上皮细胞中该突变测序信号较弱；在PCR产物的T克隆-测序中,来自先证者的血液、口腔上皮、尿液上皮细胞无义突变c.7911C＞T(p.Q2510X)突变体的重组菌分别占总数的42％、36％、12％.其儿子、正常对照不存在上述突变.结论 先证者在胚胎早期发生了NF1基因突变,使其体内部分细胞带有NF1基因突变,导致形成全身嵌合的1型神经纤维瘤病.
