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玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的气相色谱分析
目的:建立一种简单、灵敏、高效的测定玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的电子捕获气相色谱方法.方法:玉米样品用氯仿-乙醇(8∶2)提取,经硅胶柱净化,甲苯-丙酮(8∶2)洗柱,二氯甲烷-甲醇(95∶5)洗脱,洗脱液蒸干、衍生后气相色谱测定,检测器为电子捕获检测器.结果:气相色谱测定方法检测玉米中DON毒素的低检测限为10 ng·g-1.线性范围在50～500 ng·g-1时,DON的回归方程Y=20.51+0.000122X,相关系数为0.9996.平均回收率76.21%,变异系数0.10.结论:该方法简单、快速、灵敏、重复性好,具有很好的实际应用价值,可用于卫生检疫部门对大批量污染谷物及其制品中DON的监测.
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低剂量T-2毒素与脱氧雪腐镰刀菌烯醇单独及联合染毒对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的观察
目的 观察低剂量T-2毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的特点及其程度,探索亚临床剂量下的毒性作用.方法 3周龄雌性Balb/c小鼠80只,体质量(14.0±1.5)g.将小鼠按体质量随机分为对照组、T-2毒素组、DON组、T-2+DON联合组,每组20只.经腹腔注射感染毒素,染毒剂量:T-2毒素5 μg·kg-1·d-1,DON 20 μg·kg-1·d-1;对照组给予等量生理盐水.染毒至16周和21周,分别取小鼠尾血,用单细胞凝胶电泳法(SCGE)观察小鼠末梢血有核细胞拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量变化.结果 ①T-2毒素组,尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:(27.71±15.85)%、(13.67±5.56)μm、4.26±3.83;21周:(28.38±15.57)%、(13.83±5.47)μm、4.37±3.82]均增加,与对照组[16周:(11.87±4.61)%、(10.59±6.70)μm、1.34±0.98;21周:(11.31±3.94)%、(10.83±7.05)μm、1.29±1.01]比较,差异有统计学意义(P均<0.05);②DON组拖尾率、尾DNA含量、尾动量[16周:5.62%、(28.13±13.31)%、3.39±2.35;21周:7.71%、(29.17±15.12)%、5.70±4.17]均增加,其中仅拖尾率与对照组(16周:4.34%;21周:4.38%)比较,差异有统计学意义(P均<0.05);③T-2+DON联合组拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:6.21%、(30.14±15.48)%、(16.93±6.58)μm、5.54±4.22;21周:8.17%、(30.85±15.76)%、(17.21±6.45)μm、5.70±4.17]均增加,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05);与T-2毒素或DON组比较,尾DNA含量和尾长均增加(P均<0.05).结论 低剂量T-2毒素和DON均可对小鼠未梢血有核细胞DNA产生明确损伤;T-2和DON联合染毒较单独染毒的损伤作用更明显.
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇致新西兰家兔关节损伤的实验观察
目的 观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对新西兰家兔膝关节软骨和滑膜的损伤.方法 将15只成年雄性新西兰家兔随机分为3组,对照组正常饲养,高、低剂量组分别投予0.10、0.05 mg/kg剂量的DON,经耳缘静脉注射隔日染毒.20 d后处死家兔,取双侧膝关节,进行常规病理检查,测定关节冲洗液白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平.结果 光镜下,可见低、高剂量组家兔膝关节软骨细胞变性、坏死.滑膜组织炎细胞浸润.关节冲洗液IL-1β、TNF-α、NO,组间比较差异有统计学意义(F值分别为19.396、18.195、22.136,P＜0.05);与对照组[(0.113±0.043)、(0.138±0.087)μg/L、(23.56±9.35)μmol/L]比较,高剂量组[(0.451±0.091)、(0.575±0.122)μg/L,(70.27±11.53)μmol/L]和低剂量组[(0.295±0.107)、(0.387±0.131)μg/L,(45.32±12.24)μmol/L]明显增高(P＜0.05),且高剂量组高于低剂量组(P＜0.05).结论 DON可导致家兔关节软骨和滑膜损伤,其损伤类似于人骨关节炎病变.DON可能是骨关节炎的病因之一.
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对关节软骨损伤影响的研究进展
脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是由镰刀菌属病原真菌产生的真菌毒素之一,具有很强的细胞毒性,DON对关节软骨损伤的研究集中于探讨大骨节病发病机制.DON可通过抑制软骨细胞增殖、诱导细胞凋亡、影响细胞相关代谢酶等途径,打破软骨细胞与细胞外基质的平衡,终导致关节软骨的不可逆性损伤.文中作者就DON毒素对软骨的损伤作用进行综述.
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山东食管癌高发区脱氧雪腐烯醇和硒元素含量检测研究
[目的]探讨山东省农村居民粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和硒元素(Se)的含量与食管癌高发的关系.[方法]粮食样品中DON毒素含量的检测采用酶联免疫吸附法(ELISA);硒元素的检测采用2,3-二氨基萘(DAN)荧光分光光度法.[结果]东平、肥城两个食管癌高发区粮食DON含量为70.1-302.8μg/kg,对照组(泰山区、长清区)粮食DON检测结果为低于27.3μg/kg,食管癌高发区与对照区粮食DON含量差异有统计学意义(P<0.05);东平、肥城两个食管癌高发区粮食Se含量均数分别为76.5μg/kg、85.6μg/kg,对照组泰山区、长清区粮食Se含量均数分别为83.1μg/kg、90.7μg/kg,对照地区高于食管癌高发区(P<0.05);东平、肥城、泰山区、长清区居民头发Se含量均数分別为0.926mg/kg、1.015mg/kg、0.937mg/kg、0.941mg/kg,高发区组和对照组间差异无统计学意义(P〉0.05).[结论]食管癌发病可能与DON有关,Se的缺乏可能不是食管癌发病的主要病因.
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇的细胞毒性作用
脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON),又名呕吐毒素(vomitoxin),属于单端孢霉烯族毒素的一种,是由某些镰刀菌属产生的毒性代谢产物[1].DON广泛存在于各种粮谷类作物及其制品中[2],性质极为稳定,在粮食的储存和加工过程中不易被破坏,因此极易通过食物链引起人畜中毒[3].现就 DON 的细胞毒性作用及其可能机制作一综述.
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UPLC-MS/MS测定婴幼儿谷物辅食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物
目的 建立婴幼儿谷物辅食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其衍生物3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-ADON)和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-ADON)的超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS).方法 样品经乙腈-水(84∶16,V/V)提取,Mycosep(R) 226多功能净化柱净化.色谱柱采用Agilent EC-C18柱(2.1 mm×75 mm,2.7 μm),流动相为乙腈-0.1％氨水溶液,进行梯度洗脱;质谱采用电喷雾离子源,在负离子多反应监测模式下进行检测.结果 DON、3-ADON和15-ADON在10 ng/ml ～500 ng/ml时线性关系良好(r＞0.999),检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.8 μg/kg和2.0 μg/kg;在低、中、高3种浓度(4μg/kg、20 μg/kg、40 μg/kg)添加水平下,DON、3-ADON和15-ADON的回收率为87.1％ ～ 119.8％,相对标准偏差(RSD)为1.19％ ～ 6.20％.结论 该方法简便、灵敏、准确、稳定,适用于婴幼儿谷物辅食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物的测定.
关键词： 超高效液相色谱-质谱联用法 婴幼儿谷物辅食 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 衍生物 -
高效液相色谱-串联质谱联用法同时测定粮食中12种霉菌毒素
目的 建立液相色谱-串联质谱法测定粮食中12种玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇等霉菌毒素的方法,并对各种粮食中霉菌毒素污染情况进行调查.方法 样品采用乙腈+水(84+ 16)溶液超声提取后,MycosepTM 227多功能净化柱净化后,用氮气吹至近于,用乙腈+0.1％氨水(5+95)复溶后,经0.22 μm微孔滤膜过滤,采用HPLC/MS/MS电喷雾电离负离子(ESI-),多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量.结果 方法的线性范围为2.0μg/L～100.0μg/L,线性相关系数在0.9988 ～0.9998之间,检出限在0.04 μg/kg～0.18 μg/kg之间;低中高3个水平的平均加标回收率分别为91％～102％、90％ ～ 102％和89％～ 105％;相对标准偏差(RSD)均＜9.3％.结论 该方法用于测定粮食中12种玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇等霉菌毒素具有操作简单、干扰少、快速、准确可靠等特点,能满足国家食品风险监测方法的相关要求.
关键词： 高效液相色谱-串联质谱法 玉米赤霉醇类 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 霉菌毒素 粮食 -
毛细气相色谱方法检测谷物及豆类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
目的:建立检测谷物及豆类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毛细气相色谱方法.并且通过与酶联免疫方法的比较来探讨此方法的优势与缺点.方法:用甲醇-水(3:1)提取毒素,经过硅镁型吸附剂净化,采用DB-5MS毛细柱以及配备微池电子捕获检测器(μECD)的毛细气相色谱仪测定.结果:方法的检测限为1.78μg/kg.在阴性样品中分别添加标准品浓度为0.09、0.15、0.3μg/ml的回收率为86.84%～101.85%,RSD＜10%.结论:此方法有很好的灵敏度、精确度和准确性.并且,通过与酶联免疫方法的比较,显示出了毛细气相色谱方法的显著优势.
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新疆市售小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的污染水平调查
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测面粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法,并了解新疆市售小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的污染状况.方法 采用负离子多反应监测模式,以13C-DON为内标,样品用乙腈-水(86∶14,V/V)萃取后再用Mycosep TM226净化柱净化.同时对新疆部分地州超市和农贸市场销售的84份小麦粉中DON、3-ADON、15-ADON的含量进行测定,数据结果采用GB 2761-2011《食品中真菌毒素限量》中规定的限量值,评价小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的污染水平.结果 3种毒素的浓度为0.5 ng/ml ～ 500 ng/ml时,线性关系良好,相关系数(r)均＞ 0.990.在抽检的84份小麦粉中,3-ADON均未检出,DON与15-ADON的检出率分别为51.2％、28.6％,DON与15-ADON的联合污染率为22.6％.结论 该方法适用于小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测,新疆市售小麦粉中存在脱氧雪腐镰刀菌烯醇的污染状况.
关键词： 超高效液相色谱-串联质谱法 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 小麦粉 玉米粉 污染水平 -
气相色谱/质谱/质谱测定小麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇
确立了小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的气相色谱/质普及气相色谱/质谱的测定方法.以丙酮为溶剂超声波提取,弗罗里硅土柱净化,再以N-七氟丁酰咪唑衍生,采用GC/MS及GC/MS/MS确证和定量分析.方法灵敏、准确,检出限为0.01mg/kg,添加回收率为86.7%～90.3%.
关键词： 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 气相色谱/质谱/质谱 小麦 -
UPLC-MS/MS内标稀释法测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的不确定度评定
脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是全球性的、常见的谷物真菌毒素污染物,广泛存在于大麦、小麦、玉米等霉变粮食作物和动物饲料中[1],在我国,小麦及其制品受DON污染为严重.2010年,王伟等对我国13省市售小麦粉的调查中发现DON在小麦粉中的污染率为100％,污染含量高为2 995.10 μg/kg[2].此外,玉米粉DON的污染也非常严重,阳性率为97.41％,高含量为2 802.80 μg/kg.DON在体内可能有一定的蓄积,具有很强的细胞毒性.
关键词： 超高效液相色谱-质谱联用法 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 不确定度 影响因素 -
脱氧雪腐镰刀菌烯醇的高灵敏化学发光磁酶免疫法检测
目的:建立一种快速简便、灵敏度高的新型化学发光磁酶免疫法(MECLIA)检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON).方法:制备Fe3 O4@SiO2@Au金磁复合微粒及DON与卵清蛋白(OVA)的复合物(OVA-DON);以Fe3 O4@SiO2@Au为固相载体,优化条件,使其表面负载OVA-DON形成DON金磁免疫复合微粒;以鲁米诺-过氧化氢-辣根过氧化物酶-苯酚类化合物作为增强化学发光体系,建立MECLIA对小麦中DON进行检测,并对所建立的方法进行方法学评价.结果:该方法标准曲线方程为Y=-521951 X+2883979(X为DON质量浓度的对数,Y为化学发光值,R2=0.9986),线性范围为0.10~20.00μg/L,检测限为31 ng/L;批内RSD为2.2%~3.5%,批间RSD为4.9%~9.6%,标准样品回收率为95.0%~108.0%,小麦样品回收率为92.0%~106.0%.结论:该研究建立的MECLIA灵敏度高、精密度好、操作简单,可用于大批量小麦样品中DON的快速检测.
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DON对胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的影响
目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对体外培养胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的影响.方法 体外培养的胃癌细胞HGC-27经50、100、1 000、2 000μg/L DON处理12 h、24 h、48 h,应用流式细胞术(FCM)进行细胞周期分析,检测凋亡情况及其量效关系,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达情况.结果 FCM检测结果表明,较高浓度(1 000和2 000μg/L)DON处理对细胞周期分布的影响随处理时间不同有明显差异.DON处理12 h,可明显降低G0/G1细胞百分率、增加S期细胞百分率.处理时间延长至24 h和48 h,则表现为G0/G1细胞百分率增加,S期细胞百分率降低(P＜0.05).DON处理24 h和48 h,各DON实验组HGC-27细胞凋亡率均高于对照组,在50～2 000μg/L浓度范围内,凋亡率随着DON处理浓度的升高而升高.Western blot检测凋亡相关蛋白结果显示,DON处理12、24和48 h,Bax和Caspase-3蛋白表达均明显升高,而Bcl-2蛋白表达降低.结论 DON处理可影响体外培养的胃癌细胞系HGC-27细胞的细胞周期分布,其作用依DON浓度和作用时间的不同而有差异.同时DON可诱导HGC-27细胞凋亡,上调Bax和Caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达可能是其诱导细胞凋亡的机制之一.
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单链抗体表达研究进展
单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)由抗体重链可变区和轻链可变区通过15～20个氨基酸的短肽(linker)连接而成.在目标特定的scFv上连接放射性核素、生物毒素、药物,将极大增强对靶细胞的杀伤能力.Kanter等[1]研究发现将个体基因型scFv和细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子或免疫刺激肽组成融合蛋白,是一种有效治疗淋巴瘤的疫苗.Wang等[2]通过抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和抗单端孢霉毒素(ZEN)scFv基因融合.表达为抗DON和抗ZEN scFv,结果显示双功能抗体成功构建.并可应用于DON和ZEN检测.
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ELISA法测定混合饲料多种霉菌毒素污染的研究
目的 研究ELISA法检测饲料中伏马菌素、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素的可行性,并对深圳市售玉米混合饲料污染状况调查.方法 采用竞争ELISA法,检测玉米混合饲料中伏马菌素、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素污染状况. 结果伏马菌素浓度为0.25～5.0mg/ks之间的变异系数(CV,%)为1.0～7.0;黄曲霉毒素浓度为1.0～20.0μg/kg之间的变异系数(CV,%)为1.0～7.5;赭曲霉毒素浓度为2.0～40.0μg/kg之间的变异系数(CV,%)为2.0～7.5;脱氧雪腐镰刀菌烯醇浓度为0.25～5.0ms/kg之间的变异系数(CV,%)为1.0～8.0;T-2毒素含量浓度为75.0～500.0μg/kg之间的变异系数(CV,%)为2.0-7.结论 ELISA法检测玉米混合饲料中几种毒菌素的污染,显示方法灵敏度高、干扰少、测定步骤简便、快速、操作安全、测定结果准确可靠.建议日常工作中先用ELISA法快速筛选检测,阳性样品再用液相色谱--质谱联用仪分析法、薄层法进行确证实验.
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高效液相色谱-串联质谱法测定啤酒中4种霉菌毒素
目的 探讨液相色谱-串联质谱法测定啤酒中4种霉菌毒素的可行性.方法 样品采用加入乙腈提取,过MycosepTM 226多功能净化柱净化后,采用HPLC/MS/MS电喷雾电离负离子(ESI-),以多离子反应监测(MRM)模式检测,外标法定量.结果 4种霉菌毒素的线性范围为5.0μg/L～206.0μg/L,线性相关系数在0.9952～0.9998之间,检出限在0.1～0.2μg/kg之间;低中高3个水平的平均加标回收率在80.6％～91.4％之间;相对标准偏差(RSD)均＜6.3％.结论 结果提示该方法具有操作简单、干扰少、快速、准确可靠等特点,为检测此类毒素提供了一种新的潜在的方法.研究具有潜在的应用价值.
关键词： 高效液相色谱-串联质谱法 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 霉菌毒素 啤酒 -
ELISA法测定发酵茶和植物香料真菌毒素的污染
目的 探讨以ELISA法检测发酵茶、植物香料中玉米赤霉烯酮、伏马菌素、黄曲霉毒素(AFB1)、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、T-2毒素的可行性及污染状况.方法 采用竞争酶联免疫吸附法,检测发酵茶、植物香料中玉米赤霉烯酮、伏马菌素、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素.结果 玉米赤霉烯酮浓度为40.0～1 000.0μg/kg之间的变异系数为1.5％～6.5％,回收率为87.5％～111.1％,r=0.998;伏马菌素浓度为0.25～5.0mg/kg之间的变异系数为2.0％～6.5％,回收率为90.0％～107.2％,r=0.992;黄曲霉毒素浓度为1.0～20.0μg/kg之间的变异系数为2.2％～7.8％,回收率为85.0％～115.0％,r=0.997;赭曲霉毒素浓度为2.0～40.0μg/kg之间的变异系数为1.8％～7.0％,回收率为87.5％～120.0％,r=0.998；脱氧雪腐镰刀菌烯醇浓度为0.25～5.0 mg/kg之间的变异系数为1.5％～8.0％,回收率为90.0％～110.0％,r=0.996;T-2毒素含量浓度为75.0～500.0μg/kg之间的变异系数为2.8％～7.5％,回收率为86.6％～106.6％,r=0.996.结论 ELISA法检测发酵茶、植物香料中玉米赤霉烯酮、伏马菌素、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素简便快速.建议日常工作中先以ELISA法筛选,阳性样品再以液相色谱—质谱联用仪分析法、薄层法进行确证实验.
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ELISA检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的优化
目的 针对ELISA法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),对小麦粉样品中DON提取和DON标准工作液制备进行优化.方法 以超声提取法提取小麦粉样品中的DON,以含10％甲醇的DON阴性样品提取液作DON的ELISA标准工作液溶解相,对检测方法进行优化,并以优化的方法对50份小麦粉样品进行检测.结果 检测方法经优化后,样品经超声提取仅需10 min,2 500.00 ng/g、500.00 ng/g、100.00 ng/g3个浓度水平的平均回收率为94.69％～ 102.71％,平均CV％为6.50％,50份小麦粉样品DON检出率为30.00％,DON污染水平在57.26～ 112.37 μg/kg,中位数为84.12μg/kg,所有样品中DON含量均未超过国家规定的限量标准.结论 优化后的检测方法,大大缩短了样品提取时间,提高了样品提取率,降低了样品基质的干扰,方法重复性良好.
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人外周血单个核细胞TAP-1表达的抑制作用
目的: 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞(PBMC)中TAP-1表达的影响.方法: 采用流式细胞仪(FCM)和半定量RT-PCR方法,从蛋白和mRNA水平上分析不同浓度的DON对体外培养的人PBMC中TAP-1分子表达的影响及量-效关系.结果: FCM定量检测表明, 用不同浓度的DON处理, 均可一定程度地抑制人PBMC中TAP-1蛋白的表达, 且二者呈显著的负相关(r=-0.865, P<0.01).半定量RT-PCR检测显示, 不同浓度的DON处理均可抑制人PBMC中TAP-1 mRNA的表达.结论: DON可剂量依赖地抑制体外培养的人PBMC中TAP-1蛋白和其mRNA的表达, 对阐明食管癌高发区被DON污染的粮食与食管癌发生的关系具有重要的意义.
