首页 > 文献资料
-
半枝莲多糖对肝癌小鼠差异表达蛋白质影响的实验研究
目的：比较分析H22肝癌小鼠与半枝莲多糖（ SBPS）干预后的血清之间差异表达的蛋白，为进一步筛选出SBPS抑制肿瘤活性的靶位蛋白奠定基础。方法：建立动物模型，运用蛋白质组学技术中的双向凝胶电泳技术与计算机辅助的图像分析技术，对肿瘤组和SBPS组血清进行蛋白分离，建立图谱并用ImageMaster 5．0软件进行比较分析，通过比对分析筛选出差异表达蛋白。结果：肿瘤组与SBPS组比较发现18个差异表达的蛋白点，其中在SBPS组6个表达上调，1个表达下调1，个在SBPS组特异表达，10个在SBPS组表达缺失。结论：SBPS可以通过调节H22肝癌血清中蛋白质的表达，来实现对肝癌的治疗作用。
-
H22肝癌小鼠血清差异蛋白质的质谱鉴定
目的 分析正常小鼠和H22肝癌小鼠血清之间差异表达的蛋白并对部分差异蛋白进行鉴定分析,筛选可能与肝癌发生密切相关的蛋白质.方法 利用双向凝胶电泳技术(2-DE)与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),分析正常组和肿瘤组筛选并鉴定部分差异表达的蛋白,再进行生物学分析.结果 通过2-DE图谱研究发现,与正常组相比,肿瘤组存在明显差异的蛋白质点.选择其中可能为关键功能蛋白的蛋白点进行质谱分析,获得肽指纹图谱(PMF),运用Mascot软件查询NCBI数据库分析并鉴定得出其中2个蛋白:假尿苷合成酶和线粒体核糖体大亚基蛋白.结论 肝癌的发生机制与假尿苷合成酶和线粒体核糖体大亚基蛋白2个差异表达蛋白密切相关,其参与肝癌的发生发展.
-
帕金森病和正常人外周血单个核细胞的蛋白质组差异分析
目的:通过研究帕金森病和正常外周血单个核细胞(PBMC)的蛋白质组差异,初步探讨外周免疫系统与帕金森病的病理联系.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离人帕金森病和正常单个核细胞总蛋白质,考马斯亮蓝染色,PDQuest 2-DE软件分析,对部分差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用Mascot查询系统查询SWISS-PROT数据库.结果:获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳考染图谱,对其中的21个差异蛋白质点分别进行肽质指纹分析,经数据库查询,初步鉴定为一些与蛋白降解、抗氧化应激、信号转导、细胞骨架、细胞周期调控等有关的蛋白质.结论:建立了帕金森病PBMC的双向凝胶电泳图谱,提示帕金森病和正常的PBMC的蛋白质表达具有差异.
-
蛋白质组技术在胃癌相关标志物筛查中的应用
目的 初步探讨蛋白质组技术在血清研究中的应用,建立胃癌患者血清和健康者血清双向凝胶电泳图谱;筛查并鉴定胃癌患者血清和健康者血清中的差异表达蛋白质,期望从中发现有意义的胃癌分子标志物.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离低分化胃癌患者血清和健康者血清总蛋白,银染显色,ImageMaster 2D Elite软件分析,从中选取差异表达蛋白质,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质.结果 获得分辨率较好的血清双向凝胶电泳图谱;得到4个在胃癌与健康者血清中有显著性差异的蛋白质斑点进行鉴定,结果表明这些特异蛋白分别为Serpin B6(Placental thrombin inhibitor)(Cytoplasmic antiDroteinase)(CAP)(Protease inhibitor6)(PI-6),Septin-1(LARP)(Serologieally defined breast cancer antigen NY-BR-24),Kallikrein-6 precursor(Protease M)(Neurosin)(Zyme)(SP59),Hemoglobin beta chain.结论 在低分化胃癌患者血清与健康者血清中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学这一高通量的筛查技术可望从中发现与低分化胃癌相关的标志物.
-
蛋白组学技术在肿瘤诊断和治疗研究方面的应用
蛋白组是1994年澳大利亚Macquarie大学的科学家Wilkins在意大利的一次科学会议上首次提出,并首次在1995年7月的"ELECTROPHORESIS"发表.后来经不断完善定义为细胞内全部蛋白的集合体,包括基因组表达的蛋白质,还包括各种形式修饰后的蛋白质.蛋白组是基因组后兴起的一项新的研究领域.它以蛋白组为研究对象,从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白组成与活动规律.蛋白组学的研究领域包括:(1)对蛋白质进行大规模鉴定并阐明其转录后修饰的特征;(2)差异显示蛋白质组学,对各种疾病进行表达水平的比较;(3)通过各种技术,如质谱分析和酵母双杂交体系来研究蛋白质间的相互作用,并绘制蛋白质作用的图谱.在肿瘤研究方面,对于肿瘤蛋白标志物的筛选及鉴定肿瘤的特异性表达,肿瘤的发生机制,肿瘤的治疗评价方面蛋白组无疑是前沿的研究领域.是目前研究热点之一.蛋白组学的核心技术是双向凝胶电泳(2DE),质谱分析(MS),生物信息学(Bioinformatics),而临床样本分析应用广泛的技术是2-DE和MALDI-MS[1,2].
-
氢醌对人骨髓间充质干细胞蛋白质表达谱的影响
[目的]了解氢醌(HQ)对人骨髓间充质干细胞蛋白表达谱的影响,筛选HQ骨髓毒性作用的靶蛋白.[方法]体外分离并培养人的骨髓间充质干细胞至第3代,随即将细胞分为实验组和对照组.实验组用5×10-5mol/L的HQ染毒24 h;对照组加入相同浓度的磷酸缓冲液处理24 h.染毒完毕后即刻抽提两组细胞的总蛋白,然后利用双向凝胶电泳技术和LC-Qq-TOF质谱技术进行蛋白表达谱分析,找到可能的HQ骨髓毒性靶蛋白.[结果]在3次重复实验中,对照组与HQ处理组相比较,均有约20个差异蛋白点.其中3次中有11个重复的差异蛋白点,质谱分析鉴定出膜联蛋白-Ⅱ、甲酰-谷胱苷肽水解酶、尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶和醛缩酶-A 4个蛋白点.[结论]HQ可诱导膜联蛋白-Ⅱ、醛缩酶-A和尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶表达下调及甲酰-谷胱苷肽水解酶表达的上调.
-
参苓白术散对利血平所致脾虚小鼠血清蛋白质组影响
目的 用双向电泳技术分析参苓白术散(人参、茯苓、白术等)对利血平所致脾虚证模型小鼠血清蛋白质组的影响,探讨其治疗脾虚泄泻的作用机制.方法 采用利血平单因素造模法建立脾虚证小鼠动物模型.分别收集正常组、模型组、高剂量组和低剂量组的血清样本,对样本处理后分别进行双向凝胶电泳,并利用PDQuest8.0图像分析软件对2-DE图谱进行差异性分析.选取差异明显的蛋白点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定,检索数据库鉴定蛋白质.结果 经过比较分析四组血清电泳图谱,有明显差异的蛋白点有35个,质谱鉴定出6种蛋白,分别为β球蛋白、维生素D结合蛋白、妊娠区带蛋白、载脂蛋白A-Ⅰ、载脂蛋白A-Ⅳ和白蛋白.结论 免疫功能降低、小肠功能紊乱可能是利血平致小鼠脾虚发生的主要病理环节,参苓白术散能直接调节提高免疫功能、促进小肠吸收功能的相关蛋白的表达,使其归于正常,这可能是参苓白术散治疗利血平所致小鼠脾虚的主要作用机制.
-
蛋白质组及其在心血管系统的研究进展
蛋白质组的概念由澳大利亚的Marc Wilkins和Keith Willians于1994年提出,指的是由一个基因组所表达的全部蛋白质.作为一门新兴的学科,蛋白质组学由此诞生,蛋白质组学即是定量检测蛋白质水平的基因表达,从而揭示疾病过程和基因表达调控机制的崭新学科.
-
心肌线粒体双向凝胶电泳技术分析
目的:建立并优化心肌线粒体蛋白质组研究的双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)技术.方法:分离200g雄性SD大鼠心肌线粒体,抽提心肌线粒体的全蛋白,以固相pH梯度、等电聚焦为第一向和垂直SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向行双向凝胶电泳,对样品制备、上样量、电泳参数、不同固定方式等相关技术进行优化.凝胶行硝酸银染色,扫描仪获取凝胶图像并用PDQuest软件进行分析.结果:45%乙醇和5%乙酸的固定液对蛋白质固定效果好;构建了心肌线粒体高分辨率和重复性的双向凝胶电泳图谱.结论:建立了SD大鼠心肌线粒体蛋白质组的双向凝胶电泳分析技术.
-
蛋白质组学在胰腺疾病研究中的应用
蛋白质组学是研究蛋白质的表达、翻译后修饰、在细胞内定位以及蛋白质与蛋白质之间的相互作用的科学.传统的研究手段主要采用双向凝胶电泳和质谱技术,前者用于蛋白质的分离,后者用于蛋白质的鉴定.目前新兴的研究技术主要有相差凝胶电泳技术同位素亲和标签技术.蛋白质组学在胰腺疾病的研究主要是通过正常个体与患病个体的血清、胰液或组织等进行蛋白质比较,发现差异蛋白质,从而对急、慢性胰腺炎和胰腺癌等胰腺疾病的发病机制、早期诊断和有效治疗提供理论依据和新思路.
-
慢性重型乙型肝炎患者血浆蛋白质组差异表达的初步研究
目的 探讨慢性重型乙型肝炎患者血浆蛋白质组变化,为研究慢性重型乙型肝炎的发病机制及治疗提供新的线索.方法 收集慢性重型乙型肝炎患者和健康对照者血浆各20份,去除血浆中高丰度蛋白.应用双向凝胶电泳(2-DE)技术构建两组研究对象血浆蛋白2-DE图谱,经Image Master差异分析软件进行分析,寻找差异蛋白质点.用电喷雾离子串联质谱(ESI-MS-MS)对重要的差异蛋白质点进行鉴定.结果 经过样品预处理后,血浆中白蛋白和免疫球蛋白IgG含量大大减少,低丰度蛋白得到较好的富集.正常健康组蛋白质点287个,慢性重型乙型肝炎组蛋白质点297个,筛选出2倍以上的差异蛋白质点21个.鉴定出8个慢性重型乙型肝炎相关蛋白质,其中上调的蛋白质有α1-抗胰蛋白酶,载脂蛋白E;下调的蛋白质有补体因子B、CD5抗原样蛋白、纤维蛋白原B 链、α-1B糖蛋白、载脂蛋白AI、触珠蛋白.结论 成功鉴定了8个慢性重型乙型肝炎相关蛋白质.这些差异蛋白质功能涉及能量代谢、脂蛋白代谢、蛋白质分泌、补体旁路活化途径等过程.对这些重要蛋白质的结构和功能的进一步研究,对于进一步揭示慢性重型乙型肝炎发病分子机制及寻找治疗靶标可能具有重要的意义.
-
额颞叶痴呆的蛋白质组研究
目的 为深入理解额颞叶痴呆分子机制并寻找诊断治疗该疾病的蛋白质标记物,选取5例经病理证实的额颞叶痴呆患者与4例无神经系统疾病老年人尸检脑标本进行蛋白质组学研究.方法 死亡24 h内新鲜取材的尸检额叶、颞叶蛋白质以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE),图象分析软件Imagemaster 2D Elite分析电泳图谱,MALDI-TOF质谱或MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定蛋白质.结果 18种蛋白质的表达量在额颢叶痴呆患者与正常老年人显著不同.12个在额颞叶痴呆表达量上调的蛋白质被鉴定为3-磷酸甘油醛脱氢酶、尿嘧啶DNA糖苷水解酶、Cu-Zn超氧化物歧化酶、异柠檬酸脱氢酶亚单位、synaptotagmin I、Peroxiredoxin2、胶质纤维酸性蛋白、P25 alpha、烯酰辅酶A水合酶短链1、吡哆醇-5′-磁酸氧化酶、Mn超氧化物歧化酶、α-烯醇化酶;6个在额颞叶痴呆表达量下调的蛋白质被鉴定为抗氧化蛋白2(酸性钙离子依赖型磷脂酶A)、铁蛋白H链、谷氨酸脱氢酶、肽基脯氨酸顺反异构酶A、血清白蛋白前体、二氢嘧啶酶相关蛋白2.结论 额颞叶痴呆患者脑组织中神绛纤维缠结相关蛋白、氧应激蛋白、凋亡相关蛋白及重要代谢酶的表达发生变化,有助于深入理解额颞叶痴呆分子机制并有望在额颞叶痴呆的早期诊断及新药开发上发挥作用.
-
吲哚美辛抗人结肠癌细胞系HCT116的功能蛋白质组研究
目的探讨吲哚美辛(IN)对人结肠癌细胞系HCT116蛋白质表达谱的影响及其抗结肠癌的作用机制.方法应用固相pH梯度双向凝胶电泳(2-DE)技术分离IN治疗组和对照组HCT116细胞的总蛋白,银染显色,采用Image Scan扫描获取电子图像,ImageMaster 2D图像分析软件分析2组的2-DE图谱并识别差异表达的蛋白质.应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹图谱,分析并鉴定差异蛋白质.结果获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的HCT116细胞系2-DE图谱,对照组蛋白质点数为1299±55,其匹配率为94.2%;IN治疗组蛋白质点数为1208±47,其匹配率为91.0%.两组共有45个差异蛋白质点,其中,治疗组有9个蛋白质点表达上调,34个蛋白质点表达下调,2个蛋白质点仅在对照组表达.对差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析发现,IN可通过BfL-1蛋白诱导HCT116细胞凋亡,并鉴定出一些与细胞凋亡、细胞周期及信号转导相关的蛋白质.结论IN可通过BfL-1等多种途径诱导HCT116细胞的凋亡并抑制其增殖.
关键词： 吲哚美辛 双向凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 蛋白质组 结肠癌 -
人胰腺癌相关蛋白质的差异表达研究
胰腺癌5年存活率不超过5%,蛋白质组学(proteomics)的出现为寻找一种特异性高、敏感性强的胰腺癌肿瘤标志物带来了希望.蛋白质组学技术改变传统的分割式研究单个蛋白质的模式,建立全面、立体、快速的分析方法,以透视全体基因在特定细胞或组织的表达.本研究针对人正常胰腺、胰腺癌、胰腺癌旁组织,利用双向凝胶电泳(2-DE)技术以及质谱技术和生物信息学,分析胰腺组织不同生理状态下蛋白质的差异表达,旨在寻找胰腺癌早期诊断的肿瘤标志物,为早期诊断奠定基础.
-
不同预后小肠间质瘤的比较蛋白质组学分析
目的:分析不同预后小肠间质瘤病人组织蛋白质质点,寻找判断小肠间质瘤预后的候选蛋白质.方法:预后不良组和预后良好组小肠间质瘤组织各5例,经双向凝胶电泳分离总蛋白质,运用图像分析软件分析,对差异蛋白质点采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪鉴定部分差异蛋白质点.结果:比较蛋白质组学共鉴定出蛋白质28个(预后不良组中9个蛋白质表达上调,19个蛋白质下调).预后不良组小肠间质瘤组织中微管不稳定蛋白(stathmin)、血清结合珠蛋白(haptoglobin 2,HP-2)和微管蛋白表达明显升高.结论:不同预后小肠间质瘤组织的蛋白质谱存在差异,stathmin和HP-2及微管蛋白可能成为判断小肠间质瘤病人预后的3种因子,为今后小肠间质瘤病人的临床预后判断提供依据.
-
人胆囊组织蛋白质表达谱的建立
目的:建立胆固醇结石病人与正常人胆囊组织的蛋白质表达谱,用于比较胆囊组织的蛋白质组学研究,为阐明胆石成因提供实验依据.方法:提取胆固醇结石病人及正常人的胆囊壁组织总蛋白,构建相应的双向电泳表达图谱,应用ImageMaster图像分析软件对双向电泳图谱进行图像分析.结果:两组样本均获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,胆固醇结石组与正常组病人组内蛋白质平均匹配点数分别为632±61和606±64,各匹配率分别为73.46%和71.49%.组间蛋白质平均匹配点为474,匹配率为70.64%.胆固醇结石病人的28个蛋白点表达上调,7个点表达下调,与正常人间蛋白表达差异明显(P<0.05).结论:初步建立了胆固醇结石病人与正常人胆囊组织的差异蛋白质表达谱,分析两者间差异蛋白点,为胆石成因研究提供实验基础.
-
胆管癌的蛋白质组学分析
背景与目的:胆管癌是目前常见的消化道恶性肿瘤,早期诊断困难,总体5年生存率极低,所以改善预后的关键在于早期诊断.近年来,蛋白质组学的迅猛发展,为检测肿瘤标志物提供了一种新技术.本研究通过比较胆管癌组织与正常胆管组织的蛋白质组表达差异,寻找胆管癌相关的蛋白质,选择敏感的分子标志物.方法:运用蛋白质组学技术,对16例胆管癌患者的胆管癌组织和正常胆管组织进行胶内差异双向凝胶电泳(2-DE),选择差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF质谱分析和生物信息学分析.结果:成功建立胆管癌组织和正常组织的双向凝胶电泳图谱,胆管癌组织和正常胆管组织平均蛋白质斑点数分别为1 087和1 048,其中表达差异超过2倍的斑点共有32个,质谱分析和数据库检索共鉴定出18种蛋白质,包括衔接蛋白成纤维细胞生长因子受体底物2(fibroblast growth factor recptor substrate 2,FRS2)、连环蛋白(catenin,beta 1)、细胞外信号调节激酶(extracellular response kinase)等.从功能上分析,这些差异蛋白质与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关.结论:胆管癌组织与正常胆管组织间有18种差异蛋白质可能为研究胆管癌的生物学行为提供新的分子标记物.
-
人胆管癌与正常人胆汁蛋白质组学研究
背景与目的:胆管癌是目前常见的消化道恶性肿瘤,由于大多数患者确诊时疾病已属中晚期,总体5年生存率极低,所以改善预后的关键在于早期诊断.近年来,蛋白质组学的迅猛发展,为检测肿瘤标志物提供了一种新技术.本研究采用蛋白质组学的相关技术,建立胆汁蛋白质组双向电泳图谱,筛选胆管癌患者胆汁和正常人胆汁中的差异表达蛋白,以发现可能用于早期诊断胆管癌的肿瘤标志物.方法:收集胆管患者和正常人胆汁标本,经脱盐、脱脂纯化处理后提取蛋白,进行二维电泳,应用PDQuest 8.0 2D图像软件对银离子染色的双向电泳图像进行分析,并对差异表达的蛋白质行质谱鉴定.结果:成功建立胆管癌和正常人胆汁的双向凝胶电泳图谱,其图谱上平均蛋白质点数分别为(352±23)个和(317±26)个.选取其中表达差异超过2倍的蛋白质斑点10个,行质谱分析和数据库检索,鉴定出5种有意义的蛋白质,包括(angiopoien-related protein 1)、(fibroblast growth factor substrate 2)、(catenin,beta 1)、(kertain,type I cytoskeletal 16)和(ras-related protein 37).从功能上分析这些差异蛋白质与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关.结论:蛋白质组学能很好地显示胆管癌患者与正常人胆汁间的差异表达蛋白,研究鉴定的5种差异表达蛋白质可能为研究胆管癌的生物学行为提供新的分子标志物.
-
人支气管上皮癌变各阶段组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析
目的:探讨肺鳞癌癌前病变恶性转化的机制. 方法:应用脱氧胆酸-三氯醋酸(deoxycholate-trichloroaetic acid,DOC-TCA)法提纯支气管上皮癌变各阶段组织总蛋白质,采用固相pH梯度(immobilized pH gradient, IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)分离总蛋白质,凝胶经银染显色后,ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点. 结果:①重复性检测表明同一例鳞状上皮化生组织的三块凝胶的平均点数为1 216 ±75 ,平均匹配点数为1 082±67,匹配率达89.3% , 且3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差是(0.865±0.247)mm ,在SDS-PAGE方向上的偏差为(0.971±0.104)mm,由此获得了分辨率较高、重复性较好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱,正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织凝胶的平均蛋白质点数依次为1 190±36、1 227±39、1 272±41、1 326±52;②比较分析人支气管正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织各7例的双向凝胶电泳图谱,发现癌变前一阶段与后一阶段两两间的差异蛋白点分别为 34±16、41±15、46±13;③对24个差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出一些与细胞增生、分化、细胞周期调控、信号传导等有关的蛋白质. 结论:本研究建立了分辨率高、重复性较好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱,识别并鉴定了一些与支气管上皮癌变相关的差异表达的蛋白质,为进一步探讨肺鳞癌癌变机制,筛选肺鳞癌的特异性分子标志物奠定了初步基础.
-
人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析
目的:研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征.方法:抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白,双向凝胶电泳(2-DE)分离、银染显色,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的2-DE图像;根据获得的2-DE凝胶图像,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点,用胰蛋白酶原位水解,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定Mr;以测得的肽段Mr为肽质量指纹(PMF),通过PepIdent软件搜索SWISS-PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质.结果:建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的10个点相应的蛋白质.结论:本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的2-DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础.
