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单克隆抗体亲和层析法纯化SEB及其活性鉴定

张靖;王惠芳;高川;宋云扬

摘要: 目的:采用亲和层析法获取高纯度的金黄色葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B,SEB),并对其进行活性分析.方法:采用正辛酸沉淀法纯化了一株抗SEB的单克隆抗体(1D2),与CNBr活化的Sepharose4B偶联制成亲和层析柱纯化SEB,并对其超抗原活性和抗原活性进行鉴定.结果:与离子交换纯化法和市售的标准品相比较,亲和层析法纯化的SEB纯度高,纯化的效率为60.71%.同时,纯化后的SEB具有良好的抗原性和超抗原活性.结论:单克隆抗体亲和层析法可以高效率地纯化高纯度的SEB.

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    目的:观察血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9与类风湿性关节炎患者(Rheumatoid arthritis,RA)关节破坏的关系.方法:用双抗体夹心ELISA法测定90例未经治疗的早期RA患者及20例健康人血清中MMP-2、MMP-9,并分析其与RA患者X线表现积分(ΔLarsen)及健康评分(ΔHAQ)、CRP的关系.结果:血清MMP-2、MMP-9水平与C反应蛋白(CRP)、ΔLarsen、ΔHAQ显著相关,其相关系数及P值分别为r=0.40和0.46,P<0.01;r=0.28和0.31,P<0.05;r=0.30和0.34,P<0.01.18例初CRP正常的患者,MMP-2及MMP-9水平与观察12个月后出现关节侵蚀改变相关(r=0.59和0.48,P<0.05).回归分析发现,初无骨侵蚀改变的患者,Larsen积分显示的骨侵蚀进展与MMP-2含量密切相关(r=0.32,P<0.01).结论:血清MMP-2、MMP-9水平与RA患者的病情活动及早期关节的骨侵蚀显著相关,可以作为无骨破坏的早期RA患者出现骨侵蚀的有益预测指标.

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    目的:比较新生儿败血症及败血症休克血降钙素原(PCT)与C反应蛋白(CRP)和白介素-6(IL-6)的变化,探讨血中前降钙素原作为新生儿严重细菌感染诊断指标的敏感性、可靠性及对预后评估的作用.方法:采用半定量固相免疫测定法测定108例新生儿败血症(40例合并败血症休克)的血浆PCT水平,并比较同期CRP和IL-6水平.结果:新生儿败血症患儿血浆PCT阳性检出率明显高于正常对照组;其中败血症休克组尤为明显;败血症休克患儿发生率及死亡率随PCT值升高而升高;PCT与血清CRP、IL-6水平呈正相关;PCT的敏感性(87.5%)、特异性(82.4%)、阳性预测值(74.5%)和准确性(84.3%)高.结论:新生儿败血症及败血症休克时PCT升高较早,且随病情的加重持续升高.PCT对新生儿败血症及败血症休克诊断指标的敏感性、可靠性及对预后评估优于CRP和IL-6.

  • 测定血IL-2、IL-6水平以评估肾移植后的排斥反应

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    目的:探讨血液透析(HD)过程血小板中神经肽Y(NPY)与神经降压素(NT)的含量变化及意义.方法:HD患者35例,对照组30例.采用放射免疫分析法测定血小板提取液和血浆中NPY及NT的含量.结果:与对照组比较,HD患者血小板提取液NPY含量明显降低,血浆中NPY含量明显增高,血小板提取液与血浆NT含量均显著升高.与HD前比较,HD后血浆NT与血小板NPY均明显增高,血小板中NT与血浆NPY明显降低,两者具有显著相关性.结论:在HD过程中,血小板释放的NPY可能是造成肾性高血压和肾血管痉挛的重要病理因素.

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  • 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤caspase-3表达与自由基损伤机制的研究

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    目的::研究缺氧缺血性脑损伤( HIBD)新生大鼠caspase-3表达与自由基损伤的机制。方法:建立7日龄新生大鼠HIBD模型,分为HIBD组和假手术组,两组分别于HI后6、12、24、48、72、96 h取脑组织,应用TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学法检测caspase-3蛋白的表达,硫代巴比妥酸法测定丙二醛( MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶( SOD)含量。结果:HIBD组神经细胞凋亡数量及caspase-3的表达量6 h开始增多,48 h达高峰,各时间点两者均显著高于假手术组(P<0.05)。 HIBD组MDA含量6 h增高,24 h达高峰,各时间点均较假手术组增高(P<0.05)。 HIBD组SOD含量6 h下降,24 h降至低,各时间点均较假手术组降低(P<0.05)。凋亡细胞数量与caspase-3蛋白表达量和MDA含量均呈正相关(r=0.748、0.654,P均<0.05),与SOD含量呈负相关(r=-0.576,P<0.05)。结论:HIBD时自由基损伤促进caspase-3的表达及神经细胞的凋亡。

  • MMP-9及HIF-1α在鼻NK/T细胞淋巴瘤表达中的作用研究

    作者:韦花媚;刘坤平;罗春英;卢运龙;黄永秩;苏群英;陆海善

    目的:研究鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)的表达情况及其与患者临床病理特征的关系。方法:选取右江民族医学院附属医院经病理检查确诊为鼻NK/T细胞淋巴瘤患者,收集病理组织蜡块标本46例(病例组)、同期内镜检查取鼻甲黏膜组织经病理学证实为黏膜慢性炎症标本20例(对照组),分别采用HE染色法和免疫组织化学法处理两组标本,观察两组标本的病理形态、MMP-9及HIF-1a的表达差异,并分析其与患者临床病理特征的关系。结果:病例组的HIF-1α表达阳性率67.39%(31/46)、对照组表达阳性率为6.52%(3/20),病例组的HIF-1a表达显著的高于对照组(P<0.05)。病例组的MMP-9表达阳性率71.74%(33/46)、对照组表达阳性率为6.52%(3/20),病例组的MMP-9表达显著的高于对照组(P<0.05)。 HIF-1a、MMP-9在阳性表达在Ann Arbor分期(Ⅲ~Ⅳ期)、发生淋巴结转移、血管浸润鼻NK/T细胞淋巴瘤患者的患者组织中出现高表达( P<0.05)。结论:鼻NK/T细胞淋巴瘤患者组织中HIF-1α、MMP-9呈现高表达,并且与患者发生Ann Arbor分期(Ⅲ~Ⅳ期)、发生淋巴结转移、血管浸润具有一定的关系。

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