分子诊断与治疗杂志
Journal of Molecular Diagnosis and Therapy 분자진단여치료잡지
- 主管单位: 中山大学
- 主办单位: 中山大学
- 影响因子: 0.65
- 审稿时间: 1个月内
- 国际刊号: 1674-6929
- 国内刊号: 44-1656/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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Xpert MTB/RIF技术在基层实验室结核病诊断中的应用研究
目的:评估结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF )在基层实验室结核病诊断中的可行性与准确性。方法对1042例来自区级结核病防治单位门诊初诊者的痰液样品,分别进行涂片镜检、固体培养、传统比例法药敏试验和 Xpert MTB/RIF 检测,分析比较 Xpert MTB/RIF 法和传统方法检测痰标本中的 Mtb 及其耐药性的敏感度、特异度及检测耗时。结果以固体培养试验结果作为金标准,Xpert Mtb/RIF 方法检测痰标本 Mtb 的敏感度和特异度分别93.7%(655/699)和87.5%(300/343)。以传统比例法药敏试验结果为金标准,Xpert Mtb/RIF 方法检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为86.8%(79/91)和95.3%(531/557)。 Xpert MTB/RIF系统平均检测耗时为2 h。结论 Xpert Mtb/RIF检测操作简单、快速,检测敏感度高于涂片镜检法,与固体培养法有极好的一致性,同时该方法可以诊断患者是否对利福平耐药,在我国县(区)级实验室具有非常好的应用前景。
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广州地区579例儿童过敏性鼻炎患者吸入过敏原的临床分析
目的:通过皮肤点刺试验,考察广州地区过敏性鼻炎患儿吸入过敏原的种类及其分布,为诊断、预防和治疗儿童过敏性鼻炎提供参考。方法采用常见的11种吸入过敏原,对579例诊断为过敏性鼻炎患儿进行皮肤点刺试验,计算各种过敏原阳性率反应,并结合过敏原的种类、数量及患者年龄等临床资料进行分析。结果过敏原皮肤点刺试验阳性率为77.72%,以户尘螨、粉尘螨阳性率高,分别为73.58%和74.78%,其次依次为狗毛>猫毛>德国小蠊>多支>霉菌Ⅱ>树 I >交链>杂草>葡萄球菌。只对单一类别的变应原呈阳性反应的有121例,占所有阳性例数的26.9%,其中主要为螨类,占107例。对两类变应原呈阳性反应的有261例,对三类或三类以上变应原呈阳性反应的有68例。此外,皮肤点刺阳性率与患者年龄相关(P<0.001),11岁~14岁儿童(86.5%)>7岁~10岁儿童(75.0%)>5岁~6岁儿童(64.1%)。结论分析结果提示户尘螨和粉尘螨阳性率显著高于其他过敏原,是广州地区儿童过敏性鼻炎主要的吸入过敏原。过敏患者多数具有敏感体质,往往同时对多种过敏原产生过敏反应。值得注意的是皮肤点刺试验阳性率与患者年龄具有一定关系。
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细粒棘球绦虫14-3-3zeta蛋白的生物信息学分析
目的:应用生物信息学技术对细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)14-3-3zeta蛋白的结构和功能进行预测和分析,为进一步的实验研究提供依据。方法利用美国国家生物技术信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY,http://expasy.org/)提供的各种有关基因和蛋白序列、结构信息分析的工具,并结合其它生物信息学分析软件,对该蛋白质的结构和功能进行预测和分析。结果该基因全长为771 bp ,编码256个氨基酸,其编码的蛋白相对分子量理论预测值和等电点分别是29.4 kDa和5.04。预测该蛋白无信号肽和跨膜区,二级结构含8个α-螺旋和12个β-折叠股,氨基酸序列中有9个潜在抗原表位。结论初步认识了细粒棘球绦虫14-3-3zeta蛋白的基本特征,为深入研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。
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牙齿缺失对急性缺血性卒中患者预后影响的临床研究
目的:探讨牙齿缺失对急性缺血性卒中患者预后的影响。方法选择2011年10月至2012年6月汕头大学医学院附属粤北人民医院神经内科住院的急性期缺血性卒中患者164例,采集患者的人口学资料、既往病史和牙齿缺失等情况,检测血脂、血糖、同型半胱氨酸、超敏C反应蛋白、白细胞、纤维蛋白原、肌酐等血清学指标,入院3天内完成美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,出院后每半年及研究截止时通过电话随访评定患者改良Rankin量表(mRS)评分。采用t检验或秩和检验比较各组变量指标,组间频率比较采用卡方检验,并行ROC曲线及Logistic回归分析。结果缺血性卒中预后不良相关因素Logistic单因素分析显示,年龄(OR=1.04,95%CI:1.01~1.07, P=0.02)、肌酐(OR=1.01,95%CI:1.00~1.02, P=0.04)、牙齿缺失数(OR=1.05,95%CI:1.01~1.08, P=0.01)及入院时NIHSS评分(OR=1.22,95%CI:1.12~1.33, P<0.001)是预后不良的危险因素。而经Logistic多因素分析,校正年龄及其他因素的影响后,仅NIHSS 评分(OR=1.24,95%CI:1.11~1.40, P<0.001)和牙齿缺失数(OR=1.07,95%CI:1.02~1.12, P=0.004)与缺血性卒中预后不良相关。结论牙齿缺失数可能是与NIHSS评分相同,均是影响缺血性卒中预后不良的危险因素。
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TIP30基因敲除小鼠EGFR下游信号通路活性
目的:探讨TIP30基因敲除后是否影响小鼠EGFR下游信号通路的活性。方法获取野生型及TIP30基因敲除的BALB/c小鼠乳腺组织及乳腺癌组织,用免疫组化检测EGFR下游信号通路相关分子pAKT及pErk1/2的表达。结果 Tip30-/-小鼠乳腺上皮细胞pErk1/2及pAkt阳性率分别为(27.83±8.46)%和(30.83±6.65)%(n=4),显著高于 Tip30+/+小鼠乳腺上皮细胞的(12.58±5.87)%和(14.94±5.77)%(n=4),P值分别0.02和0.011。而Tip30-/-小鼠乳腺肿瘤细胞pErk1/2及pAkt阳性率分别为(51.68±8.57)%和(56.08±8.44)%(n=4),则显著高于 Tip30-/-小鼠乳腺上皮细胞阳性率,P 分别为0.002和0.001。结论 TIP30基因缺失可能通过使EGFR 下游ERK/MAPK 及PI3K/AKT 信号通路的活化,从而导致TIP30基因缺失小鼠发生乳腺癌。
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重组慢病毒载体介导不同启动子驱动的绿色荧光蛋白在多种(不同)细胞中的表达影响
目的:比较不同启动子的慢病毒转导细胞后,在不同细胞系中驱动绿色荧光蛋白表达的效率高低。方法采用3种不同启动子的转移质粒,与包装质粒共转染293T细胞,转染60 h后,收集慢病毒上清。用等量的三种慢病毒液转导5种细胞系(293A、MOLT-4、PC3、DU145及RM1),72 h后,荧光显微镜下观察转导效果;流式细胞仪计数转导效率。结果不同启动子( Ubiquitin , EF1α, CMV )在5种细胞系中驱动绿色荧光蛋白的表达及转导效率不同。在293A 和PC3细胞中,CMV 为强启动子,转导率分别为(94.83±2.87)%和(20.90±3.15)%;但在MOLT-4和DU145细胞中,EF1α为强启动子,转导率分别为(74.27±2.14)%和(25.13±4.95)%;在RM1细胞中,Ubiquitin为强启动子,转导率为(16.77±0.38)%。
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曼氏迭宫绦虫annexinB8的生物信息学分析和基因克隆
目的:通过生物信息学预测曼氏迭宫绦虫 annexinB8(SmannexinB8)的生物学特征,及潜在功能和结构,并且进行基因克隆,为下一步SmannexinB8参与宿主免疫调节研究提供依据。方法通过NCBI的ORF finder工具对SmannexinB8的开放阅读框进行分析,利用ExPASy 网站进行蛋白的物理化学参数、信号肽、跨膜螺旋、潜在分子生物学功能的预测,通过NCBI/BLAST 对蛋白保守功能域进行检测。不同物种的annexin序列从NCBI网站获取,并利用Vector NTI suit 8.0和 TreeView 软件进行分析。利用 SWISS-MODEL 网站和 SPDBV 4.10软件分析 SmannexinB8蛋白的三维空间结构。此外,对SmannexinB8基因进行扩增,并克隆到原核表达载体 pET-28a (+)。结果 SmannexinB8是一个全长基因,编码347个氨基酸。蛋白由4个典型的annexin重复结构域组成,序列当中没有信号肽,是一个稳定的可溶性蛋白分子。三维空间立体结构分析结果显示SmannexinB8是一个保守的蛋白。SmannexinB8与多房棘球绦虫、口膜壳绦虫、细粒棘球绦虫、华支睾吸虫以及人类的annexin 基因的同源性分别是68%,67%,65%,46%和40%。分子进化分析显示SmannexinB8与绦虫属的亲源性近,而与其他物种,如吸虫、哺乳动物亲源性较远。结论 SmannexinB8可能具有抑制磷脂酶A2的活性,促进细胞融合、参与调节免疫反应和离子通道形成的功能,可能在参与宿主免疫调节中起到关键性的作用。
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广东男男性行为HIV-1感染者中耐药情况及基因型分布
目的:了解2013年在广东省新发现的男男性行为(man have sex with man, MSM)人类免疫缺陷病毒-I(human immunodeficiency virus 1, HIV-1)感染者中基因型耐药情况及亚型分布。方法采用 In-House 方法,扩增 HIV-l pol 基因蛋白酶区(protease region, PR)基因全长和逆转录酶区(reverse transcriptase region, RT)基因部分片段,通过HIV-1耐药数据库,获得个体耐药突变位点、基因亚型及药物耐受情况。结果在203人中,HIV-1病毒载量拷贝数中值为4.27×104拷贝/mL,平均值拷贝数为9.37×104拷贝/mL;高度基因型耐药病例2人,占1.2%;中度耐药1人,占0.6%;低度耐药7人,占4.1%;潜在耐药26人,占15.4%。 PR 区未见主要耐药突变;RT 区主要耐药突变有:K70R、M184V、T215IT、K219E、K103KN、V106I、E138EG、V179E/D;出现了针对核苷类逆转录酶抑制剂3TC 及 FTC 的高度耐药1例,占0.6%;针对非核苷类逆转录酶抑制剂EFV 及NVP 高度耐药1例,占0.6%;亚型方面,主要以CRF01_AE及CRF_BC重组亚型为主,同时B 亚型在MSM 人群中占20.1%。结论广东省目前MSM感染者中HIV-1高度耐药毒株尚处于低流行,潜在耐药毒株可能已经在人群中传播;MSM 人群中以CRF01_AE 、CRF_BC重组亚型及B亚型毒株流行为主。
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论华法林相关基因突变检测技术
华法林为一种常用的口服抗凝药,主要用于治疗血栓栓塞性疾病。但其治疗窗窄、个体差异大,容易引起血栓或出血的风险。代谢酶CYP2C9和作用靶点VKORC1基因多态性对华法林个体剂量差异有显著影响,因此CYP2C9和VKORC1基因突变的检测对于华法林的个体化治疗具有重要的参考价值。目前用于 CYP2C9和 VKORC1突变检测的方法有 PCR-RFLP、TaqMan、pyrosequencing、HRM、POCT、熔解曲线分析技术、MS、DHPLC等。本文将对这些检测方法的特点进行比较分析,以发现适合临床应用推广的技术检测方法。
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腺相关病毒载体:通往肿瘤基因治疗的桥梁
腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)是一种有缺陷的非致病的人类细小病毒。腺相关病毒载体作为基因治疗的载体,对长期基因矫正和基因治疗具有一定优越性。由于其低致病性、易操作性等优点,腺相关病毒载体被作为转导目的基因的理想载体,现已广泛地应用于多种肿瘤等疾病的基因治疗研究中。通过对腺相关病毒载体的改造优化,增加其靶向性,减少免疫原性,有望为相关疾病的基因治疗研究提供新的手段和方法。本文就目前腺相关病毒在肿瘤治疗中的应用研究加以综述,旨在对病毒载体在肿瘤生物治疗领域中的应用提供相应的参考。
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实时荧光定量PCR检测血清/血浆microRNAs临床应用前的准备
现已证明血清/血浆 microRNAs(miRNAs)表达谱的变化与多种疾病的发生、发展相关。血清/血浆miRNAs分子稳定,不易降解,且标本采集创伤小、便捷,非常适合应用于临床实验室检测。因此miRNAs极有可能成为未来疾病诊断和预后评估的分子标志物乃至治疗靶标。实时荧光定量 PCR 检测法(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)操作简便,需要的 RNA 量较少,灵敏度极高,能在短时间内获得结果,并可同时检测多种miRNAs 表达,有良好的应用前景。本文将详细探讨现阶段用于血清/血浆miRNAs 定量检测的RT-qPCR方法,以及总结血清/血浆miRNAs 定量检测应用于临床检验应注意的问题。
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细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)与免疫调节
细胞因子信号转导抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)是一类可由多种细胞因子诱导产生,又能通过多种途径对细胞因子的信号转导进行负向调节的蛋白质分子。众多研究发现SOCS蛋白家族是一个非常重要的可以负向调节 JAK/STAT信号通路的分子家族。本文将着重阐述介绍SOCS家族在炎症和自身免疫性疾病中的作用。
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蛋白质组学在肝细胞癌诊断研究中的进展与展望
近些年研究发现,对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)进行蛋白质组学研究有助于寻找新的能更早期、更准确、更直接地反映HCC病情的蛋白肿瘤标志物或蛋白质组模式。笔者从血清、组织和细胞阐述该领域的新研究进展与发展前景。