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哺乳动物细胞中调控AQP9磷酸化的蛋白因子及对砷摄入影响的研究
目的 探讨蛋白激酶p38,蛋白激酶C对几种哺乳动物细胞中水通道蛋白9磷酸化的调控作用,以及这些蛋白因子对细胞中砷摄入含量的影响.方法 采用免疫印迹法和免疫共沉淀技术分别检测细胞株中p38,蛋白激酶C和水通道蛋白9表达水平及其磷酸化水平.电感藕合等离子体质谱法(ICP-MS)测定细胞内砷含量.结果 在ECV-304,AsRE,HepG2和L-02细胞株中,p38蛋白及其磷酸化表达水平在砷的刺激下随时间增加而有显著上升,相同条件下蛋白激酶C末见明显变化.当抑制细胞中p38活性,除了L-02细胞中水通道蛋白9的磷酸化水平受到抑制外,其余细胞中水通道蛋白9的蛋白含量及磷酸化水平都未见明显变化.砷含量也只在L-02细胞中看到有较显著的下降.结论 水通道蛋白9磷酸化水平影响砷进入细胞的速度与含量,但不同的细胞中水通道蛋白9的磷酸化调控机制有所差异.p38蛋白激酶在正常肝细胞L-02中显示对水通道蛋白9磷酸化有一定的调控作用,蛋白激酶C则在本实验条件下未见入调控砷的入胞机制.
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缺锌对大鼠脑肌醇磷脂信号转导系统的影响
目的探讨缺锌对大鼠脑肌醇磷脂信号转导系统的影响.方法24只Wistar大鼠,雌雄各半,按体重随机分为A(缺锌组),B(自由进食组),C(配对饲养组)三组,每组8只,实验期40天,测定脑锌和血锌含量,并观察缺锌对大鼠脑组织内磷脂酶C(PLC)活性,蛋白激酶C(PKC)活性,钙调蛋白(CaM)含量,及钙依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性的影响.结果A组大鼠血清和脑锌含量明显降低,同时A组大鼠大脑皮层和海马中PLC,PKC,CaMKⅡ活性亦明显低于B组和C组.A组大鼠脑组织CaM含量明显低于B组,与C组无显著性差异.结论缺锌可以抑制肌醇磷脂信号转导系统.
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冬凌草甲素通过线粒体途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡
目的研究冬凌草甲素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的作用机制.方法 MTT法检测冬凌草甲素对A375-S2细胞生长的影响及各种Caspase抑制剂、佛波酯(PMA)、PKC抑制剂H-7对冬凌草甲素作用的影响;DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡;LDH法测定乳酸脱氢酶(LDH)活力.结果冬凌草甲素对A375-S2细胞生长有显著抑制作用,并能显著诱导A375-S2细胞发生凋亡,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性.形态学观察可见凋亡小体的形成,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带;Caspase家族抑制剂,Caspase-9抑制剂能显著抑制冬凌草甲素诱导A375-S2细胞的凋亡.大剂量PMA(400 ng/mL)显著抑制34.3μmol/L冬凌草甲索诱导A375-S2细胞凋亡,而小剂量PMA(10ng/mL)与冬凌草甲素有协同杀死细胞的作用,且PKC抑制剂H-7也可下调这种凋亡作用.Caspase-3的抑制剂可抑制Caspase-3的活力升高.结论适宜浓度的冬凌草甲素(34.3μmol/L)诱导A375-S2细胞凋亡,这种作用是通过线粒体调节Caspase的激活来实现的.
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DAG-PKC信号传导通路与糖尿病血管并发症
高血糖可引起多种组织细胞内二脂酰甘油(DAG)水平升高，DAG可激活蛋白激酶C(PKC)。近研究表明，持续高血糖引起的DAG-PKC系统激活与糖尿病多种血管异常关系密切。PKC是由一个多基因家族编码的多肽类物质，至少有11种亚型。在多个PKC亚型中，β、γ亚型在糖尿病动物的血管系统中优先被激活。选择性PKC-β抑制剂(LY333531)能逆转或减轻啮齿类糖尿病动物的血管异常，其对糖尿病血管并发症预防作用的临床研究尚在进行中。
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甲异靛诱导NB4细胞凋亡的分子机制研究
甲异靛对多种肿瘤细胞生长具有抑制作用~([1-2]),对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞系NB4细胞有显著的诱导细胞凋亡作用,但其具体机制尚不明确~([3]).我们通过研究半胱天冬酶(caspase)、蛋白激酶C(PKC)以及促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在甲异靛诱导细胞凋亡过程中的变化,对甲异靛诱导NB4细胞凋亡的机制进行了初步探讨.
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14-3-3在支气管哮喘PKC信号途径中的作用初探
目的:通过14-3-3、PKC在支气管哮喘患者T细胞活化过程中信号传导途径的研究,探讨哮喘Th1/Th2失衡和T细胞异常活化的关键因素.方法:现察20例哮喘患儿及相同数量同龄对照组.分离外周血T细胞,空白对照组、加入PMA组、加入抗14-3-3单克隆抗体组培养后,流式细胞仪检测Th1/Th2、Ca抖、14-3-3、Stat6;ELISA试验检测细胞上清液中IL-4、IL-5.结果:急性发作期哮喘患儿Th1细胞比例显著下降、Th2细胞显著增高(P＜0.01);PKC激动剂(PMA)活化后Th1/Th2失衡更加明显.加入14-3-3单抗后Th1/Th2失衡明显缓解.结论:影响Th细胞分化的调控机制极为复杂,本文从正性调节(14-3-3/PKC)的调节途径,探讨了哮喘Th1/Th2失衡的调节机制,发现哮喘患儿Th2过度活化14-3-3/PKC途径可能是其中重要的因素.
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蛋白激酶C在缺碘子代大鼠神经细胞的表达
目的研究蛋白激酶C(PKC)在缺碘甲状腺激素不足所致海马神经细胞凋亡的表达和学习记忆低下可能的机制.方法复制碘缺乏海马子代大鼠,用免疫组化方法检测海马神经细胞凋亡,PKC表达,并计数.结果缺碘子代大鼠较对照组海马神经细胞凋亡明显增多,PKC表达明显减少,分别为(18.18±2.99)、(2.40±1.17),(0.037±0.009)、(0.27±0.016).结论缺碘甲状腺素不足所致海马神经细胞PKC减少,可能与海马神经细胞凋亡增加,学习记忆低下有关.
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发作性运动诱发性舞蹈手足徐动症24例临床分析
发作性运动诱发性舞蹈手足徐动症(PKC)是发作性运动障碍中常见的一种类型[1].本文回顾性总结我院自1985年至2009年6月收治及随访的24例PKC患者的临床资料,旨在总结PKC的临床特点及治疗方法,探讨PKC的发病机制.
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益气健脾抗癌法对肠癌脾虚本质的影响及抗肿瘤作用实验研究
目的:观察益气健脾抗癌中药对脾虚肠癌蛋白激酶C(PKC)及瘤体表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:使用随机平行对照方法,将40只SD小鼠编号按随机数字表法分为正常组、模型组、益气健脾组、益气健脾抗癌4组.每组10只.灌胃干预:正常组、模型组生理盐水,益气健脾组益气健脾中药,益气健脾抗癌组益气健脾抗癌中药合用.连续灌胃14 d.观察脾脏蛋白激酶C(PKC)、瘤体表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达.结果:脾脏PKC表达正常组高于益气健脾抗癌组、益气健脾组和模型组(P＜0.01),正常组、益气健脾抗癌组均高于模型组(P＜0.01),益气健脾抗癌组高于益气健脾组(P＜0.05),益气健脾组高于模型组(P＜0.05).细胞凋亡益气健脾组、益气健脾抗癌组、模型组均高于模型组(P＜0.01),益气健脾抗癌组高于益气健脾组(P＜0.01).结论:益气健脾中药可改善脾功能,缓解肿瘤对脾脏PKC表达抑制作用,益气健脾中药联合抗癌中药作用更加明显,有效促进肿瘤细胞凋亡,对EGF、VEGF表达具有明显抑制作用.
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AngⅡPKC和AT1受体的mRNA表达在大鼠慢性心衰中的作用
目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、蛋白激酶C(PKC)和AT1受体的mRNA表达在大鼠慢性心衰中的作用.方法:制作冠状动脉结扎心衰大鼠模型,采用免疫组化方法测定大鼠心肌细胞中AngⅡ、PKC含量;采用RT-PCR方法测定AT1受体mRNA含量.结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠PKC活性增强(P＜0.01),AT1受体的mRNA表达也有升高(P＜0.05).结论:激活AngⅡ和受体及其下游的信号分子PKC是介导心衰的重要信号转导途径.
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神经节苷脂对大鼠急性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响
背景:大鼠急性脑缺血再灌注损伤后有细胞凋亡及凋亡相关基因的表达.目的:观察神经节苷脂对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响.设计:随机对照动物实验.单位:吉林大学中日联谊医院神经内科.材料:实验于2002-04在吉林大学中日联谊医院动物实验室完成.健康雄性Wistar大鼠48只,鼠龄三四个月,体质量(220±50)g.大鼠随机分为缺血再灌注组和缺血再灌注+给药组(缺血前30 min腹腔注射神经节甘脂GM-1),24只/组.其中又根据再灌注时间不同,每组分别分为3个时相点,即3 h、6 h和24 h点,每个时相点8只大鼠.方法:①建立大鼠全脑缺血再灌注模型.②应用二苯胺法测定大鼠脑缺血后3 h、6 h、24 h脑组织DNA裂解率变化,取大脑皮质100 mg加0.9 mL裂解液制成10%匀浆,加入离心管中,反复冻融,收集上清和沉淀,DNA裂解率=上清吸收值/(上清吸收值+沉淀吸收值).③免疫组织化学方法观察蛋白激酶Cδ表达,以及神经节苷脂给药后的变化.主要观察指标:大鼠脑皮质DNA裂解率的变化及蛋白激酶Cδ表达强度的变化.结果:实验过程中盐水对照组再灌注6 h时死亡1只,麻醉过量死亡,再灌注24 h时死亡2只,分别予以补充.随着再灌注时间的延长,DNA裂解率变化明显增加,24 h达高峰,蛋白激酶Cδ表达于再灌注6 h达高峰,以后逐渐呈下降趋势;神经节苷脂组相应时间点的DNA裂解率及蛋白激酶Cδ表达明显减少.结论:神经节苷脂能抑制脑缺血再灌注后细胞凋亡的发生,并减少蛋白激酶Cδ的表达,对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用.
关键词： 神经节苷脂G(M-1) DNA PKC -
低能体外冲击波对大鼠成骨细胞增殖分化的影响
[目的]探讨低能体外冲击波(ESW)对体外培养鼠成骨细胞(ROB)增殖、成骨分化的作用及其细胞内信号转导.[方法]每次取6只大乳鼠,取颅盖骨细胞分2瓶培养至第3代备用.取培养第3代ROB,用0.18 mJ/mm2低能ESW不同次数(0,30,60,90,120,150次)刺激ROB,用细胞计数、MTT和流式细胞法检测ROB增殖状况,用酶标仪检测碱性磷酸酶(ALP)活性,用免疫组化检测Ⅰ型胶原表达,观察ROB成骨分化,分析ESW对ROB的影响;然后,选择适当的ESW刺激(120次),并加入PKC抑制剂H7或者p38MAPK抑制剂SB203580.观察上述ROB增殖、分化及p38MAPK磷酸化激活状况变化.[结果]ESW0.18mJ/mm2刺激60～150次可显著促进体外培养ROB细胞增殖和成骨分化(与对照组比较,P＜0.05);以120次刺激促进ROB增殖分化作用强.PKC抑制剂H7和p38MAPK抑制剂SB203580都能明显抑制120次ESW的这一作用,PKC抑制剂H7能明显抑制ESW作用ROB后磷酸化激活p38MAPK的作用.[结论]适当的ESW应力刺激可能会促进体外培养ROB增殖和成骨分化,PKC和p38MAPK可能都参与此过程的细胞内信号转导.
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δ阿片受体激活对血清饥饿致大鼠成骨细胞凋亡的影响及机制
目的 利用体外培养大鼠成骨细胞,研究δ阿片受体激活对血清饥饿诱导成骨细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 培养大鼠成骨细胞,分组给药作用48 h后,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-F1TC/PI双标记法测定细胞凋亡率,Western blot测定PKC和Caspase-3表达.结果 给予δ阿片受体激动剂DADLE l μmol·L-1处理可显著抑制由血清饥饿导致的成骨细胞凋亡,表现为细胞存活率增加,凋亡率降低,S+G2+M期百分比增加,Caspase-3表达下降,PKC表达增加；但这种现象可被Naltrindole所拮抗；并且给予10 μmol·L-1 GF109203X亦可拮抗DADLE的这种抑制细胞凋亡的作用,表现为细胞存活率降低,凋亡率增加；S+G2-M期百分比降低；caspase-3表达增加；PKC表达下降.结论 DADLE激活δ阿片受体对血清饥饿诱导的成骨细胞凋亡起保护作用,且这种作用是通过PKC途径实现的.
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巨细胞病毒感染对小鼠海马的PKC表达与Ca2+浓度的影响
目的:观察鼠巨细胞病毒感染对小鼠海马的PKC蛋白表达及细胞内Ca2+浓度的影响.方法:将BALB/C乳鼠随机分为对照组和病毒组,感染70天后应用免疫组化技术和荧光分光光度计分别检测两组仔鼠海马的PKC蛋白和Ca2+的表达量.结果:病毒组仔鼠海马的PKC蛋白表达量明显下降,Ca2+浓度明显增高,与对照组比较有显著性差异(P<0.05).结论:巨细胞病毒感染引起小鼠海马PKC蛋白表达量与Ca2+浓度的改变可能是导致其神经系统功能紊乱的机制之一.
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IL-1β影响大鼠星形胶质细胞中SSeCKS表达的研究
目的:研究Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在IL-1β激活的星形胶质细胞中的表达.方法:以炎性因子IL-1β刺激大鼠体外培养的星形胶质细胞,观察细胞中SSeCKS的表达及其细胞内的亚定位的改变.结果:IL-1β可上调大鼠原代培养星形胶质细胞中SSeCKS的表达,诱导其丝氨酸磷酸化.在亚细胞水平,IL-1β还能引起SSeCKS向核周、细胞星状突起聚集,而蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220能抑制IL-1β对细胞中SSeCKS亚细胞定位及磷酸化水平的影响.结论:在IL-1β的影响下,大鼠星形胶质细胞中SSeCKS的表达增加,磷酸化水平增强,细胞内定位发生改变,这种改变与PKC的功能相关,提示SSeCKS可能作为PKC的下游分子参与到炎性因子引起的星形胶质细胞活化的过程中.
关键词： SSeCKS 星形胶质细胞 interleukin-1β 大鼠 PKC -
瑞舒伐他汀对颈动脉粥样硬化大鼠血管损伤及MMP-2,MMP-9和PKC表达的影响
目的 探究瑞舒伐他汀对颈动脉粥样硬化大鼠血管损伤的保护作用,以及对MMP-2,MMP-9和PKC表达的影响.方法 将90只大鼠随机分为对照组、模型组和瑞舒伐他汀组,每组30只,模型组和瑞舒伐他汀组给予高脂鼠粮并复制颈动脉球囊损伤模型.检测颈总动脉内膜中膜厚度,RT-PCR法检测检测颈总动脉内MMP-2 mRNA、MMP-9mRNA和PKC mRNA表达水平,Western Blotting法检测颈总动脉内MMP-2蛋白、MMP-9蛋白和PKC蛋白表达水平.结果 瑞舒伐他汀组与模型组比较精神恢复较快,毛发色泽光滑,活动量较大,体重增加速度较快;瑞舒伐他汀组内膜厚度/中膜厚度比值、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA、PKC mRNA、MMP-2蛋白、MMP-9蛋白和PKC蛋白表达水平显著性的低于模型组(P＜0.05).结论 瑞舒伐他汀对动脉粥样硬化大鼠颈总动脉损伤有保护作用,保护作用机制可能为下调MMP-2,MMP-9和PKC表达水平.
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趋化因子FKN对单个核细胞MMP-2表达的影响及PKC在其中的作用
目的 探讨趋化因子Fractalkine(FKN)对单个核细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2表达的影响及蛋白激酶C(PKC)在其中的作用.方法 采用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞.将提取的单个核细胞分为:空白对照组、FKN组及Ro31-8220(PKC阻断剂)组.应用明胶酶谱法检测各组单个核细胞中MMP-2表达情况.结果 MMP-2在FKN组[(619±34.77)INT·mm2]较空白组[(3 285±54.69)INT·mm 2 ]表达明显减少(P＜0.05),在Ro31-8220组[(2 478.33±64.31)INT·mm2]较FKN组表达明显增多(P＜0.05).结论 趋化因子FKN可以抑制单个核细胞MMP-2的表达,这一作用可能是通过PKC途径实现的.
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大蒜素对糖尿病肾病大鼠GLUT1/PKC途径的调控作用
目的 探讨大蒜素对糖尿病肾病(DN)葡萄糖转运蛋白(GLUT)1/PKC途径是否具有调控作用.方法 采用高脂高糖饮食加尾静脉注射 STZ建造DN模型,所有大鼠分为正常对照组、糖尿病(DM)对照组、大蒜素低、中、高剂量组.实验结束后检测大鼠空腹血糖(FPG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24 h尿白蛋白(UAE)和肾组织中 CollagenⅠ、GLUT1、PKC的表达.结果 与正常对照组相比,DM对照组FPG、BUN、Scr、UAE、CollagenⅠ、GLUT1水平和 PKC的表达均显著增高(P<0.01),而大蒜素的中、低剂量组 BUN、Scr、UAE和 GLUT1均显著降低(P<0.01),高剂量组的 Scr已达正常水平(P>0.05);高剂量组 CollagenⅠ的表达显著降低(P<0.01);低、中、高剂量组 PKC的表达显著降低(P<0.01),且具有剂量依赖性.结论 大蒜素可能通过 GLUT1/PKC途径来减缓和抑制DN的发生和发展.
关键词： 大蒜素 糖尿病肾病 葡萄糖转运蛋白(GLUT)1 PKC -
大鼠脑缺血再灌注后PKCδ表达意义及银杏叶制剂的脑保护作用研究
目的研究蛋白激酶C(PKC)在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达与细胞凋亡的关系以及银杏叶制剂(金纳多)对其表达的影响.方法用免疫组化法观察PKC在脑缺血再灌注后不同时间点PKCδ表达,并用图象分析测定其免疫强度以及应用金纳多治疗后对其免疫强度的影响.结果脑缺血再灌注后PKCδ阳性表达;再灌注6 h PKCδ免疫强度达高峰,24 h免疫强度减弱;金纳多治疗组相应时间点PKCδ免疫强度明显减弱.结论PKC的激活直接参与了缺血性神经元损伤;并与细胞凋亡关系密切;金纳多抑制PKC活性,对脑组织有保护作用.
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蛋白激酶C在中性粒细胞凋亡信号转导中的作用
蛋白激酶C(PKC)是一类ca2+、磷脂依赖性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,由12种具有不同生物学特性的同工酶组成.PKC通过催化多种蛋白质上Ser/Thr的磷酸化,在细胞下游信号转导和调节细胞功能中发挥重要的作用.中性粒细胞(PMN)是参与机体固有免疫的主要细胞,一旦分化成熟便启动它的自发性凋亡程序,从而维持机体的内环境稳定和促成炎症反应的无损伤性收敛.PMN凋亡的调控是一个受多基因、多因子、多条信号转导通路独立或交联作用的复杂网络.作为细胞内信号转导重要递质的PKC,在调控PMN的自发性凋亡进程中起着重要作用.
