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IGFBP7基因慢病毒载体的构建及在K562细胞中的表达
本研究构建胰岛素样生长因子结合蛋白7( IGFBP7)基因的慢病毒载体,为研究该基因在白血病中的作用提供基础.采用限制性内切酶酶切获得目的基因,基因重组构建慢病毒载体质粒venus-IGFBP7,用293T细胞包装慢病毒颗粒,感染K562细胞,并采用多种方法鉴定.结果表明,所获IGFBP7基因经测序与GenBank比对序列一致,慢病毒载体质粒venus-IGFBP7经BamH Ⅰ酶切鉴定片段大小正确,荧光显微镜及流式细胞术检测到绿色荧光蛋白在293T及K562细胞中表达,RT-PCR和Western blot检测到IGFBP7 mRNA和蛋白在K562细胞表达.结论:成功构建带有IGFBP7基因的慢病毒载体,为研究IGFBP7基因在K562细胞中的作用奠定了基础.
关键词： 胰岛素样生长因子结合蛋白7基因 慢病毒载体 293T细胞 K562细胞 -
汉防己甲素联合屈洛昔芬对K562细胞bcr/abl表达的影响
为了研究汉防己甲素(Tet)联合屈洛昔芬(DRL)对K562细胞株凋亡相关因子bcr/abl mRNA及蛋白表达的影响,Tet(1μmol/L)和DRL(5μmol/L)单用及联合应用于K562细胞一定时间后,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测K562细胞bcr/abl mRNA和蛋白表达的变化.结果表明:Tet和DRL单独应用对K562细胞bcr/abl mRNA及蛋白表达均无影响,两药联合应用于48小时K562细胞bcr/abl mRNA表达开始下调,K562细胞P210BCR/ABL蛋白表达于72小时开始下调.结论:Tet和DRL联合应用可下调K562细胞bcr/abl的表达,这可能是两药联用逆转耐药的机制之一.
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吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶诱导K562细胞凋亡机制的探讨
为探讨吲哚乙酸(indole-3-acetic acid IAA)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase HRP)共同作用诱导k562细胞凋亡的可能机制,应用MTT法和DNA末端标记法(TUNEL)分别检测IAA/HRP对k562细胞增殖及诱导k562细胞凋亡的影响;用化学方法检测了不同IAA浓度结合HRP作用下细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量的变化;应用DCFH-DA探针通过共聚焦显微镜检测药物作用下细胞内自由基的产生情况.研究结果表明:MTT和TUNEL显示IAA/HRP能明显抑制K562细胞的增殖,诱导K562细胞凋亡,其诱导凋亡的作用与IAA浓度呈正相关(r=0.971,P＜0.01),且随IAA浓度的增加,细胞内SOD活力、MDA量也随之升高;DCFH-DA探针检测表明,胞内自由基水平的荧光强度也随IAA浓度的增加而呈明显上升趋势.结论:IAA结合HRP能抑制K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能与IAA/HRP作用下K562细胞内自由基的产生增加有关.
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黑色素瘤抗原基因3在K562细胞内质网应激反应性凋亡中的表达及意义
本研究旨在探讨黑色素瘤抗原基因-3(melanoma antigen gene-3,MAGE-3)在内质网应激反应性凋亡中的表达及意义.应用Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM通过荧光分光光度计测定白血病细胞系K562及其多药耐药细胞株K562/A02经thapsigargin作用前后细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化;Western blot检测GRP78蛋白表达变化;荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-PCR检测MAGE-3基因mRNA水平表达变化.结果显示:①毒胡萝卜素(thapsigargin)诱导K562和K562/A02细胞[Ca2+]i出现不同程度的升高并呈一定的浓度依赖性,同时诱导GRP78蛋白表达增加以及K562和K562/A02细胞典型的凋亡改变,细胞凋亡率亦呈一定的浓度依赖性;在静息状态下K562/A02细胞[Ca2+]i较K562细胞明显增高;②毒胡萝卜素诱导K562和K562/A02细胞凋亡过程中,MAGE-3 mRNA表达明显下调;此外,与K562细胞比较,K562/A02细胞MAGE-3 mRNA表达明显上调.结论:①毒胡萝卜素在一定浓度范围内可诱导K562及其多药耐药细胞株K562/A02发生内质网应激反应性凋亡,并可能与MAGE-3表达下调有关或MAGE-3基因可能参与此凋亡途径的调控;②MAGE-3可能具有抗凋亡活性,K562/A02细胞多药耐药性可能与细胞[Ca2+]i增高和MAGE-3表达上调有关.
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K562和SiHA细胞株经γ-射线照射后细胞周期阻滞与ATM表达量的关系研究
共济失调毛细血管扩张症(ataxia telangiectasis,A-T)是由ATM(ataxia telangiectasis mutant)基因突变所致,其突出特点是对放射线敏感.为探讨K562和SiHA两种肿瘤细胞株ATM表达量与γ-射线照射后细胞周期阻滞即自我保护功能之间的关系,应用半定量RT-PCR测量它们的ATM mRNA表达,同时以6、10和15 Gy 60Co γ射线分别照射细胞,并于照射后6、12、24、48及60小时观察细胞周期阻滞现象和凋亡率的变化.结果显示,K562细胞株ATM RNA相对表达量为0.04,而在SiHA细胞株为0.80,SiHA的ATM RNA表达量约为K562的20倍.结论:照射后K562和SiHA细胞株均表现G2/M期阻滞,K562细胞周期阻滞即自我保护机制明显比SiHA差.
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四硫化四砷诱导K562细胞凋亡的机制研究
为了探讨四硫化四砷(As4S4)诱导慢性粒细胞性白血病(CML)细胞株K562凋亡及机制,用台盼蓝染色和MTS方法观察四硫化四砷对K562细胞生长抑制的影响,用瑞氏染色检测药物处理后的细胞形态学变化和细胞凋亡发生,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期改变,实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)检测BCR-ABL、Bcl-2、Bcl-XL、Bad和Bax等mRNA的表达,Western blot方法检测BCR-ABL、Akt和pAkt蛋白的表达.结果表明:四硫化四砷能明显抑制K562细胞活力,在0.5 μmol/L浓度下培养24小时,细胞生长明显受抑制且有剂量和时间依赖关系.小于0.1 μmol/L的四硫化四砷对K562细胞活力无明显影响.K562细胞经与四硫化四砷培养24至48小时后,出现典型的凋亡改变.与四硫化四砷培养12小时后,1.0 μmol/L条件下,K562细胞凋亡率上升,大于2.0 μmol/L浓度的四硫化四砷能明显诱导细胞凋亡,四硫化四砷能使K562细胞周期阻滞于G2/M期.四硫化四砷能使K562细胞Bcl-XL的mRNA表达下调,但对Bcl-2、Bad、Bax和BCR-ABL等的mRNA表达无影响.四硫化四砷能使K562细胞的pAkt蛋白表达下调,而BCR-ABL蛋白表达无变化.结论:四硫化四砷能有效地通过诱导凋亡抑制K562细胞生长,其机制可能与抑制凋亡途径因子Bcl-XL和pAkt等表达有关.
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小檗胺对K562细胞体外及体内作用的实验研究
为了探讨小檗胺(berbamine,BER)在体外及体内抗人白血病细胞株K562细胞的作用及其可能的机制,用MTr法测定K562细胞的增殖抑制,用流式细胞术检测凋亡细胞,用RT-PCR方法检测bcr/abl基因表达,用Westem blot方法检测BCR/ABL蛋白质水平表达,利用K562细胞荷瘤裸鼠模型观察小檗胺治疗后瘤体大小、组织病理及bcr/abl基因表达的改变.结果表明:小檗胺对K562细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖关系.经8.0μg/ml BER作用24、48、72小时,对K562细胞的抑制率分别为(26.63±3.57)%,(61.84±4.74)%,(75.32±1.95)%,与对照组相比,P＜0.01.IC50值(72小时)为(5.227±1.307)μg/ml.与空白对照组相比,经8.0μg/ml小檗胺处理72小时后,K562细胞凋亡率明显增加[(61.77±4.35)%vs(0.50±0.14)%,P＜0.01].小檗胺能下调K562细胞bcr/abl mRNA表达和P210水平,且呈浓度-时间依赖效应,并与细胞凋亡率有一定的相关性.经8.0μg/ml BER处理后,与同浓度点对照组相比,72小时组的表达明显地减弱(0.97±0.01vs1.38±0.02,P＜0.01).4.0-16.0μg/ml BER处理24小时后,P210的相对表达量由未加药对照组的1.04±0.02降至16.0μg/ml组的0.63±0.01(P＜0.01),与所设的对照组药物酪氨酸蛋白激酶抑制剂STI571的作用结果相似.在K562荷瘤裸鼠模型,小檗胺治疗组瘤重较未治疗对照组的明显减少[(1.46±0.43)g vs(2.90±0.94)g,P＜0.01],抑瘤率为49.66%.瘤体细胞的bcr/abl mRNA的表达水平明显下调.结论:小檗胺在体外对K562细胞具有明显的增殖抑制作用及明确的诱导凋亡作用,并呈时间-浓度依赖关系;小檗胺诱导细胞凋亡可能与其下调bcr/abl基因和(或)P210的表达水平有关;在荷瘤裸鼠体内,小檗胺同样具有显著的抑制K562细胞生长的作用,尤其能下调瘤体组织细胞bcr/abl mRNA的表达水平.
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可移植性人髓系白血病BALB/c小鼠模型建立
造血干/祖细胞移植已成为迄今为止治疗恶性血液病等有效措施,而建立骨髓型可移植性白血病小鼠模型将为造血干细胞移植治疗白血病提供实验用动物模型.本实验用K562细胞接种BALB/c裸鼠产生红白血病的小鼠模型.将4-5周龄雌性BALB/c裸鼠,腹腔连续两天注射环磷酰胺(CTX)2 mg,第3天腹腔或尾静脉直接接种K562白血病细胞2×10 5-2×10 6/只.定时取小鼠尾静脉外周血、骨髓细胞用流式细胞术和RT-PCR分别检测CD45,CD13,CD33抗原及bcr/abl融合基因.结果显示,4-5周龄BALB/c裸鼠无论通过腹部或尾静脉接种,无论有无CTX预处理,当接种K562细胞数大于2×10 5/只时,均可在BALB/c裸鼠身上产生可移植性人髓系白血病,荷瘤小鼠可存活30-60天.结论:腹腔或尾静脉接种大于2×10 5细胞/只均可产生人髓系白血病荷瘤小鼠模型,有无CTX 2毫克/只的预处理不影响4-5周龄BALB/c裸鼠产生人白血病模型.
关键词： BALB/c裸鼠 造血干细胞移植 K562细胞 Bcr/abl融合基因 白血病 -
组蛋白去乙酰化酶抑制剂对HL-60细胞和K562细胞的抗肿瘤作用
为了观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸(VPA)、曲古抑菌素(TSA)对K562细胞和HL-60细胞的抗肿瘤作用以及它们同全反式维甲酸(ATRA)之间的协同效应,采用绘制细胞生长曲线,计算半数抑制浓度(IC50)以及集落抑制试验等方法观察VPA,TSA以及全反式维甲酸(ATRA)在不同浓度或不同组合条件下对HL-60细胞和K562细胞的增殖抑制作用.采用细胞化学染色、分化抗原检测、细胞周期测定、联合NBT与MTT还原试验计算A(NBT)/A(MTT)值等方法分析细胞的分化或凋亡特点.结果显示,在体外培养体系中,VPA对HL-60细胞的IC50值低于对K562细胞的IC50值.ATRA能明显增强VPA、TSA对HL-60细胞以及VPA对K562细胞集落形成的抑制.HL-60经VPA处理后出现粒系表型,NBT还原率增加,CD11b表达增强,而K562细胞未显示分化迹象.结论:VPA和TSA抑制HL-60细胞增殖,VPA诱导HL-60细胞向粒系分化,这些作用均能被ATRA增强;VPA和TSA对K562细胞增殖抑制作用较弱,不能诱导K562细胞分化.
关键词： 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 丙戊酸 曲古抑菌素 HL-60细胞 K562细胞 -
芒果甙诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡
本研究目的是探讨芒果甙对慢性髓系白血病细胞系K562细胞的作用及其作用机制.用噻唑蓝(MTT)法观察芒果甙对K562细胞生长的影响;应用细胞形态、DNA凝胶电泳和流式细胞术等观察芒果甙对K562细胞凋亡的诱导作用;用RT-PCR方法观察芒果甙作用K562细胞后bcr/abl融合基因在转录水平的改变.结果发现,25-200 μmoi/L浓度的芒果甙均能显著抑制K562细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性,并能诱导K562细胞凋亡.随着药物作用浓度的增加,bcr/abl融合基因的转录下调.结论:芒果甙可抑制K562细胞的增殖,并可能通过抑制bcr/abl融合基因的表达诱导K562细胞凋亡.
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预激态补骨脂素抑制 K562细胞增殖的实验研究
本研究的目的是观察预激态补骨脂素对K562细胞增殖的影响,为补骨脂素的临床应用提供实验依据.取预激态补骨脂素和晚激态补骨脂素处理的细胞,在培养后检测台盼蓝拒染细胞数和白血病细胞集落,并对它们在台盼蓝拒染细胞抑制率(TBIR)、细胞增殖抑制率(CPIR)和集落形成抑制率(CFIR)方面的差异进行比较.结果表明:预激态补骨脂素对K562细胞增殖有抑制作用;随着预激态补骨脂素浓度的增加,其抑制作用也随之增强;预激态补骨脂素与晚激态补骨脂素的TBIR、CPIR、CFIR各值比的差异不显著;为使预激态补骨脂素要充分发挥对K562细胞的抑制作用,补骨脂素的紫外线照射时间应在10分钟以上;与K562细胞作用时间也应大于12小时;抑制作用会因预激态补骨脂素预激后搁置时间的延长而下降,在6小时内作用强.结论:预激态补骨脂素和晚激态补骨脂素对K562细胞的增殖均表现出抑制作用,有望作为临床的抗肿瘤用药.
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蛋白激酶抑制剂Go6976增强慢性髓系白血病细胞对三氧化二砷化疗敏感性的研究
研究Go6976是否能去除As2O3引起的G2/M周期阻滞,增加慢性髓系白血病(CML)细胞株(K562细胞)对As2O3的敏感性.K562细胞经不同浓度的Go6976及和As2O3(5μmol/L)作用后,流式细胞术检测细胞周期,台盼蓝排斥试验检测细胞活力,四唑盐(MTT)比色试验分析细胞的生长增殖.结果表明,流式细胞术细胞周期检测发现K562细胞经As2O3作用24小时和48小时后,G2/M期细胞比例分别为(38.02±7.70)%和(32.58±7.43)%,未出现明显凋亡;50 nmol/L Go6976与As2O3联合作用后,G2/M期细胞分别减少至(23.24±2.93)%和(16.18±1.60)%,subG1期细胞分别增加至(11.82±2.31)%和(27.80±2.89)%;且其变化随Go6976浓度及作用时间而增加.同时台盼蓝排斥试验及MTT试验观察到Go6976与As2O3联合作用能明显降低细胞活力、抑制其生长,但Go6976本身无明显作用.结论:Go6976可能通过去除G2/M期阻滞,有效增强了K562细胞对As2O3化疗的敏感性.
关键词： Go6976 三氧化二砷 K562细胞 G2/M细胞周期阻滞 化疗敏感性 -
反应性氧代谢物清除剂逆转ROM对NK细胞抗K562细胞系体外抑制作用
为了探讨新型反应性氧代谢物(reactive oxygen metabolites,ROM)清除剂在NK细胞抑制K562细胞时作为免疫佐剂的作用,采用IL-2及PHA活化单核(MO)细胞,使MO细胞的ROM产量增加,观察NK细胞活性和K562细胞抑制率(KIR)的相应变化,然后在不同比例的MO+NK+K562细胞培养体系中加入不同浓度的ROM清除剂(硫普罗宁),定期检测ROM产量及KIR(每种检测均做3个复孔),同时应用不同浓度的二氢氯组胺(DHT)作为阳性对照.结果表明:在K562细胞、NK细胞混合培养体系中,当E/T=10/1时,加入IL-2/PHA后ROM的产量从33.17±25.02 U/ml增至223.59±59.41 U/ml(P＜0.05),KIR从65.56%升至85.89%(P＜0.05);当按E/MO=10/2、10/5、10/10三种比例加入MO细胞后,ROM产量随着MO细胞数量的增加而增加(ROM产量分别为389.79±43.83 U/ml,456.74±42.77 U/ml,601.42±21.92 U/ml),而KIR则相反(KIR分别为82.36%,81.36%,48.09%);而在K562+NK+MO+IL-2/PHA混合培养体系中加入硫普罗宁、DHT后,当E/MO=10/2时,ROM产量从389.79±43.83 U/ml分别降至-1.20±60.70 U/ml和50.21±22.4 U/ml(P＜0.05),KIR则从82.53%分别升至96.09%和94.64%(P＜0.05).随着硫普罗宁、DHT浓度的增加,ROM产量逐渐减少.ROM产量与KIR呈负相关(r=-0.518).当E/MO为10/5或10/10时,各浓度硫普罗宁及高浓度的DHT可使ROM产量减少(P＜0.05),但KIR提高不明显(P＞0.05).硫普罗宁在提高KIR的效应方面与DHT相似(P＞0.05),而在清除ROM方面,硫普罗宁较DHT为优(P＜0.05).结论:①MO细胞是ROM产生的主要来源,其产生的ROM可使NK细胞的抗瘤(抗K562)活性下降;②新型ROM清除剂(硫普罗宁)可有效清除ROM,在一定程度上逆转ROM对NK细胞抗K562细胞的抑制作用,且在逆转ROM方面优于DHT,在提高NK细胞对K562细胞的抑制率方面效应强度与DHT相似,但毒副作用较低,有望替代DHT作为免疫佐剂用于白血病的过继性免疫治疗中.
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青黛复方对K562细胞bcr/abl及JWA基因表达的影响
为了研究不同浓度青黛复方对K562细胞株增殖、凋亡及bcr/abl、JWA基因表达水平的影响,为临床治疗提供理论依据,以不同浓度药物(2.5、5、7.5、10和20 mg/ml)处理K562细胞24小时后,光学显微镜下观察形态学改变;采用半定量RT-PCR技术检测各组bcr/abl及JWA基因在mRNA水平表达的变化.结果发现,随药物作用浓度升高,K562细胞逐渐呈典型凋亡形态学改变;bcr/abl及JWA基因表达呈浓度依赖性下降.结论:青黛复方能部分抑制K562 bcr/abl及JWA基因的表达,其对CML的疗效可能是通过促进细胞凋亡而实现的.
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毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡及其机制的实验研究
本研究旨在探讨毒胡萝卜素对K562细胞的凋亡诱导作用及其可能机制.采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,annexinV-FITC/PI双染法FCM检测凋亡率的变化,Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM法荧光分光光度计测定细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的改变,Rh123单染法FCM检测线粒体△ψm的变化,Western blot检测caspase-3,-7,-9,-12、细胞色素C和GRP78蛋白的改变.结果显示:4 μmol/L毒胡萝卜素作用K562细胞48小时后,荧光显微镜观察到细胞呈典型的凋亡形态变化,早期凋亡细胞核染色质呈固缩状、圆珠状或斑块状;晚期凋亡细胞核染色质呈固缩状或斑块状.1、2、4、8 μmog/L毒胡萝卜素作用K562细胞24和48小时后细胞凋亡率分别为7.51%、11.65%、23.22%、30.56%和12.85%、20.27%、31.51%、44.16%,在一定范围内呈剂量和时间依赖性,与对照组比较,均有统计学意义(P＜0.05).毒胡萝卜素诱导K562细胞[Ca2+]i升高以及线粒体△ψm下降,并均呈一定的浓度依赖性,与对照组比较,均有统计学意义(P＜0.05).Westem b1ot检测显示,毒胡萝卜素诱导K562细胞caspase-3,-7,-9,-12剪切活化、细胞色素C释放、GRP78表达上调.结论:毒胡萝卜素可诱导K562细胞发生内质网应激反应性凋亡,内质网是细胞内诱导凋亡的一个重要新场所;caspase-3,-7,-9,-12剪切和活化、线粒体△ψm破坏和细胞色素C释放是毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡的重要机制之一,线粒体参与内质网应激反应性凋亡途径并发挥重要作用.
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Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂作用下K562细胞凋亡的影响
为了观察顺铂作用下细胞周期变化规律和Chk1/2反义寡核苷酸转染K562细胞后对顺铂诱导凋亡的影响,采用流式细胞术检测顺铂作用下K562细胞周期变化;以脂质体作为载体,转染Chk1/2反义寡核苷酸于K562细胞,用Western blot和共聚焦显微镜检测转染Chk1/2反义寡核苷酸后Chk1/2蛋白表达;用流式细胞术检测转染Chk1/2反义寡核苷酸后顺铂作用下细胞凋亡率.结果发现,10μmol/L顺铂作用下K562细胞出现S期阻滞,Chk1/2反义寡核苷酸对K562细胞中Chk1/2蛋白表达有明显抑制作用,转染Chk1/2反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下K562细胞凋亡率,Chk1和Chk2联合转染作用优于单独转染.结论:Chk1/2可作为白血病增敏治疗的有效靶点.
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血管内皮生长因子对人慢性髓性白血病细胞系 K562细胞的抗凋亡作用
为了探讨血管内皮生长因子(VEGF)对人白血病细胞增殖的影响,用形态学、DNA断裂琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪(FCM)DNA倍体分析观察VEGF对As2O3诱导的K562细胞凋亡的影响;采用蛋白印迹法检测不同浓度的VEGF对K562细胞bcl-XL、Bax和caspase-3蛋白表达的影响;用RT-PCR方法检测上述条件下bcl-XL、Bax的mRNA变化.结果表明:VEGF能阻止K562细胞发生凋亡,与细胞周期分布改变无相关性(P＞0.05);随着VEGF浓度的增加K562细胞bcl-XL的mRNA与蛋白表达上调,Bax的蛋白表达降低;激活pro-caspase-3→caspase-3被阻止或减少.结论:通过影响bcl-XL/Bax表达比率可能是VEGF抑制K562细胞凋亡的机制之一.
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三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的机制探讨
本研究旨在探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)诱导P210Bcr-AblK562细胞凋亡的发生机制.采用细胞培养、细胞形态观察、流式细胞术(FCM)测定凋亡细胞和细胞周期,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析ATO作用不同时间后K562细胞bcl-XL和bcr-abl基因的改变,并检测胞浆细胞色素C(cyt C)、半胱天冬酶3(caspase-3)蛋白的表达.结果表明:2.5μmol/L ATO作用48小时可诱导K562细胞凋亡,凋亡进程中细胞胞浆内cyt C蛋白浓度增高,caspase-3活性增强;RT-PCR显示ATO对bcr-abl基因表达无明显影响,但12小时可下调bcl-XL基因.结论:ATO通过激活胞浆线粒体下游的cyt C和caspase-3激酶活性而诱导K562细胞凋亡,bcl-XL基因下调也促进了细胞凋亡.
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人类ERMAP基因在诱导K562细胞向红系和巨噬系细胞分化过程中表达的研究
为了探讨人类ERMAP基因在红细胞分化发育过程中的作用,以Ara-C诱导K562细胞向红系方向分化,以十二氟波酯钠盐(TPA)诱导K562细胞向巨噬系方向分化,用荧光定量PCR检测上述过程中人类ERMAP基因表达量的变化.结果发现:终浓度为2.5×10-6mmol/L/L及1.0×10-6mmnol/L/L的Ara-C可诱导K562细胞向红系方向分化,在此过程中人类ERMAP基因的表达量逐渐增加;终浓度为2.0×10-6mmol/L/L及1.0×10-6mmol/L/L的TPA可诱导K562细胞向巨噬系方向分化,在此过程中人类ERMAP基因的表达量无变化.结论:人类ERMAP基因与红系分化增殖密切相关.
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Bcl-xL可能介导组织蛋白酶D相关的K562细胞凋亡
组织蛋白酶(cathepsin)D在氨基葡萄糖硫酸盐(glucosamine sulfate,GS)诱导的慢性髓系白血病K562细胞凋亡过程中为激活线粒体途径的可能的中介分子.为了探讨Bcl-xL在氨基葡萄糖硫酸盐诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡中的可能作用,在倒置显微镜下动态观察细胞生长变化,采用瑞氏-姬姆萨染色观察细胞加药前后的形态学改变,间接免疫荧光法观察GS诱导K562细胞凋亡过程中cathepsin D和细胞色素(cytochrome)C的转位情况,Western blot检测K562细胞凋亡过程中Bcl-xL、Bax、Bid蛋白的表达变化.结果表明:5 mmol/L氨基葡萄糖硫酸盐作用于K562细胞72小时后,细胞增殖受到明显抑制,胞浆出现空泡化;荧光显微镜显示cathepsinD和cytochrome C的荧光信号由颗粒状趋向弥散;Bcl-xL蛋白在GS加药组中表达减低,甚至消失,但在抑胃酶肽(pepstat1n)A预处理后的加药组中表达没有明显改变,Bax和Bid蛋白表达在凋亡前后没有明显变化.结论:Bcl-xL蛋白在GS诱导白血病K562细胞凋亡过程中可能介导cathepsin D与线粒体途径之间的联系.
